PD-1阻断对伯氏疟原虫感染小鼠免疫应答的影响

目的探讨程序性死亡受体-1 (PD-1)阻断对小鼠抗伯氏疟原虫ANKA (Plasmodium berghei ANKA, Pb A)感染免疫应答的影响。方法将BALB/c小鼠按照随机数字表法分为健康组、感染组和PD-1组,每组8只。感染组和PD-1组小鼠经腹腔注射1×106个Pb A感染红细胞,健康组小鼠不作任何处理。感染当天和感染后3、 5、 7 d, PD-1组每鼠腹腔注射200μg PD-1单抗,感染组注射等剂量PD-1同型对照单抗。感染后4 d起隔天检测小鼠红细胞感染情况并记录小鼠生存情况。感染后5 d每组各处死4只小鼠,取脾组织,制备脾细胞悬液,流式细胞术检测脾细胞中髓样树突状细胞(mDCs)及PD-1配体(PD-L1)的表达水平、骨髓来源抑制性细胞(MDSCs)和Th1细胞的百分率和绝对数,ELISA检测脾细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、 IL-10和IL-6分泌水平。结果感染组小鼠在感染后5～6d外周血开始出现疟原虫感染红细胞,随后红细胞感染率快速升高,在感染后16d达到40%左右,PD-1组小鼠红细胞感染率与感染组的相比差异无统计学意义(P0.05)。感染组小鼠在感染后15d出现死亡,23d全部死亡;PD-1组小鼠在13 d出现死亡,18 d全部死亡,差异有统计学意义(P 0.05)。流式细胞术检测结果显示,PD-1组脾细胞中CD11c+CD11b+m DCs百分率为(2.21±0.10)%,明显低于感染组的(4.51±0.21)%(P 0.05); PD-1组CD4+T-bet+IFN-γ+Th1百分率为(3.38±0.54)%,低于对照组的(5.85±0.42)%(P0.05); mDCs上PD-L1的表达水平,PD-1组为(55.67±6.35)%,高于感染组的(21.35±4.45)%(P0.05); Gr-1+CD11b+MDSCs的百分率,PD-1组为(9.03±0.62)%,高于感染组的(3.58±0.16)%(P 0.05)。脾细胞培养上清中,感染组IFN-γ、 IL-6和IL-10的分泌水平分别为(901.69±73.37)、(200.94±4.97)和(551.95±121.71) pg/ml, PD-1组分别为(231.17±57.69)、(86.16±3.93)和(101.72±20.73) pg/ml, PD-1组均低于感染组(P0.05)。结论 PD-1阻断可削弱小鼠对Pb A感染的保护性免疫应答。     

高剂量氯磷酸脂质体处理对小鼠体内约氏疟原虫生长的影响及机制初探

目的 探究高剂量氯磷酸脂质体(CL)处理对小鼠体内约氏疟原虫17XL (Py17XL)生长的影响。方法 取61只雌性BALB/c小鼠,随机分成5组：高剂量CL处理组(简称CL处理组,23只)和对照脂质体处理组(29只)小鼠分别于感染Py17XL前1 d和感染后2、5 d,尾静脉注射高剂量CL (5μg/μl 200μl)和等量对照脂质体;健康CL处理组(3只)和健康对照脂质体处理组(3只)小鼠在相同时间尾静脉注射高剂量CL (5μg/μl 200μl)和等量对照脂质体;空白对照组(3只)小鼠不作任何处理。于感染后每天采集CL处理组和对照脂质体处理组小鼠(各5只)尾静脉血,涂片后显微镜下观察原虫血症,并统计小鼠存活情况。感染后0、3、6 d,取CL处理组和对照脂质体处理组小鼠(每次3只)脾脏,分离脾淋巴细胞,采用流式细胞术检测两组小鼠疟原虫特异性CD4~+T细胞和CD8~+T细胞的增殖能力和γ干扰素(IFN-γ)分泌水平,ELISA检测感染后6 d的小鼠血清抗疟原虫Ig G抗体水平。感染后2、4、6 d,取CL处理组、对照脂质体处理组、空白对照组小鼠(每次3只)脾脏,分离脾淋巴细胞,采用...     

