丙泊酚对大鼠局灶性脑缺血-再灌注低氧诱导因子-1和热休克蛋白70的影响

目的 观察丙泊酚对大鼠局灶性脑缺血-再灌注后低氧诱导因子(HIF-1)和热休克蛋白70(HSP70)的影响,探讨丙泊酚脑保护作用机制.方法 32只雄性sD大鼠,随机均分为四组,采用可逆性大脑中动脉内线栓法建立局灶性脑缺血-再灌注模型,缺血2 h再灌注24 h后断头取脑,采用免疫组化法检测HIF-1和HSP70.HE染色,光镜观察细胞形态学改变.结果 大鼠局灶性脑缺血-再灌注后大脑皮质和海马区出现神经细胞的坏死和凋亡改变,HIF-1和HSP70的表达均增加,给丙泊酚后神经细胞的肿胀、坏死、凋亡明显减少,HIF-1和HSP70蛋白的表达受到明显抑制.结论 丙泊酚对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护机制与减少HIFll、HSP70的表达有关.     

丙泊酚对脑缺血-再灌注后海马组织热休克蛋白70和c-fos基因表达的影响

目的观察丙泊酚对脑缺血一再灌注后海马组织热休克蛋白70(HSP70)与c-fos基因表达的影响。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为假手术组、缺血一再灌注对照组和缺血一再灌注丙泊酚处理组,后者按丙泊酚用量又分为50、100和150mg／kg三个亚组。采用大鼠全脑缺血一再灌注损伤模型。全脑缺血10min再灌注60min时,断头取脑,采用免疫组织化学和半定量RT-PCR方法,对脑内HSP70与c-fos蛋白及其mRNA在海马组织的表达水平进行检测。结果缺血一再灌注后皮层、海马、纹状体及边缘区等脑区均有大量的HSP70和c-fos阳性蛋白表达,海马组织HSP70及c-fos基因mRNA的表达水平明显增高,其中以缺血一再灌注对照组表达最为显著;假手术组仅有少量阳性蛋白的表达,海马组织mRNA的表达水平极低;麻醉相关剂量的丙泊酚可显著抑制HSP70与c-fos蛋白在各脑区的表达,尤以海马CA1区最为显著,亦可明显下调HSP70和c-fos mRNA在海马组织的表达水平。结论缺血一再灌注损伤可明显诱导HSP70与c-fos基因的表达,丙泊酚的脑保护作用可能与其下调HSP70与c-fos基因的异常表达有关。     

电针预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质神经元pSTAT3蛋白表达的影响

目的 评价电针预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质神经元磷酸化信号转导及转录激活因子3(pSTAT3)蛋白表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠45只,体重280 ～ 320 g,采用随机数字表法,将其随机分为假手术组、局灶性脑缺血再灌注组和电针预处理组(n=15).局灶性脑缺血再灌注组采用线栓阻塞颈总动脉和颈外动脉24 h恢复灌注的方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.电针预处理组电针刺激百会穴30 min,处理后24h时制备模型,再灌注24 h时进行神经行为学评分,随后处死大鼠取脑测定脑梗死体积,计算脑梗死体积百分比,采用免疫荧光染色和Westem blot法检测缺血半暗带皮质神经元pSTAT3蛋白的表达.结果 与假手术组比较,局灶性脑缺血再灌注组和电针预处理组神经行为学评分降低,脑梗死体积百分比增加,皮质神经元pSTAT3蛋白表达上调(P＜0.05);与局灶性脑缺血再灌注组比较,电针预处理组神经行为学评分升高,脑梗死体积百分比减少,皮质神经元pSTAT3蛋白表达上调(P＜0.05).结论 电针预处理通过上调皮质神经元pSTAT3蛋白的表达减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

参附注射液预处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤后HSP70和HSP90表达的影响

目的探讨参附注射液(SF)单次预处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用。方法30只雄性SD大鼠随机均分为单纯缺血-再灌注组(MCAO组)、SF预处理组(SF组,缺血前30 min经腹腔注射SF 10 ml/kg)和假手术组(Sham组)。MCAO组和SF组采用颈内动脉尼龙线线栓法致右侧大脑中动脉栓塞120 min。观察再灌注后24 h时脑组织病理学改变,检测热休克蛋白(HSP)70和HSP90表达。结果再灌注24 h后,SF组脑组织病理学损害轻于MCAO组。Sham组未见HSP70及HSP90表达。MCAO组可见到较多的HSP70免疫阳性细胞,明显高于Sham组(P<0.01);SF组HSP70免疫阳性细胞分布较MCAO组广泛,数量明显增多,胞浆及胞核都可见HSP70免疫阳性细胞[(1.341±0.464)vs.(0.856±0.574)](P<0.05),而SF组HSP90的表达与MCAO组相仿[(0.006±0.013)vs.(0.005±0.007)]。结论SF预处理可通过增加HSP70表达而对大鼠脑缺血-再灌注损伤起保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤对钾氯协同转运蛋白2表达的影响

