透骨消痛胶囊含药血清对退变关节软骨细胞表达TNF-α、IL-1β的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng.mL-1IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24、48、72 h后用TaqMan real-time PCR法检测各组mRNA表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞TNF-α、IL-1β的表达。     

透骨消痛胶囊对兔骨性关节炎软骨细胞MAPK信号通路表达的影响

目的研究透骨消痛胶囊对兔骨性关节炎软骨细胞MAPK信号通路表达的作用机制。方法成年健康6月龄新西兰兔40只,采用抽签法随机分为正常组、造模组,造模组用4%木瓜蛋白酶双膝关节腔注射建立骨性关节炎模型;造模成功后造模组采用抽签法随机分为模型组、对照组、实验组,实验组用透骨消痛胶囊水溶液100 mL/d灌胃,对照组用壮骨关节胶囊水溶液100 mL/d灌胃,Western Rlot检测MAPK信号通路p—ERK1/2、p—JNK的蛋白表达。结果实验组治疗后,关节软骨中p-ERK1/2蛋白表达高于模型组、对照组（P<0.05）,p—JNK蛋白表达低于模型组、对照组（P<0.05）。结论透骨消痛胶囊可通过上调兔骨性关节炎软骨细胞p—ERK1/2蛋白的表达,下调p-JNK蛋白的表达,促进软骨细胞增殖、分化,抑制其凋亡。     

透骨消痛胶囊调节Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路抑制骨关节炎炎症反应的机制研究

目的:探讨透骨消痛胶囊调节Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路抑制骨关节炎炎症反应的作用机制.方法:取4周龄SD雄性大鼠的双侧膝关节软骨,经Ⅱ型胶原酶消化法获得大鼠软骨细胞,并采用Ⅱ型胶原免疫组化法对所得细胞进行鉴定;取第2代软骨细胞分为空白组、模型组(10 ng/mL LPS干预8 h)、抑制剂组(10...     

透骨消痛颗粒对BMSCs向软骨细胞分化的影响

目的 探讨透骨消痛颗粒舍药血清诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的分子生物学机制. 方法 从5只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs,体外传代培养,取第3代BMSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组,进行培养1、2周后,通过透射电镜、RT-PCR等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响. 结果 透射电镜观察可见软骨表型化的BMSCs多数为近椭圆形,表面突起多,细胞核大,粗面内质网丰富,内质网池扩张明显,高尔基体丰富.在TGF-β3等诱导因子作用下,透骨消痛颗粒舍药血清可以促进Sox9 mRNA、Cbfa1mRNA在细胞分化过程中的表达,与软骨诱导剂组相比表达量有显著性差异(P<0.05). 结论 透骨消痛颗粒含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化.     

透骨消痛胶囊含药血清对退变软骨细胞表达caveolin-1、p38MAPK的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养大鼠退变软骨细胞表达caveolin-1、p38MAPK的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng/mL IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24 h、48 h、72 h后用TaqMan real-time PCR和Western Blot法检测各组mRNA和蛋白的表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组caveolin-1和p38MAPK基因、蛋白相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,统计均有显著性差异(P0.05)。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞caveolin-1、p38MAPK的表达。     

卡维地洛对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌重塑中Rho/Rock信号通路的影响

目的研究卡维地洛对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌重塑中的作用及对Rho/Rock信号通路的影响。方法 24只雄性SD大鼠随机分成3组:空白对照组(对照组)、ISO模型组(模型组)、卡维地洛(Carvedilol Car)组(治疗组),每组8只。模型组和治疗组皮下多点注射ISO[5 mg/(kg·d)×10 d]建立大鼠心肌纤维化模型,其中治疗组给予Car[10 mg/(kg·d)]灌胃,模型组及对照组每日给予相同体积的生理盐水灌胃。6周后取左室心肌组织进行MASSON染色、免疫组织化学染色,分别检测胶原容积分数(CVF)、心肌组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)表达量;RT-PCR法检测心肌组织RhoA和Rho激酶(Rock)mRNA的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠CVF增加,TGF-β1表达增高(P<0.01),左室组织RhoA和Rho激酶mRNA表达上调(P<0.01);与模型组比较,治疗组CVF表达下降(P<0.01),TGF-β1、RhoA和Rho激酶mRNA表达减少(P<0.01),但均仍高于对照组(P<0.01)。结论 ISO诱导心肌纤维化伴有Rho/Rock信号通路激活,卡维地洛能抑制Rho/Rock信号转导通路的活性、抑制TGF-β1表达,减轻心肌纤维化。     

