T-cadherin分子在人肝细胞癌的表达及其与肝癌恶性生物学特征的关系

目的 观察黏附分子T-cadherin在人肝细胞癌及癌周肝组织中的表达,探讨T-cad-herin表达水平与肝癌恶性生物学特征的关系.方法 采用免疫组织化学观察40例人肝细胞癌组织和癌旁肝组织中T-cadherin蛋白表达;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测肝细胞癌组织和癌旁肝组织中T-cadherin mRAN和蛋白的表达水平;分析T-cadhefin表达与肝细胞癌生物学特征的关系.结果 T-cadherin蛋白在肝细胞癌中的表达评分为1.43±0.14,在癌旁组织中为2.65±0.17,两者差异有统计学意义(P<0.01);T.caclherin蛋白在中、高度分化的肝细胞癌中的表达和在低分化的肝细胞癌中的表达评分分别1.70±0.19和1.15±0.19,两者差异无统计学意义(P>0.05);T-cadherin在伴有门静脉分支癌栓的肝细胞癌和不伴有门静脉癌栓的肝细胞癌中的表达评分分别为0.50±0.19和1.63±0.15,两者差异有统计学意义(P<0.05).结论 T-cadherin蛋白在人肝细胞癌中表达下调与肝细胞癌的发生、肝内转移密切相关.     

CXC趋化因子受体2在肝细胞癌中的表达及意义

目的 探讨CXC趋化因子受体2(CXCR2)在肝细胞癌中的表达及与肝细胞癌发生、发展的关系.方法 采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测42例肝细胞癌组织及相应癌旁组织和23例正常肝组织中CXCR2 mRNA和蛋白表达水平,分析表达水平与肝细胞癌生物学特征的关系.结果 肝细胞癌组织、癌旁组织和正常肝组织中CXCB2 mRNA和蛋白表达分别为(1.18±0.32、0.83±0.23和0.72±0.23)和(1.78±0.20、0.98±0.13和0.90±0.18),同癌旁组织和正常肝组织比较,肝细胞癌组织中CXCR2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05).肝内转移、门静脉癌栓和低分化组中CXCR2 mRNA和蛋白表达水平分别为(1.37±0.26、1.45±0.34、1.31±0.28)和(1.87±0.20、1.93±0.13、1.86±0.18),无肝内转移、无门静脉癌栓和高分化组CXCR2 mRNA和蛋白表达水平分别为(1.08±0.33、1.08±0.27、1.06±0.33)和(1.73±0.18、1.73±0.20、1.71±0.19),差异有统计学意义(P<0.05).CXCR2蛋白表达与TNM分期相关,Ⅲ-Ⅳ期和Ⅰ-Ⅱ期表达水平分别为1.86±0.20和1.72±0.19,差异有统计学意义(P<0.05).结论 CXCR2在肝细胞癌组织中高表达,其高表达可能与肝细胞癌发生、侵袭和转移相关.     

门静脉主支癌栓PDGF-mRNA和E-CD蛋白的表达及意义

目的　探讨血小板源性生长因子 (PDGF mRNA)和内皮钙粘附蛋白 (E CD)在门静脉癌栓中表达水平的变化及其在肝癌肝内转移中的作用。方法　采用原位杂交技术检测 12例门静脉癌栓中PDGF mRNA基因的表达 ;采用免疫组化方法检测 33例门静脉癌栓中E CD蛋白和PDGF蛋白的表达 ,并与各自原发灶和癌旁组织进行对照。结果　 (1)E CD蛋白的表达 :门静脉癌栓、肝癌原发灶、癌旁组织的平均吸光度分别为 0 0 15 2± 0 0 0 36 ,0 0 5 2 7± 0 0 0 71和 0 10 0 8± 0 10 6 3。 (2 )PDGF蛋白的表达 :门静脉癌栓、肝癌原发灶、癌旁组织的平均吸光度分别为 0 10 5 9± 0 0 10 4 ,0 0 5 2 1± 0 0 0 92和 0 0 10 8± 0 0 0 2 9。 (3)PDGF mRNA的表达 :门静脉癌栓、肝癌原发灶、癌旁组织的平均吸光度分别为 0 12 0 7± 0 0 16 9,0 0 6 74± 0 0 0 71和 0 0 0 89± 0 0 0 0 6。经方差分析和t检验 ,各组间和各两组间均存在显著性差异 (P <0 0 1)。结论　门静脉癌栓中存在有促进转移和抑制转移两方面的因素 ,E CD蛋白表达减少 ,增加了门静脉癌栓中癌细胞脱落转移 ;而门静脉癌栓中PDGF mRNA表达的增加 ,则促进门静脉癌栓中结缔组织的形成 ,阻碍了癌细胞的脱落转移     

