两种反胶束体系的水蛭素萃取效果比较

 目的 比较溴化十六烷基三甲铵（CTAB）-正丁醇-正辛烷反胶束体系及丁二酸-2-乙基己基酯磺酸钠（AOT）-异辛烷反胶束体系的水蛭素萃取效果。方法 以抗凝血酶活性单位（ATU）的萃取率为指标,用凝血酶滴定改进法测定萃取物的活性,正交实验对盐浓度、pH、搅拌时间、表面活性剂浓度等因素进行考察,优化CTAB-正丁醇-正辛烷体系及AOT-异辛烷体系的水蛭素对照品溶液反胶束萃取工艺,并进行水蛭素粗提液的分离纯化实验。结果 水蛭素CTAB反胶束体系最佳萃取工艺为：萃取pH 10.0,反萃取pH 2.0,萃取液NaBr浓度30 mmol·L-1、CTAB浓度85 mmol·L-1,反萃取液NaBr浓度32 mmol·L-1,萃取及反萃取均为30 ℃,萃取及反萃取均搅拌5 min;AOT反胶束体系最佳萃取工艺为：萃取pH 2.0,反萃取pH 9.0,萃取液KCl浓度26.5 mmol·L-1、AOT浓度30 mmol·L-1,反萃取液KCl浓度27.5 mmol·L-1,萃取及反萃取均为30 ℃,萃取搅拌5 min,反萃取搅拌9 min。ATU回收率前者为82.95%,后者为85.53%;水蛭素粗提液分离纯化实验两者的ATU回收率分别为80.70%和82.15%、比活性分别为2 389.54及2 459.98 ATU·mg-1。结论 两种反胶束体系的水蛭素萃取效果都较好,而后者又稍优于前者。     

以D2EHPA为流动载体的乳状液膜萃取菲牛蛭中的水蛭素实验研究

目的:研究以菲牛蛭为原料,二-(2-乙基已基)磷酸(D2EHPA)作流动载体,脱水山梨醇脂肪酸酯(Span 80)为乳化剂,辛烷与D2EHPA混合构成膜溶液,稀HCl溶液作内水相的水蛭素乳状液膜体系萃取。方法:用正交试验优化膜相、内水相体积比(MIPVR),内、外水相的pH,流动载体浓度等水蛭素对照品萃取条件,然后用水蛭素粗提液进行纯化实验。结果:萃取的最优条件为:MIPVR 10∶3,内水相pH 2.6,外水相pH 3.4,流动载体质量分数2%;当水蛭素初始浓度为1抗凝血酶活力单位(ATU).mL-1时,对照品ATU回收率为83.06%,粗提液达到82.99%,样品比活力为3 289.48 ATU.mg-1,不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳及光谱扫描结果表明纯度与对照品相当。结论:乳状液膜体系萃取水蛭素工艺较简单,实验样品纯度及ATU回收率均较高。     

超临界CO2萃取-柱色谱分离联用制备冬凌草甲素新工艺的研究

 目的建立冬凌草甲素的提取和分离新工艺。方法用正交实验优化超临界CO₂萃取冬凌草甲素的工艺条件,并进行 中试放大实验,用HPLC测定冬凌草甲素的含量。将萃取所得产物用硅胶柱色谱进一步分离,用红外光谱,紫外光谱和核磁共 振光谱等手段鉴定所得结晶。结果超临界CO₂萃取的最佳工艺务件为压力38．5 MPa,温度40℃,夹带剂用量1．5 mL·g^-1。 柱色谱进一步分离可制备高纯度冬凌草甲素。结论超临界CO₂萃取与柱色谱分离技术联用使冬凌草甲素的制备工艺大大 简化,效果理想,可向工业化方向发展。     

超声辅助离子液体-反相液相色谱法同时测定茜草中茜草素和大叶茜草素的含量

建立以4种离子液体为萃取剂,结合超声辅助萃取,利用高效液相色谱法来测定茜草中茜草素与大叶茜草素素含量的方法。采用Purospher star RP-C₁₈柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm),以B为甲醇、C为0.4%乙酸-水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.85 mL·min^-1,紫外检测波长为250 nm,柱温为室温。结果显示,茜草素和大叶茜草素的最佳萃取条件均为0.6 moL·L^-1的[HMIM]PF₆甲醇溶液作为萃取剂,1∶80(g·mL^-1) 作为最佳固液比;茜草素进样量在0.01~0.04 μg呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为97.12%;大叶茜草素进样量在0.41~1.35 μg呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为98.10%。该实验采取环境友好型试剂作为萃取剂,提高了萃取效率,避免了有机溶剂对环境的污染,减少了对人体的伤害,操作简单,重复性好,对中药活性成分提取研究方法的创新有重要参考意义。     

