玻璃化和程序化冻融人卵裂期胚胎结果分析

目的探讨冻融周期中玻璃化和程序化两种不同方法对人卵裂期胚胎的冷冻复苏效果。方法回顾性分析35例玻璃化冷冻复苏周期和123例程序化冷冻复苏周期资料,比较冷冻胚胎复苏后的胚胎存活率、完整性胚胎存活率,冻融前后的优质胚胎率,临床妊娠率、胚胎种植率。结果①玻璃化法与程序化法冷冻前优质胚胎率无显著性差异（70．83％和71．97％,P〉0．05）,冷冻后优质胚胎率差异显著（63．89％和47．75％,P〈0．05）,复苏后的胚胎存活率差异显著（95．83％和86．16％,P〈0．05）,完整性胚胎存活率差异极显著（90．28％和63．32％,P〈0．01）;②玻璃化法与程序化法临床妊娠率差异显著（48．57％和29．27％,P〈0．05）,种植率差异显著（31．88％和18．83％,P〈0．05）。结论在冻融人卵裂期胚胎的过程中,玻璃化优于程序化,可以更好的提高累积临床妊率。     

玻璃化冷冻保存技术在人类卯裂期胚胎的应用分析

目的分析玻璃化冷冻保存技术在人类卵裂期胚胎的应用价值,观察临床效果。方法回顾性分析2011年1月～2012年12月期间在我院生殖中心行玻璃化冷冻解冻患者共272个周期的妊娠情况。结果玻璃化冷冻解冻共657枚胚胎,全部卵裂球存活612枚（93．15％）,存活率98．33％（646／657）;共冷冻解冻272个周期,均有存活胚胎可移植,妊娠率37．13％（101／272）,种植率19．97％（129／646）。结论玻璃化冷冻保存技术在人类卵裂期胚胎中可取得较好的临床效果,与新鲜胚胎移植妊娠结局相当。     

玻璃化冷冻法和程序化冷冻法对人卵裂期胚胎冷冻复苏效果及临床结局的比较

目的比较辅助生殖技术中玻璃化和程序化2种冷冻方法对卵裂期胚胎的冷冻复苏效果及临床结局。方法对3396个玻璃化冷冻周期和685个程序化冷冻周期的相关资料进行回顾性统计学分析,比较解冻后胚胎复苏率、优质胚胎率、临床妊娠率和胚胎着床率等指标。结果玻璃化冷冻后的胚胎复苏率、优质胚胎率、临床妊娠率和胚胎着床率均显著高于程序化冷冻,且复苏周期移植取消率显著低于程序化冷冻。结论相对于程序化冷冻法,玻璃化冷冻法具有更好的冷冻复苏效果以及临床结局,更适用于卵裂期胚胎的冷冻保存。     

种属和发育期及不同实验条件对卵裂期胚胎冷冻复苏结局的影响

背景：人卵裂期胚胎冷冻复苏的研究中,不同的实验条件及实验动物模型是否与人类胚胎具有相同的敏感性从而反映出实验方案的优劣值得探讨。 目的：观察胚胎种属和发育期及不同冷冻条件对卵裂期胚胎冷冻复苏结局的影响。 方法：将人卵裂期胚胎作为对照组,将KM小鼠胚分为2细胞,4细胞,8细胞组。各组胚胎随机采用以下实验方案：①冷冻操作环境温度18~20 ℃、24~26 ℃和37 ℃。②慢速程序化方案、自制straw叶片玻璃化方案和CPS玻璃化方案。③与玻璃化液接触时间< 40 s、40~60 s和60~90 s。各组胚胎比较不同实验条件下胚胎复苏率和培养24 h发育率。 结果与结论：①对照组24~26 ℃冷冻操作环境温度复苏率高于37 ℃冷冻操作环境(P < 0.05)。②对照组和4细胞鼠胚组采用自制straw叶片玻璃化方案复苏率高于慢速程序化方案(P < 0.05),培养24 h胚胎发育率差异无显著性意义(P > 0.05)。③各组胚胎与冷冻保护剂接触不同时间胚胎复苏率差异无显著性意义(P > 0.05)。表明卵裂期胚胎玻璃化冷冻复苏效果优于慢速程序化,24~26 ℃操作环境、减少冷冻保护剂剂量和缩短接触时间可改善玻璃化冷冻复苏结局;相同冷冻条件下,胚胎种属和发育阶段对冷冻复苏结局有影响,4细胞鼠胚更适合作为研究人类卵裂期胚胎冷冻复苏的实验模型。     

