重组腺病毒构建及介导报告基因在豚鼠耳蜗中的表达

目的：带绿色荧光蛋白（GFP）基因的重组腺病毒,为利用重组腺病毒介导外源基因转导内耳提供依据。方法：通过细菌内同源重组方法构建携带有报告基因的重组腺病毒（Ad-GFP）,将重组腺病毒经耳蜗底回途径导入豚鼠耳蜗鼓阶外淋巴后,观察手术后不同时间GFP基因在豚鼠耳蜗内的表达、分布情况;检测手术前后听觉脑干诱发电位,观察手术和病毒对豚鼠听觉功能的影响。结果：构建的重组腺病毒经酶切电泳鉴定正确;豚鼠耳蜗底回途径导入腺病毒24 h后即有报告基因表达,3 d后最高,表达时间可持续2周以上;报告基因表达部位主要分布在血管纹、鼓阶外淋巴面的间皮细胞和耳蜗Corti器等部位;听觉脑干诱发电位（ABR）在各组动物手术前后无明显改变。结论：成功构建了携带GFP基因的重组腺病毒,通过该方法构建的腺病毒可以介导报告基因在豚鼠耳蜗中表达,并且对豚鼠听觉功能无明显影响,为内耳基因治疗提供了理论依据。     

不同基因转染方法对小鼠内耳毛细胞转染效率的比较

目的对比不同的基因转染方法对小鼠内耳毛细胞的转染效率,以探寻简便、高效转染耳蜗毛细胞的方法。方法分离111只新生昆明小鼠(P2)耳蜗螺旋韧带及感染上皮,分别采用电穿孔法介导质粒载体(pGPHI/GFP/Neo)、腺病毒载体(Ad5/CMV/GFP)和慢病毒载体(LV/CMV/GFP)3种方法转染小鼠内耳毛细胞,于转染48小时后在荧光显微镜下观察并比较三种方法基因转染后小鼠内耳毛细胞绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的表达。结果电穿孔法介导质粒载体转染组和慢病毒载体转染组GFP阳性细胞极少;腺病毒载体转染组效率最高,耳蜗中回外毛细胞GFP阳性率为90.0%±4.1%,内毛细胞GFP阳性率为5%±0.4%。结论腺病毒载体能更有效地将外源基因导入耳蜗毛细胞内表达,是基因转染耳蜗毛细胞的理想载体。     

内耳转基因表达的实验研究

目的 了解内耳转基因表达的可行性。方法 将人复制缺陷重组腺病毒基因(Adenoviruses，Ad，含大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因LacZ基因，Ad5．LacZ)经豚鼠耳蜗蜗窗接种到鼓阶外淋巴后，观察在不同时间、不同内耳组织中LacZ基因的表达(X-Gal染色)及Ad对豚鼠声反应(听性脑干反应)、听毛细胞(扫描电镜)的影响。结果 Ad介导的LacZ基因在内耳组织中的表达至少可持续4周，其中在螺旋神经节细胞表达稳定，Corti器、前庭囊斑、壶腹嵴的毛细胞等也有较强的表达。Ad未对豚鼠声反应(≤8000Hz)造成明显的损伤，除耳蜗底回外，其余各回未见明显的毛细胞缺失。结论 腺病毒载体可成功地将LacZ基因转导致豚鼠内耳组织中，并且未对豚鼠声反应(低、中频)及听毛细胞造成明显损伤，这对未来的内耳基因治疗研究可能具有重要的参考价值。     

听力学

20030451腺病毒携带GFP在豚鼠耳蜗基因转导的形态结构与功能改变/王晓侠…//西安医科大学学报一2002,23(2)一121一124,188 目的:带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的腺病毒注人豚鼠耳蜗后,观察不同时间段GFP基因的表达和分布情况及手术操作对听力的影响,为内耳基因治疗提供理论依据。方法:15只杂色豚鼠术前及术后行听性脑干反应(ABR)和畸变产物耳声发射(DP()AE)检查,空白对照组经圆窗或底回钻孔注人人工外淋巴液。实验组注入带有GFP基因的腺病毒。分别于3、5、7和lod后取材,耳蜗标本经硝酸银染色后铺片。结果:腺病毒注人耳蜗后对听阂影响不…     

