三例急性髓系白血病患者基因表达谱的演变

目的研究急性髓系白血病（AML）患者初诊与复发时的基因表达谱差异，探讨难治性AML的发病机制。方法应用Agilent Human 1B寡核苷酸基因芯片，动态检测了3例AML-M2a患者初诊、复发时骨髓单个核细胞的基因表达谱差异。结果在检测的20173个基因中，有10个基因在3例患者初诊、复发时共同差异表达，其中7个基冈在复发时均共同上调，3个基因在复发时均表现下调。结论DAPKI等10个基因的表达变化可能与AML-M2a发病和复发有关，这些新基因的发现可能对早期诊断难治性AML具有重要价值，同时为难治性AML提供新的治疗靶点。     

急性髓系白血病预后相关基因表达谱

目的运用基因芯片技术,研究首次完全缓解持续时间(CCR1)相差显著的急性髓系白血病(AML)M2a亚型之间基因表达谱差异,寻找影响AML-M2a预后相关基因。方法应用Agilent Human 1B寡核苷酸基因芯片,检测3例CCR1 6个月内复发(A组)和3例CCR1 12个月以上(B组)的AML-M2a患者初诊时骨髓单个细胞基因表达谱及其差异。结果在检测的20173个基因中,筛选出共同差异表达基因共22个,其中在A组各例都表达上调的基因有10个,同时表达下调的基因有12个。结论APP等22个基因的表达可能与接受常规方案标准剂量化疗的AML-M2a首次完全缓解持续时间有关,可能成为早期诊断难治性AML的指标。     

FOXP3基因在人类变应性鼻炎中的表达

目的:应用寡聚核苷酸基因表达谱芯片研究FOXP3基因在人类变应性鼻炎中的表达.方法:应用包含14 500条人类全长基因的寡聚核苷酸芯片HG-U133A2.0检测6例人类变应性鼻炎黏膜组织,6例正常鼻黏膜组织的基因表达谱,分析FOXP3基因差异表达的差异,并进行realtime RT-PCR验证.结果:基因芯片筛选出FOXP3基因表达下调,实时荧光定量PCR测定FOXP3基因表达与基因芯片结果一致.结论:变应性鼻炎基因表达谱存在差异,FOXP3基因表达降低可能对人类变应性鼻炎的发病发挥作用.     

丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂治疗成人急性白血病的研究

目的应用基因表达谱芯片来检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Raf-1抑制剂对急性髓系白血病（AML）细胞基因表达的影响,试图进一步探讨丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Raf-1抑制剂抗白血病细胞增殖的机制。方法利用cDNA基因芯片研究10例成人AML,用两种不同的荧光素cy3和cy5通过逆转录反应将白血病细胞经丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Raf-1抑制剂作用前后的RNA分别标记成两种探针,并与基因表达谱芯片进行杂交,通过计算机扫描分析得出这些基因在经丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Raf-1抑制剂处理前后的表达差异。结果基因表达谱分析两次重复实验结果,最后筛选出包括与细胞凋亡、细胞周期等相关表达差异的基因共20条,其中12条表达上调,8条表达下调。结论结果提示丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Raf-1抑制剂抗成人急性粒细胞白血病的作用机制与抑制白血病细胞周期和诱导白血病细胞凋亡有很大关系。     

应用人类全基因组芯片检测多药耐药白血病细胞株HL-60/VCR与敏感细胞株HL-60基因的表达差异

本研究利用基因芯片技术检测白血病多药耐药细胞株HL-60/VCR及其亲本细胞株差异基因表达谱,探讨急性白血病多药耐药机制.本试验提取白血病细胞株HL-60及其多药耐药细胞株HL-60/VCR的mRNA,在反转录及体外转录过程中分别用生物素进行标记,与Affymetrix公司人类全基因组芯片U133A杂交,用Affymetrix专用芯片扫描仪G2500A GeneArray Scanner及Microarray Suite、Micro DB^TM GeneChip LIMS、GeneChip DMT分析软件系统处理杂交信号获取结果.结果表明：白血病细胞株HL-60及其耐药株HL-60/VCR差异显示基因5 507条,其中耐药细胞株中上调表达基因3 100条,下调表达基因2 407条;差异极显著性基因1 040条,表达上调435条,下调605条,涉及与细胞生长活动及信号转导相关的基因.结论：多基因参与白血病细胞株的多药耐药机制,基因芯片技术是并行分析多个基因、探讨白血病多药耐药机制的有效方法.     

