甲状腺素、碘、硒、氟对体外培养人胚脑细胞增殖及~3H-TdR掺入的影响

本实验建立了早期人胚大脑神经细胞体外原代单层细胞培养模型;研究了甲状腺素(T_4)、碘、氟、硒等离子对其生长、增殖,形态及~(?)H-TdR掺入的影响,观察到T_4、(?)和Se~(2-)对人胚脑体外培养细胞的增殖和DNA的合成,具有不同程度的增强作用;而F~-却有明显的抑制作用;且T_4、I~-、Se~(2-)均可抵消F~-对人胚脑体外培养细胞的抑制效应。     

硒碘对鸡胚脑发育影响的研究：亚临床克汀病发病因素及防治…

用鸡胚孵育法观察了硒，碘对鸡胚脑发育的影响。结果表明：硒能促进锥体细胞，星形胶质细胞基树突分枝，与碘组和空白组比较有非常显著有差异。碘能增加大脑ＶＥ单位内的细胞和大脑皮层到皮质板下层的厚度。证明：硒，磺对胚脑发育具有不同的作用途径。     

蜕皮激素对人胚肺二倍体细胞增殖的影响

目的：从细胞水平探讨怀牛膝主要活性成分蜕皮激素抗衰老的作用机制。方法：以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料,分为蜕皮激素组和正常对照组,以生长曲线、MTT法、^3H-TdR掺入法以及流式细胞仪法观察细胞增殖、细胞周期变化及DNA合成情况。结果：同一代龄,悦皮激素组细胞增殖数、OD490值、PI值、CPM掺入量等均明显高于对照组。结论：蜕皮激素有较显著的促细胞增殖能力。     

氟对体外培养乳鼠软骨细胞增殖的影响

目的 探讨氟对体外培养乳鼠软骨细胞增殖的影响.方法 采用细胞培养的方法,原代培养昆明乳鼠软骨细胞,传第3代后按染氟剂量不同分为O(对照)、5、10、20、40 ms/L组,10 d后光、电镜观察软骨细胞形态学变化;采用生长曲线、噻唑蓝(MTT)方法,在染氟24、48、72 h测定细胞数量变化及细胞增殖率.结果 染氟10 d后,镜下0、5、10mg/L组软骨细胞表现为增殖,细胞生长旺盛,均可见部分细胞核中核仁数增加:40mg/L组部分软骨细胞中有染色质固缩或凝结成块状,可见到凋亡细胞.在染氟24 h,细胞增殖活力各染氟组组间比较差异无统计学意义(F=2.313,P＞0.05).在染氟48、72 h,0 mg/L组[(23.5±4.6)%、(29.9±1.7)%]、5mg/L组[(34.6±4.7)%、(45.3±5.9)%]、10mg/L组[(39.9±4.8)%、(56.8±5.5)%]、20mg/L组[(31.8±4.1)%、(38.3±6.5)%]、40 mg/L组[(28.3±4.3)%、(33.4±4.8)%]组问比较差异有统计学意义(F值分别为11.401、25.671,P＜0.05);各染氟组细胞增殖活力与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),其中5、10ms/L组明显高于40mg/L组(P＜0.05).结论 低剂量氟在较短作用时间内可以促进体外培养小鼠软骨细胞的增殖,剂量升高时表现为抑制.     

红景天甙对体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞的影响

本实验采用体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞,从30代开始在培养液中加入红景天甙为实验组、不加红景天甙为对照组。分别观察了两组细胞的形态、增殖速度及对单胺氧化酶(MAO)活性的测定。结果表明,实验组细胞形态、增殖速度均比同代对照组好,MAO活性比对照组低。认为红景天甙对体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞具有一定的抗衰老作用。     

氟铝联合对体外人胚大脑神经细胞超微结构的影响

为探讨氟铝联合对大脑神经细胞的毒作用,本研究采用无血清体外细胞培养方法,观察氟铝对人大脑神经细胞生长发育及形态学的影响。结果显示高剂量铝可以抑制大脑细胞的生长发育,引起大脑神经超微结构的损害,表现为各种膜结构的损害及神经微丝微管排列紊乱。在研究剂量范围,加入不同剂量的氟并未对铝的损伤作用产生明显的影响,说明研究剂量的铝氟不存在拮抗或协同作用。     