细菌脂多糖诱导小鼠B细胞对日本血吸虫发育的影响

目的研究细菌脂多糖诱导BALB/c小鼠B淋巴细胞对日本血吸虫发育的影响。方法取T细胞缺陷的BALB/c nude小鼠18只,以及T/B细胞联合缺陷的BALB/c SCID小鼠23只,每鼠感染日本血吸虫尾蚴(30±1)条。用细菌脂多糖(LPS)腹腔注射诱导(100μg/ml,0.2 ml/只,2周1次,共2~3次)nude小鼠(NL组,9只)和SCID小鼠(SL组,12只)。同时设置对照组,即以PBS处理nude小鼠(N组,9只)和SCID小鼠(S组,11只)。感染后28 d、36 d,分别解剖N、NL、S和SL各组小鼠(n=4/5,4/5,5/6,6/6),肝门静脉灌注法收集血吸虫成虫,计算成虫检获率,测量体长,记录雌雄合抱数。取肝组织经5%KOH溶液消化后,计数虫卵,计算每克肝组织虫卵数。摘除眼球取血,检测外周血中转化生长因子(TGF-β)、γ干扰素(IFN-γ)和白介素10(IL-10)水平。取脾组织制备脾细胞悬液,检测脾淋巴细胞中调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)所占比例。结果感染后28 d,NL、N组雄虫体长分别为(7.66±2.85)mm和(5.28±1.64)mm(P0.01),雌虫体长分别为(9.64±1.99)mm和(7.49±1.63)mm(P0.01)。感染后36 d,NL组每克肝组织虫卵数(1 088±297)明显高于N组(715±404)(P0.05),SL组的(217±33)明显低于S组(573±160)(P0.01)。感染后28 d、36 d,N组脾淋巴细胞中CD1dhi CD5+CD19+Bregs所占比例分别为(12.73±0.96)%和(37.15±3.04)%(P0.05),与NL组比较差异无统计学意义(P0.05)。感染后28 d,N、NL组血清中TGF-β水平分别为(101.75±46.72)pg/ml和(260.90±45.34)pg/ml,IFN-γ水平分别为(7.91±1.62)pg/ml和(14.11±3.72)pg/ml,两组比较差异均有统计学意义(P0.01)。感染后36 d,S、N组血清中IL-10分别为(41.85±3.14)pg/ml、(66.25±4.16)pg/ml,SL、NL组分别为(44.48±3.87)pg/ml、(72.22±17.76)pg/ml,两种小鼠比较差异具有统计学意义(P0.01),但LPS处理组与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 LPS可诱导日本血吸虫感染BALB/c小鼠B细胞释放TGF-β等细胞因子,促进日本血吸虫雌雄成虫的早期发育。     

特异性IgG抗体在同源与异种疟原虫再感染中的作用研究

目的探讨特异性IgG抗体在同源和异种疟原虫再感染过程中的作用。方法DBA/2小鼠经腹腔感染致死型约氏疟原虫(Py17XL)60d后,采用等量Py17XL、Py17XNL、Pynigeriensis或PbANKA分别再次攻击,计数红细胞感染率;采用ELISA方法动态检测脾细胞培养上清中IFN-γ及其血清中特异性IgG抗体水平的变化。结果Py17XNL和Pynigeriensis再感染小鼠出现一过性低水平的原虫血症;再感染后第4d脾细胞培养上清中IFN-γ水平与正常小鼠相比无显著性差异(P>0.05),而血清中特异性IgG抗体水平明显升高(P<0.01),小鼠全部存活。相比,PbANKA再感染小鼠出现高水平的原虫血症,与其初次感染水平相近,再感染后第4d脾细胞培养上清中IFN-γ水平出现明显升高(P<0.01),而血清中特异性的IgG抗体水平却无明显变化,与正常小鼠水平接近,小鼠全部死亡。结论特异性IgG抗体可在宿主抗同源疟原虫再感染中发挥着重要作用,而对异种疟原虫再感染无保护性。     

IL-12对伯氏疟原虫红内期感染小鼠Th1/Th2细胞因子表达水平的影响

目的观察白细胞介素12 (IL-12) 对伯氏疟原虫(P.b)红内期感染小鼠Th1/Th2细胞因子表达水平的影响,探讨IL-12介导Th1/Th2免疫偏移在抗P.b红内期感染中的免疫调节作用.方法 BALB/c小鼠接种5×105个感染P.b的红细胞,同时分别给予0.03 μg/d或0.15 μg/d IL-12处理,用ELISA方法检测P.b感染小鼠血清或脾淋巴细胞体外培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-4表达水平的动态变化.结果 0.03 μg/d IL-12处理组小鼠接种感染后第7天取脾淋巴细胞体外经PHA或可溶性抗原sAg刺激培养产生的IFN-γ水平较感染对照组显著升高,IL-4水平显著下降,而0.15 μg/d IL-12处理组脾淋巴细胞产生的IFN-γ及IL-4水平均较感染对照组显著下降.在感染后第3天,0.03 μg/d或0.15 μg/d IL-12处理组小鼠血清中IFN-γ均已出现,第5天达高峰,但感染后第7天 0.15 μg/d IL-12处理组血清中IFN-γ迅速下降,甚至低于感染对照组及0.03 μg/d IL-12处理组,感染对照组直到感染后第7天血清中方可检测到IFN-γ水平.结论适当低剂量IL-12诱导CD4 Th1免疫应答,产生细胞因子IFN-γ,以诱导抗P.b红内期感染的免疫保护作用;而较大剂量IL-12抑制机体抗感染免疫,甚至可致免疫病理损害.     

