miR-139在Aβ25-35诱导Neuro-2a细胞损伤中的机制研究

目的研究miR-139在Aβ25-35诱导的Neuro-2a细胞损伤中的作用,探讨其在AD发生发展中的作用及分子机制。方法首先应用Aβ25-35体外构建Neuro-2a细胞损伤模型,采用qRT-PCR和Western blot技术检测不同浓度Aβ25-35对Neuro-2a细胞miR-139和FOXO1 mRNA及蛋白表达的影响。应用荧光素酶报告法测定miR-139的潜在作用靶点,并验证FOXO1作为miR-139直接作用靶点参与Aβ25-35的细胞毒性作用。最后利用细胞转染方法抑制miR-139功能,采用CCK-8法、caspase-3活性法、ELISA法检测miR-139静默后Aβ25-35对Neuro-2a细胞活力、凋亡、caspase-3活性、NF-κB活性及表达水平的影响。结果 Aβ25-35诱导的Neuro-2a细胞中miR-139表达上调(p 0. 05),FOXO1表达下调(P 0. 05)。FOXO1是miR-139的直接作用靶点,过表达或低表达miR-139能在蛋白及mRNA水平降低或升高FOXO1的表达(P 0. 05)。静默miR-139可降低Aβ25-35诱导的Neuro-2a细胞毒性、凋亡作用,miR-139对Aβ25-35诱导的Neuro-2a凋亡作用与NF-κB相关(P 0. 05)。结论 miR-139通过直接调控FOXO1、间接调控NF-κB表达,参与Aβ25-35诱导的Neuro-2a细胞毒性,抑制miR-139功能可能控制AD的发生发展。     

LRG1通过抑制p38/MAPK通路的活化缓解Aβ1-42诱导SH-SY5Y细胞损伤

目的 探讨LRG1在Aβ1-42诱导阿尔茨海默病(AD)细胞模型中的作用和机制。方法 Aβ1-42处理SH-SY5Y细胞体外建立AD细胞模型。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性;实时荧光定量PCR(RTq PCR)检测LRG1转录水平;免疫印迹(Western blot)实验检测LRG1、Bcl-2和Bax蛋白以及p38磷酸化水平;流式细胞术(Flow Cyto Metry)实验检测细胞凋亡率。结果 Aβ1-42处理SH-SY5Y细胞显著降低了细胞活性,提高LRG1蛋白水平。沉默LRG1提高Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞活性下降,抑制细胞凋亡;沉默LRG1逆转了Aβ1-42诱导Bcl-2和Bax蛋白水平的变化;沉默LRG1抑制Aβ1-42诱导p38的磷酸化水平。另外,U-46619(p38特异性激活剂)逆转了LRG1沉默对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。结论 LRG1沉默通过抑制p38/MAPK信号通路的激活缓解Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤。     

Aβ_(20-29)短肽阻断ApoE/Aβ结合并减少Aβ_(1-42)纤维化及其神经毒性的效应作用

目的:探讨β-淀粉样蛋白(Aβ)20-29(Aβ_(20-29))短肽在阻断载脂蛋白E(ApoE)4与Aβ_(1-42)相结合并减少Aβ_(1-42)纤维化及其神经毒性中的效应作用。方法:应用硫磺素-T(Th-T)荧光分析和透射电镜方法,观察Aβ_(20-29)短肽阻断ApoE与Aβ_(1-42)相结合及其防止Aβ_(1-42)纤维化的效应作用;应用培养的PC12细胞,观察Aβ_(20-29)短肽对ApoE4+Aβ_(1-42)神经毒性的效应作用。结果:荧光分析和透射电镜观察显示:Aβ_(20-29)短肽不能形成纤维性Aβ,ApoE4对Aβ_(1-42)纤维化具有显著促进作用,Aβ_(20-29)短肽能够显著减少ApoE4对Aβ_(1-42)纤维化的促进作用,且呈剂量依赖关系。应用培养的PC12细胞及MTT法测定细胞活性,表明Aβ_(20-29)短肽对PC12细胞无神经毒性作用,其能够显著减少ApoE4+Aβ_(1-42)的神经毒性作用。结论:Aβ_(20-29)短肽在体外能够有效抑制ApoE4与Aβ_(1-42)相结合,并显著减少Aβ_(1-42)纤维化及其神经毒性作用,提示Aβ_(20-29)短肽有可能成...     

