美洲大蠊前处理工艺及其体外抗肿瘤活性研究

目的:研究美洲大蠊前处理工艺对蛋白质含量及其体外抗肿瘤的影响。方法:通过沸水、低温两种方式分别将美洲大蠊烫杀、冻杀,用传统干燥、真空干燥、冷冻干燥三种方式干燥美洲大蠊,以得率、含水量、醇浸出物含量、蛋白质含量为理化指标,以体外抗肿瘤实验为活性指标,选出最佳的前处理工艺。结果:蛋白质得率高低为冷冻干燥真空干燥传统干燥。含水量高低为真空干燥传统干燥冷冻干燥。醇浸出物含量高低为真空干燥传统干燥冷冻干燥。蛋白质含量测定高低为真空干燥冷冻干燥传统干燥。体外细胞实验:真空干燥对A549、HeLa、MCF-7、SGC-7901、Bel-7402五种细胞均具有较强抑制作用,其次为冷冻干燥,传统干燥效果最弱。结论:本实验通过比较三种前处理工艺对美洲大蠊中蛋白质含量及其体外抗肿瘤的影响,确定以真空干燥为美洲大蠊前处理工艺,为美洲大蠊的进一步开发提供依据。     

美洲大蠊粪便提取物抗氧化活性及其化学成分研究

[目的] 探究美洲大蠊粪便提取物的抗氧化活性和化学成分。[方法] 采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除法测定美洲大蠊粪便提取物的抗氧化能力。综合利用溶剂提取法、大孔吸附树脂、制备高效液相色谱等分离纯化方法,对美洲大蠊粪便提取物中的化学成分进行提取分离,通过核磁共振波谱、质谱法鉴定化合物结构。[结果] DPPH法测试结果表明美洲大蠊粪便提取物具有明显的抗氧化活性,其半抑制浓度（IC₅₀）为44.53 μg/mL。从中分离得到12个化合物,依据物理性质及波谱数据鉴定结构分别为：邻苯二酚（1）、苯甲酸（2）、羟吲哚（3）、5-羟基吲哚啉-2-酮（4）、8-羟基喹啉-2-羧酸（5）、6-羟基-2-喹啉酮（6）、8-羟基-2-喹啉酮（7）、2-喹啉酮（8）、6-羟基-3,4-二氢-2-喹啉酮（9）、5-羟基-3,4-二氢-2-喹啉酮（10）、8-羟基-3,4二氢-2-喹啉酮（11）、3,4-二氢-2-喹啉酮（12）。[结论] 美洲大蠊粪便提取物具有明显的抗氧化活性,分离得到的化合物主要为喹啉酮类化合物。     

美洲大蠊药效物质提取工艺优化

目的美洲大蠊药效物质提取工艺优化。方法以得率及体外抗肿瘤细胞活性为评价指标,筛选美洲大蠊药效物质的提取溶剂;以得率及体外抗肿瘤细胞活性为评价指标,以溶剂剂量、提取时间、浸泡时间为影响因素,正交试验优化美洲大蠊药效物质的提取工艺。结果美洲大蠊药效物质最佳提取溶剂为75%乙醇,其IC_(50)为9.11 mg/mL;美洲大蠊药效物质最佳提取工艺为溶剂剂量15倍、提取时间1.0小时、浸泡时间2.0小时。结论筛选美洲大蠊药效物质的最佳提取工艺,为美洲大蠊提取物为主的制剂开发提供理论依据。     

美洲大蠊化学成分和生物活性研究进展

近年来对美洲大蠊的研究越来越受到关注,研究显示其具有药用价值广、不良反应低及来源丰富的特点,在医药领域中有较好的应用前景。综述近10年来国内外对美洲大蠊化学成分和生物活性方面的研究概况,为其进一步开发利用提供参考。     