香菇多糖对约氏疟原虫感染BALB/c小鼠Th1型应答的调节作用

目的探讨香菇多糖(Lentinan,Lent)对致死型约氏疟原虫(Plasmodium yoelii 17XL,Py17XL)感染BALB/c小鼠Th1型细胞免疫应答的调节效应。方法对Py17XL感染的BALB/c小鼠进行不同时间点的Lent预处理,动态观察用药后各组感染小鼠原虫血症水平和生存率;于感染后第0d、1d、3d和5d分别提取小鼠脾细胞,ELISA法检测脾细胞培养上清中IL-12、IFN-γ的分泌水平,Griess反应检测脾细胞培养上清中一氧化氮(NO)含量。结果与药物未处理组相比,感染前15d 1mg/kg Lent用药组显著降低感染小鼠的原虫血症水平,提高生存率;明显增强Th1型免疫应答中关键细胞因子IL-12、IFN-γ的分泌水平,并提高NO含量。结论Lent预处理能够有效激发Py17XL感染的BALB/c小鼠Th1型细胞免疫应答的建立,提示调控免疫应答对于致死型约氏疟原虫感染早期免疫防御的重要性。     

约氏疟原虫感染小鼠树突状细胞对Th17分化和功能的调控作用

目的探讨约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)17XL株(Py17XL)感染小鼠过程中树突状细胞(DCs)对辅助性T细胞17型(Thl7)细胞分化和功能的调控作用及机制。方法将12只雌性BALB/c小鼠随机分为感染组(Py17XL)、Toll样受体4(TLR4)阻断组(Py17XL+TLR4)、Toll样受体9(TLR9)阻断组(Py17XL+TLR9)和TLR4联合TLR9阻断组(Py17XL+TLR4+TLR9),每组3只。感染前1 d,腹腔注射10μg抗-TLR4单抗(TLR4阻断组)或50μg抗-TLR9单抗(TLR9阻断组)阻断DCs的功能,注射体积为0.4 ml,对照组注射等量的PBS。4组小鼠均腹腔注射1×10~6 Py17XL感染的红细胞。感染后第0、3和5天计数红细胞感染率,同时制备脾细胞悬液,流式细胞仪检测脾脏细胞中CD11c+TLR9+和Th17细胞数量变化,ELISA检测脾细胞培养上清中干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-10(IL-10)水平的变化。结果流式细胞仪检测表明,DCs阻断模型构建成功。感染后第5天,感染组、TLR4阻断组、TLR9阻断组和TLR4联合TLR9阻断组小鼠原虫血症分别为28.0%、29.0%、31.0%和16.3%;感染后第7天,原虫血症分别为43.3%、47.5%、32.5%和8.0%,感染组和TLR4阻断组小鼠全部死亡,其余阻断组小鼠于感染后第6天开始出现死亡。与感染组比较,TLR9阻断组和TLR4联合TLR9阻断组小鼠原虫血症上升缓慢,生存期明显延长至11 d和15 d。流式细胞仪检测结果显示:感染后第5天,TLR9阻断组和TLR4联合TLR9阻断组Th17细胞数量分别为1.2%和1.4%,与感染组(1.9%)相比,数量明显减少(P0.05,P0.01)。ELISA检测结果显示:感染后第5天,TLR4联合TLR9阻断组小鼠IFN-γ和IL-10水平分别为(232.4±15.5)pg/ml和(1 791.2±58.2)pg/ml,与感染组[(90.7±50.1)pg/ml和(962.6±409.0)pg/ml]相比,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 Py17XL感染小鼠过程中DCs调控了Thl7细胞的分化和功能。DCs阻断(Py17XL+TLR4+TLR9)后,感染小鼠原虫血症降低,生存期延长。     

