1-(2, 6-二甲基苯氧基)-2-(3, 4-二甲氧基苯乙氨基) 丙烷盐酸盐对培养的乳鼠心肌细胞[Ca2+]i的影响

采用 Fura- 2 / AM显微荧光测钙技术 ,检测培养新生大鼠单个心肌细胞内游离钙的浓度 ,并观察 1- (2 ,6 -二甲基苯氧基 ) - 2 - (3,4-二甲氧基苯乙氨基 )丙烷盐酸盐 (DDPH)对不同刺激〔去氧肾上腺素 ,高 K ,血管紧张素 (Ang II)〕所致心肌细胞钙超载的影响。结果表明 :1在含钙、无钙标准台氏液 ,DDPH 10 - 4 m ol· L- 1 对去氧肾上腺素(Phe) 10 - 4 mol· L- 1 所致钙增高有显著抑制作用。 2 DDPH 10 - 4 m ol· L- 1 对高 K 5 0 m mol· L- 1 引起的 [Ca2 ]i增高有一定抑制作用 ,对 Ang 10 - 4 mol· L- 1 引起的 [Ca2 ]i增高有部分拮抗作用。提示 :DDPH可拮抗 α1 受体调控的 Ca2 通道 ,对钙库钙释放也有抑制作用 ,对电压依赖性钙通道有一定调控作用     

苯海索对血红素所致大鼠胚胎皮层神经细胞损伤的保护作用

目的 :观察苯海索对血红素所致大鼠胚胎皮层神经细胞损伤的保护作用。方法 :体外培养大鼠胚胎皮层神经细胞 ,加入血红素建立神经细胞血红素损伤模型 ,以不加血红素者为正常对照 ,观察不同浓度苯海索对血红素损伤模型神经细胞死亡数 ,乳酸脱氢酶 (LDH)的漏出量 ,培养液中丙二醛 (MDA)和超氧化物歧化酶 (SOD)活性的影响。结果 :苯海索 10 -9mol·L-1、10 -8mol·L-1、10 -7mol·L-1能浓度依赖性地显著减少细胞死亡 ,降低LDH漏出量及MDA生成 ,提高SOD活性。结论 :苯海索对血红素所致神经细胞损伤具有显著的保护作用 ,其机制可能与苯海索抗过氧化作用有关。     

5-羟色胺对培养胃底平滑肌细胞内游离钙动员的影响

目的　研究 5 - HT诱导胃底平滑肌细胞内钙动员的机制 .方法　采用 Ca2 +指示剂 Fluo- 3/ AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的胃底平滑肌细胞 ,共聚焦技术检测细胞内钙荧光强度的变化 .结果　基础状态下 SFSMC[Ca2 + ]i 荧光强度 (FI)为 2 6 4± 15 ,5 - HT 10μmol· L- 1 使荧光强度的变化 ΔFI为 16 .5± 2 .6 ;细胞外无钙时 ,5 - HT升高[Ca2 + ]作用被减弱 ,但除去细胞外钙 ,并使用内罗啶 (ryan-odine)孵育后 ,5 - HT 不再引起荧光强度的变化 ;10μmol· L- 1 米安舍林 (mianserin)可部分拮抗 5 - HT升高[Ca2 + ]i 的作用 ,赛更定 (cyprohetadine)不能抑制 5 - HT升高的胞内钙 ;Mn92 0 2和拉西地平 (lacidipine)均能完全抑制 5 -HT升高 [Ca2 + ]i 的作用 .结论　 5 - HT可通过促进外钙内流及钙池 (SR)释放使 [Ca2 + ]i 升高 ;在胃底平滑肌 5 - HT升高胞内钙部分通过 5 - HT2 受体 ,而不是通过 5 - HT1 C受体 ;5 -羟色胺通过 L型钙通道促外钙内流 ;二氢吡啶类钙拮抗剂能通过阻滞 L 型钙通道 ,而完全抑制 5 - HT促胞内钙升高的作用     

