丹参酮ⅡA对早期脑缺血和脑缺血再灌注损伤的脑保护作用

目的观察丹参酮ⅡA对大鼠早期脑缺血和脑缺血再灌注模型的脑保护作用及可能机制。方法 SD大鼠随机分为5组:假手术组、脑缺血2 h模型组、脑缺血2 h再灌注1h模型组、脑缺血2 h+丹参酮ⅡA组、脑缺血2 h再灌注1 h+丹参酮ⅡA组。丹参酮ⅡA以30 mg/kg灌胃,1次/d,假手术组、模型组用羧基纤维素钠代替。给药7 d后线栓法致大脑中动脉闭塞(MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。观察各组大鼠神经行为学评分(NBS),TUNEL法检测脑细胞凋亡,Western blot法检测脑梗死区Bax、Bcl-2的表达,TTC染色法检测脑梗死体积,试剂盒检测脑梗死区谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量。结果与模型组比较,丹参酮ⅡA能明显降低梗死侧脑组织的细胞凋亡、脑梗死体积及Bax的表达,并能提高NBS评分、增加GSH-Px的活性及Bcl-2的表达,但对MDA含量无明显影响。结论丹参酮ⅡA对大鼠早期脑缺血和脑缺血再灌注损伤具有脑保护作用,其机制可能是通过上调Bcl-2的表达、下调Bax的表达,增加GSH-Px的活性清除氧自由基,从而抑制细胞凋亡降低脑梗死体积,改善神经功能缺损评分。     

Single-strand DNA damages and its relationship with morphological change of neurons at early stage of rat cerebral ischemia／reperfusion

Objective: To discuss the DNA-strand breaks at early stage of middle cerebral artery occlusion/ reperfusion (MCAO/R). Methods: Neurons number and morphologic change were observed by Nissl stain method, and DNA strand breaks were in situ detected by using DNA polymerase- I Klenow fragment-mediated nick end-labelling method (Klenow method). Results: Six hours after reperfusion, a few neurons in damaged regions appeared morphologic changes while a few Klenow-positive cells were detected (P<0. 01). Twenty-four hours after reperfusion lots of neurons showed morphologic change while the number of Klenow-positive cells immediately and remarkably increased (P<0. 01). Seventy-two hours after reperfusion the number of neurons decreased significantly and the number of Klenow-positive cells was also less than that in 24 h (P<0. 05). Conclusion: ① 24 h after reperfusion when the number of Klenow-positive cells reached peak value, DNA single-strand breaks (SSBs) took place in many Klenow-positive cells, and presumed     

全脑缺血再灌注后大鼠海马回中Bcl-2及Bax的表达

目的探讨大鼠全脑缺血/再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）损伤后大脑海马回中Bcl-2及Bax的表达。方法将48只SD大鼠随机分为假手术（SO）组24只;全脑缺血/再灌注（I/R）组24只,采用四血管阻塞法建立大鼠全脑I/R损伤的模型。用免疫组织化学SABC法检测大鼠海马CA1区锥体细胞中Bcl-2及Bax的表达,测量其平均灰度值,用苏木精-伊红（HE）染色检测存活锥体细胞数。结果在I/R组,可见Bcl-2平均灰度值在3小时降低;Bax在3小时平均灰度值开始降低,12小时继续降低,24小时降低达到高峰,到48小时开始回升;存活神经元数目随再灌注时间的延长而减少（P均〈0.01）。结论大鼠全脑缺血/再灌注后,Bcl-2和Bax参与了脑神经元凋亡的调控。     

调控基因Bcl-2、Bax在脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的表达的实验研究

目的：观察大鼠全脑缺血再灌注损伤后脑组织细胞凋亡及调控基因bcl-2、bax蛋白表达的动态变化，为脑：乏苏的研究及治疗开辟新的思路。方法：雄性Wistar大鼠56只，随机分为假手术组，缺血15min再灌注1、6、12、24、48、72h组。采用大鼠4条血管阻断方法制备大鼠全脑缺血再灌注模型。采用TUNEL法观察不同再灌注时间组海马CA1区细胞凋亡的变化。采用免疫组化法观察Bcl-2及Bax蛋白表达水平的变化。结果：脑缺血损伤后随再灌注时间的延长，凋亡细胞逐渐增多，至再灌注48h达到高峰，72h后减少。Bcl-2表达至再灌注12h时达高峰，再灌注24～72h组逐渐减弱。Bax表达至48h达高峰，再灌注72h减少。结论：Bcl-2于再灌注早期表达增强，Bax于再灌注中期表达增强，Bcl-2／Bax比例失衡可能是大鼠全脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一。     

