实时荧光定量PCR检测泌尿生殖道患者尿液解脲脲原体

目的 应用实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)检测泌尿生殖道患者尿液解脲脲原体(UU),并评价其敏感性和特异性.方法 对140例疑似泌尿生殖道感染患者的拭子和尿液样本,分别采用培养法、SAT进行解脲脲原体检测,检测结果有差异的标本用实时荧光定量PCR法对拭子进行复测,根据实验结果评估SAT检测尿液UU的敏感性和特异性.结果 140例疑似患者试子培养和尿液SAT检测阳性率均为60％,两者比较差异无统计学意义(P＞0.05),其中16例培养结果与SAT检测结果不一致,8例培养法阳性、SAT阴性的拭子PCR结果复测阳性;8例培养法阴性、SAT阳性的拭子标本PCR结果4例阴性、4例阳性,结合培养法结果和PCR结果作为“扩大金标准”,得出SAT对尿液检测的敏感性为95.5％、特异性为100％.结论 SAT检测泌尿生殖道患者尿液UU具有取样方便,检测快速、准确等优点,适用于临床实验室泌尿生殖道UU的检测.     

实时荧光核酸恒温扩增技术检测尿液中沙眼衣原体的分析

目的评价实时荧光核酸恒温扩增技术（SAT）检测尿液中沙眼衣原体（CT）的特异性和敏感性。方法对175例疑似患者生殖道拭子行CT—SAT、PCR检测和沙眼衣原体培养,同时对对应的175份尿液标本行CT—SAT检测。结果SAT对同一患者的拭子标本和尿液标本的检测结果符合率100％。1例淋球菌培养阴性而SAT阳性,2例PCR阳性而SAT阴性。结论SAT技术检测拭子及尿液中的沙眼衣原体具有很高的灵敏度和特异性,为CT的实验室诊断提供新的检测方法。     

实时荧光核酸恒温扩增检测技术在泌尿生殖道淋病中的应用

目的探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术（SAT）检测泌尿生殖道淋病的灵敏度、特异度以及监测疗效的实用性。方法回顾性分析12816例因怀疑泌尿道淋球菌感染需行淋球菌检测受试者临床资料,其中淋球菌培养检测6323例,基于SAT开发的淋球菌核酸检测试剂盒（NG-SAT）检测7107例,比较2种检测方法的阳性率;再以淋球菌培养法为金标准,计算同时行以上2种检测的614例患者NG-SAT检测尿液样本的灵敏度和特异度;对2种检测结果有差别的标本,进行荧光定量DNA杂交及聚合酶链反应法（FQ-PCR）复测与分析;对检测结果阳性的患者进行头孢曲松治疗,待症状消失后3d再次行以上2种检测。结果NG-SAT检测尿液标本的灵敏度为100.0%,特异度为98.2%。2种检测结果有差别的标本7份,均为SAT检测阳性、淋球菌培养阴性;FQ-PCR复测结果显示6份阳性、1份阴性。179例患者经头孢曲松治疗后,NG-SAT检测阳性15例,淋球菌培养阳性7例。结论NG-SAT检测尿液中淋球菌简便、准确,且能准确判断预后,值得临床推广应用。     

实时荧光核酸恒温扩增检测技术检测解脲脲原体的临床价值分析

目的 探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)检测解脲脲原体(UU)的临床价值.方法 选取2018年5月至2020年5月于本院就诊的疑似泌尿生殖道感染患者80例,采集所有受检者的尿道/宫颈口拭子及尿样标本,分别采用液体培养法、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法、SAT法检测拭子标本中UU阳性表达情况,以液体培养法结果为金标准,评估SAT技术在UU检测中的临床价值.结果 液体培养法结果显示,80例患者中31例(38.75％)UU检测呈阳性,49例(61.25％)UU检测呈阴性;31例UU阳性患者中SAT(拭子)检出29例,检出率为93.55％,SAT(尿样)检出27例,检出率为87.10％,qRT-PCR检出28例,检出率为90.32％;3种检测方法检测UU阳性表达情况比较差异无统计学意义.SAT(拭子)、SAT(尿样)、qRT-PCR检测UU的灵敏度、特异度、误诊率、漏诊率、正确指数比较差异无统计学意义.结论 实时荧光核酸恒温扩增检测技术检测解脲脲原体具有较高的灵敏度、特异度,且取材方便、检测快速、污染较低、结果准确,值得临床推广应用.     