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤对钾氯协同转运蛋白2( KCC2)表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠36只,体重250～300 g,随机均分为假手术组(S组)和缺血-再灌注组(IR组).IR组采用大脑中动脉栓塞2h,再灌注3、24、48 h的方法建立局灶性脑缺血-再灌注模型,S组除不插入栓线外,其余步骤相同.采用免疫组化法测定大鼠海马和皮质KCC2的表达,用HE染色观察脑组织形态学改变.结果 与S组比较,再灌注后IR组大鼠大脑皮质和海马KCC2表达下调(P＜0.05).与再灌注3h比较,再灌注24、48 h IR组皮质KCC2表达明显增多(P＜0.05).结论 大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤降低海马和皮质KCC2的表达.     

乌司他丁对大鼠局灶性脑缺血再灌注时水通道蛋白4表达的影响

目的 评价乌司他丁对大鼠局灶性脑缺血再灌注时水通道蛋白4(AQP4)表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠135只,体重230 ～ 280 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=45):假手术组(S组)、局灶性脑缺血再灌注组(I/R组)和乌司他丁组(U组).采用线栓法阻塞大脑中动脉2h恢复灌注的方法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,U组于再灌注即刻尾静脉注射乌司他丁10万U/kg,S组和I/R组给予等容量生理盐水.于再灌注6、24和48 h时处死大鼠,取脑组织,采用TTC染色法测定脑梗死体积,计算脑梗死体积比,干湿比重法测定脑含水量,免疫组化法测定AQP4表达.结果 与S组比较,I/R组和U组各时点脑梗死体积比和脑含水量升高,AQP4表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,U组各时点脑梗死体积比和脑含水量降低,AQP4表达下调(P＜0.05).结论 乌司他丁减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的机制与下调脑组织AQP4表达有关.     

浅低温对犬全脑缺血再灌注后脑组织诱导型热休克蛋白70表达的影响

目的:研究犬全脑缺血再灌时浅低温对热休克蛋白70(HSP70)表达的影响,探讨热休克蛋白在低温脑复苏中的作用。方法:采用犬心脏停跳再复苏模型。14只犬随机分成三组:非缺血对照组(n=4)、常规治疗组(n=5)和浅低温组(n=5)。用免疫组化测定脑组织内HSP70表达阳性细胞数密度和反应产物灰度值。结果:犬全脑缺血再灌后HSP70表达明显增强(P<0.01)。浅低温组HSP70表达增强比常规治疗组更明显(P<0.01)。病理损伤明显减轻。结论:浅低温能增加再灌脑组织HSP70表达,并可能是低温脑复苏机制之一。     

异氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠缺血半暗带TLR4-MyD88信号通路的影响

目的 探讨异氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠缺血半暗带TLR4-MyD88信号通路的影响.方法 成年雄性SD大鼠54只,体重250 ～ 280 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=18):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)和异氟醚预处理组(IP组).S组仅分离血管不留置线栓;I/R组采用线栓法制备右侧局灶性脑缺血再灌注损伤模型,缺血2h,再灌注24 h;IP组吸入2.0％异氟醚2h,预处理结束后24h时制备右侧局灶性脑缺血再灌注损伤模型.于再灌注24 h时行神经功能缺陷评分,随后处死大鼠,每组随机抽取5只大鼠,取脑组织,测定脑梗死体积,采用Westernblot法和RT-PCR法检测大鼠右侧脑缺血半暗带区HSP60、TLR4、MyD88蛋白及mRNA的表达情况;每组剩余的3只大鼠,采用TUNEL法检测大鼠右侧脑缺血半暗带区细胞凋亡情况.结果 与S组比较,I/R组和IP组神经功能缺陷评分升高,脑梗死体积增大,右侧脑缺血半暗带区凋亡指数升高,HSP60、TLR4、MyD88蛋白及mRNA表达均上调(P＜0.05);与I/R组比较,IP组神经功能缺陷评分降低,脑梗死体积减小,右侧脑缺血半暗带区凋亡指数降低,HSP60、TLR4、MyD88蛋白及mRNA表达均下调(P＜0.05).结论 异氟醚预处理可保护脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带,其机制可能与抑制大鼠脑缺血半暗带TLR4-MyD88信号通路有关.     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤海马胶质纤维酸性蛋白表达及神经元凋亡的影响