美洲大蠊抗癌活性成分体外抗氧化活性分析

目的 研究从美洲大蠊中提取的抗癌活性成分的体外抗氧化活性,并对其组成进行了初步分析.方法 采用体外化学模拟体系研究了美洲大蠊抗癌活性成分体外抗氧化活性,经过SDS-PAGE分析和采用Folin-酚法测定对抗癌活性成分的组成进行初步分析.结果 美洲大蠊中抗癌活性成分在清除二苯基苦味肼基自由基(DPPH·)和·OH自由基的效果和总还原能力均表现出不同程度的量效依赖关系;清除DPPH·自由基能力的EC50值为0.309 mg/ml ;清除·OH自由基的EC50 值为8.776 mg/ml;抗癌活性成分还原力的EC50为1.103 mg/ml;经过SDS-PAGE分析呈现的抗癌活性成分组成主要由一系列小分子多肽组成的混合物,小分子多肽在抗癌活性成分中的含量为62.7 %.结论 美洲大蠊中抗癌活性成分具有抗氧化活性,其活性弱于Vc,其活性与浓度呈正相关性,其组成成分中多肽成分占有62.7 %的比例.     

美洲大蠊化学成分的研究

目的研究美洲大蠊Periplaneta americana L.化学成分。方法美洲大蠊90%乙醇提取物采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到16个化合物,分别鉴定为亮氨酸(1)、尿嘧啶(2)、乙酰胺(3)、缬氨酸(4)、γ-氨基丁酸(5)、丙三醇(6)、methyl,2-piperidinecarboxylate(7)、吡嗪(8)、原儿茶酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、脱氧胸苷(10)、环(脯-丝)(11)、环(脯-天冬酰胺)(12)、苯丙氨酸(13)、多巴胺(14)、肌苷(15)、酪胺(16)。结论化合物3、7~12、14、16均为首次从美洲大蠊及大蠊属中分离得到。     

枫香树叶抗菌活性研究

目的探讨枫香树叶的体外抗菌活性。方法采用琼脂扩散法和试管连续稀释法测定枫香树叶对常见致病菌和条件致病菌的体外抗菌活性及最低抑菌浓度(MIC)。结果枫香树叶对大肠埃希菌、白假丝酵母菌无抗菌作用;枫香树叶对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌皆有抗菌作用,抑菌圈直径在13~25 mm之间。不同方法提取的药液的抗菌作用有明显差别,其中枫香树叶水煎液抗菌作用最好,对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度分别为0.5,1,0.5,0.5,0.25 g/ml。结论枫香树叶对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌有较好的抗菌作用。     

头孢吡肟的体外抗菌活性探讨

目的：探讨头孢吡肟的体外抗菌活性和抗菌谱。方法：采用Kirby2Bauer琼脂扩散法对178株临床分离菌进行头孢吡肟等6种常用抗生素的药物敏感试验,并与另外6种β-内酰胺抗生素进行比较。结果：头孢吡肟对苯唑西林敏感的葡萄球菌、肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌和枸橼酸杆菌等均有很强的抗菌活性。结论：头孢吡肟对G＋球菌和G-杆菌均有良好的抗菌活性。     

美洲大蠊的含氮成分及其促创面愈合相关活性研究

目的:探索美洲大蠊促创面愈合相关活性物质。方法:采用多种色谱法分离纯化其非肽类小分子化合物,并借助谱学法鉴定其化学结构。结果:从中分离得到16个化合物,分别为2-(1,2,3-三羟基丙基)吡嗪(1)、2-甲基-6-(2,3,4-三羟基丁基)吡嗪(2)、3-甲基-6-(2,3,4-三羟基丁基)吡嗪(3)、3-羟基吡啶(4)、1-(2-羟乙基)-5-羟甲基-1H-吡咯-2-醛(5)、N-(5-乙酰吡咯-3-基)乙酰胺(6)、8-羟基-2,3-二氢-4(1H)-喹诺酮(7)、戊内酰胺(8)、N-乙酰多巴胺(9)、aspongopusin(10)、deoxyhyrtiosine A(11)、光色素(12)、6-羟甲基-3-羟基吡啶(13)、3,4-二羟基苯基甘油(14)、2-异戊基苯酚(15)和5-羟甲基呋喃-2-醛(16)。结论:化合物1、3、5和6为新的天然产物,化合物2、4、7、10~16为首次从美洲大蠊中分离得到;生物活性研究表明化合物12~14能促进人皮肤成纤维细胞迁移,尤以化合物13作用最为显著,而化合物3可促进人脐静脉内皮细胞血管生成。     