透骨消痛颗粒对兔软骨细胞周期的影响

目的 观察透骨消痛颗粒对兔软骨细胞周期的影响. 方法 采用流式细胞仪检测透骨细胞颗粒干预后兔软骨细胞周期的变化. 结果 含药血清能够刺激软骨细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期,干预48 h后,G0/G1期细胞比例降低,S期与G2/M期细胞之和增加,与空白组比较有显著性差异(P＜0.05). 结论 透骨消痛颗粒含药血清能有效地促进软骨细胞的增殖.     

TNF-α信号传导通路的研究现状

肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor TNF)是一种具有广泛生物学效应的细胞因子.巨噬细胞产生的TNF被命名为TNF-α,T细胞分泌的淋巴毒素(LT)被命名为TNF-β.目前,多数情况下,TNF指的是TNF-α.它和细胞膜上的特异性的受体结合后发挥促进细胞生长、分化、凋亡及诱发炎症等重要作用.由于TNF-α与许多人类疾病如肿瘤等直接相关,有关TNF-α信号通路的研究成为近十年生物医学研究领域的热点.下面就有关TNF-α信号通路的研究作一综述.     

透骨消痛胶囊对KOA大鼠关节软骨uPA系统相关调节因子的影响

目的观察透骨消痛胶囊对膝骨性关节炎(KOA)大鼠软骨中尿激酶型纤溶酶原激活剂(u PA)系统相关调节因子基质金属蛋白酶3(MMP-3)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,探讨透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的作用机制。方法清洁级SD大鼠144只,分为空白组(24只)与造模组(120只)。造模组采用关节腔注射4%木瓜蛋白酶复制KOA模型,造模成功后随机分为模型组、壮骨关节丸组和透骨消痛胶囊低、中、高剂量组,空白组与模型组分别给予相应剂量的生理盐水灌胃,壮骨关节丸组和透骨消痛胶囊低、中、高剂量组分别给予相应药物灌胃。免疫组化反应观察MMP-3、IL-1β和TNF-α阳性表达;Western blot检测MMP-3、IL-1β和TNF-α蛋白表达情况。结果免疫组化反应显示,透骨消痛胶囊组和壮骨关节丸组MMP-3、IL-1β和TNF-α阳性率均明显降低,透骨消痛胶囊中剂量组和壮骨关节丸组两组间比较无显著性差异;Western blot检测结果与免疫组化具有相同的趋势。结论透骨消痛胶囊治疗KOA的部分作用机制是有效抑制u PA系统相关调节因子MMP-3、IL-1β和TNF-α的表达。     

阿魏酸钠干预对Rho/Rock信号通路的影响及其对肝脏的保护作用

［摘 要］ 目的：探讨阿魏酸钠(SF)干预后对Rho/Rock信号通路相关蛋白表达及肝脏的影响,阐明其对脏器的保护作用。方法：雄性Wistar大鼠20只,分为正常对照组、模型组、阳性药组及SF干预组。除正常对照组外,其余组大鼠注射盐酸异丙肾上腺素（Iso）15 mg/kg诱发大鼠心肌纤维化模型;稳定2 d后,除模型组外,其余2组给予SF和贝那普利。利用Masson染色分析给予SF后心肌胶原的含量变化;RT-PCR法分析Rho A和Rock mRNA表达;采用免疫组织化学染色分析心肌Rock蛋白表达;拉曼光谱分析肝脏的损伤。结果：与正常对照组比较,注射Iso后3周,Rho A和Rock mRNA表达即有所增加 (P<0.01);给予SF和贝那普利后,Rho A和Rock基因和蛋白表达水平较模型组明显降低(P<0.01);拉曼光谱分析结果显示,给予SF后大鼠肝脏组织的峰位较模型组向右移动1个单位,趋近正常对照组峰位。结论：SF可能通过阻断Rho/Rock信号通路进而起到抑制纤维化的作用,同时又起到肝脏保护作用。     