甲巯咪唑对体外培养人甲状腺细胞增殖的影响

目的研究甲巯咪唑(MMI)对体外培养人的甲状腺细胞增殖的影响，以探讨MMI的药理作用，为指导临床用药提供一个理论依据。方法甲状腺细胞培养2天，之后分别培养在5H和6H液中，不同浓度MMI(1、10、100μmol/L)状态下孵育2天。以竞争性蛋白结合法测定cAMP。采用四氮唑蓝比色法测定甲状腺细胞增殖。结果MMI在较大范围(1-100μmol/L)内不影响细胞内的第二信使cAMP的含量。在细胞增殖实验中，小剂量MMI(1～10μmol/L)对甲状腺细胞增殖无明显影响，大剂量MMI(100μmol/L)抑制甲状腺细胞增殖。结论MMI对体外培养人的甲状腺细胞的生长有影响。     

地塞米松对体外人骨髓基质细胞增殖及成骨分化的影响

目的观察地塞米松对骨髓基质细胞(MSCs)增殖及成骨分化的影响。方法以离心法分离培养MSCs,分别以10~(-9)、10~(-8)和10~(-7) mol/L地塞米松对细胞进行干预,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测细胞增殖率；测细胞质碱性磷酸酶(ALP)含量；利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术在转录水平检测成骨细胞标记物骨桥蛋白(OPN)mRNA的表达。结果地塞米松干预8 d后,各干预组的吸光度值均低于对照组,10~(-8)和10~(-7) mol/L地塞米松组与对照组相比差异有统计学意义(P＜0．05)；地塞米松干预12 d后,各干预组细胞质ALP含量呈浓度依赖性增加,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0．05)；地塞米松干预12 d后,各干预组均有OPN mRNA表达,且随浓度增加表达增强。结论地塞米松对体外MSCs增殖有抑制作用,但对MSCs成骨分化有促进作用。     

碘、T_3对培养早期的鸡胚脑细胞摄取~3H—亮氨酸和~3H—TdR的影响

应用细胞培养方法研究了碘、T_3对体外原代单层培养早期的鸡胚脑细胞摄取~3H—亮氨酸和~3H—TdR 的影响。结果表明,碘离子对鸡胚脑细胞摄取亮氨酸有作用,但对 TdR 摄取的作用不明显;T_3对脑细胞摄取亮氨酸和 TdR 均有明显的促进作用。     

氟对体外培养鸡胚肢骨骼成骨过程的影响

目的　观察氟对体外培养软骨的成骨作用 ,进一步研究氟骨症发生的机理。方法　采用 10 d龄鸡胚股骨体外培养 ,培养基中加不同浓度的氟化钠 (12 0 ,2 40 ,480 ,960μmol/ L ) ,连续培养 11d。分别检测 :形态学及形态计量学指标 ;用 TUNEL法检测细胞凋亡 ,并计算细胞凋亡指数 (AI,% ) ;透射电镜观察鸡胚股骨细胞的超微结构 ;测定培养基中的 H2 O2 、NO及 SOD含量。结果　 1加氟后软骨细胞体积变大 ,钙化增多。各加氟组的钙化面积、平均光密度、积分光密度和正常组相比均增多。 2细胞凋亡原位检测 :各加氟组的 AI和正常组相比显著增高 ,差异有显著性 (P <0 .0 5)。以 480μmol/ L组最高。 3超微结构变化 :各加氟组均出现凋亡细胞 ,随着氟浓度增加凋亡细胞数也增加 ,并有凋亡小体出现。 4培养基中 H2 O2 浓度在 480 μmol/ L 组开始升高 ,和正常组相比差异有显著意义 (P <0 .0 5) ;各加氟组的 NO浓度明显增加 ,和正常组相比差异有非常显著意义 (P <0 .0 1) ;SOD浓度从 2 40μm ol/ L F- 组开始下降 ,和正常组相比差异有显著意义 (P <0 .0 5)。结论　氟促进了软骨细胞的凋亡 ,使钙化增加 ,激发软骨内成骨过程 ,可能是氟骨症骨质增生型病变的发生机制 ,这和自由基浓度增高、机体抗氧化能力降低有关     