Ad-GFP基因经半规管转导对豚鼠内耳形态和功能的影响

目的探讨经半规管途径转导豚鼠内耳基因的可行性,绿色荧光蛋白的表达及其对内耳形态和功能的影响.方法采用白色红目健康纯种豚鼠24只,将缺陷型腺病毒携带的绿色荧光蛋白基因5μl经显微手术自前半规管灌入豚鼠内耳,同法注入人工外淋巴液5μl作对照,另一组经圆窗膜注入5μl Ad-GFP基因,分别在手术后7、14、21、28d处死,0.5%硝酸银灌注耳蜗基底膜铺片显微镜观察内外毛细胞缺失,全耳蜗铺片荧光显微镜观察GFP表达.基因导入前后及处死前测定脑干诱发电位.结果实验组耳蜗铺片内外毛细胞缺失计数和对照组无统计学意义;荧光显微镜下见术侧半规管、前庭、耳蜗均有荧光表达,术后7d表达最强,以后减弱,术后28d还有表达;经半规管组前庭区表达强于耳蜗区,主要分布在前庭及外淋巴间隙;经圆窗组耳蜗区表达强于前庭区.对侧耳蜗及对照组动物呈阴性表达.手术前后脑干诱发电位差异无显著性.结论经半规管转导基因主要分布在前庭器官及外淋巴间隙,对耳蜗功能影响不大,是一种可行的途径;腺病毒载体携带的基因表达有一定的时间性.     

C57BL/10J小鼠内耳形态学观察

目的 探讨不同月龄C57BL／10J小鼠内耳形态学变化。方法 取C57BL/10J小鼠2月龄3只（6耳）、8月龄3只（6耳）、12月龄2只（4耳）、27月龄2只（4耳），采用耳蜗铺片和耳蜗图技术，观察耳蜗和前庭毛细胞的变化。结果 2月龄鼠在耳蜗底回和顶回可见有少量的外毛细胞缺失，内毛细胞正常。8月龄鼠外毛细胞缺失主要由耳蜗底回向顶回发展，少量内毛细胞缺失主要在耳蜗底回，对应于20kHz的基底膜区域显示外毛细胞缺失在20％左右。12月龄鼠外毛细胞缺失明显加重，耳蜗底回部分几乎完全缺失，外毛细胞损失区域发展到基底膜中部，并且蜗尖区域外毛细胞缺失达到40％，耳蜗底回内毛细胞缺失达到60％～80％，蜗尖部分内毛细胞基本正常，对应于20kHz的基底膜区域显示外毛细胞缺失近80％，内毛细胞缺失近30％。27月龄鼠耳蜗外毛细胞从基底膜中部至底回完全缺失，顶回缺失60％～80％，内毛细胞缺失逐渐向蜗尖扩展，对应于20kHz的基底膜区域显示外毛细胞完全缺失，内毛细胞缺失超过50％。前庭选取球囊斑，椭圆囊斑和壶腹嵴三个部位进行观察，不同月龄的C57BL／10J鼠前庭毛细胞均正常。结论 本研究首次对C57BL／10J小鼠的内耳形态学进行观察，发现该鼠同C57BL／6J小鼠比较在外毛细胞缺失规律和时间上有明显的差别，明确了内耳毛细胞的变化规律；同时首次观察了前庭毛细胞，为C57BL／10J小鼠作为遗传性和老年性聋研究的动物模型提供了形态学理论依据。     

耳蜗外毛细胞静纤毛束变异的判定标准与抵抗耳中毒的能力

目的建立耳蜗外毛细胞(OHC)静纤毛束变异的判定标准,观察毛细胞静纤毛束变异对庆大霉素耳中毒的抵抗能力.方法对豚鼠测定听性脑干反应(ABR)阈值和畸变产物耳声发射(DPOAE)振幅后,选取静纤毛束正常和变异豚鼠各5只,连续肌注庆大霉素(grntamicin,GM)12 d后,测定ABR阈值,扫描电镜观察耳蜗外毛细胞静纤毛束变异情况,耳蜗铺片计数毛细胞的损失数.结果耳蜗底回第一排外毛细胞静纤毛束转位超过45°、"W"变形数超过10%,作为豚鼠耳蜗外毛细胞静纤毛束变异的判定标准.5只静纤毛变异豚鼠GM注射12 d后平均ABR阈值51.0±8.76 dB SPL,外毛细胞损失约16%～39.96%,柯替器受损程度较轻;而外毛细胞(OHC)正常豚鼠GM注射12 d后ABR阈值上升到58.4～100 dB SPL,OHC基本消失,柯替器毛细胞破坏较为严重.结论耳蜗外毛细胞静纤毛束变异豚鼠较OHC正常者对GM中毒具有较大的耐受能力.     

