Sonic hedgehog信号通路在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达变化及意义

 目的：探讨Sonic hedgehog（Shh）信号通路在单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾组织中的表达变化及意义。方法：将48只SD大鼠随机分为UUO模型组（n=24）和假手术组（n=24）,梗阻术3、7和14 d后取其梗阻侧肾脏组织。用HE和Masson染色检测肾间质纤维化程度,免疫组织化学染色检测Shh通路分子Shh、Ptch1、Smo、Gli1及III型胶原的蛋白表达,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测肾组织中TGF-β₁和Shh含量,real-time RT-PCR检测TGF-β₁、I和III型胶原及Shh通路分子mRNA表达。结果：HE和Masson染色显示,梗阻侧肾组织出现明显的纤维化病变,且随时间延长而加剧。TGF-β₁、I和III型胶原含量在梗阻肾中表达明显增高（P<0.05）。同时,Shh信号通路分子Shh、Smo和Gli mRNA和蛋白在梗阻肾中表达明显升高（P<0.05）,而Ptch1 mRNA和蛋白的表达下调（P<0.01）,提示Shh信号被激活。相关分析表明,Shh信号起始信号Shh水平的升高与TGF-β₁含量增加呈明显的相关。结论：UUO大鼠诱导肾间质纤维化发生过程中,Shh信号通路分子被激活,推测可能的机制是活化的Shh信号通路诱导TGF-β₁表达和释放,导致肾间质纤维化。     

单侧输尿管梗阻的大鼠内质网应激相关蛋白表达上调

目的探究内质网应激(ERS)相关凋亡通路在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化中的作用机制。方法将大鼠随机分为假手术组及UUO模型组,UUO组行左侧输尿管结扎术,于术后3、7和14 d HE和Masson染色观察肾脏病理变化;眼底静脉丛取血,分离血清测定血尿素氮及肌酐;Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、内质网源性转录因子(CHOP)、凋亡相关蛋白半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)及caspase-12蛋白表达。结果与假手术组相比,UUO模型组可见:1)肾小管扩张和肾间质纤维化程度随输尿管梗阻时间延长而渐进性加重;2)GRP78、CHOP、caspase-3及caspase-12蛋白表达在术后3 d均有上调,随着梗阻时间延长,上述蛋白表达更显著(P0.01)。结论内质网应激相关标志性蛋白在UUO大鼠肾间质纤维化的早期即存在表达上调,可能促进了肾间质纤维化不断进展。     

结缔组织生长因子在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达

目的：检测大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）模型不同时期，肾组织中结缔组织生长因子（CTGF）、转化生长因子β1（TGF-β1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达，观察比较在间质纤维化不同阶段，3者的动态变化及关系。 方法： 采用雄性SD大鼠36只，分为假手术组和模型组，模型组行左侧输尿管结扎术，再分3、7、14、21和28 d共6组，每组6只，于各时点处死大鼠，取肾组织，常规HE、Masson染色，按小管间质损害的特征进行半定量评分。免疫组化检测CTGF、TGF-β1和α-SMA表达。 结果： 随梗阻时间的延长，小管间质纤维化加重，28 d间质已基本被纤维化组织所代替。随间质纤维化程度的加重，CTGF和α-SMA表达逐渐增加，两者与小管间质损害积分呈正相关，CTGF与α-SMA的表达之间也呈正相关。TGF-β1表达在7-14 d达高峰后，逐渐减少，但仍高于对照组。 结论： UUO致CTGF表达增加可能与TGF-β升高有关，CTGF可能通过促进间质中肌成纤维细胞的形成而参与肾间质纤维化。     