青蒿素通过Nrf2/HO-1通路改善Aβ_(1-42)对SH-SY5Y细胞的细胞毒性作用

目的研究青蒿素(Artemisinin)在β淀粉样蛋白1-42(amyloid-β1-42,Aβ1-42)诱导的SH-SY5Y细胞毒性作用中的保护性作用及其可能机制。方法 SH-SY5Y细胞分为control组、Aβ1-42组、control+Aβ1-42组和Artemisinin+Aβ1-42组。利用细胞增殖实验检测细胞增殖情况,乳酸脱氢酶细胞毒性检测实验检测细胞的受损情况,免疫荧光检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的表达水平,Western blotting检测Nrf2和HO-1蛋白的表达。结果与control组相比,Artemisinin能够改善Aβ1-42对SH-SY5Y细胞的损伤以及增殖活力的抑制。除此之外,Artemisinin还能够抑制Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞内ROS的表达,上调Nrf2和HO-1蛋白的表达。结论 Artemisinin能够通过Nrf2/HO-1通路改善Aβ1-42诱导的氧化应激对SH-SY5Y细胞的毒性作用。     

LINC00612靶向结合Bcl-2抑制Aβ1-42孵育的神经元凋亡

目的探讨LINC00612对β-淀粉样蛋白(amyloid protein β,Aβ) 1-42孵育的SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法利用Aβ1-42孵育的SH-SY5Y细胞建立阿尔茨海默病神经元损伤模型。应用qRT-PCR实验检测Aβ1-42孵育的SH-SY5Y细胞中LINC00612的表达。将LINC00612过表达质粒转染至Aβ1-42孵育的SH-SY5Y细胞,Western blot实验检测Bcl-2的表达,Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡。RNA-pulldown和RIP实验检测LINC00612与Bcl-2的结合作用。结果 LINC00612在Aβ1-42孵育的SH-SY5Y细胞中低表达。过表达LINC00612显著增加Bcl-2表达量,降低细胞凋亡。RNA-pulldown和RIP实验结果显示LINC00612能够与直接Bcl-2结合。结论过表达LINC00612能够上调Bcl-2表达量,抑制Aβ1-42孵育的SH-SY5Y细胞凋亡。     

γ-Adducin减轻Aβ1-42诱导的神经元突起损伤

目的 探讨γ-Adducin蛋白是否可减轻Aβ_1-42纤维诱导的神经元突起损伤。方法 实验一:培养原代神经元,用10 μmol/L Aβ_1-42纤维处理神经元24 h,采用神经元特异性标记物MAP2检测神经元突起损伤,用TUNEL染色检测神经元凋亡; 实验二:分别用对照病毒和表达γ-Adducin的腺相关病毒感染神经元,蛋白表达5 d后再分别加入Aβ_1-42纤维处理,用免疫荧光染色法观察γ-Adducin蛋白过表达对Aβ_1-42纤维引起的神经元突起损伤的影响,用Dil染色检测神经元树突棘密度的变化。结果 Aβ_1-42纤维对神经元的突起具有损伤作用,并且引起神经元凋亡; 过表达γ-Adducin蛋白对Aβ_1-42纤维引起的神经元突起和树突棘损伤均有保护作用。结论 γ-Adducin蛋白可减轻Aβ_1-42纤维导致的神经元突起损伤,它可能是1个新的阿尔茨海默病治疗靶点。     

ApoE抗体阻断ApoE／Aβ1-42结合并减少Aβ1—42聚集、纤维化作用的研究

目的 探讨载脂蛋白E(ApoE)抗体阻断ApoE/β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)结合并减少Aβ1-42聚集、纤维化的作用.方法 应用硫磺素(Th-T)荧光分析、透射电镜和扫描电镜方法,观察ApoE抗体阻断ApoE/Aβ1-42结合及其防止Aβ1-42聚集、纤维化的作用.结果 ApoE对Aβ1-42聚集、纤维化具有显著促进作用,ApoE抗体可显著降低这种作用且呈剂量依赖关系.结论 ApoE抗体在体外可有效抑制ApoE/Aβ1-42结合,并显著减少Aβ1-42聚集、纤维化,提示ApoE抗体可能成为有效防治阿尔茨海默病的新药物.     

