二吲哚吡啶基噻唑烷对肺癌A549细胞增殖的影响

目的:探讨二吲哚吡啶基噻唑烷(DIIT)对肺癌A549细胞增殖的影响。方法:通过CCK-8法测定DIIT对肺癌A549细胞活力的影响;EdU/DAPI双染法观察细胞增殖情况;Western blot法检测DIIT对Akt和mTOR磷酸化及细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达水平的影响。结果:与DMSO对照组相比,用浓度为12.5、25、50和100 mg/L的DIIT处理A549细胞后,细胞的增殖情况分别下降12%、27%(P0.01)、33%(P0.01)及52%(P0.01);EdU阳性细胞相对数比DMSO对照组分别降低10%、21%(P0.05)、26%(P0.05)及34%(P0.01)。与DMSO对照组相比,DIIT可以抑制Akt及mTOR的磷酸化水平,抑制细胞周期蛋白CDK4及cyclin D1的表达水平(P0.01)。结论:二吲哚吡啶基噻唑烷抑制A549细胞增殖,其作用机制可能与Akt及mTOR的磷酸化水平下降及细胞周期蛋白表达受到抑制有关。     

P21蛋白和XIAP在美伐他汀诱导A549细胞凋亡中的作用

目的 研究P21蛋白和凋亡相关基因XIAP在美伐他汀诱导A549细胞凋亡中的作用及其分子机制.方法 应用MTT法检测细胞系的增殖作用,流式细胞仪、透射电镜检测细胞周期和凋亡;用流式细胞术、Western blot和RT-PCR检测P21蛋白、XIAP蛋白及P21和XIAP mRNA的表达.结果 美伐他汀呈剂量和时间依赖性对A549增殖产生抑制;并诱导A549细胞G0/G1期阻滞和凋亡.美伐他汀对P21 mRNA及P21总蛋白的表达无影响,但可使P21胞膜蛋白的表达下降.美伐他汀作用后XIAP mRNA及XIAP蛋白的表达均下降.加入甲羟戊酸可完全逆转美伐他汀的上述作用.结论 美伐他汀通过甲羟戊酸途径抑制A549细胞增殖并诱导凋亡,使细胞周期进程阻滞于G0/G1期,XIAP参与美伐他汀诱导A549细胞凋亡的基因调控.美伐他汀靶向HMG-CoA还原酶,抑制P21蛋白异戊二烯化、阻止P21蛋白与细胞膜的结合,不影响P21总蛋白的表达.     

敲减microRNA-205靶向PTEN抑制食管癌细胞TE1的增殖并促进细胞凋亡

目的:探讨miRNA-205对食管癌细胞株TE1增殖和凋亡能力的影响及其作用机制.方法:实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western印迹检测正常食管黏膜细胞Het-1A和不同食管癌细胞株(KYSE70,TE12,TE1)中miRNA-205的mRNA及蛋白表达水平.转染miRNA-205抑制剂下调TE1细胞中miRNA-205的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖能力、细胞周期和细胞凋亡情况;Western印迹检测细胞增殖和细胞凋亡相关CDK2,cyclin D1,P21,Bcl-2,cleavedcaspase-3,caspase-3,p-Rb,Rb,p-Akt和Akt的蛋白表达水平.双荧光素酶报告基因分析法预测及验证其可能的靶基因.结果:MiRNA-205在各型食管癌细胞中高表达.沉默miRNA-205后,TE1细胞的增殖能力降低并表现为细胞周期阻滞,而细胞凋亡率显著升高(p＜0.05).同时细胞中cyclin D1,CDK2,bcl-2,p-Rb及p-Akt的蛋白表达水平均显著降低,p21及cleaved-caspase-3的蛋白表达水平显著升高.双荧光素酶报告基因分析显示PTEN是miRNA-205的可能作用靶点,TE1中共转染miRNA-205抑制剂和PTEN siRNA可部分逆转miRNA-205介导细胞增殖抑制及凋亡诱导作用.结论:沉默miRNA-205可靶向PTEN抑制食管癌细胞株TE1的增殖,并促进其凋亡,提示miRNA-205可作为食管癌诊疗的一个潜在作用靶点.     