实时核酸恒温扩增技术在奈瑟菌感染检测中的应用

目的探讨实时核酸恒温扩增技术(SAT法)在淋病奈瑟菌感染检测中的应用价值。方法取153例疑似淋病奈瑟菌感染的女性患者宫颈分泌物标本采用直接涂片法、分离培养法及SAT法进行淋病奈瑟菌检测,同时对对应的153份尿液标本也进行SAT法的淋病奈瑟菌检测,对结果进行比较分析。结果淋病奈瑟菌检测中直接涂片法阳性率为31.4%,分离培养法阳性率为47.7%,SAT法阳性率为51.6%,SAT法与分离培养法检测淋病奈瑟菌阳性率差异无统计学差异(P>0.05),而直接涂片法淋病奈瑟菌阳性率较低,与分离培养法比较,差异有统计学意义(P<0.01);以分离培养法作为金标准,SAT法的检测敏感性为95.9%(70/73),特异性为88.8%(71/80);采用SAT法对153例患者的拭子标本和尿液标本进行检测,两者检测结果的符合率为100%。结论 SAT法检测女性宫颈分泌物拭子标本和尿液标本中的淋病奈瑟菌敏感性高、特异性强,能有效提高检出率;以尿液代替拭子标本,采样方便。     

两种检测男性生殖道沙眼衣原体和解脲支原体方法的对比

目的: 对比应用实时荧光核酸恒温扩增(simultaneous amplification and testing,SAT)-RNA(SAT-RNA 法)与应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)-DNA(PCR-DNA法)检测男性生殖道沙眼衣原体、解脲支原体的效果,以探讨SAT-RNA法的应用价值。方法: 收集2016年4月至2017年4月于中国医科大学附属盛京医院生殖医学中心就诊的因女方因素拟行体外受精-胚胎移植助孕的163例男性,采用SAT-RNA法检测尿液标本中的沙眼衣原体、解脲支原体,并对其中109例符合当天采集精液标本条件者进行相应病原体的检测。同时采用PCR-DNA法检测163例男性尿道拭子标本中的相应病原体。结果: 163例男性生殖道解脲支原体检测结果表明,PCR-DNA法尿道拭子检测阳性77例(阳性率47.24%),SAT-RNA法尿液标本检测阳性78例(阳性率47.85%),两者差异无统计学意义(χ² =0,P>0.05),两种方法的检测结果符合率为93.25%,阳性符合率93.51%,阴性符合率93.02%,检验结果一致性极好(Kappa值0.865)。163例男性生殖道沙眼衣原体检测结果表明,PCR-DNA法尿道拭子检测阳性5例(阳性率3.07%),SAT-RNA法尿液标本检测阳性7例(阳性率4.29%),两者差异无统计学意义(χ²=0.25,P>0.05),两种方法检测结果符合率为97.55%,阳性符合率80.00%,阴性符合率98.10%,检验结果一致性较好(Kappa值0.654)。对其中109例男性采用SAT-RNA法同时检测尿液和精液标本中的解脲支原体和沙眼衣原体:(1)解脲支原体:尿液标本阳性55例(阳性率50.46%),精液标本阳性49例(阳性率44.95%),两标本差异无统计学意义(χ²=2.08,P>0.05),检测结果符合率为88.99%,阳性符合率93.88%,阴性符合率85.00%,检验结果一致性较好(Kappa值0.780);(2)沙眼衣原体:尿液标本阳性6例(阳性率5.50%),精液标本阳性4例(阳性率3.67%),两标本差异无统计学意义(χ²=0.5,P>0.05),检测结果符合率为98.17%,阳性符合率100.00%,阴性符合率98.10%,检验结果一致性较好(Kappa值0.791)。结论: SAT-RNA法与PCR-DNA法检测生殖道沙眼衣原体、解脲支原体有良好的一致性;相比PCR-DNA法,SAT-RNA法可用于尿液或精液标本的检测,具有无创、方便等优势,更适宜临床应用。     