The effect of hyperglycemia on blood brain barrier of rats with focal cerebral ischemia/reperfusion injury

Objective： To determine whether hyperglycemia could aggravate the microvascular damage in ischemic stroke. Methods： Hyperglycemia model was made by injection of streptozocin through subcutaneous injection in wistar rats. Using the suture model, the rats were subjected to 3h of focal ischemia and different times of reperfusion, including 6,12,24,48,96h and 7d. TIC dyeing was used to Show the infarction area of rats. The infarctive volume of rats were calculated by computer imaging analysis system;Matrix metalloproteinase （MMP-2） and （MMP-9）were detected by immunohistochemistly and in situ hybridization histochemistly in Wistar rats. Results： The infarctive volume was siginificantly larger in hyperglycemic rats than that of nonhyperglycemic rats. The level of MMP-2, MMP-9 expression in the group of hyperglycemic rats was higher than that of nonhyperglycemic rats. Conclusion： Hyperglycemia aggravated the injury of focal ischmia-repeffusion in wistar rats and the higher expression of MMP-2,MMP-9 might be one of the mechanism in aggravation of focal ischemia/repeffusion injury.     

针刺结合丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤 的保护作用研究

目的 研究针刺结合丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤有无保护作用。方法 采用大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)制备大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注损伤模型,缺血2 h后将线拔出实现再灌注,分别于再灌注后立刻静脉注射丹红注射液2 mL/kg,并针刺百会、足三里,每天1次,连续3 d,72 h后采用Zea-Longa的5级4分制评分方法进行神经功能评分,TTC染色法测定脑梗死面积, Western blot法检测缺血侧脑皮层中Bcl-2与Bax的蛋白表达。结果 与模型和单用丹红注射液组比较,针刺结合丹红注射液治疗后大鼠神经功能缺陷评分明显降低,脑梗死面积减少,Bcl-2 的蛋白表达增多,Bax蛋白表达减少。结论 针刺结合丹红注射液比单用丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤具有更明显的保护作用。     

丁苯酞注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的观察丁苯酞注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的保护作用。方法选取雄性SD大鼠50只,随机分为假手术组(10只)、缺血再灌注组(20只)、丁苯酞注射液组(20只)。制备SD大鼠右侧大脑中动脉脑缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注22 h,丁苯酞注射液组于缺血1 h后予丁苯酞注射液腹腔注射,假手术组和缺血再灌注组予等体积生理盐水。应用TTC染色观察脑梗死体积;免疫组织化学检测方法观察Bcl-2和Bax表达的变化。结果与缺血再灌注组相比,丁苯酞注射液组神经功能缺损程度减轻,梗死灶体积减小,Bcl表达增多,Bax表达减少。结论丁苯酞注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞的凋亡有保护作用。     

奥拉西坦对大鼠脑缺血再灌注损伤Bcl-2及 Bax表达的影响

目的：探讨奥拉西坦对大鼠脑缺血再灌注损伤后 Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。方法利用大脑中动脉线栓法建立大鼠缺血再灌注模型,随机分为假手术组、生理盐水组、奥拉西坦小剂量组、奥拉西坦大剂量组。应用免疫组织化学法检测再灌注24 h后大鼠脑组织Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果与假手术组比较,生理盐水组大鼠的Bcl-2和Bax蛋白表达明显增加（P＜0.01）,与生理盐水组比较,药物组Bcl-2表达显著增多（P＜0.01）, Bax表达显著减少（P＜0.01）,奥拉西坦大剂量组较奥拉西坦小剂量组的Bcl-2表达增多（ P＜0.05）、 Bax表达减少（ P＜0.05）。结论局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2、 Bax表达增强,奥拉西坦能通过上调Bcl -2蛋白和下调Bax蛋白起到脑保护的作用。     