小檗碱增强表柔比星诱导T24细胞G_0/G_1期阻滞的作用机制

目的:探讨小檗碱联合表柔比星对膀胱癌T24细胞周期的影响及相关作用机制。方法:实验将膀胱癌T24细胞分为4组:对照组、表柔比星组、表柔比星+小檗碱组和小檗碱组,采用MTT法检测细胞的活力,检测药物处理后对膀胱癌T24细胞增殖的抑制情况。用流式细胞术分析T24细胞周期分布并用Western blot法测定cyclin D1、CDK2、CDK4、P21和P27蛋白的表达水平。结果:小檗碱联合表柔比星显著抑制T24细胞的活力,存在时间依赖性,联合用药组的G_0/G_1期细胞比例增高,S期和G_2期细胞比例降低,与单用药物组及对照组比较有显著性差异(P0.05)。联合用药上调细胞周期依赖性激酶抑制蛋白P27和P21蛋白的表达水平,同时下调cyclin D1、CDK2及CDK4细胞周期蛋白的表达水平。结论:小檗碱增强表柔比星对膀胱癌T24细胞增殖的抑制及G_0/G_1期阻滞,其作用机制可能与上调P27及P21蛋白和抑制cyclin D1、CDK2及CDK4蛋白表达有关。     

敲减NEDD1表达抑制肺腺癌细胞增殖与迁移

目的:探讨神经前体细胞表达发育下调蛋白1(NEDD1)在肺癌发生和发展中的作用。方法:采用免疫组化实验检测NEDD1在肺癌组织中的表达情况,结合数据库资料分析NEDD1在肺癌组织与癌旁正常组织中的表达有无差异,并分析NEDD1的表达水平与肺癌预后的相关性;敲减NEDD1在A549细胞的表达后用平板集落形成实验检测集落形成能力的变化,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布的情况,Transwell小室实验检测对细胞的迁移能力的影响,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达,并分析NEDD1与周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)表达的相关性。结果:与正常肺组织相比,肺癌组织中NEDD1表达水平升高,Kaplan-Meier曲线预后分析显示NEDD1高表达者预后差,NEDD1低表达者预后较好;光镜下观察可见敲减NEDD1表达的A549细胞增殖速度明显减慢,平板集落形成能力降低(P0.05);与对照组相比,敲减NEDD1表达促进A549细胞凋亡,抑制细胞的迁移;与对照组相比,敲减NEDD1表达后G_1期细胞的比例增加,细胞阻滞于G_1/S期,Western blot检测周期相关蛋白水平可见p-Rb和cyclinD1蛋白表达水平降低,p-Chk1、p-Chk2和p-p53蛋白表达水平升高(P0.05);数据库分析结果示NEDD1与CDK2的表达呈正相关。结论:NEDD1具有抑制肺癌细胞凋亡、加速细胞周期进程从而促进细胞增殖的能力,且其在肺腺癌组织中的高表达与患者预后不良相关,因此可以作为肺腺癌诊断和预后新的标志分子。     

Perifosine通过抑制PI3K/Akt途径调节人胶质瘤U251细胞增殖、凋亡与自噬

 目的: 探讨Akt激酶抑制剂perifosine对人胶质瘤U251细胞凋亡、细胞周期和自噬的影响,确定perifosine诱导的细胞自噬与其促进胶质瘤细胞凋亡的相关性。方法: Perifosine处理U251细胞后,采用MTT法检测细胞活力;流式细胞术分析perifosine对U251细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI双标法检测perifosine对胶质瘤细胞凋亡的作用;免疫印迹法检测细胞内P21、P27和cyclin B1等细胞周期调控相关蛋白以及caspase-9、PARP等细胞凋亡相关蛋白的表达水平;通过观察细胞内自噬标志分子LC3-Ⅱ的分布与表达来确定perifosine对自噬的诱导作用。结果: Perifosine剂量依赖性地抑制U251细胞活力,能够通过抑制cyclin B1的表达而阻滞胶质瘤细胞周期于G₂期。Perifosine促进了U251细胞内caspase-9和PARP的剪切,抑制survivin表达,从而诱导胶质瘤细胞发生凋亡。同时,perifosine与自噬抑制剂氯喹联用后,U251细胞凋亡数量明显增加。结论: Perifosine能够抑制U251细胞的增殖,同时诱导细胞发生凋亡与自噬,抑制自噬促进了perifosine诱导的胶质瘤细胞凋亡。     

