临床诊断为乙型脑炎等病人血清的Colti病毒抗体检测

对河南，南方，福建等地临床诊断为乙型脑炎等病人的血清１５９人份，采用酶联免疫吸附试验和反向被动血凝抑制试验，分别检查Ｃｏｌｔｉ病毒和乙型脑炎病毒抗体。８９例对血清经ＥＬＩＳＡ检查发现，７例恢复期血清较急性期血清Ｃｏｌｔｉ病毒抗体有４倍或４倍以上升高。     

Epstein—Barr病毒壳抗原的纯化及其在检查血清抗体…

为了建立纯化Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ（ＥＢ）病毒壳抗原（ＥＢＶ－ＶＣＡ）的方法，用于酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测人因清中的相关抗体，我们用重组昆虫病毒在感染的ｓｆ９细胞中表达ＥＢＶ－ＶＣＡ。感染的细胞经裂解后，层析纯化表达产物。用经的ＶＣＡ作为抗原包虫被ＥＬＩＳＡ板或硝基纤维膜，检查血清中ＶＣＡ／ＩｇＡ和ＶＣＡ／ｇＧ抗体，为ＥＢＶ感染的的检测和ＮＰＣ的诊断发展了一个敏感、特异和简便的方法。     

Epstein-Barr病毒壳抗原的纯化及其在检查血清抗体中的应用

为了建立纯化Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ（ＥＢ）病毒壳抗原（ＥＢＶ－ＶＣＡ）的方法，用于酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测人血清中的相关抗体，我们用重组昆虫病毒在感染的ｓｆ９细胞中表达ＥＢＶ－ＶＣＡ。感染的细胞经裂解后，层析纯化表达产物。用纯化的ＶＣＡ作为抗原包被ＥＬＩＳＡ板或硝基纤维膜，检查血清中ＶＣＡ／ＩｇＡ和ＶＣＡ／ＩｇＧ抗体，为ＥＢＶ感染的检测和ＮＰＣ的诊断发展了一个敏感、特异和简便的方法。     

乙型肝炎病毒e抗原的纯化及其在人血清抗体检测中的应用

目的方法利用ＺｈｏｕＪｉａｎ教授提供的重组质粒ＤＮＡｐＢＶ２２０／ｅＡｇ，转染ＤＨ５α细胞，经３０℃培养３小时，４２℃培养６小时温度诱导后，提取乙型肝炎病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）。经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ层折纯化后免疫打点分析，收集阳性蛋白。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，考马斯亮蓝Ｇ２５０染色，显示为单一的蛋白带，用免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）和免疫打点（ｌｍｍｕｎｏｄｏｔ）法，确定表达产物的特异性。将纯化的ＨＧｅＡｇ用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和免疫条。方法基检测人血清中的相关抗体。结果经４９例乙型肝炎病毒ｅ抗体（ＨＢｅＡｂ）阳性病人血清检验证实了其特异性。结论免疫条方法较ＥＬＩＳＡ方法更敏感、特异。     

人精子膜抗原的制备及其在人精子抗体检测中的应用

精子表面的抗原与受精和胚胎的早期发育有密切关系，其中部分抗原能引起机体产生相应的抗体，从而影响到精子的受精功能和胚胎的发育，导致免疫性不育。因此对人类精子膜抗原的研究有助于从蛋白质水平来揭示受精的过程和不育的机制，为不育特别是免疫性不育的治疗及免疫避孕开辟一条新途径。因为精子膜比较坚固，难以破碎和溶解，不易得到较高浓度的精子膜抗原。而且即使精子膜被破碎溶解后，往往有许多种抗原成分混在一起，为了提取一种成分，常需反复分离。目前常用的是先用物理或化学方法溶解精子膜，再用分段分离的方法纯化各种抗原，如Hinsch、Diekman等所用方法。为了减少反复分离的麻烦，我室摸索了提取精子膜抗原的方法并对其进行了分析，现报道如下。     

丙型肝炎病毒非结构区抗原制备及其相应抗体的检测

目的 研究丙型肝炎病毒非结构区３（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ ｎｏｎｓｔｒｕｃｔｕｒｄ ｒｅｇｉｏｎ３,ＨＣＶ－ＮＳ３）与丙型肝炎发病的关系,寻求一种可用于判断临床干扰素（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ,ＩＦＮ）治疗疗效的检测方法。方法 采用基因重组,以大肠埃岙菌表达,提取ＨＣＶ－ＮＳ３不同末端蛋白作为抗原,并回顾性的对ＩＦＮ治疗的６３例ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性的丙型肝炎患者血清用免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎ     