玻璃化法与慢速程序法对人第3天胚胎冷冻复苏效果的比较

目的比较玻璃化法与慢速程序法对人第3天（D3）胚胎冷冻复苏的效果。方法将接受体外受精-胚胎移植患者的取卵周期移植后剩余的D3胚胎分别进行玻璃化法或慢速程序法冷冻,比较胚胎解冻后的复苏率、妊娠率等指标。结果玻璃化法冷冻解冻78个周期,228个胚胎,存活210个（92.11%）,完整胚胎172个（81.90%）,移植77个周期,临床妊娠32个周期（41.56%）,种植率20.95%;慢速程序法冷冻解冻157周期,702个胚胎,存活405个（57.69%）,完整胚胎207个（51.11%）,移植148周期,临床妊娠58个周期（39.19%）,种植率17.78%。玻璃化法的胚胎复苏率、完整胚胎率高于慢速程序法（P〈0.05）;玻璃化法的临床妊娠率和种植率略高于慢速程序法,但差异无统计学意义。结论玻璃化法的冷冻复苏率比慢速程序法高,更适用于人D3胚胎的冷冻保存。     

OPS法玻璃化冷冻小鼠不同成熟时期卵母细胞的研究

目的比较OPS法玻璃化冷冻小鼠不同成熟时期卵母细胞解冻后体外成熟、体外受精及胚胎发育能力。方法收集ICR小鼠生殖泡期（GV）未成熟卵和成熟卵,分五组行OPS（open pulled straw,开放式拉细麦管）法玻璃化冷冻,Ⅰ组：直接冷冻GV期卵;Ⅱ组：GV期卵在体外培养8h后冷冻;Ⅲ组：GV期卵在体外培养16h后冷冻;Ⅳ组：GV期卵体外培养成熟（IVM）后冷冻;Ⅴ组：直接冷冻体内成熟卵。解冻后比较各组卵受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率。结果Ⅰ组（GV期卵）冷冻解冻后存活率达57．5％,显著高于Ⅱ组（34．1％）,Ⅲ组（32．0％）,Ⅳ组（29．6％）及Ⅴ组（31．0％）（P〈0．01）。各组体外受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率比较,差异不显著（P〉0．05）。结论采用OPS法玻璃化冷冻小鼠卵母细胞,冷冻GV期卵较冷冻其它成熟时期卵效果好。     

人卵裂胚和囊胚的玻璃化冷冻及临床应用

目的探索人卵裂胚及囊胚玻璃化冷冻的有效性。方法来源于生殖中心IVF或ICSI助孕的共270个胚胎（卵裂胚167个,囊胚103个）,用Cryoloop作为胚胎载体和相同的玻璃化方法进行冷冻、复苏和移植,观察其复苏存活率、临床妊娠率、植入率和流产率。结果卵裂胚和囊胚的复苏率、植入率和妊娠率分别为97.0%、33.1%、42.9%和96.1%、43.9%、52%,流产率分别为13.3%和15.4%。结论以Cryoloop为胚胎载体,使用相同的玻璃化冷冻方法对人类卵裂胚和囊胚均可获得同样理想的冷冻效果和临床结局。     

