慢性孵育β淀粉样肽25-35对培养大鼠海马神经元电压依赖性外向钾通道亚型mRNA表达的影响

目的研究慢性孵育β淀粉样肽_25-35(β-AP_25-35)对海马神经元电压依赖性外向钾通道亚型mRNA表达的影响。方法用RT-PCR方法检测mRNA的表达,用光密度扫描法半定量测定表达变化。结果在正常培养的海马神经元上延迟整流(Kv2.1,Kv1.5),瞬间外向(A型)(Kv4.2,Kv1.4),钙激活的大电导(rSlo)钾通道亚型均有表达。β-AP_25-35 3 μmol·L^-1孵育细胞24 h后,Kv2.1 mRNA的表达明显上调,其它亚型则无显著性变化;β-AP_25-35上调Kv2.1 mRNA的作用主要发生在β-AP_25-35应用后48 h内;60 h后Kv2.1 mRNA表达水平显著下调。结论Kv2.1转录水平的上调可能参与β-AP_25-35选择性地增加海马神经元上延迟整流钾电流(I_K)的作用。     

大鼠海马内注射β-AP25-35后c-fos在脑内的变化及蜕皮甾酮的影响

目的观察大鼠海马内注射β-AP_25-35后学习记忆行为、c-fos基因表达变化及蜕皮甾酮的干预作用,以探讨蜕皮甾酮改善学习记忆的机制。方法大鼠双侧海马内微注射β-AP_25-35 10 μg,Morris water maze观察其学习记忆行为,免疫组化SABC法观察c-fos基因的表达。结果结果显示,与模型组比较,尼莫地平组及蜕皮甾酮(ECR)组的潜伏期缩短、搜索时间延长;同时模型组大鼠皮层及海马内c-fos蛋白表达明显降低,而高剂量ECR组c-fos蛋白的表达则相对增加。结论海马内注射β-AP_25-35可引起大鼠空间学习记忆障碍,并抑制c-fos的表达;ECR酮可改善β-AP引起的大鼠空间学习记忆障碍,并相对增加c-fos的表达。     

人参皂苷Rb1抑制β淀粉样蛋白25-35诱导的皮层神经元tau蛋白过度磷酸化

目的探讨人参皂苷Rb1对凝聚态β-AP_25-35诱导的胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化的影响及其可能的作用机制。方法通过蛋白免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测神经元tau蛋白磷酸化水平、总tau蛋白水平和糖原合成酶3β(GSK-3β)的蛋白表达水平。结果凝聚态β-AP_25-35(20 μmol·L^-1)作用于皮层神经元12 h，tau蛋白磷酸化水平和总tau蛋白水平均增高，同时GSK-3β蛋白表达也增多。用人参皂苷Rb1或GSK-3β特异性抑制剂氯化锂预处理后，凝聚态β-AP_25-35诱导的tau蛋白的过度磷酸化受到明显抑制，同时GSK-3β的表达也降低。结论人参皂苷Rb1可通过抑制GSK-3β的表达来抑制凝聚态β-AP_25-35诱导的皮层神经元tau蛋白的过度磷酸化。     