丹参酮ⅡA对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及其机制

目的探讨丹参酮ⅡA（TanⅡA）对缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及其抗凋亡机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、TanⅡA低剂量治疗组、中剂量、高剂量治疗组,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。TanⅡA高、低剂量治疗组于术前连续灌胃给予高、低剂量TanⅡA7d,1次/d。WESTERN-BLOT观察缺血90min再灌注24h大鼠额顶部皮质Bcl-2和Bax蛋白表达,并进行2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色观察脑梗死体积。TUNEL染色观察凋亡细胞信号表达。处死前,进行神经行为学评分。结果脑缺血再灌注24h,缺血再灌注组Bax表达增加和Bcl-2表达减少,与假手术组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;与缺血再灌注组比较,TanⅡA高、低剂量治疗组均显著增加Bcl-2表达,减少Bax表达,高、低剂量组之间差异亦具有统计学意义（P〈0.05）。TanⅡA高、低剂量治疗组脑梗死体积较缺血再灌注组减小,高、低剂量组之间差异具有统计学意义（P〈0.05）。TanⅡA高、低剂量治疗组神经行为学评分明显高于缺血再灌注组,TanⅡA高剂量治疗组缺血改变亦好于低剂量治疗组。结论 TanⅡA对缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与增加Bcl-2蛋白表达同时降低Bax蛋白表达,从而产生抗凋亡作用有关。     

参附注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注Bcl-2、Bax 蛋白表达的影响

目的探讨参附注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注Bcl-2、Bax的表达的影响.方法用免疫组织化学方法与医学图像分析检测假手术组、模型组及参附注射液组大鼠大脑皮层Bcl-2、Bax蛋白表达的阳性表达指数.结果与假手术组比较,模型对照组Bcl-2、Bax蛋白的阳性表达指数升高(P＜0.05).与模型对照组比较,参附注射液组Bcl-2蛋白的阳性表达指数升高(P＜0.05),Bax蛋白的阳性表达指数降低(P＜0.05).结论参附注射液可增强Bcl-2的表达、抑制Bax的表达.这可能是参附注射液防护大鼠脑缺血再灌注损伤的机制之一.     

The effects of ischemia-reperfusion injury and hepatic artery ischemia on CD14 expression in canine auto-transplantation livers

Objective: To study the effect of ischemia-reperfusion injury(IRI) and hepatic artery ischemia(HAI) on CD14 expression in canine auto-transplantation livers. Methods:Liver orthotopic auto-transplantation models were applied with 30 healthy male Xi’an canines which were randomly divided into a control group, simultaneous reperfusion(SR) group and HAI group. CD14 protein expression, Malonaldehyde (MDA) Contents in hepatic tissues and ALT values in serum were detected, and the pathological changes of hepatic tissues was investigated under the light microscopy. Results:The level of CD14 protein expression in SR and HAI group tended to be time-dependent and both higher than controls with statistical significance(P < 0.01); The peak values of these two groups both occurred at 4 h, but the level in HAI group (11.94± 0.43) was evidently higher than that in SR group(3.04± 0.34). MDA contents in liver tissue, ALT values in serum and pathological changes showed the same changing tendency as CD14 expression. Conclusion:① Up-regula- tion of CD14 expression may be the receptor-mechanism of Kupffer cells(KCs) activation in liver transplantation. ② HAI can up- regulate CD14 expression after portal vein reperfusion, improve the activity of KCs further more, increase OFRs production and coop- erate with portal reperfusion, and finally aggravate the grafts injury.     

Protective Effect of Sodium Tanshinone ⅡA Sulfonate on Injury of Small Intestine in Rats with Sepsis and Its Mechanism

Objective:To explore the protective effect of sodium tanshinoneⅡA sulfonate(STS) on small intestine injury in rats with sepsis and its possible mechanism.Methods:According to a random number table, 24 Tats were randomly divided into 3 groups:sham operation group(sham group),sepsis model group(model group) and STS treatment group(STS group),with 8 Tats in each group.A rat model of sepsis was induced by cecal ligation and puncture(CLP) for 5 h.STS(1 mg/kg) was slowly injected through the right external jugular vein after CLP.The histopathologic changes in the intestine tissue were observed under a light microscope,and the intestinal epithelial cell apoptosis was evaluated by terminal deoxynucleoddyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick-end labeling(TUNEL) method.The expressions of Bcl-2,Bax and nuclear factorκB(NF-κB) p65 in the intestinal tissue was determined by Western blot.The levels of tumor necrosis factorα(TNF-α) and interleukin 6(IL-6) in the intestinal tissue were determined using enzyme-linked immuno-sorbent assay(ELISA). Results:Obvious injuries were observed in the intestinal tissue in the CLP group compared with the sham group. The expression of NF-κB p65 and the levels of TNF-αand IL-6 were up-regulated after CLP,the apoptosis of intestinal epithelial cells was increased after CLP,and the ratio of Bcl-2 to Bax was decreased.STS posttreatment could attenuate the injury on the intestinal tissue induced by CLP,decrease the apoptosis of intestinal epithelial cells and the levels of NF-κB p65,TNF-αand IL-6,and increase the ratio of Bcl-2 to Bax.Conclusion: STS can protect the small intestine in rats with sepsis,and the mechanism may be associated with the inhibition of intestinal epithelial apoptosis and the reduction of activation of inflammatory cytokines.     