抑癌基因FHIT和PTEN在肝癌中的表达及意义

目的探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)基因和PTEN基因在原发性肝细胞癌(简称肝癌)中的表达及其与临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学SP法和图像分析技术检测了46例肝癌组织及癌旁组织和10例正常肝组织中FHIT和PTEN基因蛋白的表达。结果46例肝癌组织中FHIT和PTEN蛋白免疫组化阳性反应颗粒的平均光密度分别为(0.1339±0.3864)、(0.1534±0.1562),均明显低于相应癌旁组织(0.2051±0.5372)、(0.3271±0.2371)和正常组织(0.2289±0.7589)、(0.3753±0.0519)的水平(P<0.05);FHIT、PTEN与肝癌的病理分级、合并门静脉癌栓有密切关系。结论FHIT和PTEN基因蛋白缺失在肝癌组织中是频发事件。FHIT和PTEN与肝癌的病理分级、合并门静脉癌栓有密切关系。     

原发性肝细胞癌中EphA7蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨酪氨酸蛋白激酶 EphA7 蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化和 Western blot 方法检测 EphA7 蛋白在40例原发性肝细胞癌及相应的癌旁肝组 织和10例正常肝组织中的表达情况,并分析其与原发性肝细胞癌的临床病理因素之间的关系.结果 EphA7蛋白的表达主要位于原发性肝细胞癌细胞或肝细胞的胞质,以及纤维间隔内的血管内皮细胞.原发性肝细胞癌组织、癌旁肝组织及正常肝组织中均有EphA7蛋白的表达,Western blot分析结果显示EphA7蛋白在肝细胞癌组织(0.58±0.26)中的表达水平高于癌旁肝组织(0.40±0.22,P<0.05)和正常肝组织(0.32±0.16,P<0.05),而在癌旁肝组织和正常肝组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05);EphA7蛋白的表达水平与原发性肝细胞癌细胞的分化程度、门静脉癌栓、淋巴结转移和甲胎蛋白水平等临床病理因素相关(P<0.05).结论 EphA7 蛋白的表达与原发性肝细胞癌的生物学行为密切相关,可能在原发性肝细胞癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥重要作用.     

含缬酪肽蛋白在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨含缬酪肽蛋白(valosin-containing protein,VCP)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达与其临床病理特点及复发的关系.方法 运用RT-PCR、荧光定量PCR检测HCC组织70例、正常无肝硬化肝组织70例中VCP mRNA的表达水平,应用免疫组织化学法检测HCC组织30例、正常无肝硬化肝组织25例中VCP的蛋白表达情况,并结合HCC患者的临床病理因素及复发情况进行分析.结果 HCC患者的组织标本中VCP mRNA表达量显著高于正常无肝硬化肝组织,差异有统计学意义(P<0.05);HCC组织中VCP的蛋白表达阳性率(76.7%)显著高于正常无肝硬化肝组织(25.0%),差异有统计学意义(P<0.05);HCC组织VCP的表达与门静脉癌栓、肿瘤大小和复发相关(P<0.05).结论 HCC组织中VCP的表达明显高于正常无肝硬化肝组织,其表达与肿瘤大小、门静脉癌栓及复发关系密切.     

诱骗受体3在肝细胞癌组织中的表达及其与凋亡的关系

目的 探讨原发性肝细胞癌(HCC)中诱骗受体3(DcR3)表达和意义及与细胞凋亡的关系.方法 应用免疫组织化学Envision二步法和TUNEL技术对62例HCC组织和配对癌旁组织、15例正常肝组织进行DcR3和细胞凋亡检测.结果 44例HCC中DcR3表达、阳性表达率为70.97%,配对癌旁组织为20.96%,正常肝组织无阳性表达,HCC中DcR3表达明显高于其他组(P<0.01),门静脉癌栓形成组中DcR3表达高于阴性组(P<0.01).HCC、癌旁和正常肝组织凋亡指数(AI)分别为3.52±1.65、6.08±1.71和6.87±1.78,HCC与后两者比较差异有统计学意义(P<0.01).DcR3阳性表达组中AI明显低于阴性组(P<0.01).结论 DcR3在HCC呈稳定高表达,与癌细胞凋亡相关,可能参与HCC的发生和影响肿瘤的预后.     