超临界CO2萃取白芷中欧前胡素的研究

 目的研究超临界流体CO_{2萃取白芷中欧前胡素的提取工艺，并用高效液相色谱法测定欧前胡素的含量。方法在Inertsil ODS-3柱上，以甲醇-水(65∶35)为流动相，流速:1.5 mL·min^-1，检测波长：248 nm，柱温:40℃。结果欧前胡素浓度在0.0415～0.166 mg·mL^-1范围内呈线性关系(r=0.999 8);加样平均回收率：99.12%，RSD为2.73%。结论采用SFE萃取白芷中欧前胡素的提取工艺速度快,HPLC测定欧前胡素的含量精确、重现性好。}     

反相高效液相色谱法测定血浆中文拉法辛浓度

 目的：建立高效液相色谱法检测人血浆中文拉法辛浓度。方法：血浆样品经石油醚-乙醚（2∶1）提取后，有机相再用50 mmol·L^-1盐酸反萃取并浓缩进样。色谱柱为氰基柱（250×4.6 mm，5 μm），乙腈-0.1 mol·L^-1NH₄H₂PO₄ (25∶75) 为流动相，UV检测波长229 nm。结果：文拉法辛血浆最低检测浓度10 μg·L^-1，线性范围25～800 μg·L^-1，萃取回收率75.5%～79.3%，加样回收率97.4%～101.2%, 日内RSD 4.87%～6.39%，日间RSD 7.55%～10.80%。结论：该法准确可靠，已用于临床患者文拉法辛血药浓度测定。     

利用丝素固定化凝血酶分离纯化菲牛蛭中的水蛭素

目的:利用制备的丝素固定化凝血酶分离纯化菲牛蛭中的水蛭素。方法:以抗凝血酶活力(ATU)回收率为指标进行牛蛭素的固定化凝血酶萃取,通过正交实验优化萃取及反萃取条件。最后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定实验样品的纯度。结果:菲牛蛭素A萃取的最佳条件为:水蛭素初始浓度9 ATU/mL,温度30℃,pH4.30,时间45 min;反萃取温度30℃,pH 7.4,时间30 min,ATU回收率55.73%。菲牛蛭素B萃取的最佳条件为:水蛭素初始浓度9 ATU/mL,温度30℃,p H 5.2,时间45 min;反萃取温度30℃,pH 7.2,时间30 min,ATU回收率23.96%。菲牛蛭素A、B实验样品PAGE图均只有1条带。结论:该文利用制备的丝素固定化凝血酶可以有效的应用于菲牛蛭素的分离纯化。     

在线二维液相色谱法快速测定桂枝茯苓胶囊中芍药苷、丹皮酚、苦杏仁苷和肉桂酸的含量

使用双梯度液相色谱系统和紫外检测器,建立在线二维液相色谱方法,同时测定桂枝茯苓胶囊中芍药苷、丹皮酚、苦杏仁苷和肉桂酸的含量。采用双梯度液相色谱的其中一个泵为一维分离泵,以乙腈为有机相,0.08%磷酸+0.08%三乙胺为水相,梯度洗脱,采用 C₁₈色谱柱（3.0 mm×150 mm,3 μm）,流速0.5 mL·min^-1;利用双梯度液相色谱的另外一个泵为二维分离泵,以乙腈为有机相,以20 mmol,pH 3.0的磷酸二氢钾为水相,梯度洗脱,采用PAⅡC₁₈色谱柱（4.6 mm×150 mm,3 μm）,流速0.8 mL·min^-1;检测波长218,230,275 nm,采用波长切换方式。芍药苷、丹皮酚、苦杏仁苷和肉桂酸的线性范围分别为5.55~222,6.6~264,3.3~132,0.315~12.6 mg·L^-1;r分别为0.999 7,0.999 5,0.999 8,0.999 7;4个成分的平均回收率在96.12%~103.9%。该方法快速,测定结果准确可靠,可用于评价药物质量。     