GeneXpert MTB/RIF Ultra在结核病特殊标本检测中的应用价值

目的 比较全自动荧光定量PCR系统超强版本（GeneXpert MTB/RIF Ultra,GeneXpert Ultra,GeneXpert）、全自动荧光定量PCR系统（GeneXpert MTB/RIF,Xpert,GeneXpert）、DNA实时荧光定量核酸检测（FQ-PCR）、结核分枝杆菌RNA实时荧光恒温扩增（SAT-RNA）、DNA实时荧光恒温扩增检测（恒温扩增法）及传统BACTEC MGIT 960液体培养（培养法）对结核病特殊标本的诊断效能，为临床诊疗提供依据。方法 收集2021年1—9月西安市胸科医院特殊标本共170例（包括胸腹水标本47例，24 h尿沉渣标本34例，组织标本49例，脓液标本40例），分别采用GeneXpert Ultra、Xpert、FQ-PCR、SAT-RNA、恒温扩增法及传统培养法进行检测，以临床诊断为标准，对比其灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率及Kappa值。结果 GeneXpert Ultra、Xpert、FQ-PCR、SAT-RNA、恒温扩增法及传统培养法的灵敏度分别为65.18%(73/112)、49.11%(55/112)...     

恒温扩增技术在男性淋球菌性尿道炎病原菌RNA检测中的应用

目的：探讨RNA恒温扩增技术（RNA-SAT）在男性淋球菌性尿道炎病原菌RNA检测中的应用价值。方法：选取2017年6月至2018年8月温州市人民医院男性疑似淋球菌性尿道炎感染患者322例,采用RNA-SAT和实时荧光定量PCR技术（FQ-PCR）进行淋病奈瑟菌（NG）检测,并对结果进行统计分析。结果：NG阳性率最高为尿液RNA-SAT法35.1%（113/322）,NG阳性率最低为尿液FQ-PCR法26.1%（84/322）。尿液RNA-SAT法、尿液FQ-PCR法与分离培养法的阳性率比较,差异有统计学意义（χ2=6.312,P＜0.05）;而拭子RNA-SAT法、拭子FQ-PCR法与分离培养法的阳性率比较,差异无统计学意义（χ2=1.039,P＞0.05）。以分离培养法作为参考,尿液RNA-SAT法检测NG的灵敏度最高为97.9%（93/95）,尿液FQ-PCR法的灵敏度最低为81.1%（77/95）;根据ROC曲线分析,拭子RNA-SAT法和尿液RNA-SAT法的曲线下面积（AUC）中等偏上,具有较高的诊断价值（AUC＞0.9）;对其中用药7 d后临床症状、体征消失且尿常规白细胞阴性的81例患者采样复查,尿液RNA-SAT法、尿液FQ-PCR法以及分离培养法的阴转率差异无统计学意义（χ2=2.531,P＞0.05）;拭子RNA-SAT法、拭子FQ-PCR法以及分离培养法的阴转率差异也无统计学意义（χ2=2.933,P＞0.05）。结论：RNA-SAT法和FQ-PCR法均可作为判断NG病原菌感染的指标,且RNA-SAT法可采用尿液作为待检样本,具有取样方便、耗时短、污染小及反应稳定等优点,可用于男性淋球菌尿道炎NG检测与疗效预后评估。     

应用恒温扩增微流控芯片技术快速菌种筛查可疑关节结核

目的探讨恒温扩增微流控芯片(isothermal amplification microfluidic chip,IAMC)技术快速筛查关节结核感染的应用价值。方法应用恒温扩增(isothermal amplification,IA)法和罗氏培养法对19例疑似关节结核感染患者标本行菌群鉴定,应用共焦滤波技术、荧光染料技术将标本的核酸通过恒温扩增法使结果量化,同时将标本核酸结果比对阴性对照、阳性对照的核酸结果以此鉴定结果准确性。结果恒温扩增法检测出13例阳性样品,阳性率为68.42%(13/19);罗氏培养法检测出7例阳性样品,阳性率为36.84%(7/19);对比差异有统计学意义(χ2=5.115,P<0.05)。Kappa值为0.424,一致性好。结论恒温扩增微流控芯片荧光检测核酸技术可快速、准确、简便地检测可疑关节结核中结核分枝杆菌复合群,可作为筛查诊断。     

XpertMTB/RIF技术在肾结核的早期诊断和利福平耐药检测中的价值

目的 评估利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)在肾结核的早期诊断及利福平耐药检测中的价值.方法 选取该院79例(2014年1月—2015年9月)确诊为肾结核患者的尿液标本,分别进行尿沉渣涂片抗酸染色、XpertMTB/RIF检测、罗氏固体培养、传统比例法药敏试验.分析XpertMTB/RIF检测尿中的Mtb及利福平耐药性的敏感度和特异度.结果 以罗氏固体培养为金标准,XpertMTB/RIF检测Mtb的敏感度和特异度为88.7%(47/53)和88.5%(23/26),以传统比例法药敏试验为金标准,XpertMTB/RIF检测利福平耐药的敏感度和特异度为71.4%(5/7)和100.0%(40/40).结论 XpertMTB/RIF技术检测尿液中的Mtb和RIF耐药具有较高的敏感度和特异度,对肾结核早期诊断和利福平耐药检测有较高的应用价值.     