应用多重RT-PCR结合寡核苷酸芯片方法检测儿童白血病常见融合基因

本研究探讨基因芯片在儿童白血病8种常见融合基因检测中的应用。采用多重巢式RT-PCR结合寡核苷酸芯片方法对84例临床收集的白血病标本进行融合基因检测。结果表明：此芯片可以从患者骨髓样本RNA中准确检测到阳性参照序列以及与融合基因相对应的特异基因片段。84例白血病患者骨髓标本中,31例（36．90％）具有8种染色体结构畸变产生的融合基因。包括te1／am11、e2a／pbx1、bcr／ablp190、bcr／ablp210、m11／af4、am11／eto、pm1／rarα、cbfβ／myh11。芯片检测的敏感性及特异性和RT—PCR方法相当。结论：采用多重巢式RT—PCR结合寡聚核苷酸芯片方法,可快速并同时筛选出8种染色体结构畸变产生的融合基因,为儿童白血病危险分层、治疗选择、预后判断提供重要依据。此种方法应用于筛查初治白血病儿童融合基因表达时优缺点并存,具有一定临床实用价值。     

STAT5诱骗寡核苷酸下调K562细胞周期相关基因的研究

目的采用基因芯片技术筛选信号转导和转录活化因子5（STAT5）诱骗寡核苷酸作用下K562细胞差异表达的周期相关分子，探讨其对K562细胞周期的影响。方法合成STAT5诱骗寡核苷酸，在脂质体介导下转染K562细胞，采用人14K基因表达谱cDNA芯片检测差异表达基因，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）验证芯片筛选到的部分基因的表达情况。结果两张cDNA芯片检测重复性良好（r-0．9799）。在13824个标记的基因中检出多个下调基因，其中包括cyclin D1、cyc-linD2、S100钙结合蛋白P和E2F-5等在内的周期相关基因；RT-PCR实验证实STAT5诱骗寡核苷酸引起cyclinD2和E2F-5mRNA表达下调。进一步分析发现，这些基因的启动子区域均含有STAT5结合的一致性序列。结论STAT5诱骗寡核苷酸抑制K562细胞G-／s转换而影响细胞周期进程的作用机制，可能与cyclin D2和E2F-5等基因的表达下调相关。     

硫化砷作用后U937细胞基因表达谱变化的研究

目的：利用基因表达谱芯片研究U937细胞在硫化砷作用前后基因表达的差异性。方法：采用急性单核细胞白血病细胞株U937，用cy3和cy5两种不同荧光染料，通过逆转录反应将硫化砷处理前后的U937 mRNA分别标记成两种探针，并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交，经扫描、计算机软件分析寻找经硫化砷作用前后表达有差异的基因。结果：筛选出与细胞骨架、代谢相关酶和细胞信号转导等相关的表达有差异的基因共7条，其中1条表达上调，6条表达下调。结论：细胞骨架和细胞信号转导的改变可能参与硫化砷促进U937细胞凋亡的过程。     

NAT1、CXCL9、BPI和HLA-DQB1在溃疡性结肠炎中的表达

目的:通过检测寡聚核苷酸芯片结果中表达上调的BPI、CXCL9、NAT1和下调的HLA-DQB1以提高基因芯片的可信度,同时为UC的发病机制、病因诊断及基因治疗的靶点提供一定的依据.方法:采用半定量RT-PCR技术检测这四个基因在21例溃疡性结肠炎(UC)组和21例正常组外周血中的相对表达量.结果:NATI、BPI和CXCL9在UC组表达水平较正常组高,差异有统计学意义(P<0.05),与基因芯片结果吻合;HLA-DQBI在UC组中较正常组中表达上调,与基因芯片结果不相吻合.结论:基因芯片和RT-PCR分析基因表达变化都是可信的,它们在基因表达谱分析、易感基因的筛选研究等都具有极其重要的作用.     

用基因芯片表达谱筛选恶性黑色素瘤差异基因的研究

目的 用基因芯片表达谱筛选出恶性黑色素瘤的差异基因。方法 用Agilent Human 1A OligoDNA芯片对恶性黑色素瘤和色素痣组织中基因表达情况进行检测，提取总RNA，进行荧光标记探针、杂交、洗涤后分析。结果 恶性黑色素瘤和正常色素痣组织共有1596个差异表达基因，其中上调基因733个，下调基因863个。结论 基因芯片技术可筛选出恶性黑色素瘤相关基因。     