调节性T细胞抑制约氏疟原虫感染小鼠早期Th1应答的建立

目的探讨调节性T细胞(Tregs)参与约氏疟原虫感染早期调控Th1型免疫应答的相关机制。方法用约氏疟原虫(致死型)感染对照组和anti-CD25 mAb注射组BALB/c小鼠,计数红细胞感染率;感染后第0、3和5d制备脾细胞悬液,磁珠分选、纯化树突状细胞(DCs)并体外培养;ELISA方法检测脾细胞培养上清中IFN-γ和DCs培养上清中IL-12的水平,Griess方法检测脾细胞培养上清中NO含量。结果两组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ和NO水平在感染后第3～5d均明显升高,但对照组小鼠IFN-γ和NO水平明显低于anti-CD25 mAb注射组小鼠。anti-CD25 mAb注射组小鼠DCs培养上清中IL-12的水平于感染后第3d达峰值,并于感染后第5d仍维持较高水平。相比,对照组小鼠DCs培养上清中IL-12的水平仅于感染后第3d出现有意义的升高。结论Tregs在致死型约氏疟原虫感染BALB/c小鼠早期可能通过抑制DCs分泌细胞因子IL-12来抑制Th1型免疫应答的有效建立。     

FK506对弓形虫感染后小鼠IFN-γ、IL-2和肝虫负荷的影响

目的探讨免疫抑制剂FK506(他克莫司,Tacrolimus)对弓形虫急性感染后小鼠干扰素γ(IFN-γ)和白介素2(IL-2)的活性以及对肝虫负荷的影响。方法用102个RH株弓形虫速殖子腹腔接种昆明小鼠120只,然后随机分为FK506组〔A组,每d用FK506 1mg/(kg.d)灌胃〕和对照组(B组,每d用等量生理盐水灌胃),每组60只,雌雄各半;分别于感染后第2、4、6、7、9 d随机取8只小鼠外周血,用ELISA法测定血清IFN-γ和IL-2的活性,同时取肝脏用荧光定量PCR法检测肝脏的虫荷。另外检测8只健康小鼠的IFN-γ和IL-2数值,作为正常值。结果A组小鼠于感染后第8d全部死亡,B组小鼠于感染后第10d全部死亡。感染后第2、4、6、7 d A组小鼠血清IFN-γ活性明显低于B组(P<0.05或P<0.01)。IL-2活性除感染后第2d两组在统计学上无显著性差异外,从感染后第4 d开始,A组的IL-2水平显著低于B组,而且差别越来越显著(P<0.05或P<0.01)。在感染后第4和第7 d A组的肝平均虫荷显著高于B组(P<0.01)。结论FK506对T淋巴细胞免疫有显著的抑制作用,导致机体的免疫力下降,加剧弓形虫的感染。     

日本血吸虫感染对过敏性哮喘影响的实验研究

目的 建立日本血吸虫感染并发过敏性哮喘实验动物模型及探讨日本血吸虫感染对过敏性哮喘的作用. 方法 取25只BALB/c小鼠,随机分为3组,A组为日本血吸虫感染并发过敏性哮喘组,B组为单纯过敏性哮喘组,C组为健康对照组.A组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(23±3)条.8周后,以卵白蛋白(OVA)分别对A组、B组小鼠进行致敏激发,建立过敏性哮喘模型.12周后,取小鼠脾脏制成单细胞悬液并培养72 h,收集脾细胞上清液,检测细胞因子IL-4和IFN-γ水平;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),观察嗜酸性粒细胞(EOS)所占的百分比;取小鼠肺组织作病理切片,观察小鼠肺组织的炎症变化. 结果 与B组比较,A组小鼠BALF涂片中EOS数减少(P＜0.05),A、B两组EOS百分比分别为(7.30±5.01)%和(43.60±2.53)%,而C组小鼠BALF中仅见少数气管上皮细胞,无炎细胞;ELISA法检测A、B、C组小鼠脾细胞培养上清IL-4水平分别为(96.02±38.54) pg/ml、(414.86±175.12) pg/ml和(13.55±1.66) pg/ml,IFN-γ水平分别为(11.60±4.18) pg/ml、(7.43±3.60)pg/ml和(7.55±1.57) pg/ml.与B组比较,A组小鼠IL-4水平降低(P＜0.05),IFN-γ水平无显著性变化(P＞0.05),IL-4/IFN-γ比值降低(P＜0.05).肺部病理改变A组小鼠较轻,B组较重,C组无炎症反应. 结论 日本血吸虫感染对过敏性哮喘的发生有抑制作用.     