HPLC-UV测定人血浆瑞芬太尼浓度

 目的建立高效液相色谱-紫外检测法测定人血浆瑞芬太尼浓度。方法人血浆经甲醇沉淀蛋白后先用氯丁烷萃取,再将药物提取至0.01mol·L^-1盐酸中。以Hypersil CN(4.6mm×250mm,5μm)为固定相;0.02mol·L^-1NaH₂PO₄水溶液-乙腈(70:30),内含三乙胺0.01%为流动相,流速1.5mL·min^-1,紫外检测波长为210nm。结果标准曲线在1.0～100ng·mL^-1内线性关系良好(r=0.9984)。3种不同浓度平均方法回收率为(113.18±12.26)%,提取回收率为(87.90±3.21)%,日内RSD和日间RSD分别小于10%,15%。结论本方法准确、灵敏、专一性好,适用于临床瑞芬太尼血药浓度检测和药动学研究。     

逍遥散超临界CO2提取工艺及提取物GC-MS特征图谱初步研究

该文为了初步确定逍遥散超临界CO₂提取的最佳工艺条件,并建立提取物的气相色谱-质谱（GC-MS）特征图谱,以提取物得率为考察指标,采用正交试验设计方法,对提取压力、提取温度、CO₂流量、提取时间等因素进行考察;采用GC-MS对不同批次的提取物进行特征图谱分析。逍遥散超临界CO₂提取的最佳工艺条件为提取压力20 MPa,提取温度50 ℃,CO₂流量25 kg·h^-1,提取时间3 h,提取物平均得率2.2%。GC-MS特征图谱中确定27个共有峰,占总峰面积的81.89%,其中指认出21个化合物,占提取物总量的53.20%。超临界CO₂萃取工艺合理可行,GC-MS方法准确可靠,重复性好,可用于逍遥散超临界CO₂提取物的制备及质量控制。     

A promising peptide antibiotic from Terfezia claveryi aqueous extract against Staphylococcus aureus in vitro

The antimicrobial activity of aqueous and methanolic extracts, as well as partially purified proteins extracted from Terfezia claveryi aqueous extract were investigated against Staphylococcus aureus in vitro. A 5% aqueous extract inhibited the growth of S. aureus by 66.4%, while a methanolic extract was ineffective. Partial protein purification of the aqueous extract using ammonium sulphate precipitation revealed that antimicrobial activity was within the third fraction. This fraction was then subjected to gel filtration using Sephadex G-100. Two peaks were obtained. Peak one possessed higher antimicrobial activity. This peak was then subjected to ion exchange chromatography using DEAE Sephadex. Only peak 4 from the six peaks obtained showed a slight antimicrobial activity. Antimicrobial activities of the aqueous extract and the fractions that showed antimicrobial activity were compared with reference antibiotics.     

对照提取物法测定葛根饮片中5种成分含量

目的:建立对照提取物法测定葛根饮片中5种成分含量的方法,考察对照提取物在中药质量标准中应用的适用性和可行性。方法:Zorbax C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-0.02%磷酸(25∶75),检测波长250 nm。采用自制葛根对照提取物,测定葛根饮片中的3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷元-8-C-芹菜糖-(1→6)葡萄糖苷、大豆苷的含量,并与单一对照品测定法的实验结果进行比较。结果:对照提取物测定法的精密度、稳定性、重复性良好,并且测定结果与单一对照品测定法所得结果一致。2种测定方法所得数据的RSD低于2%。结论:葛根对照提取物可以用于葛根药材的质量控制,该文初步验证了对照提取物在中药应用的可行性。     

银杏酸单体化合物的制备

 目的研究银杏酸单体化合物的制备方法，为银杏酸的应用研究提供参考，为银杏提取物中银杏酸的定量分析提供单体对照品。方法银杏外种皮用石油醚回流提取，提取物通过硅胶柱色谱分离，得银杏酸混合物，再经制备柱反复分离，得银杏酸单体。结果石油醚回流提取法所得银杏酸得率为4.06%，纯度84.59%,提取率达62.9%。银杏酸混合物经制备色谱多次分离后，得到6种银杏酸单体，其中一种为新发现的化合物，纯度均达95%以上。结论单体制备方法较为简便，可用于高纯度银杏酸单体的制备。     