透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的化学空间分析

目的从化学空间角度探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法运用计算机方法对透骨消痛胶囊中分子组成的数据集及药物分子/类药分子数据集进行化学空间分析,对一些特征描述符的分布进行了描述,同时采用主成分分析方法将多维化学空间映射到二维空间以得到更直观的图像。结果透骨消痛胶囊中分子与药物分子/类药分子在化学空间有较好的重叠。结论本方法直观地揭示了透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的重要意义。     

LPA对子宫颈癌干细胞生物学特性的影响及对RhoA/Rock2通路调控作用

目的:研究和探讨溶血磷酸酯(lysophosphatidic acid,LPA)对子宫颈癌干细胞生物学特性的影响及对RhoA/Rock2通路的调控作用,进一步明确宫颈癌的发病机制,并为将来研制宫颈癌靶点药物提供理论依据.方法:以宫颈癌Siha细胞株为原代细胞,球囊培养富集宫颈癌干细胞,观察细胞的克隆形成能力,检测细胞表...     

肿瘤坏死因子-α抑制剂己酮可可碱对糖尿病大鼠阴茎海绵体RhoA/Rho激酶信号通路的影响

目的：研究糖尿病大鼠阴茎海绵体组织中RhoA/Rho激酶信号通路改变以及肿瘤坏死因子（TNF）吨抑制剂己酮可可碱（PTX）对该信号通路和阴茎勃起功能的影响。方法：SD大鼠分为对照组、糖尿病组和糖尿病药物干预组;高脂喂养联合低剂量链脲佐菌素注射诱导糖尿病;腹腔埋置微渗透泵持续慢性给药;在体记录阴茎海绵体窦内压（ICP）：ELISA检测血清TNF-α浓度;Western blot检测海绵体组织中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和神经型一氧化氮合酶（nNOS）以及RhoA/Rho激酶信号通路分子的蛋白表达水平。结果：与糖尿病组比,糖尿病药物干预组血清TNF-α浓度明显下降（P〈0.01）,阴茎海绵体组织中RhoA、ROCK1和p-MYPT1表达下调（P〈0.05）,eNOS和nNOS表达增加（P〈0.05）,阴茎ICP指数显著升高（P〈0.05）。结论：TNF-α促进阴茎海绵体组织RhoA/Rho激酶信号通路的激活与表达上调,参与糖尿病性勃起功能障碍的发病机制：PTX对糖尿病大鼠的勃起功能有保护作用。     

胆仙咳喘宁胶囊对慢性支气管炎大鼠NF-κB、TNF-α的影响

目的:探讨胆仙咳喘宁胶囊治疗慢性支气管炎(慢支)的作用机制。方法:48只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照(DXM)组及胆仙咳喘宁高、中、低剂量组。除空白对照组外,均采用改良烟熏法复制慢支模型。各组大鼠分别用DXM、胆仙咳喘宁及0.9%Na Cl溶液灌胃干预,连续干预21 d。采用免疫组化染色方法(PV二步法)测定各组大鼠肺组织中NF-κB(p65)表达;采用固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)测定各组大鼠的血清及肺组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果:模型组大鼠肺组织中NF-κB(p65)表达较空白对照组明显升高(P0.01);胆仙咳喘宁高、中、低剂量组及DXM组大鼠肺组织中NF-κB的表达显著低于模型组(P0.01,P0.05)。模型组大鼠血清和肺组织中TNF-α水平较空白对照组均明显增加,胆仙咳喘宁高、中、低剂量组及DXM组大鼠血清及肺组织中TNF-α含量均明显低于模型组(P0.05,P0.01)。结论:胆仙咳喘宁胶囊可能通过抑制NF-κB的活化抑制炎症因子TNF-α的表达。     