芍药苷对Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞炎性反应和趋化性的影响

目的探讨芍药苷(PF)对β-淀粉样蛋白(Aβ)_(1-42)诱导的小胶质细胞炎性反应和趋化性的影响。方法原代培养大鼠小胶质细胞,分别用0、5、25、50μmol/LPF预处理细胞后,采用CCK-8法和LDH法检测细胞毒性。将培养的细胞分为空白对照组(正常培养基)、阳性对照组(Aβ_(1-42)处理细胞)和实验组(PF+Aβ_(1-42)处理细胞)。采用ELISA法检测各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和趋化因子配体1(CXCL1)、趋化因子配体2(CCL2)的表达水平。采用Transwell小室进行小胶质细胞体外趋化实验,观察各组细胞趋化迁移情况。结论培养大鼠原代小胶质细胞纯度达90%以上,CCK-8法和LDH法测定均显示PF对小胶质细胞无明显细胞毒作用(均P0.05)。PF可抑制Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞分泌促炎性介质TNF-α、IL-1β、IL-6和趋化因子CXCL1、CCL2(均P0.01)。同时,PF可抑制小胶质细胞向Aβ_(1-42)的趋化(均P0.05)。结论 PF可抑制Aβ_(1-42)诱导的啮齿动物小胶质细胞生成促炎性介质和趋化因子,并抑制小胶质细胞向Aβ_(1-42)趋化迁移,提示PF可能为阿尔茨海默病的治疗提供新的契机。     

S14G-humanin对β-淀粉样蛋白纤维化及其细胞毒性的影响

目的 探讨S14G-humanin(HNG)对β-淀粉样蛋白(Aβ)纤维化及其细胞毒性的影响.方法 于体外将Aβ1-42和不同浓度HNG共孵育,并设空白对照,应用硫黄素-T(Th-T)荧光法和透射电镜方法,观察HNG对Aβ1-42纤维化的作用;将Aβ1-42和不同浓度HNG共孵育后加入培养的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞(PC12细胞),应用MTT法测定PC12细胞活性,观察不同浓度HNG对Aβ-42细胞毒性的拮抗作用.结果 (1)不同浓度HNG(100、200、400 μmol/L)+Aβ1-42(100μmol/L)组Th-T荧光强度(241.86±8.41,188.27±4.47,112.36±5.27)均较Aβl-42组(514.85±14.52)显著降低(P<0.01),且各组Th-T荧光强度随HNG浓度增加而降低,各组间比较有统计学差异(P<0.01).(2)透射电镜观察表明不同浓度HNG+Aβ1-42组纤维性Aβ均较Aβ1-42组显著减少.(3)不同浓度HNG(10、20、40 μmol/L)+Aβ1-42(10μmol/L)组PC12细胞活性C(67.83±3.57)%、(79.26±3.13)%、(89.67±3.25)%]均较Aβ1-42组[(57.52±5.41)%]显著增加(P<0.01),且各组细胞活性随HNG浓度增加而增加,各组间比较有统计学差异(P<0.01).结论 HNG在体外能够有效减少纤维性Aβ1-42形成并可抑制其细胞毒性作用,提示HNG有可能成为有效防治阿尔茨海默病的新药物.     