羟基喜树碱对人肝癌细胞增殖影响及凋亡诱导

目的 探讨羟基喜树碱对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及其诱导凋亡的作用。方法 以不同浓度的羟基喜树碱在体外作用于人肝癌细胞株SMMC-7721,采用MTT法检测细胞增殖;化学荧光法检测Bcl-2的细胞表达;电镜观察、流式细胞仪与原位末端标记方法检测细胞凋亡情况。结果 与空白对照组比较,羟基喜树碱浓度在3.125μg/mL～100μg/mL组,对肿瘤细胞的增殖抑制率显著增高(P<0.01);在0.05mg/mL组出现细胞早期凋亡现象,Bcl-2表达明显减少;在0.1mg/mL组形成凋亡小体;细胞凋亡比例随羟基喜树碱浓度增加而增高。结论 羟基喜树碱在体外可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖,其作用机制可能系通过抑制Bcl-2表达诱导细胞凋亡。     

土贝母苷甲对人肺腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨土贝母苷甲对人肺腺癌细胞(A549)增殖及凋亡的影响.方法 应用MTS法检测土贝母苷甲不同浓度、不同时间对A549细胞增殖的影响;使用1μg/mL土贝母苷甲处理A549细胞48 h作为处理组,对照组加入培养基培养48h;使用流式细胞仪分别检测两组细胞的周期分布及细胞凋亡率;并使用Western blot检测两...     

高碘对体外培养的人甲状腺滤泡上皮细胞的生物学作用及临床意义

为探讨高碘与甲状腺疾病的关系 ,2 0 0 2年 1月至 2 0 0 3年 5月 ,我们观察了碘对体外培养的甲状腺滤泡上皮细胞分泌功能变化的影响。现报告如下。1　材料与方法1 .1　甲状腺细胞原代培养及碘刺激试验　正常甲状腺组织取自甲状腺腺瘤手术中的腺瘤旁组织 ,常规甲状腺细胞原代培养 ,调整细胞浓度为 2× 1 0 5/ml,分 6组接种于 2 4孔培养板上 (每组复孔 4个 ) ,每孔加入细胞悬液 0 .5 ml。置于 37℃ ,5 % CO2 培养箱中培养 3天 ,观察细胞贴壁后继续培养 4天 ,隔日换液 1次 ,去除未贴壁的甲状腺细胞 ,待细胞呈次融合状态时 ,加入以培养液稀释的…     

人胚肺间充质干细胞体外培养及生物学特性的实验研究

目的建立体外培养人胚肺间充质干细胞（MSCs）的培养体系并探讨其部分生物学特性。方法取3～5个月的流产胎儿,按照人骨髓MSCs的体外培养方法,获得贴壁的人胚肺细胞,研究其形态、细胞周期和体外诱导分化潜能。结果人胚肺MSCs可在体外扩增培养,可传至17代以上,其形态及生长特点不发生明显改变,处于G0/G1期的细胞多,具有典型的干细胞增殖特点。其免疫表型与骨髓来源的MSCs相似。结论从人胚肺中可分离培养出MSCs,可以在体外扩增,并可诱导向成骨、软骨和脂肪细胞分化。     

柔肝中药对体外培养软骨细胞增殖能力及关节软骨低聚基质蛋白分泌的影响

目的 探讨柔肝中药对体外培养软骨细胞增殖能力及关节软骨低聚基质蛋白（COMP）分泌的影响。方法 采用分阶段酶消化法体外培养兔软骨细胞，以2×10^4／ml密度接种3代内细胞，以Ⅱ型胶原的免疫组织化学研究鉴定细胞。给予家兔临床等效剂量灌胃后，抽取含药血清培养细胞，分别用5％、10％的柔肝方含药血清（分给药后1、3、5h3个时间点）以及正常兔血清、小牛血清干预7d，采用四甲基偶氮唑蓝（MTF）法观察中药含药血清对体外培养的软骨细胞增殖的影响；体外培养人软骨细胞，采用柔肝复方组及单味柔肝药提取物直接添加体外培养体系3d，添加终浓度为10mg／ml。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测药物对体外培养的人软骨细胞COMP分泌的影响。结果 培养细胞经Ⅱ型胶原的免疫组织化学染色后有阳性表现，在对软骨细胞增殖的影响方面，柔肝方含药血清各组均优于兔血清组和小牛血清组，其中含药血清组的3h时间点总体优于1h及5h时间点（P〈0．05）；在对软骨细胞上清COMP分泌方面，柔肝复方及单方提取物组均有促进细胞分泌COMP的作用（P〈0．05），但两组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 柔肝方中药含药血清可以促进体外培养软骨细胞增殖；在药物直接干预的条件下，柔肝复方及单方提取物可以促进软骨细胞分泌COMP。     

