Mcl-1在阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡中的作用

目的研究阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡过程中Mcl-1含量的变化以及Mcl-1对骨肉瘤细胞凋亡的调控作用。方法采用半定量PCR法检测Mcl-1、Bcl-2、β-actin的mRNA水平变化;Western blot法检测Mcl-1、Bcl-2、β-actin蛋白变化;转染pcDNA3-Mcl-1质粒使细胞高表达Mcl-1、Bcl-2;采用Caspase3/7活性试剂盒检测Caspase3/7活性。结果骨肉瘤细胞在阿霉素作用下,Mcl-1和Bcl-2的mRNA水平无变化,而蛋白水平下调;过表达Mcl-1可以明显抑制凋亡标志物PARP的剪切,而Bcl-2不具有抑制效应;同样,过表达Mcl-1可以抑制阿霉素作用下Caspase3/7的活化。结论阿霉素作用下,Mcl-1蛋白水平下降是骨肉瘤细胞发生凋亡的重要原因,并且该凋亡过程与Caspase的活化有关。     

髓锌指基因1对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的研究葡萄糖-6- 磷酸脱氢酶（G6PD）和髓锌指基因1（MZF -1）在骨肉瘤中的作用及其可能的作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测MZF -1 和G6PD在骨肉瘤细胞中的表达;MTT 法检测过表达MZF -1 对骨肉瘤细胞增殖的影响;流式细胞仪检测过表达MZF -1 对骨肉瘤细胞凋亡及细胞周期的影响;荧光素酶报告基因分析法验证MZF-1 与G6PD启动子区的相互作用关系。结果在骨肉瘤细胞中, MZF -1 的表达下降,G6PD表达上升。过表达MZF -1可抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,并且将细胞周期阻滞于G0/G1期。荧光素酶报告基因分析结果表明, MZF -1可靶向结合到G6PD 的启动子区域并负向调控G6PD 的表达。结论MZF -1 可通过负向调节G6PD的表达,在骨肉瘤的发生、发展过程中发挥抑癌的作用,为骨肉瘤治疗提供新的思路。     

Effect of heme oxygenase-1 on protection of myocardial cells by resveratrol against doxorubicin-induced apoptosis

目的 探讨血红素加氧酶1(HO-1)在白藜芦醇(RES)抑制阿霉素(DOX)致心肌细胞凋亡中的作用.方法 60 只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、DOX组、DOX+ RES组和DOX+ RES+HO-1抑制剂锡原卟啉(ZnPP)组,每组15只;除对照组外,均采用经腹腔注射DOX(总剂量12 mg/kg)建立心肌损伤模型.苏木精-伊红(HE)染色后光学显微镜下观察心肌组织病理学改变.采用化学比色法测定血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性;分光光度法检测心肌组织HO-1和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的活性;Western blotting法检测心肌组织HO-1蛋白表达;免疫组织化学法检测心肌组织凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡率.结果 与对照组比较,DOX组小鼠的CK、LDH和Caspase-3活性、Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡率均显著升高(P＜0.01),而HO-1活性及HO-1、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P＜0.01).与DOX组比较,DOX +RES组小鼠的CK、LDH和Caspase-3活性、Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡率均显著降低(P＜0.01),而HO-1活性及HO-1、Bcl-2蛋白表达均显著升高(P＜0.01);与DOX+ RES组比较,DOX+ RES+ZnPP组小鼠的CK、LDH和Caspase-3活性、Bax蛋白表达和心肌细胞凋亡率均显著升高(P＜0.01),而HO-1活性及HO-1、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P＜0.05).结论 HO-1参与RES对DOX致心肌细胞凋亡的抑制作用.     