大鼠单侧输尿管梗阻后黏附分子与树突状细胞表达分布及抗黏附干预的影响

目的 探讨黏附分子与树突状细胞(DC)在大鼠啦侧输尿管梗阻后肾组织中的表达和分布，以及抗P-选择素单抗的抗黏附调抑作用。方法建立大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型，随机将大鼠分为手术组(n=18)和抗P-选择素单抗治疗组(n=18)，按不同梗阻时间(1、3、7d)再分为3组，另设假手术组(n=6)作为对照。分别采用免疫组化LSAB法和免疫双染与荧光图像分析法，观察P-选择素、ICAM-1及DC在肾组织中表达和分布变化。结果大鼠UUO第1d起即见P-选择素以肾小管上皮细胞为主在肾小管间质中表达上调，伴随CDla^ CD80^ DC在以肾间质为主部位的浸润。第3d P-选择素明显表达，ICAM-1以肾血管为主表达上调，且CDla^ CD80^ DC显著增多。至第7dP-选择素表达遂下调，ICAM-1表达明显增强，而CDla^ CD80^ DC在肾间质分布聚集达峰。经抗P-选择素单抗处理后，大鼠肾组织P-选择素、ICAM-1表达受到抑制，CDla^ CD80^ DC分布聚集减少，且肾小管间质病理损伤减轻。结论P-选择索等黏附分子介导树突状细胞迁移聚集，可能参与了肾小管间质纤维化早期病理损伤过程，抗P-选择素单抗对此具有抗黏附调抑和肾脏保护作用。     

骨形态形成蛋白-7及其受体在单侧输尿管梗阻大鼠模型中表达的研究

目的：探讨单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模 型不同时点肾脏中骨形态形成蛋白-7（BMP-7）及其受体BMPR-Ⅱ、ALK-2、ALK-3、ALK-6 mR NA表达水平的动态变化及意义。方法:60只Wistar大鼠随机分为正常大鼠 组、假手术组和单侧输尿管梗阻组，分别于术后1 d、3 d、7 d、14 d处死，采用RT-PCR方 法检测肾组织BMP-7、BMPR-Ⅱ、ALK-2、ALK-3、ALK-6的mRNA表达水平，免疫组织化学方法 检测肾小管间质中BMP-7的蛋白定位和表达。结果:与对照组相比，输尿 管梗阻组肾组织BMP-7及其受体BMPR-Ⅱ、ALK-2、ALK-3的mRNA表达于术后第1 d即出现下降 并随梗阻时间延长递减，而ALK-6的mRNA表达水平变化不明显。免疫组化结果显示BMP－7蛋 白在对照组中高度表达，主要分布在肾小管及肾间质，肾小球内基本无表达。在梗阻组随梗阻时间延长、肾间质损害加重，BMP－7蛋白表达呈进行性下降。结论:在肾间质损害过程中BMP-7及其受体BMPR-Ⅱ、ALK-2、ALK-3于病变早期即出现表达下调，早于肾间质纤维化病理改变的出现，BMP-7及其受体表达下调可能参与介导肾小管间质纤维化的发生发展。     

EMMPRIN在大鼠肾间质纤维化过程中的表达变化

目的 检测细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)在大鼠肾间质纤维化模型中的表达变化.方法 64只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(Sham组)和模型组(UUO组),每组16只.假手术组,仅游离输尿管不结扎,模型组,行单侧输尿管结扎术,分别于术后3、7、14 d处死大鼠并留取肾脏组织.肾脏标本行HE、Masson染色方法检测间质纤维化损伤的程度.应用免疫组织化学方法检测肾组织中EMMPRIN,α-SMA,E-cadherin的表达.结果 HE染色显示:UUO术后肾间质肾小管萎缩、扩张,胞外基质沉积,炎细胞浸润增加.Masson染色显示:UUO术后大鼠肾组织胶原纤维组织增生,出现明显的间质纤维化改变.免疫组织化学结果显示:与假手术组相比,UUO模型3d组的EMMPRIN表达显著增高,同时有α-SMA表达升高和E-cadherin表达显著下降(P＜0.05);随着梗阻时间的延长,模型7d组EMMPRIN的表达逐渐减弱(P＜0.05).结论 EMMPRIN可能参与了UUO大鼠肾间质纤维化的早期上皮间质转分化过程,而随着纤维化程度加重,后期表达逐渐减少.     