GANT61 阻断Hedgehog 信号通道调控肺腺癌A549 / DDP 细胞耐药的机制研究

目的:探讨GANT61阻断Hedgehog信号通道调控肺腺癌A549/DDP细胞增殖、细胞周期及耐药的机制研究。方法:应用CCK8法检测顺铂(DDP)对肺腺癌细胞株A549和A549/DDP的半数抑制浓度(IC50),从而计算A549/DDP细胞的耐药指数;同时采用Western blot检测A549、A549/DDP细胞中Gli1、Ptch1、Shh、XRCC1蛋白的表达水平。用不同浓度的GANT61干预A549/DDP细胞后,CCK8法检测增殖活力。流式细胞术检测GANT61对A549/DDP细胞凋亡率和细胞周期的影响。Western blot检测GANT61对A549/DDP细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响。采用20μmol/L GANT61联合不同浓度的顺铂干预A549/DDP细胞,CCK8法检测各组细胞增殖抑制率变化及Western blot检测各组细胞中XRCC1蛋白的表达水平。结果:A549/DDP细胞的耐药指数为5. 34。A549/DDP细胞与A549细胞相比,Gli1、Ptch1、Shh、XRCC1在蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P 0. 01或P 0. 05)。使用GANT61处理A549/DDP细胞,当其浓度分别≥20μmol/L、≥10μmol/L时,分别培养24 h和72 h,与对照组相比肿瘤细胞增殖活性下降(P0. 01),且呈现剂量依赖性。GANT61可通过下调c-myc、cyclin D1表达(P0. 01),阻滞细胞周期于G1期(P0. 01)。GANT61能够明显诱导A549/DDP细胞发生凋亡(P0. 05),其分子机制可能与促进caspase-3的剪切活化相关(P0. 05)。GANT61联合顺铂用药后使A549/DDP细胞抑制率显著增加,呈协同效应,且伴随XRCC1蛋白表达下降(P0. 01)。结论:Gli1在人肺腺癌耐药细胞A549/DDP中的表达明显高于顺铂敏感株A549,提示Gli1可能与肺腺癌顺铂耐药相关,且XRCC1蛋白在A549/DDP细胞高表达。故采用Gli1抑制剂GANT61能够明显抑制A549/DDP细胞增殖,阻滞细胞周期,并诱导细胞凋亡。体外试验中,GANT61与顺铂联合用药可以协同抑制增殖作用,其机制可能与下调XRCC1蛋白表达有关。     

虾青素通过阻断JAK1/STAT3通路抑制肺癌A549细胞增殖并促进其凋亡

目的探讨虾青素对A549肺癌细胞增殖、凋亡的影响及可能的作用机制。方法实验分为对照组、DMSO溶剂对照组、(20、40、60、80、100)μmol/L虾青素组;CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bax、信号转导子和转录激活子3(STAT3)和Janus激酶1(JAK1)蛋白水平。结果虾青素能够抑制A549细胞增殖,使A549细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡增加;虾青素上调Bax蛋白水平,下调Bcl-2、STAT3、JAK1蛋白水平。结论虾青素通过抑制JAK1-STAT3信号通路抑制肺癌A549细胞增殖并促进其凋亡。     