三尖杉酯碱通过下调Mcl-1蛋白诱导NB4细胞凋亡

［摘要］目的：考察三尖杉酯碱（HT）对人急性早幼粒白血病（APL）细胞株NB4细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用,并探讨其杀伤白血病细胞的作用机制。方法：采用台盼兰染色法,细胞计数,考察HT对NB4细胞的生长抑制作用和细胞毒性作用;采用AO-EB荧光染色法和细胞形态学观察,考察HT对NB4细胞的凋亡诱导作用;采用PI染色的流式细胞术,考察HT对NB4细胞的凋亡诱导作用;采用Western Blotting技术,考察HT对NB4细胞凋亡相关蛋白的影响;采用siRNA干扰技术,沉默目的蛋白证明推论;提取APL患者血液样本,验证HT的凋亡诱导作用及作用机制。结果：HT能够呈剂量依赖和时间依赖地抑制NB4细胞生长并杀伤NB4细胞,HT处理72h后GI50为（32.0±2.5） nmol/L;HT能够呈现剂量依赖和时间依赖的诱导NB4细胞凋亡,HT处理6h后其诱导凋亡百分率为66%;HT诱导NB4细胞凋亡,引起PARP蛋白裂解,并不下调Bcl-2,不影响Bax和Bak的表达,但显著下调Mcl-1蛋白水平;siRNA沉默Mcl-1的蛋白表达可以显著提高HT对NB4细胞的凋亡诱导作用;HT诱导APL患者白血病样本细胞凋亡,并下调Mcl-1蛋白。结论：HT通过抑制细胞生长和诱导细胞凋亡杀伤NB4细胞,HT可能通过下调Mcl-1蛋白发挥诱导NB4细胞凋亡的抗白血病作用。     

细胞自噬在多柔比星诱导淋巴瘤细胞凋亡中的作用

目的 研究细胞自噬在阿霉素诱导Raji细胞发生细胞凋亡过程中所起的作用。 方法 采用Western Blot法观察阿霉素杀伤Raji细胞过程中自噬相关蛋白的表达,并用MDC染色法观察Raji细胞内的自噬体和自噬溶酶体的形成情况;并在给予阿霉素的同时使用PI3K通路抑制剂3-MA和自噬溶酶体抑制剂NH4Cl对细胞自噬进行抑制后利用MTT和流式细胞术测定Raji细胞的细胞活力与凋亡。 结果 阿霉素能诱导Raji细胞发生细胞自噬,并且通过抑制自噬能显著地增强阿霉素诱导的Raji细胞的细胞凋亡（p<0.05, p<0.01）从而增加阿霉素的疗效。 结论 在阿霉素杀伤Raji细胞的过程中,阿霉素诱导的细胞自噬能减弱阿霉素诱导的细胞凋亡作用;并且自噬抑制剂3-MA和NH4Cl抑制细胞自噬能增强阿霉素诱导的Raji细胞的细胞作用,增强对Raji细胞的杀伤,并提示抑制自噬可能能增强阿霉素对淋巴瘤的杀伤。     

RhoGDI1通过抑制骨肉瘤细胞凋亡促进其顺铂耐药性的研究

目的 探讨抑制Rho蛋白鸟苷酸解离抑制因子-1(RhoGDI1)的表达对骨肉瘤顺铂耐药性的影响.方法 在骨肉瘤细胞中通过siRNA抑制RhoGDI1的表达(si-RhoGDI1-1、si-RhoGDI1-2组),CCK-8实验检测其对骨肉瘤细胞增殖和顺铂耐药性的影响,划痕实验和体外Transwell检测其对骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力的影响,流式细胞术(FACS)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RhoGDI1对骨肉瘤细胞凋亡的影响.结果 与si-Control组(转染无意序列)比较,si-RhoGDI1-1、si-RhoGDI1-2组骨肉瘤细胞的增殖速度明细降低(P<0.01),对顺铂的耐受性明显降低(P<0.01),迁移到下室的细胞数显著减少;划痕实验和FACS结果显示,与si-Control组比较,si-RhoGDI1-1、si-RhoGDI1-2组细胞的修复能力明显减弱(P<0.05、P<0.01),细胞凋亡率(P<0.01)和凋亡诱导因子Bax的表达水平明显升高(P<0.01).结论 RhoGDI1通过抑制骨肉瘤细胞凋亡促进骨肉瘤细胞顺铂耐受性.     

促红细胞生成素对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的预防作用研究

目的:研究促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)预防阿霉素(Doxorubicin,DOX)诱导的心肌细胞凋亡的作用.方法:原代培养乳鼠心肌细胞,随机分为空白对照组、模型对照组及不同浓度(6.25、25、100 IU/ml)EPO预处理组,各组预处理24 h后加人5 μg/ml的DOX.24 h后采用流式细胞术检测细胞凋亡率,甲基噻唑基四唑(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果:与空白对照组相比模型对照组细胞活力明显减低,凋亡率显著增高.不同浓度EPO预处理的心肌细胞活力较模型对照组显著增高,细胞凋亡率显著降低,并且凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达增高,凋亡蛋白Bax的表达降低.结论:EPO对DOX诱导的心肌细胞的损伤具有预防作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax有关.     