单侧输尿管梗阻大鼠肾脏岩藻糖基转移酶8的表达变化

目的: 探讨岩藻糖基转移酶8(FUT8)在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型肾脏中表达及意义。方法: 90只雄性Wistar 大鼠随机分为正常对照组(control组)、假手术组(sham组)和UUO组,分别在术后1 d、3 d、7 d、14 d和21 d处死,检测各组大鼠肾功能情况;PAS与Masson染色观察大鼠肾间质病理形态学改变;RT-PCR和Western blotting检测各组大鼠肾组织不同时点FUT8 mRNA及蛋白的表达;免疫荧光检测大鼠肾组织不同时点FUT8和活化素受体样激酶5(ALK5)的分布以及表达;免疫组化检测大鼠肾脏纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col I)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果: 与control组相比,UUO组大鼠血肌酐及尿素氮于术后3 d开始升高(P<0.05),第21 d升至最高(P<0.01);UUO3 d开始肾间质可见明显炎症细胞浸润,14 d出现明显肾小管萎缩,21 d可见明显肾间质纤维化。FUT8的mRNA表达与蛋白水平表达于术后3 d出现上升并随梗阻时间延长逐渐增加(P<0.05),分别于14 d及21 d达到最高峰(P<0.01); ALK5在肾小管的表达与FUT8一致,呈正相关(r=0.87,P<0.05),且两者分布一致,共表达区域随着肾纤维化进展逐渐增加。FN、Col I和α-SMA表达于术后第3 d出现上升并随梗阻时间延长逐渐增加(P<0.05),且与FUT8呈正相关(r=0.80,r=0.76,r=0.89,P<0.05)。结论: 在肾间质纤维化的进展中,FUT8与ALK5表达呈时空一致性升高,可能与肾间质纤维化程度密切相关。     

Akt信号蛋白在阿托伐他汀作用于UUO大鼠肾小管-间质中的表达

目的： 探讨PI3K/Akt信号通路是否参与了阿托伐他汀延缓UUO大鼠肾小管-间质纤维化过程。方法: 将45只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及阿托伐他汀治疗组（简称阿乐组）。模型组与阿乐组大鼠均行左侧输尿管梗阻（UUO）术。阿乐组于术前3 d开始阿托伐他汀（10 mg·kg^-1·d^-1）灌胃，其余两组予等量生理盐水灌胃。术后第5、10、15 d分别处死各组中的5只大鼠，取左肾行HE和Masson染色，并用免疫组化方法检测肾小管间质中TGF-β₁、Akt1、磷酸化Akt1的表达。结果: 模型组大鼠肾小管间质细胞增多，纤维化明显。阿乐组大鼠肾小管间质病变程度较同期模型组明显减轻（P<0.05）。模型组大鼠梗阻肾小管-间质中Akt1、磷酸化Akt1、TGF-β₁表达较假手术组明显增加（P<0.01），Akt1活性增加（P<0.01）。阿乐组大鼠上述指标在肾小管-间质的表达程度均较同期模型组明显减轻（P<0.05）。梗阻肾术后第5 d和第15 d肾组织Akt1活性与TGF-β₁表达呈正相关（r=0.63, P<0.05；r=0.64, P<0.05）。结论: 阿托伐他汀可减少输尿管梗阻后磷酸化Akt1、总的Akt1、TGF-β₁的表达，抑制Akt1活性，提示PI3K/Akt信号通路可能参与了阿托伐他汀延缓UUO大鼠肾小管-间质纤维化的过程。     