RhoA/ROCKI信号通路在紫杉醇诱导宫颈癌细胞周期阻滞中的作用

目的 探讨RhoA/ROCKI信号通路在紫杉醇诱导宫颈癌细胞周期阻滞中的作用及其分子机制。方法 MTT法确定能引起细胞生长显著性抑制最小浓度 (1 μmol/L) 的紫杉醇。流式细胞仪检测细胞周期和RhoA蛋白表达,Western blotting检测ROCKI、细胞周期蛋白 (cyclins) 及周期依赖性激酶 (CDKs) 的表达。结果 紫杉醇处理C33A细胞后,G₂/M细胞数和RhoA/ROCKI蛋白表达显著性增加,并呈时间依赖性;而cyclin B1、A、D1和CDK1蛋白表达显著性降低。上述现象被RhoA抑制剂C3转移酶全部反转;却被ROCKI蛋白抑制剂Y-27632部分反转,但与对照相比差异仍显著。紫杉醇或RhoA/ROCKI抑制剂对CDK2的表达无显著性影响。结论 紫杉醇诱导了宫颈鳞癌C33A细胞的G₂/M期阻滞,其机制与RhoA活性增强后抑制特异的cyclins和CDKs有关,而下游通路中ROCKI活性仅起到部分作用。     

冬凌草甲素对人食管鳞癌细胞系KYSE-150和KYSE-450增殖及迁移的影响

目的 探讨冬凌草甲素（ORI）对食管鳞癌细胞系KYSE-150和KYSE-450增殖、凋亡、周期及迁移的作用。 方法 MTT法检测ORI对食管癌细胞增殖的影响;集落形成实验检测ORI对集落形成的影响;流式细胞术检测ORI对食管癌细胞凋亡和周期的影响;Transwell迁移实验检测ORI对食管癌细胞迁移的作用;Western blotting检测ORI对抗凋亡蛋白Bcl-2、细胞周期抑制蛋白p21Cip1/Waf1及上皮-间质转化（EMT）标志蛋白表达水平的影响。 结果 ORI对KYSE-150和KYSE-450细胞的增殖、迁移和集落形成有显著的抑制作用（P<0.05）,且抑制作用呈一定的时间、剂量依赖性;流式结果显示,随着ORI浓度的增加,细胞的凋亡率明显增加（P<0.05）,G₂/M期细胞比例显著增加（P<0.05）,G₀/G₁期细胞比例明显下降（P<0.05）;ORI处理食管癌细胞48 h,Bcl-2、间质细胞标志蛋白,波形蛋白（vimentin）、β-连环蛋白（β-catenin）表达下调,p21Cip1/Waf1、上皮细胞标志蛋白,E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达上调。 结论 冬凌草甲素可能通过诱导细胞凋亡,阻滞细胞在G₂/M期抑制食管癌细胞的增殖,并通过抑制EMT转化从而抑制食管癌细胞的迁移。     

沉默ClC-3氯通道基因对HeLa细胞周期分布的影响

目的:探讨沉默HeLa细胞的ClC-3氯通道基因后细胞周期分布的变化及其作用机制。方法:依照siRNA设计原则构建沉默ClC-3基因的ClC-3 siRNA并转染HeLa细胞;实验分为空白对照组(control组)、转染试剂对照组(Lipo组)、阴性对照组(negative siRNA组)和ClC-3 siRNA组。采用real-time PCR检测ClC-3 siRNA的沉默效率;流式细胞术检测细胞周期分布情况;Western blot检测ClC-3蛋白及相关细胞周期蛋白(cyclin)D1、细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)4、CDK6、P21和P27等表达。结果:CIC-3 siRNA成功沉默HeLa细胞的ClC-3基因。和其它组相比,ClC-3 siRNA组的细胞周期被阻抑在G_0/G_1期。CIC-3 siRNA组的cyclin D1、CDK4和CDK6蛋白表达水平明显下降,P21和P27蛋白表达水平明显上升。结论:沉默HeLa细胞ClC-3氯通道基因可影响cyclin D1、CDK4、CDK6、P21和27蛋白的表达水平胆抑HeLa细胞周期停滞在G_0/G_1期。     