高表达Mcl-1对衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡的影响

目的 探讨Bcl-2蛋白家族中Mcl-1在衣霉素诱导胃腺癌细胞内质网应激性凋亡中的作用.方法 采用流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Mcl-1、Bcl-XL在衣霉素诱导胃腺癌细胞内质网应激状态下的表达;脂质体LipofectamineTM2000转染pcDNA3.0/Mcl-1质粒;Western blot分别检测转染前后Mcl-1蛋白的表达水平变化.结果 衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,但两株细胞对衣霉素诱导的凋亡都不敏感,其中SGC-7901较BGC-823对衣霉素的耐受表现更明显.由于衣霉素诱导SGC-7901和BGC-823的凋亡与线粒体凋亡途径有关,检测Bcl-2蛋白家族Mcl-1在SGC-7901中有明显上调.通过转染质粒高表达Mcl-1蛋白,衣霉素诱导的凋亡有明显下降.结论 Mcl-1在衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡中发挥重要的抑制作用.     

帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响

目的：研究帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法： Western 印迹检测骨肉瘤细胞株(MG-63,Saos-2和U2OS)及正常人成骨细胞株hFOB1.19中DJ-1和第10号染色体上缺失的 磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome 10,PTEN)基因的表达。DJ-1 siRNA处 理人骨肉瘤细胞后,采用Western印迹检测DJ-1的蛋白表达水平;细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细 胞存活率;膜联蛋白V(annexin V)-异硫氰酸荧光素(fl uorescein isothiocyanate,FITC)/碘化吡啶(propidium iodide,PI)双染 检测细胞凋亡;Transwell侵袭和迁移实验检测细胞侵袭和迁移水平。结果：与hFOB1.19细胞比较,骨肉瘤细胞DJ-1蛋 白表达水平显著升高(均P<0.05),其中U2OS细胞升高最为显著(P<0.01)。DJ-1 siRNA可显著降低U2OS细胞中DJ-1蛋白 表达水平、降低细胞存活率、促进细胞凋亡、抑制细胞侵袭和迁移水平,以及增加PTEN蛋白表达水平(均P<0.05)。 另外,与hFOB1.19细胞比较,PTEN在骨肉瘤细胞中的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论：DJ-1可抑制人骨肉瘤 细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭和迁移水平,其机制可能与增加PTEN蛋白的表达水平有关。     

氯喹通过miR-26b调控Mcl-1诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的探讨氯喹对人肝癌HepG2细胞凋亡的作用及其可能机制。方法选择浓度10、20、40、80、160 μmol/L的氯喹处理细 胞,MTT法检测氯喹对HepG2细胞的增殖抑制作用。试剂盒检测胞内ATP水平,PI单染检测细胞凋亡情况,此外,使用PCR检 测miR-26b水平,Western blot检测Mcl-1蛋白的表达。结果氯喹在10~160 μmol/L浓度范围内对HepG2细胞具有显著的增殖 抑制作用,在80 μmol/L氯喹的作用下24、48、72 h的存活率分别为（71.59±0.2）%、（45.40±0.5）%、（26.34±1.4）%,随浓度增加抑 制率也逐渐增加。同时,随着氯喹浓度的增加,ATP水平相应降低。氯喹在10~160 μmol/L浓度范围内,PI单染检测结果显示早 期凋亡率逐渐增加,转染miR-26b抑制剂可降低氯喹诱导的凋亡率。PCR检测结果表明,给予80 μmol/L氯喹作用后,miR-26b 的表达明显升高,Western blot检测Mcl-1蛋白的表达水平降低,转染miR-26b的抑制剂后表达升高。结论氯喹能诱导肝癌细 胞HepG2凋亡,且呈浓度依赖性,其机制可能是通过miR-26b靶向调控Mcl-1的表达实现的。     

FASTKD4在骨肉瘤组织中表达及对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨FASTKD4在骨肉瘤组织中表达及其对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 通过免疫组化和qPCR的方法检测FASTKD4在骨肉瘤及癌旁组织中的表达情况,同时还通过qPCR检测FASTKD4在不同骨肉瘤细胞中的表达情况,根据结果选择Saos-2细胞作为研究对象,细胞转染FASTKD4小干扰RNA(shFASTKD...     