特异性损伤内耳螺旋神经元小鼠模型的建立

目的：建立小鼠内耳螺旋神经元损伤的耳聋模型,为研究干细胞移植治疗感音神经性聋奠定基础。方法成年雌性SPF级CBA／J小鼠60只,随机分为实验组和生理盐水组,每组30只,实验组动物经圆窗渗透给予10μl哇巴因（ouabain）,生理盐水组同法给予等量生理盐水。每组于给药前及给药后7、14及30天分别检测小鼠听性脑干反应（ABR）和畸变产物耳声发射（DPOAE）,并用免疫组织荧光技术和基底膜铺片技术分别观察耳蜗螺旋神经元（spiral ganglion neurons ,SGNs）细胞及内耳毛细胞（hair cells ,HCs）的变化。结果①与生理盐水组比较,实验组给药后各时间点 ABR反应阈均明显升高,波Ⅰ潜伏期延长,振幅明显降低,差异有统计学意义（ P＜0．05）。②实验组及生理盐水组小鼠DPOAE均可正常引出。③与生理盐水组相比,实验组耳蜗各回螺旋神经元的数量及密度显著降低,差异有统计学意义（P＜0．05）。④实验组在给药后不同时间点,耳蜗各回内、外毛细胞均排列整齐、形态完整、未见明显损伤或丢失。结论哇巴因经圆窗渗透给药可特异性损伤CBA／J小鼠内耳螺旋神经元及其功能,而不损伤内、外毛细胞,是一种理想的研究干细胞移植治疗感音神经性聋的动物模型。     

内耳转基因表达的实验研究

目的　了解内耳转基因表达的可行性。方法　将人复制缺陷重组腺病毒基因(Adenoviruses ,Ad ,含大肠杆菌 β 半乳糖苷酶基因LacZ基因 ,Ad5 LacZ)经豚鼠耳蜗蜗窗接种到鼓阶外淋巴后 ,观察在不同时间、不同内耳组织中LacZ基因的表达 (X Gal染色 )及Ad对豚鼠声反应 (听性脑干反应 )、听毛细胞 (扫描电镜 )的影响。结果　Ad介导的LacZ基因在内耳组织中的表达至少可持续 4周 ,其中在螺旋神经节细胞表达稳定 ,Corti器、前庭囊斑、壶腹嵴的毛细胞等也有较强的表达。Ad未对豚鼠声反应 (≤ 80 0 0Hz)造成明显的损伤 ,除耳蜗底回外 ,其余各回未见明显的毛细胞缺失。结论　腺病毒载体可成功地将LacZ基因转导致豚鼠内耳组织中 ,并且未对豚鼠声反应 (低、中频 )及听毛细胞造成明显损伤 ,这对未来的内耳基因治疗研究可能具有重要的参考价值。     

卡那霉素联合速尿致聋豚鼠的Math1基因治疗

目的 观察卡那霉素和速尿联合致聋豚鼠耳蜗鼓阶导入Math1基因后的形态学及功能改变,探讨Mathl基因治疗药物中毒性耳聋的可行性.方法 健康成年豚鼠经硫酸卡那霉素(500 mg/kg)和速尿(50 mg/kg)联合致聋,将听性脑干反应(ABR)反应阈＞95 dB SPL的豚鼠按随机数字表法分为空白对照组(不做任何处置,3只),手术对照组(右耳单纯鼓阶钻孔,3只),人工外淋巴液组(右耳鼓阶钻孔导入人工外淋巴液,3只),单纯病毒载体组[右耳鼓阶钻孔导入携带增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的重组腺病毒(Ad.EGFP),4只]、Math1基因治疗组[右耳鼓阶钻孔导入携带Math1及EGFP基因的重组腺病毒(Ad.Math1-EGFP),6只].各组动物分别于鼓阶注射前及注射后8周时行ABR测试,结束测试后处死动物,取出耳蜗组织行扫描电镜观察.结果 各组豚鼠不同频率(4、8、16、20 kHz)短纯音ABR阈值在不同检测时间段差异均无统计学意义,组间比较差异亦无统计学意义(P值均＞0.05).除Math1基因治疗组外,其余各组右耳耳蜗各回毛细胞形态和数目与左耳(自身对照)比较无明显差别.4只Math1基因治疗组豚鼠中,有2只右耳耳蜗第三回内、外毛细胞数量明显比左耳多,其中内毛细胞排列形态较外毛细胞整齐.结论 鼓阶显微注射导入Math1基因能使部分卡那霉素和速尿联合致聋豚鼠的耳蜗毛细胞修复或再生,但其听觉功能没有改善.     