小檗碱增强丝裂霉素C诱导的膀胱癌T24细胞周期阻滞及凋亡

目的:研究小檗碱(berberine,Ber)增强丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)诱导的人类膀胱癌T24细胞周期阻滞和细胞凋亡的作用及其相关机制。方法:将T24细胞分为4组:对照组、MMC组、MMC+Ber组和Ber组;采用CCK-8法检测不同药物处理后T24细胞的活力;采用流式细胞术分析不同药物处理后T24细胞周期的情况;Western blot检测细胞周期调控相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达;Annexin V-FITC/PI双染后用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果:CCK-8实验表明Ber能增强MMC抑制T24细胞活力的作用;流式细胞术检测细胞周期结果显示,MMC+Ber组T24细胞滞于G_0/G_1期(P0.05);与MMC组相比,MMC+Ber组p21和p27的蛋白表达上调(P0.05),cyclin D1、CDK2和CDK4的蛋白表达下调(P0.05),同时Ber促进MMC下调survivin的蛋白表达(P0.05);Annexin V-FITC/PI双染结果显示,Ber能促进MMC诱导的T24细胞凋亡(P0.05)。结论:Ber能显著增强MMC抑制T24细胞活力的作用,其机制可能是通过上调p21和p27,进而抑制cyclin D1、CDK2和CDK4表达;同时通过抑制survivin蛋白的表达,最终导致细胞被阻滞在G_0/G_1期,并促进细胞凋亡。     

三叶因子3对甲状腺乳头状癌细胞周期的影响及机制

目的 探讨三叶因子3 (TFF3)基因沉默对人甲状腺乳头状癌TPC-1和BCPAP细胞增殖及细胞周期的影响及相关分子机制。 方法 包装TFF3 shRNA 慢病毒载体,病毒感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株;生长曲线和集落形成实验检测沉默TFF3后细胞增殖状况;流式细胞术检测TFF3基因对TPC-1和BCPAP细胞周期的影响;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测P27、P21和cyclin D1、周期蛋白依赖性激酶（CDK）4 mRNA的表达情况;免疫印迹法(Western blotting)、免疫细胞化学染色检测周期相关蛋白P27、P21、cyclin D1、CDK4和蛋白激酶B（Akt）、pAkt的蛋白表达水平。 结果 成功包装TFF3 shRNA 慢病毒载体,病毒液感染获得TPC-1和BCPAP稳转细胞株;生长曲线和集落形成实验结果显示,沉默TFF3后,细胞增殖能力减弱;流式细胞术结果显示,与对照组相比,TFF3基因沉默组G₁期的细胞比例明显增高(*P<0.05),S和G2期的细胞比例明显下降（*P<0.05);TFF3沉默组TPC-1和BCPAP细胞中的P27、P21 mRNA和蛋白明显上调（*P<0.05),而cyclin D1,CDK4 mRNA和蛋白表达降低（*P<0.05);4株细胞Akt蛋白含量无明显差异,但沉默TFF3组磷酸化蛋白激酶B（pAkt）表达减弱;免疫细胞化学染色显示,cyclinD1阳性蛋白位于癌细胞胞核,P27、P21蛋白表达于胞质和胞核,且沉默TFF3后在细胞核中阳性信号增强,细胞质中阳性表达降低。 结论 沉默TFF3可明显延长甲状腺癌细胞周期,抑制细胞的增殖,可能与抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路相关蛋白的表达有关。     

地西他滨抑制K562白血病细胞增殖和诱导分化的作用

目的:观察地西他滨(DAC)抑制白血病K562细胞生长和诱导分化的作用。方法:不同浓度的DAC处理K562细胞。MTT法和半固体集落生成实验检测K562细胞增殖能力;瑞氏染色观察细胞形态;流式细胞术检测分化相关抗原CD11b和CD42b阳性表达率;Western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白E1(cyclin E1)、细胞周期负调控因子P27、红系分化核转录因子GATA-1及粒系分化核转录因子PU.1蛋白的表达水平。结果:DAC能够减少K562细胞集落形成的数量,降低细胞活力,减少核质比,抑制K562细胞进入S期,并阻滞在G_2/M期,提高分化相关抗原CD11b和CD42b阳性表达率,上调P27、GATA-1和PU.1蛋白表达,同时下调CDK2和cyclin E1蛋白表达。结论:DAC可能通过调控细胞周期抑制K562细胞增殖,同时诱导多向分化。     