赛庚啶对谷氨酸诱导的神经元损伤的影响及可能机制

目的 :观察赛庚啶 (Cyproheptadine,CPH)对谷氨酸 (Glutamate ,Glu)诱导的大鼠大脑皮质神经细胞兴奋毒性的影响及其可能机制。方法 :实验分 5组 ,①对照组 ;②Glu组 ;③Glu +1μmol·L-1CPH组 ;④Glu +10 μmol·L-1CPH组 ;⑤Glu +10 0 μmol·L-1CPH组 ,用倒置显微镜观察神经细胞形态的变化 ,用Trypanblue染色法观察细胞死亡率 ,测定乳酸脱氢酶 (LDH)和总过氧化物歧化酶 (T SOD)的变化。结果 :5 0 μmol·L-1Glu使细胞死亡率升高 ,LDH释放显著增加 ,T SOD降低。 10 ;10 0 μmol·L-1CPH能减少LDH的释放 ,降低细胞死亡率 ,1;10 ;10 0 μmol·L-1CPH还能升高T SOD。结论 :CPH对Glu介导的神经元损伤有保护作用 ,其机制可能与提高T SOD的活性 ,使神经细胞抵抗自由基攻击的能力和抗脂质过氧化作用增强有关。     

细胞内钙离子分析

钙离子是人体内重要的阳离子 ,具有极其重要的生理功能 ,如 :作为第二信使 ,完成生物信号的跨膜传递 ,维持神经、肌肉正常兴奋性 ,调节腺体分泌等。测定细胞内游离钙离子的含量及其变化是研究细胞功能的重要方法。现着重对细胞内游离钙离子的测定方法加以叙述。1　钙离子的生理钙离子广泛存在于细胞内、外液 ,具有重要的生理功能。细胞内的钙离子主要贮存于线粒体和内质网内。细胞外液中的钙离子浓度远高于细胞内液 ,如 :神经细胞在静息状态下细胞内游离钙离子浓度为 10 - 8～ 10 - 7ｍｏｌ/Ｌ。细胞外浓度为 10 - 4～ 10 - 3ｍｏｌ/Ｌ[1] …     

雌激素对大鼠心肌细胞钙的调控作用研究

目的　观察雌激素对大鼠心肌细胞钙转运的调控作用 .方法　应用膜片钳全细胞记录方法观察 L型钙通道电流 (ICa.L) ,共聚焦显微镜系统分析细胞内钙浓度 ([Ca2 +]i)的变化 .结果　应用 10 μmol· L- 1和 30 μmol· L- 1的 17β- Estradiol,分别使 ICa.L抑制到正常的 (4 8.1± 4.5 ) %和 (2 9.3± 5 .2 ) % (n=5 ,P<0 .0 1) . 10μmol· L- 1 的 17β- Estradiol可升高静息的培养心肌细胞[Ca2 +]i,荧光强度 (FI)值由 5 4.2± 13.6增加到 86 .5± 15 .3(n=6 ,P<0 .0 1) ;而对具有自发收缩的心肌细胞钙瞬变幅度有明显的抑制作用 ,由给…     

1,6-二磷酸果糖抑制白细胞介素-1β诱导的胰岛β细胞内钙超载

目的探讨1,6-二磷酸果糖（FDP）对白细胞介素-1β（IL-1β）损伤胰岛β细胞的保护作用。方法分离3-5日龄W istar大鼠胰岛,进行胰岛细胞体外培养,在培养细胞中加入IL-1β及FDP,用紫外分光光度法测细胞内游离钙离子浓度,用火焰原子吸收光谱法测量加入FDP前后细胞的总钙量。结果在胰岛细胞中加入IL-1β后,细胞内游离钙离子浓度及细胞总钙量均升高;在IL-1β损伤后的胰岛细胞中加入FDP的钠盐共同培养后,细胞内游离钙离子浓度及细胞内总钙量均减少（P〈0.01）。结论IL-1β引起胰岛β细胞外钙离子内流入细胞内,导致胰岛β细胞内钙超载。加入FDP可抑制IL-1β引起的胰岛β细胞内钙超载,表明FDP对胰岛β细胞有一定保护作用。     