大鼠胚胎神经干细胞经蜗窗移植到正常耳蜗的研究

目的 探讨感染携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)报告基因的重组腺病毒(recombinant adenovirus with GFP,Ad-GFP))的大鼠胚胎神经干细胞(neural stem cell,NSC)经蜗窗径路移植到正常大鼠耳蜗后的存活、分布及报告基凶的表达情况,并检测移植后大鼠听力和耳蜗形态结构的变化.方法 大鼠随机分为三组:组Ⅰ(感染Ad-GFP的NSC移植组)10只,组Ⅱ(人工外淋巴注射组)10只,组Ⅲ(空白对照组)10只.组Ⅰ及组Ⅱ的手术径路均为经蜗窗途径;两组移植前后分别测试大鼠听性脑干反应(ABR),了解其听力的改变;移植后14 d在荧光显微镜下观察耳蜗中轴切片中感染Ad-GFP的NSC的存活、分布及报告基凶的表达情况,并通过耳蜗切片HE染色及摹底膜铺片硝酸银染色观察耳蜗形态结构及毛细胞数目的 变化.结果 组Ⅰ及组Ⅱ术后ABR反应阈分别为(33.5±3.4)dB和(32.5±3.5)dB,与移植前相比差异均无统计学意义(P值均＞0.05),两组术后ABR反应阈问的差异亦无统计学意义(t=0.526,P＞0.05).两组大鼠术后耳蜗形态结构均正常.组Ⅰ NSC移植入耳蜗14 d后,存活的细胞主要分布在耳蜗底回的前庭阶和鼓阶,耳蜗其他各回的前庭阶和鼓阶中也有存活,同时表达强烈的绿色荧光.三组均出现耳蜗外毛细胞的散在缺失,总缺失率均未超过1%,且三组各回的缺失率及总缺失率之间的差异均无统计学意义(P值均＞0.05);三组耳蜗各回均未见内毛细胞的缺失.结论 感染Ad-GFP的NSC经蜗窗径路移植到正常大鼠耳蜗后可以存活并表达GFP基因,移植对大鼠听反应阈及耳蜗形态结构无明显影响.     

腺病毒携带的LacZ基因在豚鼠耳蜗中的表达

目的 带有LacZ基因的腺病毒注入豚鼠耳蜗后,观察不同时间段LacZ基因的表达和分布情况及手术操作对听力的影响,为内耳基因治疗提供理论依据。方法 24只白色豚鼠术前及术后行听性脑干反应(ABR)检查。空白对照组经圆窗注入人工外淋巴液,实验组注入带有LacZ基因的腺病毒。分别于2天、l周、2周后取材。耳蜗标本经β-半乳糖苷酶(X-Gal)组织化学染色后做石蜡切片和耳蜗铺片。结果 腺病毒注入耳蜗后对听力影响不大。经X-Gal染色后整个耳蜗被染成蓝色。2天组表达产物最高,l周后逐渐降低。表达产物主要分布于柯蒂器的内外毛细胞、螺旋神经节细胞、基底膜下的间皮细胞。对照组均未着色。结论 通过圆窗注入腺病毒对听力没有影响,单一位点的接种就能使因子通过耳蜗液扩散到整个耳蜗。有效的基因转移在耳蜗是可行的,但表达相对短暂。     

Cochlear hair cell loss in ears with cholesteatomas. Scanning electron microscopy study

Cochleas from 16 Mongolian gerbils with spontaneous aural cholesteatomas, and four of similar age without cholesteatomas, were examined by scanning electron microscopy to quantify cochlear hair cell loss. Loss of hair cell stereocilia was found in all ears with cholesteatomas and was significantly increased when compared with uninvolved ears from animals of similar age. The hair cell loss associated with gerbilline cholesteatomas appeared to be most marked in the middle turn of the cochlea and increased in severity with increasing size of the cholesteatomas. Outer hair cells were affected more than inner hair cells. Inner and outer hair cell loss was not significantly different in infected cholesteatomas versus sterile cholesteatomas. The greater damage to hair cells at the middle turn compared to the basal turn suggests that these losses may be the result of some agent acting through the cochlear wall rather than through the round window.     