冷冻方法对人卵裂期冷冻胚胎移植周期妊娠结局的影响

目的探讨慢速冷冻和玻璃化冷冻方法对人卵裂期冷冻胚胎移植周期妊娠结局的影响。方法回顾性分析2011年1月~2015年12月在北京大学第一医院进行卵裂期冷冻胚胎移植的1331个周期,包括慢速冷冻周期431个和玻璃化冷冻周期900个,比较两种不同冷冻方法的胚胎复苏率、完整胚胎率、临床妊娠率、种植率、流产率等各项指标,并分析卵裂球损伤对胚胎发育潜能的影响。结果玻璃化冷冻的胚胎复苏率(92.53%)、完整胚胎率(75.43%)、临床妊娠率(45.72%)、种植率(27.41%)高于慢速冷冻(76.93%、48.46%、39.52%、19.88%,P0.05);而流产率分别为12.20%、12.56%(P0.05);周期取消率分别为3.71%、1.33%(P0.05)。慢速冷冻移植0、1、2、3个无卵裂球损伤胚胎的临床妊娠率分别为:36.2%、37.7%、42.0%、44.3%(P0.05);玻璃化冷冻移植0、1、2、3个无卵裂球损伤胚胎的临床妊娠率分别为:20.5%、42.3%、48.8%、54.1%(P0.05)。结论玻璃化冷冻法更适合于人卵裂期胚胎冷冻保存,其冷冻胚胎移植周期的妊娠结局要优于慢速冷冻法;卵裂球损伤对玻璃化冷冻复苏胚胎的发育潜能影响较大。     

人卵母细胞冷冻保存的初步研究

目的比较慢速冷冻、冷冻环和自制叶片2种不同载体玻璃化冷冻应用于人卵母细胞冷冻保存的效果。方法经患者本人同意和伦理委员会的批准,收集未成熟的MI期卵,体外自然成熟后冷冻保存,解冻121个卵,存活卵用ICSI方法受精,比较慢速冷冻、玻璃化冷冻（冷冻环和自制叶片2种载体）在存活率、受精率、卵裂率、优质胚胎率方面的差异,同时与常规新鲜MⅡ卵ICSI后相应指标进行比较。结果人卵母细胞玻璃化冷冻能取得较好的存活率,明显高于慢速冷冻;玻璃化冷冻后的存活卵母细胞ICSI受精率与常规ICSI无明显差异,但卵裂率、优质胚胎率明显低于常规ICSI。结论玻璃化冷冻人卵母细胞能取得较高的存活率;自制叶片和冷冻环都是较为理想的冷冻载体,二者用于玻璃化冷冻效果相近,自制叶片具有成本低、易操作的优点;体外自然成熟卵玻璃化冷冻后继续发育潜能降低,人卵母细胞的冻存还需要更多的研究。     

激光辅助孵化在冻融胚胎移植中的应用探讨

目的探讨冻融胚胎移植（FET）周期应用激光辅助孵化（AH）的效果。方法回顾分析2012年6月～12月我生殖中心FET资料,常规采用玻璃化冷冻卵裂期胚胎,复苏后对于透明带异常或年龄≥35岁或种植失败≥1次或胚胎质量差患者选择性应用激光辅助孵化处理（激光削薄透明带长度为30～40μm,深度为透明带外2／3）。结果FET198个周期,总临床妊娠率53．54％,AH共155个周期,冷冻胚胎复苏率92．06％,平均移植胚胎2．54±0．70个,临床妊娠率为51．61％,种植率25．64％,流产率15．0％,多胎率23．75％,无单卵双胎发生。结论选择性对玻璃化冻融卵裂期胚胎实施激光辅助孵化可获得满意的FET临床妊娠率。     

116例非优质胚胎冻融的临床分析

目的探讨非优质胚胎在体外受精-胚胎移植中的冷冻价值。方法回顾性分析116例非优质胚胎冷冻移植周期。根据结局分为妊娠组与非妊娠组,比较两组中不同发育速度,均匀度以及碎片比例的胚胎所占比例。结果妊娠组中,卵裂球大小严重不均和碎片比例〉20%的胚胎比例显著低于非妊娠组,碎片0-20%的胚胎比例则显著高于非妊娠组。卵裂球大小均匀或明显不均,以及不同发育速度的胚胎比例,二者并无显著差异。结论选择性冷冻非优质胚胎,有助于提高体外受精-胚胎移植的累积妊娠率,改善临床治疗结局。     