甲肝IgM抗体诊断试剂盒在甲肝病毒抗原检测中的应用

将HAV IgM-Ab诊断试剂盒用HAV-Ag标准品调控灵敏度后,用于检测HAV-Ag,并比较快速检测法和常规过夜法两种检测方法的测定效果,以选择在甲肝疫苗生产中,抗原检测的合适方法.经过调控灵敏度后,抗HAV IgM诊断试剂盒完全可以用来检测HAV-Ag.并可以正确评价HAV-Ag滴度,HAV感染性滴度.适用于甲肝疫苗的检定工作.     

Epstein-Barr病毒壳抗原gp125的纯化和应用

目的研制ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ（ＥＢ）病毒诊断试剂。方法将重组痘苗病毒表达的Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒（ＥＢＶ）壳抗原（ＶＣＡ）主要多肽ｇｐ１２５纯化，作为诊断抗原建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），检测了４８份鼻咽癌（ＮＰＣ）病人血清及１０份正常人血清中的ＶＣＡ／ＩｇＡ抗体。结果该方法与免疫荧光（ＩＦ）检测结果一致，但ＥＬＩＳＡ的平均几何滴度（ＧＭＴ）是ＩＦ的１２倍。结论以纯化的ＥＢ病毒壳抗原主要多肽ｇｐ１２５作为诊断抗原建立的检测方法，更适合于ＥＢＶ相关疾病的血清学诊断和血清流行病学调查。     

弓形虫抗原,抗体检测在眼病诊断中的应用

弓形虫并是由专性细胞内鼠弓形体所起,它是引起后部葡萄膜炎最常见的原因。其发生无种族和性别差异,其典型改变为,在陈旧性视网膜脉络膜瘢痕附近出现局灶性坏死性视网膜脉络膜炎。临床上根据其典型的病灶特征可以作出诊断,但对高度疑是弓形虫感染者,作血清抗原抗体的检查,对明确诊断是很有帮助的。我们用ELISA对临床上已诊断为葡萄膜炎患者进了弓形虫循环抗原、特异性抗体的检测。旨在确定可能的病因。 材料和方法     

肺癌患者下呼吸道病毒抗原检测

目的　了解肺癌患者下呼吸道病毒感染情况。方法　通过纤维支气管镜刷取肿物周围之分泌物,采用北京军区第262医院研制的呼吸道病毒抗原检测试剂盒进行检测、分析。结果　肺癌组呼吸道病毒抗原阳性8例,阳性率174%(846),显著高于非肺癌组(P<005)。其中甲型流感病毒1例,乙型流感病毒2例,副流感病毒(1,3型)2例,腺病毒2例,呼吸道合胞病毒1例。鳞癌、小细胞癌、腺癌伴病毒感染依次为4例、3例、1例。结论　肺癌与常见呼吸道病毒感染有统计学上的相关性,肺癌患者感染率增加,值得重视。     

HCV免疫学诊断抗原与链亲和素融合蛋白的制备及应用研究

目的 制备带有链亲和素（SA）标签的丙型肝炎病毒（HCV）融合蛋白,并初步探讨其在抗-HCV ELISA检测中的应用.方法 构建了HCV诊断抗原与链亲和素融合蛋白重组表达质粒pET-11d-C44P-SA,在大肠埃希菌BL21（DE3）中表达,并用Western Blot进行鉴定,表达的融合蛋白经镍金属螯合（Ni-NTA）层析柱进行纯化,透析复性后分别包被生物素化以及普通酶联板,进行人血清抗-HCV检测.结果 成功构建了带有SA标签的重组表达质粒,其在大肠埃希菌BL21（DE3）中实现高效表达,制备的融合蛋白纯度可达90%以上.建立ELISA法进行人血清抗-HCV检测显示：融合蛋白包被生物素化酶联板检测灵敏度与特异性明显高于普通酶联板.结论 构建的融合蛋白作为包被抗原,结合利用SA标签与生物素化酶联板,明显提高了抗-HCV检出的灵敏度与特异性,该策略为进一步提高抗-HCV检测试剂的质量打下了基础.     