MALAT1对Aβ1-42诱导PC12细胞损伤及PI3K/Akt通路的影响研究

目的探讨肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对β-淀粉样蛋白1-42片段(Aβ1-42)诱导肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的影响。方法体外培养PC12细胞,并随机分为正常对照组(正常生长PC细胞)、模型组(Aβ1-42诱导PC细胞损伤)、sh-MALAT1组(Aβ1-42组基础上转染MALAT1干扰序列)、sh-对照组(Aβ1-42组基础上转染MALAT1对照序列)。采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测各组PC12细胞MALAT1表达水平,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测PC12细胞增殖,采用流式细胞仪及AnnexinV-FITC/PI法体外检测PC12细胞凋亡,采用免疫印迹(WB)检测PC12细胞PI3K/Akt通路相关p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白及其下游凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3/caspase3、B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组、sh-对照组组PC12细胞存活率、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白水平低(均P0.05),MALAT1表达水平、PC12细胞凋亡率、Bax、Cleaved-caspase3/caspase3蛋白表达水平高(均P0.05);与模型组、sh-对照组比较,sh-MALAT1组MALAT1表达水平、细胞存活率及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白水平高(均P0.05),Bax、Cleaved-caspase3/caspase3蛋白表达水平低(均P0.05)。结论下调MALAT1表达可能通过激活PI3K/Akt通路,上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax、Cleaved-caspase3/caspase3蛋白表达抑制Aβ1-42诱导的PC12损伤,发挥保护作用。     

pIRES2-EGFP-Aβ42重组质粒的构建及其在N2a细胞中的表达

目的构建重组质粒pIRES2-EGFP-Aβ42,转染小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞,建立稳定表达Aβ42的Neuro-2a细胞系,为体外研究阿尔茨海默病提供新的途径。方法将质粒pGEMT-Aβ42上的Aβ42基因酶切后,与真核表达质粒pIRES2-EGFP连接,构建重组质粒pIRES2-EGFP-Aβ42。酶切鉴定正确后,采用脂质体介导法转染Neuro-2a细胞,800mg/L G418筛选4w,后续培养G418浓度维持在200mg/L。扩增细胞以低密度培养,HE染色观察细胞形态,免疫组织化学染色法检测Aβ42的表达。结果酶切鉴定显示重组质粒pIRES2-EGFP-Aβ42构建正确;pIRES2-EGFP-Aβ42转染Neuro-2a细胞,经G418筛选后扩增的细胞均表达绿色荧光蛋白,呈现绿色荧光;免疫组织化学染色显示经G418筛选后的细胞表达Aβ42;HE染色结果显示低密度培养条件下,细胞内表达的Aβ42未引起对细胞形态和增殖能力的明显改变。结论成功构建重组质粒pIRES2-EGFP-Aβ42,获得稳定表达Aβ42的细胞系。     

睾酮对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡保护机制的研究

目的 探讨睾酮对Aβ25- 35诱导PC12细胞凋亡的保护作用机制.方法 MTT法观察睾酮对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡后细胞活性的影响;Hochest—PI染色观察睾酮对Aβ25- 35诱导PC12细胞凋亡形态学的影响;Western免疫印迹法和Real — time PCR法观察睾酮对Aβ25- 35诱导PC12细胞凋亡相关调控因子bcl-XL、Bax蛋白及mRNA表达的影响.结果 与对照组相比,睾酮预保护后可以明显抑制Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡后细胞活性及细胞形态学变化,并上调bcl-XL蛋白及mRNA、下调Bax蛋白及mRNA的表达,雄激素受体拮抗剂氟他胺干预后可以明显抑制睾酮的保护效应.结论 睾酮保护Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡活动,其潜在作用机制可能是通过AR介导的基因信号传导通路在蛋白表达和基因转录水平上抑制Bax、上调bcl-XL的表达实现.     