过氧化氢对培养大鼠海马神经元瞬时外向钾电流的影响

目的　研究过氧化氢对海马神经元上瞬时外向钾电流的影响。方法　采用全细胞膜片钳技术记录培养大鼠海马神经元瞬时外向钾电流的变化。结果　 3 0 μmol·L-1H2 O2 孵育 12h后 (1)明显抑制IA,电流密度由 (5 3 8±15 8) pA·pF-1变为 (18 5± 6 2 ) pA·pF-1(n =10 ,P <0 0 1) ;(2 )明显抑制IA 激活作用 ,半数最大激活电压由 (-15 2± 3 6)mV左移至 (- 18 2± 2 7)mV(n =10 ,P <0 0 1) ;(3 )明显抑制IA 失活作用 ,失活常数由 (42 2± 10 1)ms变为 (81 9± 3 5 0 )ms(n =10 ,P <0 0 5 ) ,半数最大灭活膜电位V1/ 2 由 (- 87 5± 12 6)mV变为 (- 99 8± 2 1)mV(n =10 ,P <0 0 1) ;(4)明显抑制IA 电流失活后复活作用 ;恢复时间常数由 (2 7 9± 14 1)ms变为 (5 8 6± 10 0 )ms(n=10～ 11,P <0 0 1) ;(5 )降低静息膜电位 ,由 (- 64 9±9 4)mV变为 (- 46 0± 12 8)mV(n =6～ 11,P <0 0 1) ,延长动作电位时程 ,由 (8 7± 3 4)ms增至 (16 0± 6 2 )ms(n =6～ 11,P <0 0 5 )。结论　H2 O2 对IA 的抑制作用可能参与其对神经元的氧化应激损伤毒性     

人参皂苷Rg1对β-淀粉样肽(25-35)侧脑室注射所致小鼠学习记忆障碍的改善作用及其机制

目的　观察人参皂苷Rg₁对β-淀粉样肽［β-AP,(25-35)］所致小鼠拟阿尔茨海默(AD)学习记忆功能障碍的改善作用及其作用机制。方法　小鼠侧脑室注射凝聚态β-AP4nmol,次日,ipRg₁5和10mg·kg^-1,10d后,测试各组被动回避、空间学习记忆能力,及皮层、海马组织胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性变化。结果人参皂苷Rg₁可明显改善β-AP所致小鼠被动回避、空间学习记忆能力及皮层海马组织ChAT活性的下降。β-AP对小鼠AchE活性无显著性影响,但与对照、模型组相比,Rg₁明显抑制AchE活性。结论　Rg₁对β-AP(25-35)所致的小鼠学习记忆障碍有显著改善作用,其对胆碱能系统的影响是Rg₁重要作用机制之一。     

左旋黄皮酰胺对冈田酸和β淀粉样肽25-35神经毒性的保护作用

探讨左旋黄皮酰胺对冈田酸(okadaic acid，OA)诱导的人神经瘤细胞(SH-SY5Y)和去卵巢(ovariectomy，OVX)及单侧侧脑室注射Aβ_25-35所致神经元损伤的保护作用。通过MTT试验、LDH释放测定试验、Hoechst 33258荧光染色试验以及SH-SY5Y细胞检测，考察左旋黄皮酰胺拮抗冈田酸诱导的细胞毒作用。通过避暗试验、电镜检测、Nissl体染色及HE染色，考察左旋黄皮酰胺对去卵巢及侧脑室注射Aβ_25-35大鼠神经元的保护作用。左旋黄皮酰胺可明显拮抗冈田酸诱导的细胞毒作用，提高去卵巢及侧脑室注射Aβ_25-35大鼠的学习记忆能力，保护海马及皮层神经元。左旋黄皮酰胺可拮抗冈田酸及Aβ_25-35诱导的神经毒性，具有神经保护作用。     

他克林对培养大鼠海马神经元延迟整流钾电流和瞬间外向钾电流的影响

目的研究他克林对培养大鼠海马神经元上延迟整流钾电流(I_K)和瞬间外向钾电流(I_A)的影响。方法 大鼠海马神经元原代培养,全细胞膜片钳记录培养大鼠海马神经元上电压依赖性外向钾电流和瞬间外向钾电流变化。结果他克林明显抑制海马神经元延迟整流钾电流和瞬间外向钾电流,呈浓度依赖性,对延迟整流钾电流的敏感性高于瞬间外向钾电流。30 μmol·L^-1他克林显著影响I_K和I_A稳态激活曲线,使所有电流的V_1/2左移。结论他克林明显抑制延迟整流钾电流和瞬间外向钾电流,对延迟整流钾电流的敏感性高于瞬间外向钾电流。     