碘过量和甲状腺球蛋白免疫诱发NOD小鼠甲状腺炎的病变特征

目的 观察碘过量和甲状腺球蛋白(Tg)免疫诱发甲状腺炎的病变特点,进一步了解碘过量在自身免疫性甲状腺炎发病中的作用机制.方法 选用NOD小鼠,饮0.05%碘化钠(NaI)水和(或)Tg皮下免疫.观察甲状腺形态学改变和细胞凋亡情况;检测血清中TT4、TSH、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)和甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)水平;检测颈部淋巴结和脾脏淋巴细胞对Tg刺激的增殖反应和脾脏细胞培养上清中白细胞介素4(IL-4)和1γ-干扰素(IFN-γ)水平;实时荧光定量PCR法检测甲状腺绀织内IL-4、IFN-γ、趋化冈子配体10(CXCL10)、细胞间黏附因子1(ICAM-1)mRNA的表达.结果 碘过量组甲状腺滤泡扩张、胶质潴留;大昔淋巴细胞浸润和结构破坏;滤泡上皮细胞凋亡数量增加(34.66±2.78//vs 5.1 1±0.62,P<0.01);总T4下降、TSH升高,无自身抗体产生;淋巴结和脾脏细胞对Tg刺激增殖实验呈阳性反应.脾脏细胞上清中IL-4水平无升高,而IFN-升γ高[(1.272±0.049 vs 1.139±0.025)ng/L,P<0.01];甲状腺组织中除了IL4外,IFN-γ、CXCL10、ICAM-1 mRNA表达升高(均P<0.01).而Tg组甲状腺内有少量散在淋巴细胞浸润,产生了甲状腺自身抗体,脾脏细胞上清中IL-4水平升高[(18.508±0.113绑13.368±0.016)ng/L,P<0.01].碘和Tg联合作用炎症反应加重.结论 碘过量所致的NOD小鼠甲状腺炎主要是以Th1反应为主的器官特异性自身免疫性疾病.碘过量联合Tg免疫对诱发实验性自身免疫性甲状腺炎具有协同作用.     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在约氏疟原虫感染小鼠应答早期中的作用

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞在约氏疟原虫感染早期的作用及意义。方法用约氏疟原虫(致死型)感染DBA/2和BALB/c小鼠,计数红细胞感染率;在感染后第0d、3d、4d、5d和6d提取脾细胞应为,流式细胞术检测两种小鼠感染不同时间脾细胞悬液中CD4+T细胞和CD4+CD25+T细胞百分含量;ELISA法检测脾细胞培养上清IFNγ、IL10和TGFβ1水平。结果DBA/2小鼠的IFNγ水平在感染后第3d迅速升高后缓慢下降(P<0.01),CD4+CD25+T细胞数仅在感染后第5d出现有意义的升高(P<0.05),而IL10水平和CD4+T细胞数量都无明显改变。BALB/c小鼠的IFNγ水平在感染后第3d出现有意义的升高后迅速下降(P<0.01),CD4+CD25+T细胞数在感染后第3d开始明显升高,于感染后第5d出现下降(P<0.05),而IL10水平自感染后第3～6d持续维持高水平(P<0.05),CD4+T细胞数量于感染后第6天明显下降(P<0.05)。结论CD4+CD25+调节性T细胞在致死型约氏疟原虫感染BALB/c小鼠早期可能通过抑制性细胞因子IL10发挥免疫抑制作用。     

弓形虫感染对大鼠脑组织神经丝mRNA表达和细胞免疫水平的影响

目的 探讨弓形虫感染对大鼠大脑组织神经丝(NF)mRNA表达和细胞免疫水平的影响.方法 将4周龄雄性SD大鼠分成两组(每组10只):弓形虫感染组腹腔感染2×10~(10)个/L弓形虫速殖子悬液2 ml;对照组腹腔注射灭菌生理盐水2 ml.9周后,应用RT-PCR法检测大鼠大脑组织中高相对分子质量NF(NF-H)、中相对分子质量NF(NF-M)和低相对分子质量NF(NF-L)mRNA表达水平:流式细胞术检测大鼠外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞;酶联免疫吸附试验测定其血清γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)水平.结果 大鼠弓形虫感染9周后,大脑组织NF-L、NF-H mRNA表达量(0.51±0.06、0.68±0.05)较对照组(0.79±0.03、0.76±0.05)明显下降(t值分别为3.41、2.17,P<0.01或<0.05);NF-M mRNA表达量(0.69±0.02)与对照组(0.72±0.03)比较.差异无统计学意义(t=2.09,P>0.05).弓形虫感染组大鼠的CD4~+T细胞[(32.19±5.01)%]和CD8~+T细胞[(20.06±2.28)%]与对照组[(35.82±3.71)%、(22.06±3.90)%]比较,差异均无统计学意义(t值分别为1.69、1.88,P均>0.05).弓形虫感染组大鼠血清IFN-γ[(6.03±0.16)ng/L]、TNF-α[(18.05±1.93)ng/L]、IL-4[(15.76±1.59)ng/L]水平均高于对照组((4.77±0.13)、(9.54±1.57)、(5.67±0.42)ng/L,t值分别为2.81、2.74、2.63,P均<0.05].结论 弓形虫感染可导致大鼠大脑组织中NF亚单位mRNA表达水平下降,血清IFN-γ、TNF-α、IL-4水平升高.     