蛋白激酶D1对Aβ诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的调节作用

目的探究蛋白激酶D1(PKD1)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的阿尔茨海默病(AD细胞模型的调节作用和分子机制。方法分别以0、10、20、30、40、50μmol·L~(-1)的Aβ25-35处理SHSY5Y细胞24 h,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT检测细胞活力,蛋白印迹法(Western blotting)检测PKD1蛋白水平变化。在AD细胞模型中分别过表达和干扰PKD1,流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧(ROS),Western blotting检测凋亡相关蛋白(B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和B细胞淋巴瘤/白血病-xl(Bcl-x L))、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(P-JNK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK 1/2)、磷酸化JAK激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号传导及转录激活蛋白3(p-STAT3)及其下游靶基因c-Myc的蛋白水平变化。过表达PKD1同时添加10μmol·L~(-1) FLLL32(JAK2/STAT3通路抑制剂)处理AD细胞模型,流式细胞术检测细胞凋亡和ROS,Western blotting检测Bcl-2、Bcl-x L、P-JNK和P-ERK 1/2蛋白水平变化。结果 30μmol·L~(-1) Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞,细胞存活率和凋亡率分别约为70%和20%(P0.05),为构建AD模型的最适浓度。过表达PKD1抑制Aβ25-35诱导的细胞凋亡增加、ROS升高、Bcl-2和Bcl-x L蛋白表达下调、P-JNK和P-ERK1/2蛋白表达上调;干扰PKD1,加剧Aβ25-35对细胞的毒性作用。过表达PKD1,P-JAK2、P-STAT3和C-Myc蛋白表达上调;干扰PKD1,p-JAK2、p-STAT3和c-Myc蛋白表达下调。FLLL32处理抑制PKD1对AD细胞模型的作用。结论 Aβ诱导SH-SY5Y神经细胞中P-JAK2、P-STAT3表达下调和P-JNK和P-ERK 1/2表达上调。过表达PKD1可通过上调p-JAK2、p-STAT3的表达抑制P-JNK和P-ERK 1/2表达,缓解Aβ对细胞的毒性作用。     

二氮嗪抑制Aβ1～42对U251细胞存活率、线粒体膜电位和细胞内活性氧水平的影响

目的探讨线粒体膜上ATP敏感的钾离子通道开放药物二氮嗪防治Aβ1～42细胞毒性作用及其分子学机制。方法采用不同浓度Aβ1～42和二氮嗪同时处理神经胶质细胞瘤U251细胞24h,以四唑盐比色法测定细胞存活率;四氯四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物(JC-1)检测线粒体膜电位;2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧水平;膜联蛋白荧光素荧光染色检测U251细胞凋亡。结果(1)二氮嗪组神经胶质细胞瘤U251细胞在不同浓度Aβ1～42作用下,细胞存活率明显高于单纯Aβ1～42组(P<0.05)。(2)半定量分析显示,单纯Aβ1～42组(5μmol/L)U251细胞线粒体膜红/绿荧光强度比值(590/527nm)明显低于正常对照组(P<0.01);而二氮嗪组U251细胞红/绿荧光强度比值(590/527nm)明显高于单纯Aβ1～42组(P<0.01)。(3)流式细胞术检测显示,单纯Aβ1～42组(5μmol/L)U251细胞内的活性氧水平明显增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);经二氮嗪(1mmol/L)预处理后U251细胞内的活性氧水平下降,与单纯Aβ1～42组相比差异有统计学意义(P<0.05)。(4)流式细胞荧光强度分析显示,无论Aβ1～42或Aβ42～1均不能引起U251细胞发生早期或晚期凋亡或坏死。结论Aβ1～42的细胞毒性作用明显早于其致细胞凋亡作用。提示尽早应用二氮嗪保护细胞线粒体功能状态,可预防长时间暴露于Aβ1～42导致细胞凋亡所引起的神经细胞数量的减少。     

脑微出血患者血清Aβ1-40 Aβ1-42的检测及意义

目的 探讨对脑微出血患者进行血清Aβ1-40、Aβ1-42检测的意义.方法 选择2015-04—2016-04我院收治的45例急性腔隙性梗死患者为观察组,并选取同期在我院接受治疗的无急性腔隙性梗死的43例患者为对照组.分别检测2组患者的血清Aβ1-40和Aβ1-42水平,并进行比较.结果 观察组患者血清Aβ1-40水平明显高于对照组,而Aβ1-42水平则明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 血清Aβ1-40、Aβ1-42的检测是诊断脑微出血的重要方法,Aβ1-40、Aβ1-42水平能够准确反映患者脑微出血情况.     