PeroxiredoxinⅠ蛋白在肝癌门静脉癌栓组织中的表达及其临床意义

目的 探讨抗氧化还原蛋白1(PeroxiredoxinⅠ,PrxⅠ)在肝细胞癌合并门静脉癌栓组织中的表达及其与肝癌门静脉癌栓患者术后复发的关系.方法 应用免疫组化法和蛋白印迹法检测40例肝细胞癌合并门静脉癌栓组织中PrxⅠ蛋白的表达.于大鼠肝癌模型进一步观察PrxⅠ蛋白在肝癌门静脉癌栓形成中的病理变化,运用免疫组化法检测在癌栓形成过程中Prx Ⅰ蛋白其阳性表达率的改变.临床随访40例肝癌合并门静脉癌栓患者术后肿瘤首次复发时间与Prx Ⅰ蛋白阳性表达的关系.结果 免疫组化显示肝癌原发灶组织的Prx Ⅰ蛋白表达阳性率明显高于癌栓组织的表达阳性率(70%比15%,P＜0.05),蛋白印迹结果 显示PrxⅠ蛋白在组织中的表达与免疫组化具有相同趋势,条带光度平均值在原发灶和癌栓组分别为1534.2和735.6(P＜0.01).大鼠肝癌模型汇管区肝癌组织在4、8、12、16、20、24周时,PrxⅠ蛋白阳性表达率分别为60%、80%、75%、65%、40%、20%,存在显著差异(P＜0.01).临床随访资料显示:原发灶PrxⅠ蛋白表达阳性组的门静脉癌栓患者(28例),其术后肿瘤首次复发时间(6.3个月)明显晚于PrxⅠ蛋白表达阴性组(12例)患者的时间(3.7个月).结论 肝癌门静脉癌栓组织中存在PrxⅠ蛋白的低度表达;PrxⅠ蛋白的表达与癌栓患者术后复发存在密切关系.

Abstract：

Objective To investigate the expression of peroxiredoxin 1 (Prx 1) in hepatocellular carcinoma (HCC) with portal vein tumor thrombosis (PVTT) and to evaluate the relationship between the expressions of Prx 1 and the postoperative recurrence of this disease. Methods Immunohisto chemistry and Western blotting were performed to examine the expression of Prx 1 protein in 40 patients with HCC with PVTT. Experiments on Sprague Dawley (SD) rat hepatoma model were further carried out to observe the pathological changes of Prx 1 by immunohistochemistry. Clinical outcomes were analyzed to find a correlation between the recurrence and positive rate of Prx 1. Results The expression level of Prx 1 was significantly up-regulated in primary tumor tissues than in tumor thrombosis samples (P＜0.01). Immunohistochemistry results showed that the positive rate of Prx 1 in primary tumor tissues were higher than that in tumor thrombosis. Western blotting confirmed a same trend in the level of Prx 1, the average luminosity of the blots were 1534.2 and 735.6, respectively. There was a significant difference in SD rat hepatoma model, the 4, 8, 12, 16, 20 and 24-week positive rates of Prx 1 in liver tumor tissues were 60%, 80%, 75% ,65%, 40% and 25% respectively. Clinical outcomes showed that the time to first postoperative recurrence of Prx 1 in the primary tumor positive group was significantly higher than that in the negative group (6. 3 vs 3. 7 months, P＜0. 01). Conclusions Prx 1 protein was down-regulated in HCC with PVTT. There was a negative correlation between the expression of Prx 1 and recurrence.     

神经钙黏素和上皮钙黏素在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的目的探讨神经钙黏素和上皮钙黏素在肝细胞癌中的表达及其与临床病理参数的关系。方法采用免疫组织化学方法对38例肝细胞癌组织标本进行检测。结果肝癌组织中上皮钙黏素表达阳性率为39.5%,神经钙黏素表达阳性率57.9%,两者具有显著负相关性(P<0.05)。上皮钙黏素表达下调和神经钙黏素表达上调与肝癌包膜的完整性和侵袭表型显著相关(P<0.05),而与肿瘤分化、肿瘤直径、门静脉癌栓、卫星灶等无关(P>0.05)。结论上皮钙黏素表达下调和神经钙黏素表达上调均与肝细胞癌侵袭转移相关,联合检测两个指标有助于判断肝细胞癌的生物学特性。     