自然调节性T细胞对脑型疟疾易感鼠和抵抗鼠感染结局的影响

目的探讨自然调节性T细胞(nTregs)在伯氏疟原虫感染过程中的活化特点及其与疾病进展的相关性。方法用伯氏疟原虫ANKA分别感染C57BL/6、BALB/c和DBA/2小鼠,计数红细胞感染率;感染前和感染后3、5、8d制备脾细胞悬液,流式细胞术检测脾细胞悬液中nTregs百分含量;ELISA和Griess方法检测脾细胞培养上清IFN-γ、IL-10和NO水平。结果C57BL/6小鼠感染后8～11d死于脑疟,BALB/c和DBA/2小鼠感染后3～4w死于贫血和过度虫体血症。3种小鼠于感染后3d,nTregs百分数达到峰值后逐渐下降,于感染后8d,C57BL/6小鼠nTregs百分数下降最为显著并明显低于正常水平,整个感染过程中,C57BL/6小鼠的nTregs百分含量显著低于BALB/c和DBA/2小鼠。3种小鼠脾细胞培养上清IFN-γ、NO和IL-10水平于感染后开始升高,感染后5d达到峰值,感染后8d与感染后5d相比,C57BL/6小鼠IFN-γ、NO水平轻微下降,IL-10水平显著下降;BALB/c和DBA/2小鼠IFN-γ、NO水平显著下降,IL-10水平轻微下降。并且C57BL/6小鼠IFN-γ、NO水平高于BALB/c和DBA/2小鼠,而IL-10水平低于BALB/c和DBA/2小鼠。3种小鼠感染后脾脏nTregs数量与IFN-γ和NO水平呈负相关,IL-10水平与感染率呈正相关。结论伯氏疟原虫感染过程中,nTregs数量的动态变化与宿主感染结局密切相关。     

骨髓间充质干细胞移植对MRL/Ipr鼠B细胞活化因子及B细胞活化的影响

目的 探讨正常鼠骨髓问充质干细胞(BM-MSCs)移植对MRL/Ipr狼疮鼠B细胞活化因子(BAFF)表达及B细胞活化的影响.方法 18只雌性MRL/Ipr鼠随机分为MSCs治疗组和对照组,18周龄时治疗组经尾静脉移植MSCs 1×10~6/只;5只同周龄雌性BAL B/C小鼠作为健康阴性对照.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清BAFF、干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-2、IL-10水平,流式细胞术检测脾脏中边缘区、T1期、T2期B细胞百分率及细胞数.结果 ①MSCs治疗8周后,治疗组血清BAFF水平[(32±14)ng/ml]显著低于对照组[(47±13)ng/ml](P＜0.05);血清IL-10[(19±7)pg/ml]显著低于对照组[(40±13)pg/ml](P＜0.01);血清IFN-γ、IL-2低于对照组[(26±20)pg/ml与(38±25)pg/ml、(73±10)pg/ml与(80±14)pg/ml],但差异无统计学意义.②MSCs治疗8周后,可降低治疗组脾脏边缘区B细胞百分率(15±4)%,对照组为(21±5)%,但差异无统计学意义,并能显著降低边缘区B细胞数[(9±6)×10~6与(19±10)×10~6,P＜0.05].③MSCs治疗8周后,可降低治疗组脾脏T1期、T2期B细胞百分率[(3.4±2.1)%与(7.3±4.0)%]、[(2.6±1.4)%与(4.8±2.7)%],但差异无统计学意义,并能显著降低T1期B细胞绝对数[(2.7±1.7)×10~6与(5.1±2.0)×10~6,P＜0.05]、T2期B细胞绝对数[(2.0±1.2)×10~6与(3.7±1.7)×10~6,P＜0.05].结论 BM-MSCs移植可能通过抑制体内BAFF的过量表达,进而抑制狼疮鼠B细胞的过度活化.     