结缔组织生长因子在单侧输尿管梗阻大鼠肾脏中的表达及其意义

目的： 观察结缔组织生长因子（CTGF）在单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型中的动态表达，探讨CTGF在肾小管间质纤维化中的作用机制。方法： 将48 只Wistar大鼠随机分为UUO组和假手术（SO）组，采用左输尿管结扎术复制UUO模型，于术后1、3、7、14 d分别处死2组大鼠取左肾。采用Masson染色评定肾小管间质损伤程度；逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 方法检测肾组织转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、CTGF、Ⅰ型胶原（ColⅠ）和纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）mRNA表达；免疫组织化学方法测定TGF-β₁、CTGF、ColⅠ、PAI-1表达；Western blotting方法检测CTGF蛋白表达量的变化。结果: UUO术后1d，梗阻肾TGF-β₁ mRNA表达开始升高，第3-14d时升高更显著（P<0.01），CTGF、ColⅠ、PAI-1 mRNA水平随之逐渐升高。免疫组织化学染色发现，UUO大鼠肾小管和间质区域CTGF表达随病程进展逐渐增强；相关分析显示，UUO术后第7d，CTGF表达量与肾小管间质损伤指数、肾小管间质TGF-β₁、ColⅠ、PAI-1表达强度均呈正相关，相关系数（r）分别为0.62、0.85、0.78和0.76（均P<0.01）。Western blotting结果显示，CTGF蛋白水平在术后第3d开始上升，随病程进展更显著。结论: CTGF可通过促进细胞外基质产生和抑制细胞外基质降解双重途径诱导肾小管间质纤维化的发生和进展。     

α-平滑肌肌动蛋白和E-钙依赖性黏附素在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达

目的： 检测单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾间质纤维化模型肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙依赖性黏附素(E-Cad)表达的动态变化,并观察比较在肾小管间质纤维化不同阶段的病理变化。方法:采用 54只雄性健康SD大鼠随机分为正常组、假手术组和模型组,模型组行左侧输尿管结扎术,正常组21 d处死6 只动物,假手术组和UUO组分别于术后 3、7、14、21 d 各处死6只动物,共48只,取肾组织常规行HE染色、六胺银染色光镜下观察,取肾皮质电镜下观察病变情况。采用蛋白印迹法检测肾组织α-SMA、E-Cad 蛋白表达。结果: (1)随着造模时间的延长,肾小管间质纤维化逐渐加重,UUO术后21 d的肾小管扩张与萎缩均明显,肾间质有大量的纤维化组织出现。(2)与假手术组相比,模型组肾组织α-SMA于术后第3 d 即表达增加,并随梗阻时间延长表达逐渐增加,至UUO术后21 d达高峰。21 d模型组与假手术组比较,有显著差异(P<0.01)。(3)而E-Cad 蛋白于术后第3 d 即表达降低,并随梗阻时间延长逐渐降低。 结论: 在UUO阻塞性肾病中,α-SMA蛋白表达呈时间依赖性上调,而E-Cad 蛋白表达呈时间依赖性下调,提示在阻塞性肾病中,肌纤维母细胞的活化是一个动态的过程,可能与肾小管上皮细胞转分化有关。     