肾小球肾炎肾组织中HBV感染的标志

为了解肾组织中ＨＢＶＤＮＡ与ＨＢＶ抗原存在的关系，探讨肾组织中ＨＢＶ抗原的来源及其与病理变化的关系，我们检测２４６例肾炎肾组织中三种ＨＢＶ抗原。发现除肾小球沉积外，肾小管常有阳性表达。肾小管ＨＢｃＡｇ阳性率达２１．５４％，高于肾小球（１０．９８％）。有１８例肾组织经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交检测ＨＢＶＤＮＡ，１５例阳性者中１４例肾组织ＨＢＶ抗原同时阳性，１２例血清感染标志亦阳性。结果提示某些肾炎可能与肾组织感染ＨＢＶ相关，肾组织中出现的ＨＢＶ抗原抗体免疫复合物除来自血循环外，有肾源性──原位形成的可能。     

乙型肝炎病毒preS/S蛋白对人PCNA基因启动子激活作用的研究

目的：研究乙型肝炎病毒preS/S蛋白对人增殖细胞核抗原（PCNA）基因启动子的激活作用。方法：利用荧光素酶报告基因，用共转染方法研究该整合片段对人PCNA启动子的作用。用免疫组织化学法确定preS/S蛋白细胞中的定位。结果：在人肝细胞L02中，含有上述HBV整合片段的质粒pKSH7C-Hpa I能以剂量依赖方式激活PCNA启动子，使PCNA启动子活性提高0.5倍；免疫组化分析表明，其蛋白定位于细胞质中。结论：preS/S蛋白对PCNA启动子有激活作用，但作用并非直接，可能是通过细胞信号传导途径来影响PCNA活性。     

2001年中国新分离维多利亚系乙型流感病毒的抗原性及基因特性分析

目的：研究2001年中国新分离维多利亚（Victoria)系乙型流感病毒的抗原性及基因特性。方法：鸡胚传代流感病毒，从尿囊液中提取流感病毒的RNA，进行逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR），扩增产物用纯化试剂盒纯化后测序，然后用MegAlign软件进行基因种系发生树分析。结果：B／Sichuan/63/2001和B／Zhejiang/2/2001毒株的抗原性与B／Shandong/7/97毒株间存在有差异，编码血凝素重链区基因已发生了突变并导致了HA1蛋白抗原性表位两个位点（197和199）氨基酸不同于B／Shandong/7/97毒株，基因种系发生树分析同样也证明了它们的HA1基因不同于B／Shandong/7/97病毒。然而，B／Sichuan/63/2001与B／Zhejiang/2/2001毒株间无论抗原性还是HA1基因特性均很相似。结论：2001年我国人群中流行的乙型流感病毒维多利亚毒株系的抗原性已发生进一步的漂移。     

乙肝患者HBV感染指标、病毒复制水平与基因分型的关系分析

目的 探讨HBV感染指标、病毒复制水平和基因型之间的关联及对乙肝患者诊断和预后的意义.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测样本的HBV PreS1-Ag、Anti-HBc-IgM和HBV两对半;荧光定量PCR法测HBV DNA水平;巢氏PCR法扩增S片段、测序并对比分析判定基因型,联合分析指标的关联.结果 收集河南地区急、慢性乙肝患者样本355例.模式Ⅰ(HBeAg阳性)的PreS1-Ag阳性率为80.2％、HBV DNA阳性率为73.7％,显著高于其他模式;PreS1-Ag、Anti-HBc-IgM阳性者的ALT、AST异常率显著高于阴性组;HBV基因型结果为B型4例(2.9％),C型76例(55.9％),D型56例(41.2％),C型患者的HBeAg和HBV DNA阳性率显著高于B型和D型.结论 PreS1-Ag和Anti-HBc-IgM对乙肝早期诊断、病毒复制监测及预后评估有重要意义;河南地区乙肝患者的HBV基因型以C型和D型为主,C型的HBeAg和HBV DNA阳性率显著高于B和D型.     

Antibody-capture ELISA for detection of immunoglobulin M antibodies in sera from Japanese encephalitis and dengue hemorrhagic fever patients

Immunoglobulin M (IgM) antibody titers in paired sera from 19 encephalitis and 44 dengue hemorrhagic fever (DHF) patients in Thailand and 42 Japanese encephalitis (JE) patients in Japan were measured by the antibody capture ELISA and applied to distinguish JE virus infection from dengue virus infection. Titer distribution and the ratio of the titers against JE and dengue antigens led to the following diagnostic criteria. The specimens can be considered as positive with JE when IgM-ELISA titer showed over 200 against JE and 4-fold or more higher than titers against any types of dengue antigens. The specimens can be considered as positive with dengue infection when IgM ELISA titer showed over 200 against one of the 4 types of dengue antigens and 4-fold or more higher than against JE antigen. Based on these criteria, 41 of 42 patients in Japan and 11 of 19 encephalitis patients in Thailand could be diagnosed as having JE virus infection while 2 of 19 encephalitis patients in Thailand and 26 of 44 DHF patients in Thailand could be diagnosed as having dengue virus infections.     