游离脂肪酸对L-02和HLF细胞增殖及细胞外基质合成的影响

以MTT法、透明质酸(HA)放免测定法及^3H-脯氨酸掺入法，观察四种不同浓度的油酸、亚油酸和花生四烯酸对无血清培养正常成人肝细胞(L-02细胞)、人胚肺成纤维细胞(HLF细胞)增殖及合成细胞外基质(ECM)的影响。结果发现，油酸、亚油酸可影响HLF细胞和／或L-02细胞的细胞的增殖，促进其胶原蛋白和HA的合成，而花生四烯酸对其合成ECM的影响不明显。提示游离不饱和脂肪酸过多可促进肝纤维化的发生和发展。     

姜黄素对人子宫肌瘤细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察姜黄素对人子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法将对数生长期的人子宫肌瘤细胞分为两组,观察组加入终浓度分别为10、50、100μmol/L的姜黄素,对照组加入1‰的二甲基亚砜(DM-SO),分别于培养12、24、48、72 h后,采用MTT法测算细胞增殖抑制率,用流式细胞术检测细胞凋亡率。将对数生长期的细胞随机分为3组,A组加入终浓度100μmol/L的姜黄素,B组加入100μmol/L的线粒体ATP敏感钾通道开放剂二氮嗪及100μmol/L的姜黄素,C组加500μmol/L的线粒体ATP敏感钾通道阻断剂5-羟基癸酸脱氢酶(5-HD)及100μmol/L的姜黄素;培养48 h后,分别采用MTT法和流式细胞仪测算细胞增殖抑制率和凋亡率。结果随着姜黄素浓度的增加和作用时间的延长,细胞增殖抑制率逐渐减低(P均<0.05),而细胞凋亡率逐渐增加(P均<0.05)。A组细胞增殖抑制率和凋亡率分别为75.65%±9.42%、41.82%±6.12%,B组分别为17.66%±2.45%、32.46%±6.71%,C组分别为40.67%±5.46%、74.42%±8.47%,B组与A、C组比较,P均<0.05。结论姜黄素可抑制人子宫肌瘤细胞增殖并促进其凋亡,该作用可能与姜黄素抑制线粒体ATP敏感钾通道有关。     

生长抑素对人肝癌HepG2细胞增殖及cyclinD1、cyclinE蛋白表达的影响

目的探讨生长抑素治疗肝癌的作用机制。方法取对数生长期HepG2细胞以不含血清的培养液使其周期同步化,以含血清培养液继续培养24h后随机分为观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组,前三组分别加入质量浓度为100、200、400μg／（kg·d）的生长抑素,对照组加入等体积RPMll640培养液24—72h。MTT比色法观察各组细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期分布,免疫组化法检测周期素D1（cyclinD1）、周期素E（cyclinE）蛋白表达。结果观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组不同时间点细胞增殖抑制率均显著高于对照组,且同一时间点观察Ⅲ组〉观察Ⅱ组〉观察I组,同组中72h〉48h〉24h（P〈0．05、0．01）;观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组G,期细胞比例均显著高于对照组,观察Ⅱ、Ⅲ组S期细胞比例均显著低于对照组（P〈0．05、0．01）;观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组cyclinD1、cyclinE蛋白水平均显著低于对照组,且观察Ⅲ组〈观察Ⅱ组〈观察Ⅰ组（P〈0．05、0．01）。结论生长抑素可通过下调cyclinD1、cyclinE表达抑制HepG2细胞增殖,此可能为其治疗肝癌的作用机制之一。