瞬时受体电位通道C亚族和炎症在高盐饮食致左心室纤维化中的作用

 目的：研究瞬时受体电位通道C亚族（TRPCs）和炎症在高盐饮食致左心室纤维化中的作用及替米沙坦的干预效应。方法：雄性 Wistar大鼠随机分为正常盐对照组(C组,n=13)、8%高盐组（HS组,n=24）和8%高盐+替米沙坦干预组(T组,n=12),每2周测量尾动脉压1次,喂养共24周。Masson染色和HE染色观察左心室纤维化及炎症反应。通过 real-time PCR或Western blotting法检测左心室TRPC1、TRPC3、TRPC6、钙调神经磷酸酶(CaN)、核因子κB p65（NF-κB p65）、转化生长因子 β1（TGF-β1）、白细胞介素 1β（IL-1β）、血管细胞黏附分子 1（VCAM-1）、细胞间黏附分子 1（ICAM-1）和单核细胞趋化蛋白 1（MCP-1） mRNA或相关蛋白表达。结果：与C组相比,HS组大鼠左室重量指数和胶原容积分数显著增加(P<0.05),TRPC1、TRPC3、TRPC6、CaN和NF-κB p65 mRNA或蛋白表达上升(P<0.05),HS组左心室有炎症细胞浸润,并伴随促炎症细胞因子TGF-β1、IL-1β、VCAM-1、ICAM-1和MCP-1 mRNA或蛋白表达的增高(P<0.05);经替米沙坦干预后,LVMI和CVF减小(P<0.05),TRPC1、TRPC3、TRPC6、NF-κB p65、TGF-β1、ICAM-1和MCP-1的mRNA或蛋白表达减少(P<0.05)。结论：局部组织炎症可能参与高盐诱导Wistar大鼠左心室纤维化的发生机制,炎症激活可能与TRPCs和NF-κB表达上调有关;替米沙坦可通过影响TRPCs和NF-κB表达,改善左心室的炎症及纤维化。     

Attenuation of renal fibrosis by proteasome inhibition in rat obstructive nephropathy: possible role of nuclear factor kappaB

We previously reported that pyrrolidine dithiocarbamate blocked nuclear factor-kappaB (NF-kappaB) activation and attenuated interstitial inflammation and tubulointerstitial fibrosis in the rat obstructive nephropathy. Since pyrrolidine dithiocarbamate is an anti-oxidant and possesses additional biological properties, present experiment was conducted to clarify further the role of NF-kappaB in the development of tubulointerstitial fibrosis in obstructed kidney using a proteasome inhibitor that blocks NF-kappaB through stabilizing IkappaB, an endogenous inhibitor of NF-kappaB. At 5 days following unilateral ureteral obstruction (UUO) in rats, obstructed kidney exhibited tubulointerstitial fibrosis that was associated with macrophage infiltration. UUO decreased renal cortical IkappaB protein contents with concomitant increases in NF-kappaB DNA-binding activity and gene expression of monocyte chemoattractant protein-1. Administration of PSI, N-benzyloxy-carbonyl-Ile-Glu (O-t-Bu)-Ala-leucinal, a proteasome inhibitor, (3 mg/kg/day, s.c., b.i.d) to UUO rats inhibited proteasome activity and attenuated the changes in IkappaB content, NF-kappaB activity and MCP-1 mRNA expression observed in UUO rats. PSI also decreased macrophage influx and attenuated the development of fibrosis. Furthermore, up-regulated gene expression of pro-fibrogenic molecules observed in the obstructed kidney was attenuated by PSI. These results further support the notion that NF-kappaB plays an important role in the development of renal fibrosis in the obstructive nephropathy.     

单侧输尿管梗阻模型小鼠肾脏微血管损伤与肾间质纤维化的关系研究

目的:观察单侧输尿管梗阻(UUO)后小鼠肾脏管周毛细血管(PTC)损伤、继发低氧及肾组织纤维化的变化,进一步探讨管周毛细血管损伤和缺氧对肾间质纤维化的影响。方法:将48只雄性昆明小鼠随机分为UUO组和对照组,采用左侧输尿管结扎术复制UUO模型,于术后1、3、7、14 d分别处死2组小鼠取左肾。采用M asson染色评定肾间质损伤程度;免疫组织化学方法测定血小板反应蛋白-1(TSP-1)、低氧诱导因子-1α(H IF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达和PTC密度变化;免疫印迹检查VEGF蛋白表达的变化。结果:假手术组肾组织结构形态正常,无纤维化的表现。UUO术后第1 d TSP-1表达开始升高,第3-14 d时升高更加显著(P0.05);VEGF在第1 d表达升高,第3-14 d表达逐渐降低(P0.05);PTC密度随之逐渐下降,H IF-1α表达逐渐升高,肾间质面积逐渐扩大。相关分析显示,TSP-1与PTC密度呈负相关(r=-0.874),PTC密度与H IF-1α表达呈负相关(r=-0.930),VEGF表达与PTC密度呈正相关(r=0.745),PTC密度与肾纤维化面积呈负相关(r=-0.787),H IF-1α与肾纤维化面积呈正相关(r=0.835),均P0.01。结论:UUO模型小鼠TSP-1表达升高,VEGF表达下降,PTC损伤和组织缺氧加重,肾间质纤维化面积扩大;缺血和缺氧可能是UUO后肾组织病变发生发展的重要原因。     