Aβ1-40对PC12细胞突触素表达的影响

目的探讨β-淀粉样蛋白(Aβ1-40)诱导PC12细胞凋亡,对突触素的表达影响。方法星形胶质细胞诱导PC12细胞分化为神经元样细胞。PC12细胞随机分为7组:Aβ1-40(0h)组～Aβ1-40(24h)组和对照组。应用MTT法检测细胞生存率,吖啶橙染色、流式细胞仪观察PC12细胞凋亡情况,应用免疫荧光技术检测突触素的表达变化。结果 Aβ1-40作用PC12细胞6h时,细胞生存率明显下降,细胞出现凋亡特征改变,细胞凋亡率最高,与对照组、其他各时间点比较,差异有统计学意义(P<0.05);Aβ1-40作用PC12细胞4h时,突触素明显减少,与对照组、其他各时间点相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在Aβ1-40诱导大量PC12细胞明显出现凋亡特征之前,Aβ已经引起PC12细胞突触素明显减低,β-淀粉样蛋白(Aβ)可能引起PC12细胞早期神经突触损伤。     

RNAi沉默CAPN1基因对Aβ 25-35诱导的原代神经细胞的神经毒性及凋亡的影响

目的探讨CAPN1 RNAi对Aβ25-35诱导的原代神经细胞的神经毒性及凋亡的影响。方法利用Aβ25-35诱导原代胎鼠皮质神经元毒性损伤,观察CAPN1 RNAi对神经元细胞活力、凋亡的影响。实验分为4组:对照组(NC)、NC+Aβ、CAPN1 shRNA+Aβ、CAPN1 shRNA+Aβ+P25。CCK-8法检测神经元细胞活力的变化情况;Annexin V-PI方法进行细胞凋亡检测;Real-Time PCR检测转染CAPN1 RNAi后CAPN1 mRNA的表达水平;Western blotting检测CAPN1、CDK5、GSK3β、p-tau/tau蛋白表达的变化。结果 CCK8检测结果显示,与对照组相比,NC+Aβ组细胞活力明显下降,转染CAPN1 shRNA后细胞活力有明显改善(P0.05);与CAPN1 shRNA+Aβ组相比,CAPN1 shRNA+Aβ+P25组细胞活力无显著性差异(P0.05)。Annexin V-PI凋亡实验结果表明:与NC+Aβ组相比,转染CAPN1 shRNA后细胞早期凋亡比例显著降低(P0.01)。RT-PCR检测结果表明:与NC+Aβ组相比,CAPN1 shRNA+Aβ组CAPN1 mRNA的表达显著得到抑制。Western blot发现NC+Aβ组中CAPN1、CDK5、GSK3β、p-tau蛋白表达水平均显著升高,而转染CAPN1 shRNA后均显著下调(P0.01)。结论 CAPN1RNAi可以显著改善Aβ25-35诱导的原代神经细胞的神经毒性及凋亡。     

嘌呤霉素敏感的氨肽酶对β-淀粉样蛋白诱导的细胞凋亡的影响

目的 探讨嘌呤霉素敏感的氨肽酶(PSA)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的SH-SY5Y细胞、PC12细胞凋亡的影响. 方法 采用MTT法检测Aβ25-35对SH-SY5Y、PC12细胞生长的影响;Hoechst染色检测Aβ25-35对SH-SY5Y、PC12细胞核形态的影响;进一步采用脂质体转染法在SH-SY5Y细胞中瞬时转染PSA-siRNA,在PC12细胞中瞬时转染PSA重组质粒,加入Aβ25-35作用24h后收集细胞,进行流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting检测PSA、caspase-3蛋白的表达变化;酶标仪检测caspase-3活性. 结果 Aβ25-35抑制SH-SY5Y、PC12细胞增殖,细胞核发生凋亡的形态学改变,流式检测细胞凋亡率增加;在SH-SY5Y细胞中,沉默PSA表达能使Aβ25-35诱导的细胞凋亡率升高,促进caspase-3酶原激活,caspase-3活性升高.反之,PC12细胞中过表达的PSA能使Aβ25-35诱导的细胞凋亡率下降,抑制caspase-3酶原激活,caspase-3活性降低. 结论 Aβ25-35能抑制神经细胞生长,引起神经细胞凋亡;PSA能抑制Aβ25-35诱导的神经细胞凋亡,对神经元具有保护作用,其机制可能与抑制caspase-3通路的激活有关.     