扭肚藤水煎液体外抗菌活性研究

目的:研究扭肚藤水煎液对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希氏菌的体外抗菌活性,为临床规范使用该药提供实验依据。方法:制备扭肚藤水煎液,采用牛津杯法初筛检测其抑菌作用,再分别应用液体培养基2倍稀释法和琼脂平板法检测其最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结果:扭肚藤水煎液对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希氏菌均有较强的抑菌作用。扭肚藤提取物对金黄色葡萄球菌MIC为62. 5mg/L,MBC为125mg/ml;对大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的MIC均为125mg/L,MBC均为250mg/ml。     

单味中药体外抑菌活性的研究进展

查阅5年来国内外有关单味中药体外抑菌研究的文献,就我国在体外具有抑菌活性的不同功效的单味中药做一概述,总结归纳出对不同病原菌和致病菌有抑制作用的单味中药,包括清热药、解表药、泻下药、化湿药、理气药、收涩药、补虚药、止咳平喘药、利水渗湿药和活血化瘀药等,并对其主要抑菌成分和可能的作用机制进行阐述,以期为利用我国丰富的中药资源和研发出低毒高效的中药抑菌剂提供参考,为抗菌中药的进一步研究提供依据和新的思路。     

美洲大蠊醇提取物的木瓜蛋白酶酶解工艺

目的:优选木瓜蛋白酶对美洲大蠊醇提取物的酶解工艺.方法:以水解度为指标,通过单因素和正交试验,分别考察酶解温度、酶解时间、pH、加酶量、底物浓度对木瓜蛋白酶酶解美洲大蠊醇提取物的影响.结果:木瓜蛋白酶酶解美洲大蠊醇提取物的最佳工艺条件为酶解温度55℃,时间3h,pH 7.0,加酶量8400 U·mg-1,底物浓度0.5％.在此条件下,水解度可达9.87％.酶解后的样品相对分子质量变小,相对分子质量分布变宽.结论:优选方法稳定,操作简便,为进一步研究美洲大蠊提供依据和基础.     

雄黄致体内外染色体畸变

目的:用仓鼠体内染色体畸变试验和中国仓鼠肺细胞CHL细胞染色体畸变试验评价雄黄的遗传毒性.方法:体内染色体畸变试验用毛足属仓鼠连续ig5 d给予33.25,66.5,133 mg·kg-1剂量雄黄悬浊液,处死前2 h ip秋水仙素.处死后取骨髓细胞制备染色体.油镜下观察每只动物骨髓细胞的有丝分裂指数和100个中期分裂相细胞的畸变类型.CHL细胞染色体畸变试验用雄黄浸出液终质量浓度为0.15,0.3,0.6g.L-1作用于CHL细胞,培养24 h或48 h,终止培养前4h加入秋水仙素.收获细胞,制备染色体,油镜下观察CHL细胞有丝分裂指数和200个中期分裂相细胞的畸变类型.结果:①雄黄265.0 mg· kg -1组和雄黄530.0 mg·kg-1组ig给药和雄黄浸出液(1.2,2.4g·L-1)作用于CHL细胞显示有明显的抑制有丝分裂作用.②与阴性对照组比较,雄黄ig给药仓鼠体内染色体畸变率和雄黄体外给药CHL细胞染色体畸变率均显著升高,差异有极显著意义,且有明显的量效关系.但体内试验的畸变率低于体外试验.③雄黄给药后CHL细胞染色体畸变试验中可见较多的染色体断片,而仓鼠体内染色体畸变试验中未发现,这可能与体内外药物作用的方式不同.结论:①雄黄能致体内外细胞染色体畸变,具有遗传毒性.②仓鼠体内染色体畸变试验可作为中药新药遗传毒性评价试验组合的方法之一.     