内耳免疫反应中细胞凋亡及Caspase-3动态表达的研究

目的:研究内耳免疫反应过程中是否存在细胞凋亡,以及细胞凋亡是否与Caspase3信号转导有关。方法:选用雌性白色豚鼠45只,随机分为实验组29只,对照组16只,以钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)全身免疫后,实验组以相同抗原进行内耳免疫,对照组内耳注射等量的磷酸盐缓冲生理盐水(PBS),分别在内耳免疫术后1、3、5、7d和14d后处死动物,于免疫前及处死前行双侧听性脑干反应(ABR)测试。取内耳免疫侧耳蜗做石蜡切片。通过DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测内耳凋亡细胞,免疫组织化学检测内耳Caspase3的表达。结果:实验组豚鼠内耳免疫前、后反应阈比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01);对照组给药前、后比较反应阈无明显变化。实验组豚鼠内耳均存在TUNEL染色阳性细胞,并且TUNEL染色阳性细胞具有凋亡细胞的典型形态学特征,而对照组仅在支持细胞、血管纹和螺旋神经节细胞中发现极少数TUNEL染色阳性细胞。Caspase3免疫组织化学染色实验组内耳从内耳免疫后5d开始出现阳性表达,而对照组表达阴性。结论:内耳免疫反应可以诱导细胞凋亡的发生;内耳免疫反应诱导细胞凋亡的发生中有Caspase3的激活。     

adenoviral-mediated hath1-egfp gene transfer into guinea pig cochlea through intact round window membrane

Objective To study expression of adenovira1-mediated Hathl-EGFP gene in the guinea pig cochlea after transfer through intact round window membrane (RWM), and to assess its effects on hearing. Methods Twenty adult guinea pigs were used, of which: 12 were surgically inoculated with AdHath1-EGFP in the bony groove of round window niche, and 8 with artificial perilymph. Auditory brainstem response(ABR) thresholds were determined in all animals before and 5 days after surgery. On post-surgery day 5 and day 14, animals were sacrificed and whole mounts of cochlea and fro zensections were examined. Results ABR tests showed no significant change of hearing after the surgery.Strong fluorescence staining in the cochleae was seen in Ad-Hathl-EGFP groups. The highest levels of gene expression were seen in the post-surgery day 5 group with tittle decrease on post-surgery day 14.The contralateral cochlea and those in the control groups were free of fluorescence staining. Conclusion The transgenic Hath1-EGFP can be effectively delivered into the inner ear through intact RWM, in an atraumatic manner.     

Hearing preservation after inner ear gene therapy: the effect of vector and surgical approach

Over seventy studies have examined the potential of gene therapy in the inner ear. For the most part, they have focused on adenoviral vectors and delivery into the cochlea. Most studies have emphasized looking at the expression of marker genes driven by a CMV promoter and have used first-generation adenoviral constructs. E1/E3/E4 deleted adenoviral vectors carrying the green fluorescent protein (GFP) gene were injected into the round window, the basal turn of the cochlea (via a cochleostomy) or into the superior semicircular canal. Hearing was then tested 24 h after viral gene transfer. Large vector titers in small volumes of fluid were well tolerated with the round window approach resulting in complete hearing preservation with transfer of GFP to hair cells and spiral ganglion cells. Injection of comparable doses of vector into a basal turn cochleostomy resulted in high-frequency hearing loss. Addition of a pancaspase inhibitor protected hearing when larger volumes of fluid were administered to the inner ear.     