β-淀粉样肽25-35致记忆障碍大鼠中枢双孔钾通道亚型mRNA表达的改变

目的研究聚集态β-淀粉样肽_25-35（β-AP_25-35）致记忆障碍大鼠模型中枢双孔钾通道亚型mRNA表达的变化。方法Morris水迷宫实验检验大鼠空间学习记忆能力，用RT-PCR方法检测大脑皮层和海马中3种双孔钾通道TREK-1,TREK-2和TRAAK mRNA的表达。结果在Morris水迷宫实验中，β-AP_25-35注射组大鼠d 1，d 2和d 4的潜伏期均比对照组显著延长。β-AP_25-35注射组大鼠大脑海马中TREK-1,TREK-2和TRAAK mRNA的表达比对照组明显升高；而在皮层中的表达变化不显著。结论侧脑室注射聚集态β-AP_25-35致大鼠学习记忆障碍的同时可诱发中枢双孔钾通道亚型的表达改变。     

人参皂苷Rb1可能通过CDK5途径减轻Aβ25-35诱导的胎鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化

观察人参皂苷Rb1对Aβ_25-35诱导的海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响，并探讨其对周期依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinase 5，CDK5)及激动亚基p25/p35的可能作用。通过蛋白免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测胎鼠海马神经元tau蛋白在Thr²⁰⁵、Ser³⁹⁶和Ser⁴⁰⁴位点的磷酸化水平，及CDK5的两个亚基cdk5和p25/p35的蛋白水平。20 μmol·L^-1凝聚态Aβ_25-35作用于海马神经元12 h，可使海马神经元tau蛋白在Thr²⁰⁵、Ser³⁹⁶和Ser⁴⁰⁴位点的磷酸化水平增高，p25的数量增多，但并不影响cdk5亚基的表达。人参皂苷Rb1可减轻凝聚态Aβ_25-35诱导的海马神经元tau蛋白的过度磷酸化，抑制p35的降解并减少海马神经元p25的生成。人参皂苷Rb1可能通过CDK5途径减轻Aβ_25-35诱导的胎鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化。     

硫酸镁对大鼠海马神经元瞬间外向钾电流和延迟整流钾电流的抑制作用

目的研究硫酸镁(MgSO₄)对大鼠海马神经元瞬间外向钾电流(I_A)和延迟整流钾电流(I_K)的作用。方法 全细胞膜片钳技术。结果MgSO₄可浓度依赖地抑制I_A和I_K,半数抑制浓度IC₅₀分别为6.30和7.60 mmol·L^-1;此外还与电压呈依赖性关系,但不具有频率依赖性。6 mmol·L^-1 MgSO₄非常显著地影响I_A和I_K的激活过程,但不改变二者的斜率因子。另外6 mmol·L^-1 MgSO₄还非常显著地影响I_A的失活过程,但不改变其斜率因子。结论 MgSO₄抑制大鼠海马神经元的I_A和I_K,并改变I_A和I_K的激活过程和失活过程。这可能是其抗缺血缺氧引发的中枢神经系统损伤,具有神经保护作用的机制之一。     

Donepezil对大鼠海马及新皮层锥体神经元延迟整流样钾电流的影响

目的探讨donepezil对大鼠海马和新皮层锥体神经元具有延迟整流样特性钾电流(I_K)的影响。方法 用膜片钳全细胞记录法。结果Donepezil在微摩尔水平即可抑制I_K,并呈剂量依赖性和电压依赖性,且可使I_K的稳态激活曲线向超级化的方向移动。结论低浓度donepezil即可抑制大鼠海马和新皮层锥体神经元电压激活的I_K,此作用可能与其抑制胆碱酯酶活性协同,参与药物的治疗效应。     