过氧化氢刺激下肾近曲小管上皮细胞内钙离子变化

细胞内钙超载是细胞致死性损伤的一个重要特征：由于细胞膜受损，通透性增高，使细胞外钙顺着浓度梯度大量内流；由于线粒体受损，ATP生成障碍导致钙泵功能障碍，不能排出和摄取细胞浆中过多的钙。但目前的研究仍未搞清细胞内钙超载是细胞损伤的原因抑或结果。本实验观察体外培养的猪近曲小管上皮细胞在亚致死剂量过氧化氢刺激下细胞内钙的动态变化。     

5-羟色胺对心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的　观察 5 -羟色胺 (5 - HT)对新生大鼠心肌细胞内游离 Ca2 + 浓度的影响 ,并探讨其作用机制 .方法　培养 SD大鼠 (1～ 3d)心肌细胞 ,应用特异性 Ca2 +荧光指示剂 Fluo- 3/AM负载细胞 ,激光共聚焦显微镜检测游离 Ca2 + 浓度 .结果　 5 - HT在 10 - 6 ,10 - 5,10 - 4 m ol· L- 1 时均可升高心肌游离Ca2 + 浓度 ,且随剂量增加而加强 ;二氢吡啶类钙通道阻断剂lacidipine可部分拮抗 5 - HT的作用 ;心肌肌浆网内钙释放通道 ryanodine受体调节剂 ryanodine,在 10 - 5mol· L- 1 时也可部分拮抗 5 - HT的作用 ;用 EGTA络合细胞外液中游离Ca2 + ,5 - HT升高心肌游离 Ca2 + 作用明显减弱 ;此外 ,5 - HT二型受体 (5 - HT2 R)阻断剂赛庚定具有显著抑制 5 - HT升高心肌游离 Ca2 + 的作用 .结论　 5 - HT具有升高心肌游离 Ca2 + 的作用 ,其机制可能与细胞外 Ca2 +经 5 - HT2 R或二氢吡啶类钙通道进入细胞以及肌浆网内钙释放有关     

雷公藤单体T10对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用及机制研究

目的:以谷氨酸为工具药建立帕金森病(Parkinson disease, PD)的氧化应激模型,观察雷公藤内酯醇(triptolide, T10)的保护作用并初步探讨其作用机制.方法:分别用10-10 、10-9 mol*L-1的T10和/或10、50 mmol*L-1谷氨酸处理PC12细胞24 h,MTT法检测细胞的活力,并用AnnexinV-FITC和PI对活细胞进行双标,流式细胞仪检测凋亡细胞百分率.分别采用荧光探剂2′7′-二氯荧光素乙酰乙酸盐和JC1定量检测细胞内活性氧和线粒体膜电位水平以探讨其作用机制.结果:谷氨酸处理PC12细胞24 h,可引起细胞的凋亡和坏死,细胞内活性氧形成明显增加,线粒体膜电位下降.而用10-10或10-9 mol*L-1的T10预保护30 min可明显减轻PC12细胞的损伤,并抑制细胞内活性氧的形成和线粒体膜电位下降.结论:10-10或10-9 mol*L-1的T10能有效地拮抗谷氨酸对PC12细胞的损伤作用.其作用机制可能与抑制谷氨酸诱导的细胞内活性氧自由基的生成和线粒体膜电位下降有关.     