柴胡总皂苷提取物体外溶血作用

目的:考察柴胡总皂苷提取物的溶血作用和抗氧化剂对柴胡总皂苷溶血的影响。方法:通过肉眼观察和分光光度法考察不同浓度柴胡皂苷的溶血作用及抗氧化剂对柴胡总皂苷溶血的影响。结果:柴胡总皂苷质量浓度为在0.01,0.02 g.L-1时,其溶血曲线呈S形,溶血当量为0.01 mg,溶血指数为1∶10万,抗氧化剂与柴胡总皂苷组溶血率低于同浓度柴胡总皂苷组。结论:柴胡总皂苷具有一定的溶血作用,且溶血强度与浓度呈剂量依赖性,抗氧化剂的加入能减轻柴胡总皂苷的溶血作用。     

Evaluation of toxicity of Calophyllum brasiliense stem bark extract by in vivo and in vitro assays

Ethnopharmacological relevance

Calophyllum brasiliense Camb., Clusiaceae, is commonly known as “guanandi” and its stem bark is used in Brazilian traditional medicine to treat rheumatism, vein problems, hemorrhoids and gastric ulcers. The aim of this study was to evaluate the toxicity of hexane extract of Calophyllum brasiliense stem bark (HECb) using in vitro and in vivo experimental models.

Materials and methods

In vitro toxicity was evaluated by Alamar Blue cytotoxicity assay and micronucleus test, using Chinese hamster ovary (CHO-k1) epithelial cells. in vivo toxicity was evaluated by oral acute and subchronic toxicity assays. In the oral acute toxicity screening, a single dose of HECb was administered to mice at doses ranging from 250 to 1000 mg/kg. In the subchronic study, HECb was administered orally for 30 days to Wistar rats at doses of 100 mg/kg and 500 mg/kg. Phytochemical analyses were performed by HPLC/UV–vis, secondary metabolites were quantified by spectrophotometric methods.

Results

HECb presented IC₅₀=119.94±4.31 µg/mL after a 24 h cytotoxicity test using CHO-k1 cells, showing low cytotoxicity. However, when the cells were exposed to HECb for 72 h, the IC₅₀ value was 8.39±2.00 µg/mL, showing in this case, a pronounced cytotoxic effect. In the oral acute toxicity studies, doses up to 500 mg/kg of HECb did not cause any changes in both male and female mice. At 1000 mg/kg, male mice showed signs typical of depression and stimulation that were reversed at 72 h. Besides, female mice were more sensitive to the toxic effect of HECb at 1000 mg/kg, which initially presented typical agitation signals, followed by depression signals, leading to death of all the animals at 24 h. In subchronic assay with rats, HECb administered orally at doses of 100 and 500 mg/kg did not cause significant changes in all clinical parameters evaluated. Histopathological analyses showed no deleterious effect in the vital organs of rats. Preliminary phytochemical analysis revealed the presence of phenolic compounds, steroids, and volatile coumarins. Analysis by HPLC showed two major peaks characteristic of chromanones.

Conclusions

In vitro toxicological tests showed that HECb exhibited cytotoxicity especially after 72 h of exposition, and mutagenicity on the highest tested dose. The in vivo studies demonstrated that HECb produced some toxicity signs at the highest dose tested, particularly, in the acute toxicity test but showed no significant signs of toxicity in the subchronic assay. Based on these and previous pharmacological studies, it is possible to say that HECb did not exhibit significant toxicity at its effective dose. This suggests that HECb is relatively safe in humans at its effective dose.     

基于UPLC-PDA-MS/MS技术的四逆散水煎液体内外物质基础研究

目的:采用液质联用技术,分析四逆散水煎液体外化学成分及血中移行成分,对其体内外物质基础进行研究。方法:采用ACQUITY UPLCTMBEH C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-2 mmol.L-1醋酸铵水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 mL.min-1,柱温35℃;质谱采用ESI源,正负离子同时检测,在m/z 100～1 000进行扫描,并对特征离子进行2次裂解,获得二级质谱数据。结果:在四逆散水煎液中,检测到芍药苷、甘草酸、柴胡皂苷a及柚皮苷等20种化学成分。在体内样品中,发现芍药苷、柚皮苷、橙皮苷等8种成分以原型入血;同时还检测到6种代谢物,包括葡萄糖醛酸结合物、硫酸酯结合物及葡萄糖醛酸硫酸酯结合物等。结论:采用UPLC-PDA-MS/MS技术分析四逆散水煎液的体内外化学成分,能比较全面、快速地反映四逆散水煎液的体内外物质基础,为进一步研究四逆散的药效物质基础提供依据。     