目的评价亚低温对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达及神经元凋亡的影响。方法健康成年雄性SD大鼠72只,体重250~300g,采用随机数字表法均分为三组:假手术组(S组)、脑缺血-再灌注损伤组(IR组)和亚低温组(MH组),每组24只。IR组和MH组采用线栓法进行大鼠脑缺血2h、再灌注制备局灶性脑缺血-再灌注损伤模型。S组分离右侧颈总动脉、颈内动脉及颈外动脉,不置入线栓。S组和IR组置于室温下,MH组于缺血后10min给予亚低温处理并维持3h。分别于再灌注后4h(T1)、6h(T2)、12h(T3)和24h(T4)进行神经功能缺陷(NDS)评分。取海马组织,采用Western blot和RT-PCR检测海马GFAP蛋白和GFAP mRNA表达,采用流式细胞仪检测海马神经元凋亡情况。结果与S组比较,T1~T4时IR组和MH组大鼠NDS评分及海马神经元凋亡率明显升高,GFAP蛋白和GFAP mRNA表达明显上调(P0.05)。与IR组比较,T1~T4时MH组大鼠NDS评分及海马神经元凋亡率明显降低,GFAP蛋白和GFAP mRNA表达明显下调(P0.05)。结论亚低温可减轻大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤,其机制可能与下调海马GFAP表达有关。     

异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌住损伤时蛋白激酶B活性的影响

目的 评价异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌住损伤时蛋白激酶B(Akt)活性的影响,以探讨异丙酚脑保护作用的机制.方法 健康SD大鼠90只,体重260～300 g,雌雄不拘,随机分为5组(n=18):假手术组(S组);局灶性脑缺血再灌注组(IR组)、P1-3组阻断大脑中动脉2 h,开放22 h,制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,分别于再灌注前3 min至再灌注5 min时经股静脉输注生理盐水2.5ml、异丙酚1、2、5 mg/kg(异丙酚采用生理盐水稀释至2.5 ml).于再灌注22 h时行神经行为学评分;测定大鼠脑梗死质量、免疫组化法检测大鼠脑组织caspase-3表达、Western blot法检测Akt活性.结果 与S组比较,再灌注22 h时IR组、P1-3组神经行为学评分、脑梗死质量比升高,脑组织caspase-3表达上调,P1组和P2组Akt活性升高,IR组和P3组Akt活性降低(P<0.05);与IR组比较,P1组和P2组大鼠神经行为学评分,脑梗死质量比降低,腩组织caspase-3表达下调,Akt活性升高(P<0.05).结论 静脉输注异丙酚1、2 mg/kg可通过升高Akt活性,抑制脑组织细胞凋亡,减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

HSP70与肿瘤

1974年,Tissieres 等证实高温引起的果蝇染色体蓬松是由于热休克激发染色体内基因转录合成特异性的蛋白,即热应激蛋白(又称热休克蛋白)引起的.热休克蛋白(Heat Shock Protein,HSP)按分子量大小分为以下几个家族:小分子HSP(相对分子质量为22～32 ku)、HSP60、HSP70、HSP90、HSP100和泛素(相对分子质量为7～8 ku),其中最重要、诱导后表达量最大的是HSP70家族.     

热休克蛋白27、70与恶性肿瘤

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)广泛存在于生物体内,是一类在进化上高度保守的细胞应激蛋白.其中HSP27和HSP70在抗凋亡过程中发挥重要的作用,在多种肿瘤细胞中异常高表达,尤其是腺癌起源的肿瘤.HSP27和HSP70在恶性肿瘤的发生、发展中的作用及其机制是近年来研究的热点,有望对肿瘤的治疗提供新的平台.     