冷冻载体对扩张期囊胚解冻结局的影响

背景：囊胚的冷冻复苏对人类辅助生殖技术的发展具有重要意义,合适的冷冻载体可以降低冷冻毒性提高冷冻效率,是改善囊胚冷冻复苏结局的研究热点之一。 目的：观察不同冷冻载体对昆明小鼠扩张期囊胚玻璃化冷冻解冻结局的影响。 方法：以新鲜昆明小鼠扩张期囊胚作为对照组,随机选取同期小鼠胚进行玻璃化冷冻解冻,冷冻前使用激光仪行人工皱缩,使用玻璃化法进行冷冻和解冻,按实验载体不同分为冷冻环组、闭合拉细麦管组和自制麦管叶片组;冷冻环组和自制麦管叶片组投入液氮前与冷冻保护剂接触时间 <40 s,40-60 s和60-90 s;解冻后囊胚使用胚胎囊期培养基添加10%血清替代品进行微滴培养。比较解冻后组间囊胚丢失率、囊胚复苏率和培养24 h囊胚孵出率。 结果与结论：相比闭合拉细麦管组,冷冻环组和自制麦管叶片组的囊胚丢失率降低,胚胎复苏率增高(P < 0.05),各冷冻组复苏囊胚培养24 h孵出率均低于对照组(P < 0.05)。使用冷冻环载体和自制麦管叶片载体冷冻解冻囊胚,投入液氮前与冷冻保护剂接触时间90 s内不同时间胚胎复苏率和孵出率的比较差异无显著性意义。结果说明冷冻环载体和自制麦管叶片载体用于昆明小鼠扩张期囊胚玻璃化解冻复苏的效果较好。     

超快速玻璃化冷冻人早期胚胎的临床应用价值初探

目的观察cryotop超快速玻璃化冷冻人早期胚胎的临床效果并探讨其应用价值。方法玻璃化冷冻试剂盒购自日本KITAZATO Biopharma公司,对新鲜周期胚胎移植后未妊娠患者的胚胎施行胚胎复苏,观察胚胎复苏后的存活率,胚胎分级和临床妊娠情况。结果共行胚胎复苏63个周期,201个胚胎,胚胎复苏后存活189个,胚胎复苏存活率为94.03%（189/201）;移植胚胎63个周期,移植胚胎总数187个,平均每周期移植胚胎2.97个（187/63）;临床妊娠30个周期,临床妊娠率为47.62%（30/63）,种植率为20.32%（38/187）,多胎率为23.33%（7/30）,流产率为6.67%（2/30）。结论 cryotop超快速玻璃化冷冻法简便且胚胎存活率高,是一种较好的冷冻人早期胚胎的方法。     

Comparison of the survival of human biopsied embryos after cryopreservation with four different methods using non-transferable embryos

BACKGROUND: The standard embryo cryopreservation method is still less than optimal for biopsied embryos. The aim of this study was to compare the survival of biopsied embryos cryopreserved with four different methods using non-transferable embryos. METHODS: Abnormal embryos from one or three pronuclei and spare embryos of grade 3 and 4 were used for this study. Non-biopsied embryos were cryopreserved using the standard method as control. Biopsied embryos were cryopreserved using four methods as follows: standard method, modified freezing method, modified thawing method and vitrification. Blastomere survival and blastulation of frozen-thawed embryos were compared between the different methods. RESULTS: The proportion of embryos with > or = 50% blastomere survival and total blastomere survival rate of biopsied embryos were significantly higher with vitrification than the other three methods. Both the modified freezing and modified thawing methods had significantly higher embryo survival and total blastomere survival rates than standard methods. However, there was no significant difference in blastulation of surviving embryos in all the five groups. CONCLUSIONS: Non-transferable embryos derived from clinical IVF/ICSI are useful for evaluation of the optimal freezing procedures for biopsied embryos. Vitrification increases the survival rate of human biopsied embryos above standard and modified cryopreservation methods.     