射干提取物体内体外抑菌作用的研究

目的:研究射干提取物的体内外抑菌作用。方法:通过测定抑菌圈直径考察射干提取物对不同菌株的敏感性;采用2倍稀释法检测射干提取物的最小抑菌浓度(MIC);通过ip金黄色葡萄球菌观察射干提取物低、中、高(0.46,0.92.1.84g.kg-1)3个剂量ig给药7 d对小鼠的致死保护率。结果:肺炎链球菌、铜绿假单胞菌对射干提取物有较强的敏感性,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、无乳链球菌、化脓链球菌、痢疾志贺菌对射干提取物中度敏感;射干提取物对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、无乳链球菌、化脓链球菌、痢疾志贺菌的最小抑菌浓度(MIC/g.mL-1)分别为0.062 5,0.015 6,0.250 0,0.031 2,0.015 6,0.015 6,0.062 5;射干提取物低、中、高3个剂量组均显著降低金黄色葡萄球菌酵母悬液引起的小鼠死亡率,死亡率分别为45%,35%,30%,与模型对照组死亡率100%比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:射干提取物体内体外对所试菌株均有抑菌作用。     

白木香果皮提取物的抗菌活性

目的:为开发利用白木香果皮资源,对其提取物进行抗菌活性评价。方法:用三氯甲烷对白木香果皮进行提取,提取物分别采用滤纸片法和生长速率法对不同细菌和真菌进行抗菌活性测定,并采用连续稀释法测定其最低抑菌浓度。结果:白木香果皮提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌有显著抑制作用,最小的抑菌浓度分别为6.25,625,12.5 g.L-1,对大肠杆菌则没有抑制效果;对绿色木霉、黑曲霉、黄曲霉也有明显的抑制作用,最小的抑菌浓度分别为6.25,6.25,12.5 g.L-1。结论:白木香果皮三氯甲烷提取物具有显著的抗菌活性,值得开发利用。     

何首乌不定根的离体诱导及悬浮培养研究

通过离体不定根的高效诱导与悬浮培养,实现何首乌资源的永续利用。在培养基中添加不同浓度的蔗糖和植物生长物质,筛选从幼茎有效诱导不定根的最适培养基;采用正交试验筛选不定根悬浮培养的最适培养基;对悬浮培养的不定根进行继代培养并测定生长曲线,同时对不定根中的主要有效成分进行检测。结果表明,能够从幼茎有效诱导不定根的最适培养基为MS+蔗糖 40 g·L^-1+α-萘乙酸 2.0 mg·L^-1+6-卞基腺嘌呤 0.2 mg·L^-1;不定根悬浮培养的最适培养基为 MS+蔗糖30 g·L^-1+α-萘乙酸 2.0 mg·L^-1+生根粉 0.2 mg·L^-1;经过检测,发现不定根同样含有何首乌药材中的主要有效成分二苯乙烯苷。该实验实现了何首乌不定根的高效诱导与培养,为中药资源的永续利用研究提供了工作基础。     

夏枯草花粉离体萌发观察

选用唇形科植物夏枯草花粉为材料,通过在离体条件下花粉的萌发来探讨夏枯草花粉萌发的最适条件.以10％ H3BO4,30％ Ca(NO3)2,20％ MgSO4,10％ KNO3配制成无机盐溶液为基本培养基,统计不同相对分子质量的PEG,不同浓度的蔗糖,不同pH和不同温度条件以及不同采集时间下花粉萌发率的情况.夏枯草花粉萌发的最适液体培养条件是:10％ H3BO4 +30％ Ca(NO3)2 +20％ MgSO4+10％ KNO3+25％ PEG-4000,pH在6.5左右,刚刚开花时采集的花粉在此条件下花粉萌发率最高.