酸枣仁汤含药血清对皮质酮损伤的PC12细胞[Ca2+]i、Caspase-3的影响

目的:观察酸枣仁汤含药血清对皮质酮损伤的PC12细胞[Ca2+]i、Caspase-3的影响。方法:以高浓度皮质酮诱导PC12细胞凋亡模拟焦虑症神经细胞损伤状态,激光共聚焦显微镜检测[Ca2+]i浓度、免疫细胞化学染色法测定Caspase-3的表达,探讨酸枣仁汤含药血清对皮质酮诱导PC12细胞凋亡的钙信号转导通路的影响。结果:与空白对照组比较,皮质酮组细胞内[Ca2+]i浓度、Caspase-3表达显著升高;与皮质酮+正常动物血清组比较,皮质酮+酸枣仁汤含药血清组细胞内[Ca2+]i浓度、Caspase-3表达显著降低。结论:胞内钙超载可能是皮质酮诱导PC12细胞凋亡的主要原因之一,酸枣仁汤含药血清可能通过减轻胞内钙超载、减少Caspase-3表达、拮抗皮质酮诱导的PC12细胞凋亡、减少焦虑症可能伴有的高皮质酮状态对神经细胞的损伤,发挥抗焦虑作用。     

钙调素拮抗剂E6对大鼠脑一氧化氮合酶活性和突触体谷氨酸释放的影响

目的 探讨钙调素拮抗剂E6的抗脑缺血作用机制。方法 用[3H]-L-Glu（glutamic　acid,Glu）标记大鼠脑突触体,测定突触体的Gln释放量和用一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）试剂盒测定成年大鼠脑匀浆上清中NOS活性。结果　E6促进Glu释放（与对照组比,10-5mol·L-1组增加81.0％）,但对KCl（50 mmol·L-1）引起的Glu释放有抑制作用,10-5mol·L-1E6的抑制率为23.2％。E6浓度依赖性地抑制NOS活性。钙调素（calmodulin,CaM）（30μg·ml-1）可逆转E6的抑制作用（10-6mol·L-1E6的抑制率为13.7％）,N-硝基-精氨酸（（N-nitro-arginine,L-NNA）（10μmol·L-1）可加强E6的抑命作用（10-6mol·L-1的抑制率为76.5％）。结论 E6是与CaM结合后发挥抑制 NOS活性效应的,E6对Glu 释放的影响可能与其对NOS活性及其对神经细胞内Ca2+影响有关。     

尼莫地平对脑挫裂伤后神经细胞内游离钙浓度的影响

目的〓〖HTK〗研究尼莫地平对脑挫裂伤后神经细胞胞浆内游离钙离子浓度变化的影响。〖HTW〗方法〓〖HTK〗将Wistar大鼠随机分为对照组、创伤组、治疗组；创伤组按照Feeney自由落体脑损伤模型方式制作大鼠左顶叶脑挫裂伤模型，治疗组在外伤后开始静脉滴注尼莫地平。分别对脑挫裂伤后0.5、1、3、6、12、24、48h各时相点细胞内游离钙离子浓度和细胞凋亡率进行检测。对不同时相的创伤组、治疗组和对照组进行比较分析。〖HTW〗结果〓〖HTK〗脑挫裂伤后大脑皮层神经细胞内游离钙离子浓度迅速升高，0.5h时为正常值的4倍，24h时达到高峰，48h时降低明显，但仍然维持在比较高的水平。应用尼莫地平治疗后，钙离子浓度显著降低，6h时降至接近正常水平。脑挫裂伤后神经细胞凋亡率和胞内游离钙离子浓度存在相关性。〖HTW〗结论〓〖HTK〗脑挫裂伤后神经细胞胞浆内钙离子浓度升高，导致钙超载并引起细胞凋亡。早期应用尼莫地平能抑制钙超载，抑制细胞凋亡，对神经细胞具有极强的保护作用。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体对清醒大鼠海马谷氨酸释放的调节作用