亲环素A对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及机制研究

目的 探讨亲环素A(CyPA)对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡影响及可能的作用机制.方法 将PC12细胞分为正常对照组(0 μmol/L Aβ25-35)、Aβ25-35诱导组(10 μmol/L Aβ25-35)和药物保护组(0.1、1、10、100 nmol/L CyPA+10 μmoi/Lβ25-35),药物保护组采用相应浓度CyPA预处理PC12细胞30 min,再加入Aβ25-35继续培养.MTT法分析细胞存活率,Hoechst33258染色法检测细胞凋亡,RT-PCR检测Bcl-2和Bax mRNA表达,Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 1、10和100 nmol/L CyPA可提高细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的细胞凋亡,增加Bcl-2mRNA表达以及Bcl-2蛋白表达,降低Bax mRNA表达以及Bax蛋白表达,与Aβ25-35诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05),且CyPA剂量越高效果越明显.结论 CyPA可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,减少细胞凋亡,其机制与上调抗凋亡基因Bcl-2表达和下调凋亡基因Bax表达有关.

Abstract：

Objective To explore the effect of cyclophilin A (CyPA) on apoptosis of PC 12 cells induced by Aβ25-35 and its potential mechanism. Methods PC 12 cells were divided into normal control group (0 μmol/L Aβ25-35), Aβ25-35 inducement group (10 μmol/L Aβ25-35) and drug protection groups (0.1, 1,10 and 100 nmol/L CyPA+10 μmol/L Aβ25-35). Cells in the drug protection groups were pretreated by CyPA of different concentrations for 30 min, and then co-cultured with Aβ25-35 We evaluated the survival rate of PC12 cells with MTT assay, analyzed the apoptosis of PC12 cells with Hoechst33258 staining, and detected the mRNA expressions of Bcl-2 and Bax with PT-PCR and the protein levels of Bcl-2 and Bax with Western blotting. Results Cells pretreated wth CyPA of 1, 10 and 100 nmol/L enjoyed an obvious elevation of survival rate of PC 12 cells, a significant reduction of apoptosis induced by Aβ25-35,an obvious increase of mRNA expression of Bcl-2 and protein level of Bcl-2, and a statistical decrease of mRNA expression of Bax and protein level of Bax as compared with those cells of the Aβ25-35 inducement group (P<0.05);and these effects were dose-dependent. Conclusion CyPA could resist the toxic role of Aβ25-35 on PC 12 cells and reduce the apoptosis in a dose-dependent manner by up-regulation of anti-apoptosis gene Bcl-2 and down-regulation of apoptosis gene Bax.     

FZS中药合剂对Aβ42寡聚体致PC12细胞损伤的保护作用研究

目的探讨FZS中药合剂对Aβ42寡聚体致PC12细胞损伤的保护作用,及不同浓度Aβ42寡聚体的PC12细胞毒性作用比较研究。方法分别用不同浓度Aβ42寡聚体作用于PC12细胞,加FZS中药合剂进行干预并与正常细胞进行对照研究。应用噻唑蓝（MTT）、LDH检测细胞活性,同时采用光镜、原位末端标记（TUNEL）方法检测细胞凋亡。原子力显微镜（AFM）鉴定并观察Aβ42寡聚体、Aβ42及细胞表面的形态变化。结果MTT在Aβ42寡聚体组表达明显降低（P＜0．05）；LDH在Aβ42寡聚体组表达明显增高（P＜0．05）；光镜观察及TUNEL染色Aβ42寡聚体组均发现典型的凋亡PC12细胞,凋亡率较Aβ42组差异有显著意义（P＜0．05）。FZS中药合剂组细胞凋亡串均明显降低,差异有显著意义（P＜0．05）。结论Aβ42寡聚体在神经细胞凋亡过程中发挥了重要的作用,其聚集变化可通过AFM进行观察。FZS中药合剂有确切的神经细胞保护作用,其作用与药物浓度相关。