依那西普对大鼠切口痛和脊髓TNF-α表达的影响

目的 观察依那西普对切口疼痛模型大鼠疼痛程度、痛阈和脊髓肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 雄性 SD 大鼠 60 只随机分为模型对照组(C组)和依那西普组(E组),按术后-I(术前1 h)、4、8、16和 24 h 随机分配大鼠,每组每时间点 6 只.戊巴比妥钠麻醉大鼠后,对大鼠左足底实施手术刺激;C组大鼠鞘内注射生理盐水10 μl,E组大鼠鞘内注射可溶性 TNF-α受体依那西普 100 μg(10 μ1).用 Dynamic Plantar Aesthesiometer 和 Plantar test 7375 分别测定大鼠机械性痛阈和热痛阈;用RT-PCR方法测定腰脊髓 TNF-α mRNA的表达,用 Western blot 方法测定脊髓TNF-α蛋白的表达.结果 ①术后两组大鼠累积疼痛评分(CPS)均升高(P<0.01),E组术后各时间点 CPS 低于 C 组(P<0.05或<0.01).②术后两组大鼠机械性痛阈(HWMT)和热痛阈(HWTL)明显下降(P<0.01),术后各时间点 E组大鼠 HWMT、HWTL 均明显高于 C 组(P<0.05或P<0.01).③术后两组大鼠脊髓 TNF-αmRNA及蛋白表达均上调(P<0.01),术后各时间点 E 组大鼠脊髓 TNF-αmRNA 及蛋白表达水平均明显低于 C 组(P<0.05或P<0.01).结论 大鼠脊髓 TNF-α参与了手术后疼痛的产生和维持,可溶性 TNF-α受体依那西普可抑制大鼠切口痛和脊髓 TNF-αmRNA 及蛋白表达.     

楮实子对肝星状细胞增殖、凋亡及TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路的影响

目的探究楮实子对肝星状细胞(HSC)增殖、凋亡及Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)/肿瘤坏死因子-α(TNF-α)信号通路的影响。 方法体外培养大鼠肝星状细胞系(HSC-T6),正常培养细胞作为空白组;使用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激细胞24 h后,分别添加不同质量浓度(0、1、5、10 g/L)的楮实子培养细胞,依次作为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法检测楮实子对HSC-T6细胞增殖、凋亡的影响;ELISA法检测HSC-T6细胞上清液中TNF-α、白细胞介素-6(IL-6)含量;Western blotting法检测HSC-T6细胞中TLR4、NF-κB、TNF-α蛋白表达。 结果楮实子可抑制活化的HSC-T6细胞增殖,促进其凋亡,且呈质量浓度依赖性(P＜0.05);楮实子可降低活化的HSC-T6细胞上清液中TNF-α、IL-6水平,下调细胞中TLR4、NF-κB、TNF-α蛋白水平,并均呈质量浓度依赖性(P＜0.05)。 结论楮实子可抑制HSC-T6细胞增殖,促进HSC-T6细胞凋亡,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路激活有关。     

透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的多向药理学研究

目的 研究透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的药理学机制.方法 利用生物网络的度分布、路中心、最近距离中心、特征路径长度、异质性等网络特征参数,对透骨消痛胶囊中分子配体-靶作用网络和药物库中药物分子配体-靶作用网络对照研究透骨消痛胶囊的药理学机制.结果 2个网络都属于无标度网络,存在一些"关键节点",2个网络的异质性和特征路径...     