负向调控p21对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

探讨AU 结合因子1（AUF1）调控p21对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 采用qRT-PCR和Western blot分别检测AUF1在骨肉瘤组织mRNA和蛋白表达水平。在骨肉瘤U2OS和HOS细胞中分别转染sh-NC和sh-AUF1后,CCK8检测细胞增殖情况;qRT-PCR检测增殖相关分子PCNA的表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关分子Cleaved-caspase-3的表达水平。RNA结合蛋白免疫沉淀实验和RNA半衰期实验检测AUF1调控p21的机制。结果 AUF1 mRNA和蛋白的表达水平在骨肉瘤组织中明显高于癌旁正常组织（P＜0.05）,AUF1 mRNA的表达水平在骨肉瘤伴转移的患者中明显高于骨肉瘤不伴转移的患者（P＜0.05）。在U2OS和HOS细胞中分别转染sh-NC和sh-AUF1,AUF1 mRNA和蛋白的表达水平在转染sh-AUF1组较sh-NC组明显下降（P＜0.05）。低表达AUF1能够明显抑制U2OS和HOS细胞的增殖和增殖相关分子PCNA的表达（P＜0.05）,促进细胞凋亡和凋亡相关分子Cleaved-caspase-3的表达（P＜0.05）。低表达AUF1能够明显促进U2OS和HOS细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平（P＜0.05）。AUF1蛋白能够与p21 mRNA结合,同时低表达AUF1能够明显抑制p21 mRNA的降解速度（P＜0.05）。结论 AUF1在骨肉瘤组织和细胞中明显高表达,低表达AUF1能够抑制p21 mRNA 降解,增加p21蛋白的表达,进而抑制骨肉瘤细胞增殖和促进细胞凋亡     

补骨脂素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖及凋亡的影响

目的 体外观察补骨脂素对人成骨肉瘤MG-63细胞的抑制增殖和促进凋亡作用.方法 将浓度为640、320、160 μmol/L的补骨脂素与MG-63细胞体外培养, 采用苔盼蓝染色法绘制细胞生长曲线,噻唑蓝(MTT)比色法测定药物的细胞毒作用,倒置相差显微镜下观察细胞的形态变化,Hoechst33258细胞荧光染色法观察细胞凋亡的形态变化.结果 细胞生长曲线表明细胞增殖数量变化与药物浓度及时间有显著依赖性;MTT测定补骨脂素在72 h对MG-63细胞抑制率分别为77.74%、71.05%、61.15%,细胞荧光染色观察到MG-63细胞形态改变.结论 补骨脂素抑制体外培养骨肉瘤MG-63细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的：研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对骨肉瘤OS-732细胞的诱导凋亡作用，探寻骨肉瘤临床化疗的斯方案。方法：将TRAIL应用于体外培养的骨肉瘤OS-732细胞，采用MTr法检测细胞毒性作用，倒置相差显微镜及荧光染色方法观察肿瘤细胞形态改变，扫描及透射电镜在亚细胞形态上证实凋亡细胞。结果：不同浓度TRAIL作用下，细胞抑制率问差别十分显著（P〈0.01）。超微结构观察显示骨肉瘤细胞凋亡。结论：TRAIL诱导骨肉瘤细胞凋亡，且具有浓度依赖性。     