31例新型冠状病毒感染病例咽拭子与痰标本病毒核酸检测的比较

目的 比较新型冠状病毒病例咽拭子标本与痰标本的病毒核酸检测结果。方法 对31例新型冠状病毒确诊病例的咽拭子与痰标本分别进行病毒ORF1ab基因、N基因及人体上皮细胞（ribonucleoprotein,RNP）基因（试剂内标基因）RT-PCR核酸检测与比较。结果 31例病例的咽拭子和痰标本中,人体上皮细胞RNP基因均呈现明显典型的扩增信号曲线;病毒ORF1ab基因、N基因的检测结果：31例患者的咽拭子核酸结果中,28例患者均显示阴性,第9例和第16例患者的咽拭子为单基因阳性,第17例为双基因阳性;同时采集的痰标本结果显示,18例患者均为单基因阳性,13例患者为双基因阳性。痰标本的病毒ORF1ab基因和N基因核酸检测扩增曲线的Ct值小于咽拭子标本的Ct值。结论 在开展新型冠状病毒实验室核酸检测中,痰标本的病毒含量高于咽拭子标本,其检测效果优于咽拭子标本,更能准确体现患者病情。     

辽阳市手足口病患者标本肠道病毒检测结果

目的 通过对辽阳市2016年手足口病的临床诊断病例的咽拭子标本和粪便标本进行肠道病毒核酸检测和病毒分离培养,比较不同病毒分型下两种标本类型阳性率的差异,探究不同类型标本对手足口病实验室诊断的指导意义。方法 收集107例辽阳市2016年手足口病的临床诊断病例的咽拭子和粪便标本,提取样本核酸,用实时定量PCR法检测肠道病毒通用引物、肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型,通过McNemar检验以及Kappa检验对检测结果进行统计学分析。结果 配对采集病例两种类型标本共214份,肠道病毒通用引物、肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型的咽拭子标本核酸检测阳性率分别为48.6%、8.4%、22.4%;粪便标本的核酸检测阳性率分别为59.8%、11.2%、18.7%。PE、EV71病毒的粪便标本的检出率均大于咽拭子标本的检出率,但CV-A16病毒的粪便标本的检出率却小于咽拭子标本的检出率。其他肠道病毒的咽拭子标本和粪便标本的病毒检出率差异有统计学意义（P<0.05）,粪便标本肠道病毒检测阳性率高于咽拭子标本,同时显示较差的一致性（P<0.05）。结论 在手足口病实验室肠道病毒检测中,粪便标本的肠道病毒检测阳性率高于咽拭子标本,今后的手足口病防治工作中为提高标本检测阳性率,若时间紧迫应首先考虑选择采集粪便标本加以检测。     

实时荧光核酸恒温扩增检测技术对痰标本中结核分枝杆菌的诊断价值*

目的 评估实时荧光核酸恒温扩增检测（SAT）技术对痰标本中结核分枝杆菌（MTB）的诊断价值。方法 收集确诊为活动性肺结核（PTB）的115例和无证据显示为活动性PTB的67例总计182例患者的痰液标本,采用集菌涂片法、罗氏培养法、PCR荧光探针法及Xpert MTB/RIF法及SAT法进行检测,分析对比检测结果。结果 SAT法检测PTB患者MTB的检出率为40.00%,与罗氏培养法的检出率（40.87%）比较,差异无统计学意义（P?>0.05）。以罗氏培养法为标准,SAT法敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、约登指数分别为95.74%（95% CI：0.8975,0.10174）,98.53%（95% CI：95.59%,101.46%）,0.9783（95% CI：0.9345,0.1022）,0.9710（95% CI：0.9304,0.1012）和0.94。其中阳性预测值高于Xpert MTB/RIF法,各指标均优于PCR荧光探针法。ROC曲线结果显示SAT法AUC为0.936。结论 SAT法检测MTB敏感性、特异性和准确度较高,操作简单,检测周期短,其检测结果可以作为临床诊断参考。     