Psma6和Slc25a4基因在急性单核细胞白血病中的表达研究

本研究探讨psma6、slc25a4基因在急性单核细胞白血病（AML—M5）患者中的表达水平,并分析其与临床特征和预后的关系。应用实时荧光定量RT—PCR方法检测psma6、sle25a4在AML—M5患者白血病细胞、正常人血细胞以及非白血病患者血细胞中的表达水平并加以比较,同时对于psma6编码的蛋白P27K进行免疫组化分析。结果表明：psma6mRNA在AML—M5患者白血病细胞的表达低于正常人血细胞、非AML—M5白血病细胞以及非白血病患者血细胞。免疫组织化学检测结果与之相一致。psma6表达在AML－M5化疗缓解组高于未缓解组;在AML—M5和AL中P27K蛋白表达水平与外周血白细胞计数、乳酸脱氢酶（LDH）含量有关。slc25a4mRNA在AML—M5患者白血病细胞中高表达,而sle25a4mRNA表达在缓解组和未缓解组无显著差异。结论：psma6表达水平可能作为AML—M5的预后指标之一;slc25a4可能是一个AML—M5新肿瘤抗原基因。     

An alternative method for custom prime: A case report of successful peripheral blood stem cell harvesting from two low-weight child donors

Allogeneic peripheral blood stem cell (APBSCs) transplantation is an effective treatment for hematological malignancies. However low-weight donor children meet some complications. In the current report, PBSCs were harvested from a 14-month-old child (9.8 Kg) for a 6 years old sibling recipient suffering from pre-B type of acute lymphoblastic leukemia (ALL) and also 24 months old male child donor (12 Kg) for a haploidentical recipient suffering from acute myeloid leukemia (AML-M4EO). The PBSC harvesting was performed using Spectra? Optia^® apheresis software with continuous mononuclear cell (CMNC) procedure. The results were completely promising and both recipients underwent an acceptable transplantation.     

急性B淋巴细胞白血病TGF-β信号转导通路基因表达差异的研究

本研究旨在探讨急性B淋巴细胞白血病（B—ALL）TGF—β信号转导通路基因表达谱。应用荧光实时定量RT-PCR和包含人TGF-β／BMP信号转导通路上113个基因的芯片分别检测经过FAB分型和免疫学分型的B—ALL患者白血病细胞、急性B淋巴细胞白血病细胞株NALM6细胞、Raji细胞的TGF—β，mRNA及TGF—β信号转导通路上各基因表达谱，以经流式细胞术分选的健康人的外周血B淋巴细胞为对照，比较两者差异。结果表明，同健康人外周血B淋巴细胞相比较，B—ALL细胞、NALM6细胞、Raji细胞TGF-β1表达水平下调，cyc和Smad-1基因表达上调，几击、Smad-7基因表达下调。结论：急性B淋巴细胞白血病存在TGF—β信号转导通路异常。     

Genetically modified donor leukocyte transfusion and graft-versus-leukemia effect after allogeneic stem cell transplantation

Seven patients with acute myeloid leukemia (AML) and two patients with chronic myelogenous leukemia (CML) were transplanted from HLA-identical sibling donors with CD34(+) cell-enriched stem cells (HSCTs) without further immunosuppression. The myeloablative standard transplantation protocol was adapted to include transfusion of gene-modified donor T cells after HSCT. Donor T cells were transduced with the replication-deficient retrovirus SFCMM-3, which expresses herpes simplex thymidine kinase (HSV-Tk) and a truncated version of low-affinity nerve growth factor receptor (ΔLNGFR) for selection and characterization of transduced cells. Transduced T cells were detectable in all patients during follow-up for up to 5 years after transfusion. Proteomic screening for development of acute graft-versus-host disease (aGvHD) was applied to five of the seven patients with AML. No positivity for the aGvHD grade II-specific proteomic pattern was observed. Only one patient developed aGvHD grade I. To date, three of the patients with AML relapsed; one responded to three escalating transfusions of lymphocytes from the original donor and is in complete remission. Two were retransplanted with non-T cell-depleted peripheral blood stem cells from their original donors and died after retransplantation of septic complications or relapse, respectively. In one patient with CML, loss of bcr-abl gene expression was observed after an expansion of transduced cells. Seven of nine patients are alive and in complete remission.     

