膜联蛋白A7低表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的 探讨膜联蛋白A7低表达对人肝癌HepG2细胞的增殖产生的影响。方法 采用Western blotting法鉴定siRNA可有效抑制膜联蛋白A7表达,然后用脂质体转染法将siRNA转染入HepG2细胞,将细胞分为siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,在转染后24h、48h、72h进行细胞计数以绘制细胞增殖曲线,转染后48h进行MTT实验以检测细胞增殖活力;免疫组织化学法检测cyclinD1和Ki67的表达,Western blotting法检测cyclinD1的表达情况。结果 转染了靶向膜联蛋白A7的siRNA后48h的HepG2细胞,细胞计数和MTT实验可见siRNA干扰组细胞增殖活力较阴性对照组和空白对照组显著降低（P<0.05）;cyclinD1和Ki67蛋白表达均为siRNA干扰组细胞表达显著低于两对照组（P<0.05）。 结论 膜联蛋白A7低表达可能对HepG2细胞的增殖具有一定的抑制作用。     

膜联蛋白A7低表达对人宫颈癌HeLa细胞系增殖与凋亡的影响

目的 探讨膜联蛋白A7表达减少是否对人宫颈癌HeLa细胞系的增殖和凋亡产生影响. 方法 采用Western blotting鉴定siRNA可否有效抑制膜联蛋白A7表达,然后用脂质体转染法将siRNA转染入HeLa细胞,将细胞分为siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,分别在转染后48h进行刃天青实验以观察细胞增殖状况的改变;流式细胞术检测3组细胞凋亡情况. 结果 在转染膜联蛋白A7的siRNA后48h的HeLa细胞, 刃天青实验可见siRNA干扰组细胞增殖较阴性对照组和空白对照组显著降低(P<0.05);流式细胞术实验可见siRNA干扰组细胞凋亡显著增多(P<0.05). 结论 膜联蛋白A7的低表达可能影响HeLa细胞的增殖和凋亡.     

膜联蛋白A7低表达对胃癌MGC-803细胞生物学特性的影响

目的 探讨膜联蛋白A7(ANXA7)低表达对人胃癌低分化细胞MGC-803的影响。方法 将细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组。采用RNA干扰技术将靶向ANXA7的siRNA和阴性对照siRNA以脂质体转染法分别转染胃癌细胞系MGC-803细胞, 空白对照组不予任何处理。转染48h后,采用Western blotting 和实时定量-PCR法进行抑制效果的鉴定。检测ANXA7低表达对MGC-803细胞黏附、伸展、剥脱和迁移等生物学行为的影响。 结果 靶向ANXA7的siRNA可显著抑制ANXA7的表达;ANXA7表达受抑后,细胞黏附、伸展和剥脱能力降低,与阴性对照组和空白对照组相比,差异显著（P<0.05）。细胞迁移变化不显著。结论 ANXA7表达降低后MGC-803细胞行为学发生明显改变。     

miRNA-7介导Bax和Bcl-2表达对人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡的影响

 目的:研究过表达微小RNA-7(microRNA-7,miRNA-7)诱导人鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)CNE-1细胞凋亡及其与Bax和Bcl-2表达之间的关联情况。方法:体外利用脂质体Lipofectamine 2000将miRNA-7模拟物转染到人鼻咽癌CNE-1细胞中;采用real-time PCR法检测转染后各实验组细胞中miRNA-7的相对表达情况;CCK-8法检测各组细胞活力的改变;在荧光显微镜下利用Hoechst 33258荧光染色法观察转染后细胞的凋亡;real-time PCR法检测Bax和Bcl-2的mRNA表达水平;Western blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果:Real-time PCR结果表明,转染miRNA-7模拟物的CNE-1细胞中其miRNA-7的相对表达水平明显高于无关序列组和空白对照组(P<0.01);转染miRNA-7模拟物后,CNE-1细胞的活力明显下降(P<0.01);Hoechst 33258染色检测可发现典型的凋亡细胞核形态学变化;real-time PCR及Western blot结果显示,转染miRNA-7模拟物的CNE-1细胞中Bax的mRNA及蛋白显著上调(P<0.01),而Bcl-2的mRNA及蛋白则显著下调(P<0.01)。结论:过表达miRNA-7可以通过调节Bax/Bcl-2之间的比例关系来抑制鼻咽癌CNE-1细胞的恶性生长,并促进细胞凋亡。     