核酸恒温扩增-免疫层析技术在布鲁菌病诊断中的应用

目的：探讨核酸恒温扩增-免疫层析检测方法对布鲁菌病（布病）诊断的应用价值,为核酸检测标准化推广应用提供实验室参考依据。方法：分别以全血和血清为样本提取布鲁菌核酸,应用恒温扩增技术进行核酸扩增,以免疫层析检测装置直接判读核酸扩增结果;免疫学检测应用试管凝集试验（SAT）;数据处理应用配对校正χ2检验。结果： 29例就诊者全血核酸扩增阳性率为55.2%,血清核酸扩增阳性率为23.1%,二者比较差异有统计学意义（P＜0.05）;以全血为核酸提取样本,190例不同病程SAT诊断为阳性和阴性的就诊者核酸检测结果与SAT检测结果符合率为57.9%;93例首诊SAT诊断为阳性和阴性的急性早期就诊者核酸
检测结果与SAT检测结果符合率为63.4%。结论：核酸恒温扩增-免疫层析检测方法作为一项实验室辅助诊断和治疗的参考依据,对急性早期的布病患者具有较高的临床应用价值,在鉴别诊断布病患者和非患者方面无参考价值。     

新疆2011-2013年肠道病毒71型VP1区基因特征分析简

目的了解新疆肠道病毒71型（EV71）分离株VP1区基因特征。方法选取2011-2013年新疆部分地州手足口病病例标本,临床标本或其病毒培养物经实时荧光PCR鉴定后,通过RT—PCR法进行VP1区编码基因扩增,并对扩增产物进行序列测定,所得序列用ChromasPro1．7．4,BioEdit7．1．11和MEGA5．1软件进行序列校正、拼接、整理和分析,并与EV71各型及亚型参考序列构建基于VPl序列的系统进化树。结果新疆EV71分离株之间核苷酸和氨基酸序列同源性在92．8％～100．0％和97．9％～100．0％,22株病毒株与安徽阜阳和山东临沂C4a基因参考株最为相近,核苷酸和氨基酸序列序列同源性在93．9％～98．6％和98．6％～99．6％。而与A、B基因型参考株差异较大,核苷酸和氨基酸序列序列同源性在82．1％～84．8％和95．9％～98．3％。直接用临床标本进行核酸提取、扩增和序列测定的阳性率为30．0％,低于用病毒培养物的阳性率（100．0％）。结论2011—2013年新疆EV71分离株均为C4a基因型,与安徽和山东分离的EV71毒株可能有相同的起源。直接用临床标本进行核酸提取、扩增和序列测定可用于肠道病毒的分型鉴定。     

新型冠状病毒肺炎病例不同标本核酸检测结果分析

目的 了解不同类型和疾病进展阶段新型冠状病毒肺炎（coronavirus disease 2019,COVID-19）病例的标本新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测结果及影响因素。方法 对桂林市新型冠状病毒肺炎疑似病例及密切接触者分别采集深咳痰液、咽拭子、粪便及眼结膜拭子,采用双重实时荧光RT-PCR方法进行SARS-CoV-2核酸检测,收集流行病学、临床实验室及辅助诊断等资料,分析提高核酸检测敏感性的因素。结果 共采集537例COVID-19疑似病例及密切接触者标本654份,其中,深咳痰液569份,咽拭子26份,粪便28份,眼结膜拭子31份。SARS-CoV-2核酸阳性32例,核酸阳性检出率6.00％（32/537）;首次核酸阳性的深咳痰液的采样时间与发病时间的间隔天数0~23 d。在2种样本检测比较中,深咳痰液中SARS-CoV-2核酸阳性检出率明显高于咽拭子标本的检出率（P=0.000）。粪便和眼结膜拭子中 SARS-CoV-2核酸阳性分别有19例和5例,它们的采样时间与首次核酸阳性的深咳痰液样本的采样时间比较平均晚7 d。在32例新型冠状病毒肺炎确诊病例中,28例单次采集深咳痰液样本为核酸阳性,其中,于发病第1、2、3、4和5 d及以上分别有6、6、3、4和9例;4例病例需采集2次及以上深咳痰液样本才出现核酸阳性结果。1例病例在采样前有发热及治疗史,作为密切接触者排查隔离观察,分别于发病后第21天（阴性）、第23天（阳性）采集2份深咳痰液标本检测。结论 SARS-CoV-2核酸检测中深咳痰液标本优于咽拭子标本,粪便和眼结膜拭子也可检测到病毒核酸,采样方式、采样时机及治疗史为核酸检测敏感性的影响因素,对疑似病例或密切接触者需隔离观察并多次采样检测,以免漏检。