提前复苏分裂速率较慢胚胎对妊娠率的影响

目的探讨冻融胚胎移植(FET)周期中,提前一日复苏冷冻前分裂速率较慢的胚胎对妊娠结局的影响。方法回顾性分析哈尔滨医科大学附属第一医院生殖中心2006年3月至2009年9月561例FET周期中,移植冷冻前分裂速率较慢胚胎的周期共88个。其中,33个周期为移植当日复苏胚胎,培养1-4h后移植。55个周期为移植前一日复苏胚胎,培养18-24h移植。比较两组胚胎移植后的妊娠率和种植率。结果移植当日复苏组与移植前一日复苏组妊娠率(9.1%,32.7%)与种植率(4.2%,15.5%)均有显著性差异(P﹤0.05);而患者平均年龄、移植前平均内膜厚度、胚胎复苏存活率及100%卵裂球存活率均无显著性差异(P﹥0.05)。结论对冷冻前分裂速率较慢胚胎提前一日复苏,可提高临床妊娠率和种植率。     

超速玻璃化冷冻载体Cryotop和Cryoloop冻存小鼠卵裂期胚胎的效果比较

目的应用冷冻薄膜(Cryotop)和冷冻环(Cryoloop)两种超速玻璃化冷冻载体,氯化胆碱替代氯化钠的低钠磷酸盐缓冲液配置的玻璃化冷冻保护剂冷冻小鼠胚胎,比较两种载体的效果差异。方法将300个小鼠胚胎随机分为3组:对照组60个、Cryotop组120个和Cryoloop组120个。比较复苏后胚胎存活率和继续发育能力。结果 Cryotop组复苏后胚胎存活率达93.3%,Cryoloop组90.4%,无显著性差异(P>0.05);继续发育率:Cryotop组和Cryoloop组比较,4细胞率分别为48.2%和29.8%(P<0.05),囊胚率分别为31.5%和16.1%(P<0.05),差异具有显著性。结论Cryotop和Cryoloop两种玻璃化冷冻载体相比,Cryotop操作更为简便,复苏后小鼠胚胎获得了更高的继续发育能力。     

胚胎密度对卵裂期优质胚胎率的影响

目的 通过调整协变量来探索培养的胚胎密度与第3天卵裂期胚胎发育结果之间的相关性.方法 回顾性分析206对夫妇1196个胚胎体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的资料.培养条件为低氧,培养液每微滴体积为30 μl.以第3天卵裂期胚胎的优质胚胎率为终点指标对胚胎质量进行评价.选择女方年龄,男方年龄,窦卵泡数,抗苗勒管激素...     

常规IVF受精失败补救ICSI后行冻融胚胎移植的临床价值

目的探讨冻融胚胎移植在常规体外受精(IVF)失败后补救卵胞浆内单精子注射(L-ICSI)中的应用价值。方法在12个常规体外受精失败周期中应用ICSI对未受精的MⅡ期卵子进行显微授精,将获得的优质胚胎进行冷冻,再择期行冻融胚胎移植。结果对93个未受精的MⅡ卵子接受L-ICSI,受精63枚,受精率为67.7%(63/93),异常受精3枚(2枚1PN,1枚3PN),57个正常受精卵发生卵裂,卵裂率为95.0%(57/60),优质胚胎率为43.9%(25/57),10例患者冷冻胚胎25枚,其中4例采用程序化冷冻,6例采用玻璃化冷冻。9个患者行冻融胚胎移植,共移植胚胎18枚(其中解冻后胚胎碎裂死亡5枚),其中1个周期因冻融后2个胚胎碎裂放弃移植,2例获得临床妊娠,1例分娩出正常婴儿,1例正在妊娠中,临床妊娠率为22.2%。结论 ICSI可使常规体外受精失败的卵子再受精,冻融胚胎移植可以解决胚胎与子宫内膜不同步的问题,获得相对满意的临床结局,具有一定的应用价值。