敲低膜联蛋白A5对人胃癌MGC-803和MKN-45细胞周期的影响

目的 探讨敲低膜联蛋白A5（ANXA5）对人胃癌细胞系MGC-803、MKN-45细胞周期相关蛋白表达的影响。 方法 将细胞分为干扰组、阴性对照组及空白对照组,采用脂质体转染法将靶向膜联蛋白A5的siRNA以及阴性siRNA分别转染干扰组和阴性对照组MGC-803、MKN-45细胞,空白对照组不加任何试剂。转染后48 h采用Real-time PCR和Western bloting分别从mRNA和蛋白水平检测ANXA5的表达,确定ANXA5被敲低之后,Real-time PCR和Western bloting检测各组p21^cip1 mRNA和P21^cip1的表达,Western bloting检测各组细胞周期蛋白D1（cyclinD1）蛋白的表达,流式细胞术检测各组细胞周期的变化情况。 结果 敲低ANXA5后,与阴性对照组和空白对照组相比,两种细胞的p21^cip1mRNA和P21^cip1蛋白均显著降低（P<0.05）,cyclinD1（P<0.05）也显著降低。 结论 敲低ANXA5可下调MGC-803、MKN-45细胞中p21^cip1mRNA和P21^cip1蛋白以及cyclinD1的表达,推测ANXA5可能通过作用于细胞周期相关蛋白而引发细胞周期阻滞从而影响着胃癌的发展。     

低浓度乙醇对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用

目的探讨低浓度乙醇对人肝癌Hep G2细胞的杀伤作用,及其作用机制。方法以体外培养的人肝癌Hep G2细胞为研究对象,MTT法检测细胞毒性,吖啶橙(AO)、溴化乙锭(EB)染色观察细胞凋亡形态,2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)法检测Hep G2细胞内活性氧族(ROS)水平,罗丹明123(Rh123)染色检测线粒体膜电位变化,免疫荧光法检测Caspase-9表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 MTT显示,低浓度乙醇呈时间依赖性和剂量依赖性抑制Hep G2细胞增殖,1.0、1.6mol/L乙醇作用6h后,细胞内ROS、Caspase-9荧光强度均显著高于对照组(P0.01,n=20),Rh123荧光强度显著低于对照组(P0.01,n=20);高内涵活细胞成像系统可见细胞核固缩呈圆珠状凋亡特征;流式细胞术显示,1.0mol/L乙醇作用6h可诱导27.92%Hep G2细胞凋亡,5.4%细胞坏死;1.6mol/L乙醇作用6h可诱导31.22%Hep G2细胞凋亡,15.1%Hep G2细胞坏死。结论低浓度乙醇可通过升高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位,上调Caspase-9表达,通过线粒体途径诱导Hep G2细胞凋亡。     

环氧合酶-2抑制剂对非小细胞肺癌A549细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨环氧合酶-2抑制剂对非小细胞肺癌A549细胞Bcl-2和Bax表达的影响。方法加不同浓-1度塞来昔布与A549肺癌细胞共培养,MTT法检测细胞增殖,50μmol·L塞来昔布作用于A549细胞48 h,实时定量PCR方法检测各组细胞的Bcl-2和Bax基因表达水平,Western blot方法检测各组细胞的Bcl-2和Bax蛋白表达。结果塞来昔布在体外对细胞株A549的生长抑制作用呈剂量、时间依赖性;各组细胞培养48h后,相比于对照组,塞来昔布组细胞Bcl-2 m RNA和蛋白表达显著下调,Bax m RNA和蛋白表达显著上调,Bcl-2/Bax比值显著降低(<0.01)。结论塞来昔布可能通过调节Bcl-2和Bax的表达抑制A549细胞增殖。     

敲低Aurora-A抑制HepG2人肝癌细胞增殖并促进其凋亡

目的 探讨敲低Aurora-A对HepG2人肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计Aurora-A短发夹RNA(shRNA)片段,构建和包装Aurora-A shRNA慢病毒载体,转染HepG2细胞,实时定量PCR检测Aurora-A mRNA表达,Western blot法检测Aurora-A蛋白及磷酸化水平,噻唑蓝(...     

雌激素对大鼠胸腺细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨苯甲酸雌二醇对大鼠胸腺Bcl-2和Bax表达及细胞凋亡的影响及其机制.方法:雌性大鼠行卵巢切除术,给予苯甲酸雌二醇后,观察胸腺指数的变化,Hochest33342荧光染色及透射电镜标本观察胸腺细胞凋亡情况,免疫组织化学检测胸腺组织中Bcl-2和Bax的表达情况,原位杂交技术检测Bcl-2、Bax m RNA的表达情况.结果:双侧卵巢切除组大鼠胸腺指数较假手术组增加,双侧卵巢切除+雌激素组大鼠胸腺指数较双侧卵巢切除组减小;假手术组和双侧卵巢切除组大鼠胸腺组织中以正常胸腺细胞为主,偶见凋亡细胞或凋亡小体,双侧卵巢切除+雌激素组可见较多凋亡细胞和凋亡小体;双侧卵巢切除+雌激素组大鼠胸腺组织中Bcl-2表达较双侧卵巢切除组和假手术组增高明显降低,而Bax表达呈现相反趋势;Bcl-2 mRNA、Bax mRNA的表达与Bcl-2、Bax的表达呈一致性.结论:雌激素可以降低大鼠胸腺指数,抑制胸腺组织中Bcl-2的表达,促进Bax的表达,从而诱导大鼠胸腺细胞凋亡,促进雌性大鼠胸腺退化.     

膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察宫颈癌细胞系HeLa细胞在膜联蛋白A5表达降低后,细胞增殖和凋亡的情况. 方法 采用BNA干扰的方法,通过免疫印迹法筛选出对HeLa细胞中膜联蛋白A5的表达抑制效率最高的siRNA,脂质体法将siRNA转染入细胞48h后,用MTT法检测细胞增殖的改变情况,用细胞凋亡光学检测试剂盒检测细胞的凋亡.结果 Helm细胞中膜联蛋白A5的表达被显著抑制,其增殖速度与未转染siRNA的普通HeLa细胞相比,无显著性差异;细胞凋亡显著减少,与未转染siRNA的普通HeLa细胞相比,有显著性差异. 结论 膜联蛋白A5低表达对宫颈癌细胞系HeLa细胞的增殖未见显著影响,但可能影响了细胞的凋亡.     

Galecin-3在膜联蛋白A7表达抑制的HeLa细胞中的表达变化

目的探讨膜联蛋白A7(ANXA7)表达抑制的HeLa细胞galectin-3(gal-3)的表达改变。方法将细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组。采用RNA干扰技术将靶向ANXA7的siRNA和阴性对照siRNA脂质体2000转染法分别转染宫颈癌细胞系HeLa细胞,空白对照组不予任何处理。转染48h后采用Western blotting法和RT-PCR法分别在蛋白水平和mRNA水平进行抑制效果的鉴定。Western blotting和实时定量PCR法分别检测ANXA7表达抑制的HeLa细胞中galectin-3的表达改变。结果靶向ANXA7的siRNA可显著抑制ANXA7的表达;当ANXA7表达受抑后,galectin-3在HeLa细胞中的表达显著下降,与阴性对照组和空白对照组相比,差异有显著性(P0.05)。结论 ANXA7表达抑制的宫颈癌细胞系HeLa细胞中galectin-3的表达显著下调,这可能是ANXA7表达受抑的细胞行为学发生改变的机制之一。     

热休克蛋白70在缺糖损伤的HeLa细胞中对Bax和Bcl-2以及Bax构象改变的影响

目的 观察热休克蛋白70(Hsp70)对缺糖引起的HeLa细胞凋亡的影响,探讨其与凋亡相关的Bcl-2家族成员的相互作用关系. 方法 用人正义Hsp70重组质粒稳定转染HeLa细胞获得Hsp70过表达细胞.采用Hsp70过表达和正常HeLa细胞无糖培养建立两组细胞损伤模型,并均取3个平行样本.四甲基偶氮唑盐(MTT)法测细胞活率;Hoechst染色法和Giemsa染色法检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测Bax和Bcl-2的表达变化,并计算其灰度比值;细胞免疫化学和荧光免疫法检测Bax构象改变情况. 结果 缺糖48h内,Hsp70明显抑制了HeLa细胞凋亡并增强其活力,同时也抑制了凋亡细胞中 Bax/Bcl-2的增高以及Bax的构象改变. 结论 缺糖诱导下,热休克蛋白70在HeLa细胞中能够通过与Bcl-2家族成员作用而抑制凋亡的发生.     

Nodosin对HepG2细胞株的增殖抑制作用及对Bcl-2和Bax表达的影响

 目的:研究传统中药提取物nodosin对体外培养的人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用,并探讨其对Bcl-2和Bax表达的影响。方法:将不同浓度组（1.25、2.5、5、10和20 μmol/L）nodosin预作用于HepG2细胞24 h,用倒置显微镜观察nodosin对细胞形态学的影响,采用MTT法检测细胞生长抑制率,用流式细胞术检测细胞凋亡率和Bcl-2、Bax的表达。结果:形态学结果显示,随着nodosin剂量的增加,细胞皱缩和漂浮细胞数量增加,流式细胞术检测结果显示随着nodosin药物浓度的增加,HepG2细胞凋亡率增加。Bax的表达随着nodosin剂量的增加逐渐增加, Bcl-2的表达逐渐减少。结论: Nodosin能抑制HepG2细胞株的增殖,呈明显的剂量依赖性,对HepG2细胞的抑制作用是通过增加Bax的表达以及降低Bcl-2的表达诱导细胞凋亡实现的。     

人参皂甙Rg1对大鼠肢体缺血再灌注后脑组织Bax和Bcl-2表达的影响

目的:探讨肢体缺血再灌注(LIR)后脑组织Bax和Bcl-2基因表达的变化及人参皂甙Rg1对其影响.方法: 复制大鼠LIR模型,用人参皂甙Rg1进行干预,测定脑组织丙二醛(MDA)含量,采用尼氏染色观察脑组织病理学改变,TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫组织化学方法检测Bax、Bcl-2表达,免疫印迹法检测Bax、Bcl-2表达变化.结果: 大鼠LIR后,脑组织海马区、中脑红核区神经元细胞受损,脑组织出现水肿裂隙,Bax的表达明显上调,与细胞凋亡数量的增加相一致,Bcl-2表达也相应增加.人参皂甙Rg1干预组与LIR组相比,MDA含量、凋亡细胞数、Bax表达降低.Bcl-2表达降低不明显.结论: LIR后有细胞凋亡机制参与脑损伤的发生,人参皂甙Rg1可能通过抑制Bax表达,降低Bax/Bcl-2比值,从而减轻脑损伤.