3种非甾体抗炎药对大鼠骨关节炎关节软骨细胞IL-1β、TNF-α、IL-1α表达的影响

目的:探讨长期应用塞来昔布、布洛芬、吲哚美辛对大鼠骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨细胞白细胞介素-1β(in-terleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、细胞白细胞介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)表达的影响。方法:采用左侧跟腱切除术建立Wistar大鼠同侧膝关节OA模型,分4组,每日给赛来昔布24 mg/kg(celecoxib,CE)组、布洛芬72 mg/kg(ibuprofen,IBP)组、吲哚美辛9 mg/kg(indomethacin,IN)组及生理盐水(normal saline,NS)组。用免疫组织化学法观察3、6、9个月后关节软骨细胞IL-1β、TNF-α、IL-1α表达的变化。结果:①连续用药3月,CE对软骨细胞IL-1β、TNF-α表达无明显影响,抑制IL-1α的表达;IBP促进软骨细胞IL-1β、TNF-α的表达,对IL-1α的表达无明显影响;IN轻度促进软骨细胞IL-1β表达,增强TNF-α的表达,对IL-1α的表达无明显影响。②连续用药6月,CE对软骨细胞IL-1β表达无明显影响,轻度抑制TNF-α、IL-1α表达;IBP轻度促进软骨细胞IL-1β的表达,促进TNF-α表达,轻度抑制IL-1α的表达;IN轻度抑制软骨细胞IL-1β,抑制TNF-α表达,轻度抑制IL-1α的表达。③连续用药9月,CE明显抑制软骨细胞IL-1β的表达,抑制TNF-α、IL-1α的表达;IBP抑制软骨细胞IL-1β、TNF-α的表达,轻度抑制IL-1α的表达。结论:CE抑制软骨细胞IL-1β、TNF-α、IL-1α的表达,可减轻OA关节软骨的损害,IBP、IN在不同时期对软骨细胞IL-1β、TNF-α、IL-1α表达的影响有所不同,其总体抑制效应不明显。     

透骨消痛胶囊干预膝骨性关节炎早期COX-2炎症途径的实验研究

目的探讨透骨消痛胶囊对膝骨性关节炎早期COX-2炎症途径的影响,从炎症途径阐明透骨消痛胶囊治疗膝OA的作用机制。方法改良Hulth法建立骨关节炎动物模型,随机分为6组,模型组、对照组(壮骨关节丸组)、实验Ⅰ组(透骨消痛胶囊低剂量组)、实验Ⅱ组(透骨消痛胶囊中剂量组)、实验Ⅲ组(透骨消痛胶囊高剂量组)及正常组,灌胃给药4周后处死动物取材,行关节内COX-2、PGE2浓度检测。结果骨性关节炎关节局部表达COX-2,透骨消痛胶囊可降低关节液中PGE2含量以及滑膜、软骨中COX-2水平,其中透骨消痛胶囊中剂量组及高剂量组作用更明显,与透骨消痛胶囊低剂量组及对照组比较有显著差异(P<0.05),但两者之间无显著差异。结论关节局部COX-2是引起膝骨性关节炎的重要介质。透骨消痛胶囊通过抑制OA早期滑膜和软骨细胞中COX-2的表达及其诱导产物PGE2的生成,从而达到控制OA早期炎症、缓解疼痛、减轻症状的目的 。     

透骨消痛胶囊在大鼠体内药代动力学初步研究

目的以透骨消痛胶囊为例,探讨吸光度-波长曲线下面积应用于中药复方药代动力学研究的新思路与方法。方法通过配制系列浓度的透骨消痛胶囊内容物的溶液,在200~400 nm下进行全波长扫描,观察吸波面积和总药物浓度的线性关系,并对透骨消痛胶囊开展灌胃后大鼠体内药代动力学研究。结果不同浓度内容物溶液的吸波面积和内容物中药物的总浓度具有良好的线性关系,归一化方程为:AUAWC=0.6608x-0.1206,(r=0.9999)。大鼠体内透骨消痛胶囊内容物灌胃后,Ka=7.72/h,t1/2(Ka)=0.0898 h,吸收分布较迅速;T(peak)=0.4656 h,第0.5 h左右达到最大血药浓度,Cmax=33.9576μg/mL;第6 h出现双峰现象,说明可能存在肠肝循环;Ke=0.2368/h,t1/2(Ke)=2.9271 h,药物消除较慢,总浓度维持较长的时间。结论吸波面积和中药总浓度成线性的关系可应用于多成分复杂体系的中药药代动力学研究,不同时间段获得的中药总浓度能较好地体现复杂成分的总量在体内的"动态"过程。