拉米夫定治疗对慢性乙型肝炎患者干扰素-γ和白细胞介素-4的影响

目的 观察拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者血清IFN-γ和IL-4水平的动态变化.方法 ELISA法分别检测66例慢性乙型肝炎患者在拉米夫定治疗前,治疗后第3、6、9、12个月时的血清IFN-γ和IL-4水平.选取20名健康献血员作为健康对照.治疗前后比较用t检验,计数资料采用非参数秩和检验.结果 HBeAg阳性患者拉米夫定治疗前.完全应答组IFN-γ水平为(21.03±4.44)ng/L,明显高于部分应答组的(13.85±3.92)ng/L及无应答组的(10.63±3.11)ng/L(t=7.56,t=11.87,均P<0.01);以IFN-γ为15.66 ng/L为界,治疗前IFN-γ高水平患者完全应答率明显高于低水平患者(31.0%比8.7%,x2=8.391,P<0.01),无应答率明显低于低水平患者(13.8%比52.2%,x2=4.256,P<0.01).治疗后完全应答组患者IFN-γ/IL-4接近或高于对照组,部分应答组和无应答组低于对照组;HBeAg阴性患者拉米夫定治疗后IFN-γ/IL-4缓慢上升,但未达对照组水平.结论 拉米夫定治疗慢性乙型肝炎可增加IFN-γ释放,抑制IL-4释放,治疗应答程度与治疗后辅助性T淋巴细胞(Th)1/Th2平衡的恢复及治疗前IFN-γ水平有关.     

结核分枝杆菌ESAT6-RpfE亚单位疫苗的构建与免疫原性研究

目的 构建Mtb ESAT6-RpfE（早期分泌抗原靶6-复活促进因子E）的原核表达载体,表达和纯化融合蛋白,并对其免疫原性进行研究。方法 分别以Mtb H37Rv及临床株的基因组为模板,PCR扩增esat6、rpfE基因,依次插入pET30a质粒并在大肠埃希菌BL21中表达纯化ESAT6-RpfE蛋白。采用完全随机的方法将C57BL/6小鼠分组,每组6只,共进行了两次实验,第一次实验分为ESAT6、RpfE、ESAT6 RpfE、PBS、BCG五组,佐剂为二甲基三十六烷基胺（dimethyl dioctyldecyl ammonium bromide,DDA）;第二次实验有ESAT6-RpfE、PBS、BCG三组,佐剂为DPG［DDA+poly(I:C)+明胶］。分别于0、3、6周皮下免疫C57BL/6小鼠。末次免疫8周后,用特异性抗原ESAT6及RpfE刺激,检测其分泌IFN-γ的水平;ELISA检测血清特异性抗体IgG2b、IgG1。结果 PCR扩增的esat6、rpfE基因序列与GenBank报道一致;融合蛋白主要以包涵体形式表达;亚单位疫苗免疫动物能够分泌RpfE特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量［(427.13±100.46)］显著高于PBS组(26.13±22.34;q=7.924,P＜0.001); 分泌ESAT6刺激特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量［(506.50±140.40)］明显高于PBS组(19.25±14.75;q=11.36,P＜0.001)和 BCG组(125.5±46.41;q=8.882, P＜0.001)。ESAT6-RpfE免疫组能诱导产生特异性抗体。结论 成功构建并表达ESAT6-RpfE融合蛋白。此融合蛋白可在C57BL/6小鼠中诱导抗原特异性的免疫应答,可作为新型结核亚单位疫苗的候选疫苗予以进一步研究。     

半乳糖凝集素-1抑制过敏性哮喘小鼠Th2型炎症反应的研究

目的探讨半乳糖凝集素-1(galectin-1)抑制过敏性哮喘小鼠模型Th2型炎症反应的作用机制。方法54只BALB/c雌性小鼠随机均分为健康对照组、卵清蛋白(OVA)组和治疗组。在第0、3、7天,OVA组和治疗组小鼠分别皮下注射致敏液[含100μg OVA混合相同体积10%Al(OH)3佐剂],健康对照组注射等量生理盐水。最后1次注射后7 d,OVA组和治疗组小鼠分别进行滴鼻激发(50μg OVA),健康对照组使用50μl生理盐水,每天激发1次。治疗组在激发2 h后,给予galectin-1(1μg/ml)进行滴鼻治疗,健康对照组和OVA组使用生理盐水(10μl),连续7 d。第22天,检测3组小鼠气道高反应;收集肺泡灌洗液(BALF),吉氏染色后,对炎症细胞进行分类并计数;肺组织切片用HE染色后,镜下观察肺组织炎症病理变化;取眼球血,ELISA检测血清中过敏原特异性IgE和Th2型炎症细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、IL-5、IL-13,以及γ干扰素(IFN-γ)、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)的表达水平。取脾淋巴细胞,流式细胞术检测调节性T细胞(Treg)的比例。结果气道高反应性结果显示,治疗组小鼠的气道高反应性(Penh值为2.08±0.17)较OVA组(Penh值为5.77±0.64)降低(P<0.05)。治疗组小鼠BALF中的嗜酸粒细胞、巨噬细胞和中性粒细胞数量分别为(1.33±0.52)×10^4/ml、(1.16±0.41)×10^4/ml、(1.33±0.52)×10^4/ml,与OVA组的[(7.00±1.41)×10^4/ml、(5.00±0.63)×10^4/ml、(5.50±0.84)×10^4/ml]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。肺组织HE染色切片镜检显示,OVA组小鼠支气管周围出现炎症细胞浸润和气道壁增厚;治疗组小鼠的肺部炎症较OVA组改善,且与健康对照组相似。血清ELISA检测结果显示,治疗组血清中过敏原特异性IgE为0.24±0.06,IL-4、IL-5、IL-13的表达水平分别为(104.49±20.76)pg/ml、(82.82±7.71)pg/ml和(31.59±9.78)pg/ml,均较OVA组的[0.87±0.10,(442.72±14.97)、(445.18±35.60)和(434.67±9.78)pg/ml]降低(P<0.05)。治疗组血清中的IFN-γ、IL-10、TGF-β的表达水平分别为(120.80±9.71)、(63.05±6.05)、(67.89±6.64)pg/ml,均较OVA组的[(47.28±5.01)、(23.89±2.98)、(15.49±3.75)pg/ml]提高(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,治疗组的Treg比例为(9.64±0.41)%,较OVA组的(1.81±0.48)%增加(P<0.05)。结论Galectin-1通过促进机体调节性T细胞和调节性细胞因子IFN-γ、IL-10、TGF-β的生成抑制小鼠过敏性哮喘Th2型炎症反应。     