抑制Aurora激酶B的表达可促进骨肉瘤143B细胞凋亡

目的 探讨抑制Aurora激酶B（AURKB）诱导骨肉瘤143B细胞自噬对凋亡的影响及其潜在的分子机制。方法 构建慢病毒载体（干扰慢病毒Lv/shAURKB和相应的空载慢病毒Lv/shScrambled）,分别感染人源骨肉瘤细胞系143B细胞,并采用氯喹（CQ）进行干预24 h,分别作为：AURKB慢病毒干扰组（plv/shAURKB组）;阴性对照组（plv/NC组）;plv/shAURKB+CQ组;空载慢病毒+氯喹处理组（plv/NC+CQ组）。RT-qPCR检测Lv/shAURKB慢病毒载体对AURKB mRNA的干扰效率。Western blot检测AURKB、P62、LC3、Cleaved-Caspase3、Bcl2、P-ULK1（Ser555）等蛋白表达水平。采用透射电镜和LC3双标荧光法示踪143B细胞内自噬小体并检测自噬水平,流式细胞术和Tunel实验检测细胞凋亡。免疫共沉淀检测AURKB蛋白与ULK1（UNC-51样激酶1）蛋白间的相互作用关系。结果 plv/shAURKB组细胞中AURKB mRNA及蛋白表达水平均低于plv/NC组,差异有统计学意义（P<0.05）;plv/shAURKB组中自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的比率和自噬小体数量高于plv/NC组,而P62的表达低于plv/NC组,差异均有统计学意义（P<0.05）;plv/shAURKB组细胞中促凋亡蛋白Cleaved-caspase3显著高于plv/NC组（P<0.05）,而抑制凋亡蛋白Bcl2的表达水平显著低于plv/NC组（P<0.05）;与plv/shAURKB组相比plv/shAURKB+CQ组中凋亡相关蛋白 Cleaved-caspase3和Bcl2的表达得到明显回复（P<0.05）。Tunel实验和流式细胞术结果显示,plv/shAURKB组细胞凋亡率显著高于plv/NC组（P<0.05）,plv/shAURKB+CQ组细胞凋亡率与plv /shAURKB组相比得到明显的回复（P<0.05）。plv/shAURKB组细胞中自噬启动蛋白ULK1Ser555磷酸化水平显著高于plv/NC组（P<0.05）。免疫共沉淀检测显示：免疫沉淀AURKB的同时ULK1也发生了沉淀。结论 沉默AURKB能够通过激活ULK1Ser555磷酸化诱导细胞自噬促进骨肉瘤143B细胞凋亡。     

Wilms肿瘤基因反义寡苷酸对白血病细胞凋亡的影响

目的 了解Ｗｉｌｍｓ肿瘤基因（ＷＴ１）反义寡核苷酸（ＡＳＯ）对白血病细胞凋亡的作用。方法 应用ＷＴ１ＡＳＯ以及足叶乙甙（ＶＰ－１６）作用Ｋ５６２、ＨＬ－６０细胞系,然后应用流式细胞仪测定ＤＮＡ含量以确定白血病细胞的凋亡数。结果 Ｋ５６２细胞系经ＷＴ１ ＡＳＯ作用２４ｈ和６０ｈ后细胞凋亡数分别为１４．６％和２６．８％;而ＷＴ１有义寡核苷酸（ＳＯ）组分别为３．１％（２４ｈ）和３．９％（６０ｈ）;加入少     

氯化两面针碱对人骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的探讨氯化两面针碱对人骨肉瘤MG-63细胞诱导凋亡作用及其相关机制。方法将不同浓度的氯化两面针碱作用于MG-63细胞,采用MTT法检测其增殖抑制作用;利用荧光显微镜和电镜观察其对细胞形态的影响;利用流式细胞仪检测不同浓度的氯化两面针碱诱导MG-63细胞的凋亡率;Western blotting法分析caspase-3、caspase-9、Bcl-2和Bax表达的变化。结果 MTT结果表明,氯化两面针碱可明显抑制MG-63细胞的增殖,并存在时间-剂量依赖性。荧光显微镜下,氯化两面针碱处理过的细胞呈现典型的凋亡形态,如细胞核清亮,大小不一,有的裂解成亮蓝色的颗粒。透射电镜下,同样可看到细胞凋亡现象,如胞质内出现大量空泡,细胞核边集,细胞表面微绒毛减少。流式细胞仪结果表明氯化两面针碱诱导细胞凋亡呈明显的剂量依赖性,随着药物浓度升高,凋亡率升高。Western blotting证实,氯化两面针碱能上调MG-63细胞中cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9和Bax的表达,同时下调pro-caspase-3、pro-caspase-9和Bcl-2的表达。结论氯化两面针碱可诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡,其具体机制可能与激活caspase凋亡通路有关。