Heat shock proteins HSP27 and HSP70 in unilateral obstructed kidneys

Unilateral ureteropelvic junction obstruction (UPJO), a condition involving injury to the kidney, leads to vasoconstriction, macrophage infiltration, oxidative stress, and tubulointerstitial fibrosis. In the present study we analyzed in 22 children, the impact of UPJO on expression of HSP27 and HSP70 and related the changes to renal function and duration of obstruction. Kidney function was evaluated, and renal biopsies were obtained for immunohistochemical and western blot analyses at the time of surgery. Kidney tissue from 5 children of similar age, removed because of various malignancies, was used as control. Increased HSP27, with an expression pattern related to the duration of the obstruction, was noted in proximal tubules (PTs), cortical collecting ducts (CCDs), and medullary collecting ducts. Strong HSP27 staining in cytoplasm and nuclei of these segments appeared in children with kidney obstruction for 2.1+/-0.41 years. HSP70 showed a close spatial expression pattern with that of HSP27. The increased staining of HSP70 in PTs and CCDs was related to the decreased glomerular filtration rate. The constitutive/cognate form of HSP70 (HSC72) was absent. These results support the concept that HSP27 and HSP70 are involved in the adaptive response of the human kidney to congenital UPJO.     

大鼠全脑缺血再灌注模型方法的改进及其在热休克蛋白70方面的应用

目的　改进大鼠全脑缺血再灌注模型的方法。方法　采用 42只成年雄性SD大鼠 ,四动脉阻断法制作全脑缺血再灌注模型 ,术中乙醚麻醉 ,41/ 2号注射器针头破坏椎动脉 ,动脉夹夹闭颈总动脉 ,苏木素 伊红 (HE)染色观察海马区病理改变 ,免疫组织化学法检测海马CA1区热休克蛋白 70 (HSP70 )表达 ,苏木素在体染色大体观察脑血供的阻断情况。结果　全脑缺血模型成功率为 77.8% ,四动脉阻断的动物海马区神经元大量坏死 ,HSP70表达 ,苏木素在体染色阴性 ,单纯颈总动脉阻断组和假手术组未见上述表现。结论　改进后的四动脉阻断方法简便 ,效果可靠 ,利于推广。     

胃癌组织中HSP60和HSP70的表达及其意义

目的研究胃癌组织中HSP60和HSP70的表达及其意义.方法将胃癌组织石蜡包埋切片,以ABC免疫组织化学法染色进行观察.结果50例胃癌HSP60和HSP70阳性率分别为56%和64%,高分化和未发生淋巴结转移的胃癌HSP60和HSP70阳性率均明显地低于未分化和有淋巴结转移的胃癌.结论HSP60和HSP70的表达可能与胃癌临床病理特征、生物学行为和预后有较密切的关系,两者可能是反映胃癌生物学行为和预后的重要标记物.     

热休克蛋白70和27在非小细胞肺癌中的表达和临床意义

目的研究热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)70和27在非小细胞肺癌(nonsmallcelllungcancer,NSCLC)组织中的表达,探讨HSP70和HSP27与NSCLC细胞的组织学类型、分化和转移之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测60例NSCLC标本中HSP70和HSP27的表达情况。结果NSCLC中HSP70和HSP27的表达与肿瘤细胞组织学类型无关。HSP70和HSP27的表达正相关。HSP70的表达与肿瘤细胞分化程度和淋巴结转移明显相关,HSP27的表达则无关。结论HSP70在NSCLC中的高表达与肿瘤细胞的分化和转移明显正相关,提示HSP70可以作为NSCLC辅助诊断和估计预后的指标。而HSP27尽管在多种恶性肿瘤中发挥促进细胞恶变的作用,但在NSCLC中的作用需要进一步研究。     

热休克蛋白70、90α在严重多发伤中的表达及意义

目的 研究热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白90α(HSP90α)在严重多发伤患者外周血白细胞中的表达规律及意义.方法 采用Western blotting检测严重多发伤后患者(ISS评分≥16)外周血白细胞中HSP70、HSP90α蛋白的表达高峰期,以及检测严重多发伤经治疗后痊愈患者、严重多发伤因MODS死亡患者外周血HSP70、HSP90α蛋白在高峰期的表达情况.同时记录患者的预后.结果 严重多发伤患者伤后72 h HSP70、HSP90α蛋白均表达明显升高,而经治疗后痊愈患者表达明显增强,因MODS死亡的患者表达相对增强.结论 HSP70、HSP90α表达强弱对于严重多发伤患者预后生存情况有密切关系.