目的　应用清醒大鼠脑微透析技术 ,通过观察N -甲基 -D -天冬氨酸 (NMDA)受体激动剂和阻断剂对大鼠海马兴奋性氨基酸释放的影响 ,探讨NMDA受体对大鼠海马兴奋性氨基酸释放的自身调节作用。方法　Sprague-Dawley雄性大鼠 ,横跨海马背部植入一自制的透析探头 ,待大鼠清醒后 2 4h用人造脑脊液灌流 ,灌流速度为 5 μl·min-1,每 2 0min收集一次透析液 ,采用邻苯二甲醛 - β -巯基乙醇衍生化反相梯度洗脱荧光检测透析液中谷氨酸的含量。结果　海马内局部灌流NMDA 5 0 0 μmol·L-1可明显增加细胞外基础状态下谷氨酸水平。非竞争性NMDA受体拮抗剂MK - 80 1(10 0 μmol·L-1)可拮抗NMDA引起的谷氨酸释放增加作用。单独应用MK - 80 1(10 0 μmol·L-1)对基础状态下谷氨酸的水平没有影响。局部灌流NMDA受体协同激动剂甘氨酸5 0 0 μmol·L-1也可明显增加细胞外基础状态下谷氨酸的水平。局部灌流NMDA受体上甘氨酸部位的选择性阻断剂 7-氯犬尿烯酸 2 0 0 μmol·L-1可以拮抗甘氨酸引起的谷氨酸释放增加作用。结论　本研究发现兴奋性氨基酸受体NMDA受体的激活可增加海马内兴奋性神经递质的释放 ,这种NMDA受体可能存在于突触前膜 (兴奋性神经末梢膜上 ) ,即自身调节受体正反馈调节兴奋性氨基酸的释放。     

丹皮酚通过抑制线粒体氧化应激防止1-甲基-4-苯基吡啶离子损伤SH-SY5Y细胞

目的 探究丹皮酚（Paeonol,Pae）防止1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-methyl-4-phenyl pyridine, MPP+）损伤神经细胞的机制。方法 采用MPP+作用于人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y建立神经细胞损伤模型。采用甲基噻唑基四唑染色法检测细胞活力,采用流式细胞仪检测细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平,采用罗丹明123染色流式细胞仪分析SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的改变,采用Western blot法分析线粒体细胞色素C的表达。结果 0.1~10 μmol/L Pae可以剂量依赖性地抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡;10 μmol/L Pae能够升高细胞线粒体膜电位,减少MPP+引起的细胞内ROS的产生,降低细胞色素C的表达。结论 Pae可防止MPP+损伤SH-SY5Y细胞,其保护作用可能与减少SH-SY5Y细胞内ROS生成,增强SH-SY5Y细胞清除自由基的能力以及提高SH-SY5Y细胞内线粒体膜电位水平有关。     

平滑肌的钙生理

<正> 血管张力的调节取决于血管平滑肌的收缩状态,后者对于体循环和肺循环的血液动力学以及冠状循环的病理生理无疑是非常重要的。本文回顾了目前对平滑肌钙生理的知识,平滑肌的超微结构和生化特点,详细讨论了平滑肌收缩功能和钙的调节以及线粒体中钙浓度的调节。 平滑肌细胞内的钙浓度保持在10~(-7)M(摩尔)以下。在受体激活和膜除极时,膜对钙的通透性增加,使之内流。加上细胞内贮存钙的释放,使胞浆内钙浓度增加。当胞浆内ca~(++)浓     

MCI-186对H_2O_2所致PC12细胞氧应激损伤及细胞内活性氧的影响

目的研究MCI186对PC12细胞氧应激损伤的保护作用及其机制。方法以过氧化氢(H2O2)造成的PC12细胞氧应激损伤模型,采用MTT比色法、乳酸脱氢酶(LDH)活力测定,探讨了MCI186对PC12细胞氧应激损伤的影响;再用荧光染色技术及流式细胞仪测定在静息状态下的神经细胞内产生的过氧化氢含量。结果MCI186(1×10-6,1×10-5mol/L)可显著改善氧应激损伤引起的PC12细胞形态学变化,提高活细胞比率,对损伤的抑制率分别为407%及627%,并抑制细胞LDH释放;MCI186(1×10-7,1×10-6,1×10-5mol/L)还可降低静息状态下的神经细胞内过氧化氢的含量。结论MCI186可减少由H2O2诱导的细胞死亡,对PC12细胞氧应激损伤具有显著的保护作用;MCI186可能影响正常生理条件下细胞内过氧化氢的生成和/或神经细胞的氧化代谢过程,提示MCI186的自由基清除作用和抗氧化作用与其对脑缺血和脑缺血引起的脑水肿及组织损伤的保护作用密切相关。     