AM-111 reduces hearing loss in a guinea pig model of acute labyrinthitis

OBJECTIVES/HYPOTHESIS: This study investigated the otoprotective properties of AM-111, an inhibitor of c-Jun N-terminal kinase-mediated apoptosis and inflammation. STUDY DESIGN: A controlled, prospective animal study using a guinea pig model of acute labyrinthitis. METHODS: Acute labyrinthitis was generated by injection of antigen into the scala tympani of sensitized guinea pigs. Treatment groups received 100 microL of AM-111 at concentrations of 100 micromol/L, 10 micromol/L, and 1 micromol/L in a hyaluronic acid gel formulation delivered over the round window niche within 1 hour of antigen challenge. Cochlear function was monitored over 21 days with serial auditory brainstem response (ABR) and distortion product otoacoustic emission (DPOAE) measurements followed by histologic analysis. RESULTS: The ABR results on day 21 demonstrated that untreated control ears for acute labyrinthitis had a mean hearing loss (HL) of 68 +/- 12 dB. In contrast, ears treated with AM-111 (100 micromol/L) had a mean HL of 39 +/- 31 dB. These two groups were statistically different (one-way analysis of variance, P = .03). Secondary outcomes, including DPOAE shift, inner hair cell survival, inflammatory cell counts, and spiral ganglion density, were also statistically significant in favor of an otoprotective effect of AM-111. Lower doses of AM-111 did not produce a statistically significant reduction in HL over controls. CONCLUSION: AM-111 delivered over the round window membrane in a 100 microL hyaluronic acid formulation at a 100 micromol/L concentration immediately after induction of acute labyrinthitis in the guinea pig cochlea protects hearing, reduces hair cell loss, and reduces the number of inflammatory cells at 21 days after treatment.     

神经营养因子3基因转染对庆大霉素性耳聋保护作用的实验研究

目的 :探讨阳离子脂质体介导的神经营养因子 3(NT3)基因转染对豚鼠庆大霉素性耳聋的保护作用。方法 :将携带外源性基因NT3的重组真核表达载体 pIRES2 EGFP NT3与阳离子脂质体复合物注入豚鼠耳蜗 ,术后给予庆大霉素肌肉注射 (12 0mg/kg) 14d ,分别于停药后 1d、2周进行听性脑干反应 (ABR)及畸变产物耳声发射 (DPOAE)测听并观察转染基因在耳蜗的表达和分布及耳蜗毛细胞受损情况。结果 :NT3组DP gram幅值降低较对照组明显减轻 ,ABR阈值升高亦无对照组显著 (P <0 .0 5 )。耳蜗基底膜FITC phalloidin染色见NT3组耳蜗毛细胞的缺失较对照组明显减轻。结论 :阳离子脂质体介导的NT3基因转染对豚鼠庆大霉素性耳聋具有一定程度的保护作用。     

纯中药制剂复聪汤对庆大霉素致聋豚鼠耳蜗毛细胞修复再生的实验研究

目的观察纯中药制剂对庆大霉素致聋动物和耳蜗毛细胞的修复再生作用。方法选用73只健康青年豚鼠,行听力学检查后,53只动物连续肌肉注射庆大霉素(80mg.kg-1.d-1)24～30天致聋(GM组),其间死亡8只,剩余45只随机分成中药治疗组(25只)和致聋后对照组(20只),中药治疗组给予纯中药制剂"复聪汤Ⅰ号"口服液和"复聪汤Ⅱ号"滴耳液治疗,致聋后对照组同法给予生理盐水。另外20只豚鼠作为正常对照组,每天肌肉注射等量生理盐水。在治疗30、60和90天后对GM组两组动物分别行ABR、DPOAE检测,同时,每一时间点处死6只动物,左侧耳蜗行扫描电镜观察,右侧耳蜗铺片行光镜观察和毛细胞计数。结果实验前所有豚鼠的听功能正常;连续注射庆大霉素30天后,GM组豚鼠ABR反应阈值上升到50～80dB SPL,DPOAE幅值降低,光镜和电镜下表现为耳蜗毛细胞纤毛断碎、倒伏、融合和消失,多处毛细胞表皮板肿胀、突起和疱疹样变性,或毛细胞被完全挤出网状板,基底回和第三回耳蜗毛细胞严重消失;中药治疗30天后,80%的耳聋豚鼠的ABR反应阈恢复到30～50dB SPL,DPOAE幅值明显提高;耳蜗铺片和电镜观察显示耳蜗毛细胞数目有一定恢复,组织结构有修复现象,扫描电镜可见再生毛细胞仅出现少量纤毛,而致聋后对照组未发现此种现象;治疗60天后,耳蜗毛细胞数目明显增多,Corti器的毛细胞区有大量的增殖细胞出现,扫描电镜可见成小束的新生纤毛出现在毛细胞缺失部位,同时支持细胞大量增殖;治疗90天后,再生的静纤毛束已基本形成,尤其是耳蜗基底部位的毛细胞明显增多,听功能基本正常。结论纯中药制剂复聪汤对庆大霉素致聋豚鼠耳蜗毛细胞有一定的修复和再生作用。