红花注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮质Bax及Bcl-XL/Bcl-2的影响

目的：以大鼠脑缺血再灌注损伤模型为研究对象,探讨红花注射液对大鼠大脑皮质B细胞淋巴瘤/白血病-2（B-cell leukemia-2,Bcl-2）蛋白、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated x protein,Bax）、Bcl-XL（B-cell lymphoma-extra large）蛋白表达的影响。方法：健康成年雄性SD大鼠30只,随机分为6组,分别为假手术组（生理盐水 1.6mL·kg-1）,模型组（生理盐水 1.6 mL·kg-1）,红花注射液低剂量组（0.8 mL·kg-1）、中剂量组（1.6 mL·kg-1）、高剂量组（3.2 mL·kg-1）及尼莫地平组（2.0 mL·kg-1）。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,采用免疫组织化学方法检测大鼠脑皮质Bax、Bcl-2、Bcl-XL蛋白的表达。结果：模型组脑组织缺血周边区域中Bax、Bcl-2、Bcl-XL阳性细胞表达较假手术组明显增加（P＜0.05）;而与模型组比较,红花注射液低、中、高剂量组和尼莫地平注射液组脑组织缺血周边区域中Bax阳性细胞表达明显减少（P＜0.05）,而Bcl-2、Bcl-XL阳性细胞表达均明显增加（P＜0.05）。结论：红花注射液可通过增加Bcl-2、Bcl-XL蛋白及下调Bax蛋白的表达减少大脑神经细胞凋亡,对缺血再灌注损伤大鼠脑组织发挥保护作用。     

棕榈油对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的研究棕榈油（palm oil,PO）对大鼠局灶性脑缺血再灌注后梗死体积及细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨棕榈油的脑缺血保护作用及机制。方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。将健康雄性SD大鼠随机分成4组：空白对照组、假手术组、缺血再灌注组（IR）、PO处理组。空白对照组与假手术组每组12只大鼠,缺血再灌注组与PO处理组再分为再灌注2 h、6 h、12 h、24 h、72 h、7 d等6个亚组,每亚组12只大鼠。TTC染色观察脑缺血再灌注损伤后的损伤体积;SDS聚丙烯酰胺凝胶转移电泳（westernblotting,WB）检测Bcl-2、Bax的表达水平并观察PO的保护作用。结果①TTC染色：空白对照组与假手术组未见缺血失染区域,缺血再灌注组与棕榈油处理组缺血再灌注后2h均未见明显的缺血失染区,在缺血再灌注6 h、12 h、24 h、72 h、7 d各时间点,PO处理组梗死质量百分比与对应的IR组数值比较均有统计学差异（P〈0.05）,PO处理组较缺血再灌注组缺血梗死脑区质量百分比减少;②WB：缺血再灌注组及棕榈油组从再灌注6 h开始Bcl-2、Bax在半暗带区表达增强,随缺血时间延长,表达呈先升高后降低,Bcl-2于缺血12 h达高峰,Bax于缺血24 h达高峰。各时间点PO处理组与相应缺血组相比,Bcl-2的表达量显著增加（P〈0.05）,Bax的表达量显著减少（P〈0.05）。结论①棕榈油可以减小大鼠局灶性脑缺血再灌注后的缺血受损范围;②棕榈油能够增加大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡抑制基因Bcl-2表达作用,降低凋亡基因Bax表达作用,保护神经细胞。     

参附注射液对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马Bcl-2、Bax蛋白的表达及参附注射液对其的影响。方法成年雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、参附注射液治疗组。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞((middle cerebral artery oc-clusion,MCAO)再灌注模型,应用TTC染色检测脑梗死体积,免疫组织化学法检测海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果缺血组大鼠海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白的表达较假手术组明显增加(P<0.01),给予参附注射液处理后,Bcl-2蛋白表达明显增加(P<0.01),Bax蛋白表达减少(P<0.05),差异均有统计学意义。结论参附注射液可以通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达来抑制细胞凋亡,这可能是其发挥脑保护作用的机制之一。     