血管紧张素Ⅱ对培养人血管平滑肌细胞钙化的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对培养人血管平滑肌细胞钙化的影响,以探讨血管钙化发生的机制。方法:体外培养人动脉平滑肌细胞,用β甘油磷酸(βGP)诱导细胞钙化。培养细胞分4组:正常对照组;βGP组:βGP终浓度为10mmol·L-1;AngⅡ组:AngⅡ终浓度为10-7mol·L-1;βGP+AngⅡ组:同时加入相同浓度的βGP和AngⅡ,连续培养10d。采用Vonkossa染色、细胞层钙沉积定量和细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性测定判断钙化程度,用流式细胞仪测细胞周期分布和细胞凋亡率。结果:βGP组细胞Vonkossa染色见大量黑色颗粒状沉积物弥漫分布于细胞层,βGP+AngⅡ组细胞之间散在分布黑色沉着点;βGP+AngⅡ组细胞钙沉积显著低于βGP组[分别为(1.336±0.096)和(2.056±0.441)μmol·L-1,P<0.01];βGP+AngⅡ组细胞内ALP活性显著低于βGP组[分别为(277.57±87.81)和(691.27±128.06)IU·L-1,P<0.01]。正常对照组与AngⅡ组细胞比较,Vonkossa染色、细胞钙沉积量和ALP活性均无显著性差异。流式细胞仪结果显示,βGP+AngⅡ组细胞凋亡率显著低于βGP组,G0/G1期细胞比例降低,S期的比例升高(P<0.05)。结论:10-7mol·L-1的AngⅡ可抑制钙化血管平滑肌细胞的体外钙化进程。其作用可能与抑制ALP活性和促进细胞增殖、抑制凋亡有关。     

大鼠膀胱平滑肌过度充盈后钙离子分布的变化

目的观察大鼠膀胱平滑肌细胞钙离子在亚细胞水平的分布变化,同时探讨钙离子超微结构示踪方法.方法健康雌性Wistar大鼠10只,分实验组(膀胱过度充盈2 h 排空后2 h)和正常对照组各5只,用草酸钾-戊二醛灌注固定取膀胱组织制样透射电镜观察.结果示踪钙离子呈20 nm直径高电子密度细颗粒状,正常对照组大鼠膀胱平滑肌示踪钙离子数量少,散在分布于滑面内质网内,实验组示踪钙离子在损伤肌细胞内数量明显增多,弥漫密集分布,尤其聚集在线粒体周围.结论急性尿潴留时膀胱平滑肌功能和结构损害与细胞内钙超载密切相关.钙示踪法是观察细胞内钙超载的可靠方法.     

MCI-186对H2O2所致PC12细胞氧应激损伤及细胞内活性氧的影响

目的:研究MCI-186对PC12细胞氧应激损伤的保护作用及其机制.方法:以过氧化氢(H2O2)造成的PC12细胞氧应激损伤模型,采用MTT比色法、乳酸脱氢酶(LDH)活力测定,探讨了MCI-186对PC12细胞氧应激损伤的影响;再用荧光染色技术及流式细胞仪测定在静息状态下的神经细胞内产生的过氧化氢含量.结果:MCI-186(1×10-6,1×10-5 mol/L)可显著改善氧应激损伤引起的PC12细胞形态学变化,提高活细胞比率,对损伤的抑制率分别为40.7%及62.7%,并抑制细胞LDH释放;MCI-186(1×10-7,1×10-6,1×10-5 mol/L)还可降低静息状态下的神经细胞内过氧化氢的含量.结论:MCI-186可减少由H2O2诱导的细胞死亡,对PC12细胞氧应激损伤具有显著的保护作用;MCI-186可能影响正常生理条件下细胞内过氧化氢的生成和/或神经细胞的氧化代谢过程,提示MCI-186的自由基清除作用和抗氧化作用与其对脑缺血和脑缺血引起的脑水肿及组织损伤的保护作用密切相关.