抑制cyclinD1表达对乳腺癌细胞增殖及cyclinE、CDK2和p21cip1转录的影响

目的　分析探讨人乳腺癌细胞中 cyclin D1的表达受到反义 RNA抑制后 ,细胞增殖能力的变化以及cyclin E,CDK2和 p2 1cip1 (cip1/ waf1/ sdi1)基因表达受到的影响。　方法　将表达 cyclin D1反义 RNA的重组质粒转入人乳腺癌细胞 ,由此抑制细胞中 cyclin D1的表达 ,然后分析细胞生长速率和各时相细胞分布比例的变化 ,并通过Northern blot分析有关基因的表达水平。　结果　 cyclin D1表达受到抑制的细胞与对照相比 ,细胞增殖速率明显下降 ,培养至第 6 d时 ,生长抑制率为 5 4%。细胞周期各时相的分布比例也有较大的变化 ,G1期细胞比例上升 ,而 S期及 G2 / M期细胞比例下降。cyclin E和 CDK2的 m RNA水平显示出有不同程度的下降 ,而 p2 1cip1的表达无明显变化。　结论　 cyclin D1表达的抑制可明显减弱人乳腺癌细胞的异常增殖 ,同时表明同为细胞周期调控基因的 cyclin E和CDK2的表达与 cyclin D1的表达密切相关 ,而 p2 1cip1的表达不受 cyclin D1的影响     

参慈胶囊联合顺铂通过PI3K/AKT/mTOR信号通路逆转人肺腺癌顺铂耐药的机制研究

目的:探讨参慈胶囊联合顺铂是否通过PI3K/AKT/mTOR信号通路逆转接种人肺腺癌A549/DDP细胞的裸鼠体内的顺铂耐药。方法:建立裸鼠人肺腺癌移植瘤模型,随机分为对照组、参慈胶囊组、顺铂组和参慈胶囊+顺铂组。对照组予生理盐水,其余各组荷瘤裸鼠均用药21 d,断颈处死,取肿瘤组织,采用流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡;采用FQ-PCR技术检测A549/DDP肺癌组织PTEN、P-糖蛋白、PI3K、AKT和mTOR的mRNA表达情况。结果:参慈胶囊组、顺铂组和参慈胶囊+顺铂组与对照组比较,对人肺腺癌A549/DDP细胞的增殖均有抑制作用,其中参慈胶囊+顺铂组较其它治疗组能够进一步将人肺腺癌A549/DDP细胞阻滞于G_2/M期,促进细胞凋亡,增加PTEN的表达,抑制P-糖蛋白、PI3K、AKT和mTOR的表达。结论:参慈胶囊可能通过阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路,促进PTEN的表达,或者抑制P-糖蛋白介导的耐药途径,增强裸鼠体内人肺腺癌A549/DDP耐药细胞对顺铂的敏感性。     

miRNA-93在急性淋巴细胞白血病中的表达

目的:探讨微小RNA(miRNA)-93在急性淋巴细胞白血病中的表达情况及其对急性T细胞白血病细胞株Jurkat增殖的影响和潜在作用机制。方法:Real-time PCR技术检测急性白血病患者骨髓样本中miRNA-93的表达水平。转染miRNA-93 inhibitor下调Jurkat细胞中miRNA-93的表达,分别采用CCK-8法、Ed U法和流式细胞术检测细胞活力、增殖及周期,Western blot检测周期相关调控因子cyclin D1、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、p-Rb及P27的蛋白表达水平。结果:miRNA-93在急性白血病患者中呈现高表达,且在高危患者中表达水平最高;沉默miRNA-93后,Jurkat细胞的活力下降并出现明显的G1/S期阻滞,同时细胞中cyclin D1、CDK4、p-Rb的蛋白水平显著降低,而P27的蛋白水平显著升高。结论:miRNA-93在急性淋巴细胞白血病中表达显著升高;沉默miRNA-93可通过调控周期相关因子的表达抑制急性T细胞白血病细胞株Jurkat的增殖。