黄芩苷抗脑缺血小鼠学习记忆功能损伤的保护作用

目的探讨中药黄芩苷对脑缺血-再灌注模型小鼠学习记忆功能损伤的保护作用和机理.方法将60只小鼠随机等分为脑缺血模型组、假手术组、黄芩苷组,采用经典Morris水迷宫法测试小鼠空间学习记忆能力,记录每天的潜伏期与游泳轨迹,同时运用蛋白印记的方法来检测小鼠纹状体中Bax和Bcl-2蛋白水平的变化.结果黄芩苷组小鼠水迷宫训练学习期的第4天开始,逃避潜伏期缩短、错误次数减少,与模型组相比差异有统计学意义（P〈0.01）;脑缺血模型组损伤4 d后,小鼠纹状体区神经细胞Bcl-2与Bax表达、Bax/Bcl-2比值都上调;黄芩苷组预处理可以分别下调Bax表达与Bax/Bcl-2比值,较模型组显著降低（P〈0.01）.结论黄芩苷能有效预防脑缺血-再灌注致小鼠学习能力的损伤,其作用机制可能与Bax/Bcl-2改变有关.     

黄体酮对大鼠缺血再灌注脑组织细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨黄体酮对缺血再灌注脑损伤的保护机制.方法:采用SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),将48只SD大鼠随机等分为6组:假手术组、脑缺血再灌注组、溶剂(DMSO)对照组、黄体酮(PROG)预防组、PROG治疗组、PROG防治组,应用免疫组织化学和原位末端标记(ISEL)法检测脑组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达情况.结果:假手术组每高倍视野下凋亡细胞数为1.88±0.25,缺血再灌注组为41.38±3.85, DMSO组为38.13±5.69,预防组为22.88±2.70,治疗组为25.63±2.93, 防治组为20.88±2.30;缺血再灌注组每高倍视野下Bcl-2蛋白阳性细胞数为9.50±1.69, DMSO组为10.25±2.61,预防组为 17.13±1.13,治疗组为16.63±1.30,防治组为23.50±1.93;缺血再灌注组每高倍视野下Bax蛋白阳性细胞数为28.13±2.75, DMSO组为27.75±3.06,预防组为 14.25±1.83,治疗组为13.00±1.85,防治组为11.38±1.41.各PROG处理组(预防组、治疗组及防治组3项指标与缺血再灌注组、DMSO组之间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05.结论:PROG可抑制脑神经细胞中Bax表达,上调Bcl-2表达,从而抑制脑细胞凋亡,发挥脑保护作用.     

青蒿素对大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡相关因子及炎症介质表达的影响

目的 探讨青蒿素对大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡因子及炎症介质表达的影响.方法 采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、青蒿素预处理组.缺血2 h,再灌注24 h后,处死大鼠,脑组织取材.采用实时荧光定量PCR检测Fas、FasL、Bcl-2、Bax mRNA水平.采用ELISA法检测TNF-α和IL-1β蛋白水平.结果 与假手术比较,模型组Fas、FasL、Bcl-2和Bax mRNA表达水平上调(P<0.05),Bcl-2/Bax比值下调(P<0.05),TNF-α和IL-1β蛋白水平升高(P<0.05),青蒿素预处理可明显下调Fas、FasL、Bcl-2和Bax mRNA水平及TNF-α和IL-1β蛋白水平(P<0.05),上调Bcl-2/Bax比值(P<0.05).结论 青蒿素对脑缺血再灌注损伤后的脑组织具有保护作用.     

丹参酮ⅡA对Lewis肺癌小鼠Bcl-2及Bax表达的影响

目的通过研究丹参酮ⅡA（TanⅡA）对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤组织Bcl-2及Bax的影响,探讨TanⅡA抗肿瘤机制。方法建立Lewis肺癌小鼠模型,将动物随机分为生理盐水（NS）组、TanⅡA组、TanⅡA＋环磷酰胺（CTX）组和CTX组共四组。腹腔连续注射给药。10d后计算各组的抑瘤率。用免疫组化方法测定Bcl-2及Bax表达水平。所有数据用SPSS13.0处理。结果各用药组对Lewis肺癌小鼠肿瘤均有不同程度的抑制作用：TanⅡA＋CTX组抑瘤率最高。盐水组、TanⅡA组、TanⅡA＋CTX组、CTX组各组Bcl-2阳性表达率分别为（59.83±3.38）%、（45.89±5.31）%、（25.26±4.09）%和（30.93±4.13）%。各组Bax阳性表达率分别为（31.96±8.50）%、（39.66±3.81）%、（52.24±5.25）%和（46.58±4.10）%。各项指标以TanⅡA＋CTX组效果最好。结论 TanⅡA通过上调Bax、下调Bcl-2的表达诱导肿瘤细胞凋亡来抑制肿瘤生长,与环磷酰胺有协同作用。