HLA相合同胞异基因外周血造血干细胞移植治疗急性白血病

背景:HLA 相合同胞间异基因外周血造血干细胞移植是治疗急性白血病的一种有效方法.目的:评价HLA 相合异基因外周血造血干细胞移植治疗急性白血病的临床疗效及并发症.方法:25 例急性白血病患者接受HLA 相合同胞的异基因外周血造血干细胞移植,其中急性髓系白血病20 例,急性淋巴细胞白血病5 例.预处理方案为BU+CY 方案或CY+TBI 方案,移植物抗宿主病预防采用环孢素A+吗替麦考酚酯+短程甲氨蝶呤.结果:最短随访2 个月,最长随访80 个月.患者均获造血重建,中性粒细胞≥0.5×109 L-1的时间为10～18 d,血小板≥20×109 L-1 的时间为10～37 d.主要并发症:感染败血症12 例,巨细胞病毒感染9 例,带状疱疹病毒感染3 例,发生急性移植物抗宿主病10 例,慢性移植物抗宿主病11 例,出血性膀胱炎4 例.至随访结束,17 例无病生存,8 例死亡.提示HLA相合同胞异基因外周血造血干细胞移植是治疗急性白血病安全有效的方法.     

Chfr基因在急性白血病骨髓细胞中表达的研究

为了探讨急性白血病（AL）患者骨髓细胞中有丝分裂早期检查点Chfr基因的表达及其意义，对46例初诊未治疗的AL患者骨髓单个核细胞，用RT—PCR和免疫组织化学的方法检测Chfr基因mRNA及蛋白的表达，并与正常人骨髓单个核细胞进行对照。结果表明：免疫组织化学和RT—PCR分析显示。28例急性髓细胞白血病（AML）中的15例，18例急性淋巴细胞白血病（ALL）中的13例骨髓单个核细胞Chfr基因mRNA和蛋白的表达与正常对照相比显著下降，同时Chfr基因表达异常病例染色体检查存在核型异常。结论：急性白血病骨髓细胞有丝分裂检查点Chfr基因表达受损，可能在白血病发病中具有重要作用。     

AC133抗原在急性白血病细胞中的表达

为了解AC133抗原在急性白血病细胞中的表达情况及其临床意义,采用常规三色直接免疫荧光标记法,使用流式细胞仪测定AC133抗原及其它白血病相关抗原在61例急性白血病患细胞中的表达。检测结果显示,61例中有27例（44.3%)AC133表达阳性,其中ALL13例（13/29）,AML-M0/M16例（6/8）,AML-M24例（4/16）,AML-M4/M5 4例（4/8）。27例AC133^ 病例中25例（92.6%)同时表达CD34,13例（48.1%)同时表达CD117.本研究结果提示,AC133抗原与CD34和CD117的表达有相关性。AC133抗原可表达于各型白血病中,但在AML-M0/M1中表达频率及表达强度均高于其它各亚型。     

减低预处理剂量异基因造血干细胞移植后的白血病复发

目的：减低预处理剂量异基因造血干细胞移植预处理方案剂量强度弱于清髓性移植且又强于真正的非清髓移植，期望在降低毒副反应的同时能够减少复发。评价减低预处理剂量的异基因造血干细胞移植后白血病的复发情况及主要影响因素。 方法：①对象：选取2003—03／2005—06厦门大学附属中山医院血液科收治的23例白血病患者，急性粒细胞白血病6例，急性淋巴细胞白血病7例，慢性粒细胞白血病10例。供者同胞HLA全相合10例，同胞或亲缘供者不全相合12例，非血缘1例。供受者对治疗均签署知情同意书，实验经医院医学伦理委员会批准。②实验方法：23例白血病患者均采用减低预处理剂量方案，马利兰4mg/（kg·d），2-3d；环磷酰胺50mg／（kg·d），2d。其中19例患者在上述方案的基础上加用氟达拉滨30mg／（m^2·d），3-5d；10例患者同时加用阿糖胞苷（1．0～2．0）g／（m^2·d），1～3d。供受者HLA位点不合时用兔抗胸腺细胞球蛋白（3．0～5．0）mg/（kg·d），3-5d。异基因造血干细胞移植前行供者外周血干细胞动员，4-5d后连续采集2次，23例白血病患者输入CD34^＋细胞中位数为4．02×10^6／kg。采用骁悉＋环孢素＋短程甲氨喋呤方案预防移植物抗宿主病。③实验评估：采用STR—PCR方法检测异基因造血干细胞植入证据。 结果：①造血功能重建检测：23例患者均顺利完成造血功能重建，无一例发生预处理相关死亡。经预处理后外周血白细胞最低值为（0．01～0．30）×10^9L^-1，血小板最低值为（5～20）×10^9L^-1；中性粒细胞恢复到0．5×10^9L^-1的中位时间为术后11d，血小板恢复到30×10^9L^-1的中位时间为术后12d。术后30d经STR—PCR检测22例患者为完全供者型，骨髓象均完全缓解，剩余1例复发患者未行STR—PCR检测。②移植物抗宿主病发生情况：23例患者中，9例（39．1