吴茱萸次碱的制备方法

目的以吴茱萸为原料,研究简单、快速、高效的分离、纯化吴茱萸次碱的制备方法。方法采用85%乙醇提取,硅胶柱层析分离,甲醇重结晶纯化吴茱萸次碱,薄层鉴别(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、核磁方法检查纯度。结果吴茱萸次碱经TLC检查与对照品一致,无杂质斑点,经HPLC检测纯度达98.5%以上,经核磁鉴定。另外经考察,确定色谱条件为Waters C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);检测波长225、290、215、365 nm;流动相乙腈-水溶液(50∶50);进样量10μL;柱温35℃;体积流量1.0 m L/min。结论吴茱萸次碱对照品已达到中药质量检测用化学对照品技术要求,所采取的分离、纯化方法简单、安全、可行性强,成本低、效率高,可用于吴茱萸药材及其制剂的质量控制。     

高效液相制备色谱制备-枝蒿酮酸对照品

目的研究高效液相色谱制备一枝蒿酮酸对照品的方法。方法原料用95%乙醇提取,浓缩成浸膏后用醋酸乙酯萃取。醋酸乙酯部位用100~200目硅胶柱色谱分离,用石油醚-醋酸乙酯(3∶1)梯度洗脱,收集样品进行HPLC分离制备。结果该法所得产品用HPLC归一化法定量,质量分数大于98%。结论本方法简便,产品质量高,一枝蒿酮酸产品可用做分析方法的对照品。     

液相色谱-串联质谱法同时测定中药材中74种农药残留量

 目的 研究中药材中农药多残留的测定方法。方法 样品经加速溶剂萃取,依次经凝胶渗透色谱（GPC）和固相萃取柱（SPE）净化后,用液相色谱-串联质谱同时定性、定量测定。结果 在6种中药材样品基质、3水平添加条件下,74种农药的回收率大多在70.0％～110.0％,相对标准偏差小于15％,检测限大多低于0.01 mg·kg-1,符合农药多残留检测的要求。结论 本法净化效果好,灵敏度高,重现性好,可用于中药材样品中农药多残留的日常检测。     

水性二相系统与逆流色谱对牛膝多糖的纯化研究

 目的:将水性二相系统通过高速逆流色谱进行牛膝高分子物质中多糖成分的纯化研究?方法:以聚乙二醇与磷酸钾缓冲溶液组成水性二相系统,作为高速逆流色谱的固定相和流动相,对牛膝的高分子物质进行分离纯化?结果:12.5%聚乙二醇(PEG)1000与16%磷酸钾缓冲溶液(pH6.8)组成的水性二相系统,在X-axisCPC高速逆流色谱仪上,可以成功地分离出多糖部分和蛋白多糖部分?结论:借助高速逆流色谱,水性二相系统可以进行中药牛膝多糖的分离和纯化?     

Purification of a dimethyladenosine compound from silkworm pupae as a vasorelaxation substance

To identify the active substance in the male silkworm pupae that strengthens men's vitality, the vasorelaxation activity was determined by measuring the vascular endothelial nitric oxide (eNO) produced in calf pulmonary artery endothelial (CPAE) cells treated with extracts from the pupae. Dried silkworm male pupae were extracted with ethanol and suspended in water, then partitioned with hexane, chloroform, ethylacetate, and butanol, sequentially. Among these fractions, the aqueous fraction had maximal NO production (156.87 microM/200 microl well, 10 mg/ml) and minimal cytotoxicity (IC50 362.3 mg/ml). The vasorelaxation substances (VAS) from the aqueous fraction were isolated by a combination of gel filtration and anion-exchange chromatography on DEAE Sephadex A-25 and reverse phase-HPLC. Their chemical structures were determined on the basis of their spectroscopic parameters of EI-MS, MALDI-TOF MS, 1H and 13C NMR, 1H-1H COSY, and GC-MS spectral data. The active substance was subsequently identified as a dimethyladenosine and dimethyladenosine-5'-L-arabinose that has phosphodiesterase (PDE) inhibition activity. This compound was shown to inhibit PDE4 activity in a dose-dependent manner. Also, it inhibited the PDE5 activity of cyclic-GMP-specific PDE5 enzyme. These results imply that dimethyladenosine may be a lead compound for the development and improvement of vasculogenic impotence drugs through phosphodiesterase inhibition and NO production in endothelial cells.