人参皂甙Rb1和Rg1对原代培养大鼠海马神经细胞的保护作用

用大鼠海马神经细胞原代培养的实验模型,观察了人参皂甙Rb1和Rg1对原代培养的大鼠海马神经细胞生长的影响。结果发现Rb1和Rg1可明显延长培养神经细胞的存活时间、降低神经细胞的死亡率,并对抗谷氨酸介导的神经毒性作用。实验证明其机制在于选择性抑制大剂量谷氨酸引起的钙离子浓度异常升高。     

MK801慢性处理引起皮层神经元3H-GABA释放的改变

Excitatory amino acids are involved in acute and chronic neurodegenerativediseases.Little is known about the potential consequences of chronic blockade of NMDA receptors (onesubtype of excitatory amino acid receptors).Receptor function measured as ³H-GABA release inculture media after pretreatment with MK801 was studied in rat cortical neurons in primary cultures.Cultured neurons were exposed to 1μmol·L^-1 MK801 for 4 days since the 14th day.Glutamate( 1 mmol·L^-1 )evoked ³H-GABA release was shown to be significantly increased(control0.2174‰±1.40‰; MK801 treatment 0.763%±0.192%).KCl 40 mmol·L^-1 stimulation showedno such effect.This result suggests that the NMDA receptor function of releasing neurotransmitterschanged after chronic treatment with noncompetitive antagonists.     

EFFECTS OF 5HT2 RECEPTOR ANTAGONISTS ON RESPONSES TO POTASSIUM DEPOLARIZATION IN RAT ISOLATED AORTA

1. In order to determine whether 5HT₂ receptor antagonists can modify Ca²⁺ uptake via voltage-operated Ca²⁺ channel (VOC) in arterial smooth muscle, a comparative study of the effects of selected Ca²⁺ uptake blockers and 5HT₂ receptor antagonists on K⁺-induced contractions of rat aortic strip was undertaken. 2. The antagonist drugs studied included the Ca²⁺ uptake blockers verapamil, nifedipine, felodipine, diltiazem and cin-narizine, the 5HT₂ receptor antagonists cyproheptadine, ritanserin, mianserin, and ketanserin and the α₁-adrenoceptor antagonist prazosin. 3. With the notable exception of prazosin, each of these compounds diminished K⁺-induced aortic responses. 4. The following order of potencies (mean IC₅₀ values in mol/L) was established: felodipine (7.0 × 10^-11) >nifedipine (4.8 × 10^-9) >verapamil (5.5 × 10^-8) >cyproheptadine (6.2 × 10^-8) > diltiazem (4.1 × 10^-7) >cinnarizine (1.3 × 10^-6) >ritanserin (1.8 × 10^-6) >ketanserin (9.0 × 10^-6) > mianserin (2.0 × 10^-5). 5. The results suggest that antagonists of 5HT₂ receptors can modulate Ca²⁺ uptake via VOC in rat aorta.     

EFFECTS OF V2 RECEPTOR ACTIVITY ON THE PRESSOR RESPONSE TO VASOPRESSIN IN THE RAT

1. To determine the contribution of V1 and V2 receptor activity on the enhancement of reflex buffering of the pressor response to arginine-vasopressin (AVP), mean arterial pressure (MAP) and heart rate (HR) changes were examined in response to graded injections of phenylephrine, AVP, or Phe2Orn8OT, a potent, selective V1-receptor agonist in the absence and presence of Val4DArg8VP, a potent, selective V2-receptor agonist. 2. There were no significant differences in MAP responses to the V1 agonist in the absence and presence of the V2 agonist in either conscious intact or autonomic-blocked rats. 3. Autonomic blockade with methscopolamine and hexamethonium increased the pressor sensitivity to phenylephrine threefold. In contrast, the pressor sensitivities to AVP and Phe2Orn8OT were increased 14-fold and 11-fold, respectively, by autonomic blockade. 4. V2-receptor activity does not have any inherent vasocative action or synergistic vasoactive action with V1-receptor activity. 5. V2 receptors do not play a role in enhancing reflex buffering of the pressor response to AVP; V1 receptors are suggested to play the role.