乙型肝炎病毒e抗原的纯化及其在人血清抗体检测中？…

目的 方法利用Ｚｈｏｕｊｉａｎ教授提供的重组质粒ＤＮＡ ｐＢＶ２２０／ｅＡｇ，转染ＤＨ５＾α细胞经３０℃培养３小时，４２℃培养６小时温度诱导后，提取乙型肝炎病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）。经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ层折 纯化后免疫打点分析，收集阳性蛋白。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，考马斯亮蓝Ｇ２５０染色，显为单一的蛋白带，用免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）和免疫打点（ｌｍｍｕｎ     

Direct broad-range detection of alphaviruses in mosquito extracts

Members of the genus Alphavirus are a diverse group of principally mosquito-borne RNA viruses. There are at least 29 species and many more subtypes of alphaviruses and some are considered potential bioweapons. We have developed a multi-locus RT-PCR followed by electrospray ionization mass spectrometry (RT-PCR/ESI-MS) assay that uses the amplicon base compositions to detect and identify alphaviruses. A small set of primer pairs targeting conserved sites in the alphavirus RNA genome were used to amplify a panel of 36 virus isolates representing characterized Old World and New World alphaviruses. Base compositions from the resulting amplicons could be used to unambiguously determine the species or subtype of 35 of the 36 isolates. The assay detected, without culture, Venezuelan equine encephalitis virus (VEEV), Eastern equine encephalitis virus (EEEV), and mixtures of both in pools consisting of laboratory-infected and -uninfected mosquitoes. Further, the assay was used to detect alphaviruses in naturally occurring mosquito vectors collected from locations in South America and Asia. Mosquito pools collected near Iquitos, Peru, were found to contain an alphavirus with a very distinct signature. Subsequent sequence analysis confirmed that the virus was a member of the Mucambo virus species (subtype IIID in the VEEV complex). The assay we have developed provides a rapid, accurate, and high-throughput assay for surveillance of alphaviruses.     

云南省病毒性脑炎和不明原因发热患者的相关病毒IgM抗体检测及分析

目的 调查云南省病毒性脑炎和不明原因发热病例的发病病因.方法 在云南省部分地区采集病毒性脑炎和不明原因发热患者血清和脑脊液标本,用ELISA法检测患者标本中包括虫媒病毒、肠道病毒和呼吸道病毒中15种病毒的IgM抗体.结果 在云南省共采集病毒性脑炎患者血清和脑脊液标本526份,不明原因发热患者血清标本221份.经ELISA法检测,病毒性脑炎患者标本中乙型脑炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒、版纳病毒、单纯疱疹病毒、腮腺炎病毒、登革热病毒和罗斯河病毒的IgM抗体阳性率依次为50.95％(阳性数=268)、21.48％ (113)、19.58％(103)、7.41％ (39)、3.04％(16)、1.71％(9)、1.00％(5)和0.38％(2);不明原因发热患者血清中乙型脑炎病毒、登革热病毒、单纯疱疹病毒、版纳病毒、腮腺炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒、罗斯河病毒和巴马森林病毒的IgM抗体阳性率依次为21.27％ (47)、20.36％ (45)、13.12％(29)、12.67％ (28)、11.76％ (26)、4.52％(10)、1.81％(4)、1.81％(4)和0.45％(1).乙型脑炎病毒、登革热病毒、版纳病毒、罗斯河病毒和巴马森林病毒感染以7-10月为主,柯萨奇病毒、埃可病毒、单纯疱疹病毒和腮腺炎病毒感染以7-8月居多.结论 乙型脑炎病毒是云南省夏秋季病毒性脑炎流行的主要病原体,柯萨奇、埃可和单纯疱疹病毒是散发性病毒性脑炎的重要病原;登革、版纳、单纯疱疹和腮腺炎病毒是不明原因发热的重要病毒病原并可能存在罗斯河和巴马森林等蚊媒病毒的流行.