人参皂苷Rh1对UUO大鼠肾纤维化的抑制作用

目的:观察并探讨人参皂苷Rh1(G-Rh1)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾纤维化的抑制作用及其机制。方法:雄性SD大鼠40只,分为假手术组(sham组)、UUO组、G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组。手术后第2天开始,G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组分别每日灌胃50 mg/kg和100 mg/kg G-Rh1,连续2周。给药2周后,收集24 h尿测定尿蛋白,收集血清测定血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)。HE染色观察肾组织病理变化并对肾组织损伤程度评分。利用免疫组化和Western blot法观察肾组织中转化生长因子β_1(TGF-β_1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白和结缔组织生长因子(CTGF)的表达。结果:肾功能检测显示,各组大鼠24 h尿蛋白定量的差异无统计学显著性。UUO组BUN和SCr明显高于sham组(P 0. 05),G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组BUN和SCr明显低于UUO组(P 0. 05),同时G-Rh1高剂量组BUN和SCr低于G-Rh1低剂量组(P 0. 05)。光镜下观察,与sham组比较,UUO组病理改变显著,肾组织损伤明显,G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组与UUO组比较,肾损伤明显改善,G-Rh1高剂量组改善程度较G-Rh1低剂量组更显著。肾组织免疫组化显示,与sham组比较,UUO组肾小管及肾间质中TGF-β_1表达明显增多,G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组与UUO组比较,TGF-β_1表达明显下降,G-Rh1高剂量组较G-Rh1低剂量组降低更明显。Western blot检测显示,与sham组比较,UUO组Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA和CTGF蛋白表达明显增多(P 0. 01),G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组与UUO组比较,Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA表达明显下降(P 0. 05),G-Rh1高剂量组较G-Rh1低剂量组α-SMA和CTGF蛋白表达明显降低(P 0. 05),而Ⅰ型胶原蛋白表达无显著差异。结论:人参皂苷Rh1可缓解UUO大鼠肾组织纤维化,改善肾功能,其主要机制可能是抑制TGF-β_1信号通路中纤维化相关因子的表达。     

低氧刺激结缔组织生长因子表达与肾间质纤维化

目的：观察低氧对结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响，探讨低氧致肾间质纤维化的机制。方法： 单侧输尿管结扎（UUO）9 d大鼠动物模型，用RT-PCR方法检测肾组织中低氧标记分子-低氧诱导因子（HIF-1α）的mRNA水平，免疫组化方法观察假手术组及模型组肾组织中HIF-1α和CTGF的表达及部位，Western蛋白印迹技术检测肾组织CTGF的蛋白水平。体外实验，正常大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）分别置于低氧（1%O2）和正常氧条件下培养6 h，应用RT-PCR和Western蛋白印迹检测CTGF mRNA和蛋白表达水平。结果： 对照组肾组织未能检测到HIF-1α mRNA和HIF-1α蛋白表达；模型组肾组织有高水平HIF-1α mRNA，并出现HIF-1α蛋白表达，主要分布在小管-间质细胞；CTGF蛋白与HIF-1α蛋白表达部位及程度一致；低氧（1% O2）培养刺激NRK-49F细胞表达CTGF mRNA和蛋白。结论： 低氧刺激的CTGF的表达增加与肾间质纤维化的发生有关。