左氧氟沙星联合CD_(25)单克隆抗体治疗小鼠结核病的初步研究

目的 研究CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞(Treg细胞)消除与左氧氟沙星联合治疗对小鼠结核病细胞免疫作用的影响.方法 3～4周龄C57BL/6雌性小鼠76只,体重17～19 g,随机数字表法分为对照组、CD_(25)单克隆抗体(PC61)消除组、左氧氟沙星组和联合治疗组,每组19只.PC61消除组和联合治疗组小鼠腹腔注射含50 μg PC61的PBS,0.2 ml/只,对照组和左氧氟沙星组小鼠腹腔注射含50μg小鼠IgG同型对照的PBS,0.2ml/只.全部小鼠3 d后尾静脉注射0.1 ml的H_(37)Rv(1×10~6 CFU)造模,左氧氟沙星组和联合治疗组小鼠于攻毒后第2天每只给予左氧氟沙星200 mg·kg~(-1)·d~(-1)连续灌胃45 d.分析小鼠体内不同组织中Treg细胞百分率及其对特异性细胞免疫、肺组织病理变化的影响.应用单因素方差分析对4组连续变量进行检验,组间比较采用q检验,组内不同时间点比较采用t检验.结果 感染MTB第10天和第30天小鼠脾细胞中Treg细胞百分率:对照组分别为(30±4)%和(17.3±1.6)%,PC61消除组分别为(21±4)%和(16.1±1.3)%,左氧氟沙星组分别为(44±6)%和(24.7±2.0)%,联合治疗组分别为(24±3)%和(10.4±1.0)%,除第10天联合治疗组与PC61消除组比较无明显差别外,其他各组间比较均差异有统计学意义(q值为3.62～5.56,均P<0.05).联合治疗组小鼠的肺组织病变较轻,死亡数量较少.结论 Treg细胞消除联合左氧氟沙星治疗可促进结核病小鼠的特异性细胞免疫,使肺内病变有所改善,并可降低小鼠的病死率.     

Kinetics of spleen and Peyer's patch lymphocyte populations during gut parasite clearing in Cryptosporidium parvum infected suckling mice

Data from experimental and human cryptosporidiosis have established a major role of specific immunity in the control of Cryptosporidium parvum infection. In this work, alterations in spleen and Peyer's patch (Pp) lymphocytes were investigated in the course of a spontaneously resolutive gut cryptosporidiosis in four-day-old suckling NMRI mice infected with either 4 x 10(5) or 30 viable oocysts. Oocysts from entire small intestines, and spleen and Pp lymphocytes were examined using flow cytometry from day 7 to day 27 post-infection. Compared to uninfected animals, a 3-5 fold increase in the numbers of spleen TCR alphabeta+, CD4+, CD8+, TCR gammadelta+ and CD45R/B220+ lymphocytes was observed on day 17 post-infection in heavily infected animals. In Pp, more than ten-fold increases were observed, except for TCR gammadelta+ lymphocytes. At termination of infection, i.e. on days 21-23 after ingestion of 4 x 105 oocysts, T and B lymphocytes decreased rapidly in both organs, and remained lower than in uninfected animals on days 19-23 post-infection. In mice infected with 30 oocysts, similar alterations were observed in Pp, but not in spleen. Data suggest that in normally developing mice, clearance of gut C. parvum infection is associated with an initial increase in systemic and local lymphocyte numbers, followed by their decrease to below control levels during the recovery phase.