肝细胞癌门静脉主干癌栓uPA和uPAR基因表达

目的：探讨uPA,uPAR基因表达和肝癌转移，肝细胞癌门静脉主干癌栓（Tumor thrombosid of the main trunk of the portal vein,PVTT)形成的关系。方法：采用原位杂交等技术检测uPA,uPAR表达。结果：癌栓（A1组）和其原发癌（A2组）uPA,uPAR mRNA阳性表达率均高于无转移肝癌（B组）（P均＜0．01），A1组表达强度均高于A2组（P＜0．01），A2组小血管内可见癌细胞群落，A1组多见，B组无此现象，A1组、A2组uPAR和uPA蛋白质阳性表达率均高于B组（P均＜0．01），A1组表达强度均高于A2组（P＜0．01），uPA,uPAR mRNA和其蛋白质表达存在良好相关性（P均＜0．01），结论：uPA,uPAR在肝癌的侵袭和转移中起重要作用。其过度表达是PVTT形成和肝癌转移的重要因素。     

9 Survivin反义寡核苷酸对人肝癌细胞的抑制作用

目的:探讨survivin反义寡核苷酸（ASODN）对人肝癌细胞HepG2的抑制作用。方法:采用免疫组织化学法检测肝细胞癌（HCC）组织中survivin的表达。采用脂质体介导survivin ASODN体外转染人肝癌细胞株HepG2，Western blot检测细胞survivin蛋白的表达，FCM检测细胞的凋亡率，观察细胞在软琼脂中的集落形成能力。建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型，观察survivin ASODN的体内抑癌作用。 结果:（1）肝癌组织中survivin表达阳性率为75.8％(25/33)，明显高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.01);（2）survivin ASODN体外转染可明显下调HepG2细胞survivin蛋白表达，ASODN组HepG2细胞凋亡率明显高于空白对照组和SODN组(P<0.01)，ASODN组HepG2细胞在软琼脂中形成的集落数目明显少于空白对照组和SODN组(P<0.01);（3）ASODN组瘤体生长速度较空白对照组和SODN组明显减慢(P<0.01)，ASODN组瘤体重量较空白对照组和SODN组明显减轻(P<0.05)。结论:Survivin在HCC组织中高表达;survivin ASODN可以诱导HepG2细胞凋亡，在体外实验和动物实验中对HepG2细胞生长都有抑制作用。     

靶向抑制survivin基因对肝细胞癌血管生成的影响

目的研究靶向抑制survivin基因对肝细胞癌血管生成的影响,探讨survivin在血管生成中的作用机制。方法采用脂质体介导survivin ASODN体外转染人肝癌细胞株HepG2,Western blot检测细胞中survivin蛋白的表达;RT-PCR检测细胞中VEGF mRNA的表达;FCM检测细胞的凋亡率;利用皮下注射法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型;采用脂质体包裹survivin ASODN直接瘤内注射,观察其对移植瘤生长情况的影响;SABC法检测移植瘤组织MVD。结果400 nmol/L survivin ASODN转染可明显下调HepG2细胞survivin蛋白表达,但不影响VEGF mRNA表达;ASODN组HepG2细胞凋亡率显著高于空白对照组和SODN组(F=428.19,P<0.01);ASODN组瘤体生长速度较空白对照组和SODN组明显减慢(F=12.63,P<0.01);ASODN组瘤体重量较空白对照组和SODN组明显减轻(F=5.90,P<0.05);ASODN组MVD较空白对照组和SODN组明显降低(F=34.29,P<0.01)。结论survivin ASODN可以抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长,其机理可能是诱导HepG2细胞自发性凋亡和抑制肿瘤血管生成。     

COX-2在肝细胞肝癌中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨肝细胞癌(HCC)中环氧化酶-2(COX-2)的表达与细胞凋亡的关系及其可能的机制.方法 选用44例HCC组织制作组织芯片,应用免疫组织化学S-P法检测癌组织COX-2、caspase-3和survivin的表达情况.应用末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡指数(AJ).结果 HCC中COX-2蛋白阳性率为52.3%,其表达与AJ呈显著负相关r=-0.354,P＜0.05),与caspase-3蛋白表达也呈显著负相关(r=-0.447,P＜0.01),但与survivin蛋白的表达呈显著正相关(r=0.394,P＜0.01).AI与caspase-3呈显著正相关(r=0.381,P＜0.05),但与survivin呈显著负相关(r=-0.458,P＜0.01).结论 本研究证实了HCC中COX-2的抗肿瘤细胞凋亡作用;其机制可能是通过上调肿瘤细胞survivin表达,同时下调caspase-3表达途径实现的.     

结直肠癌组织中胃泌素的表达与Fas／FasL和天冬半胱氨酸蛋白酶的关系

目的了解胃泌素（GAS）mRNA及其蛋白在结直肠癌组织中的表达情况，并探讨其与结直肠癌细胞凋亡指数（AT）和凋亡调控基因Fas／FasL、天冬半胱氨酸蛋白酶（easpases）的关系。方法采用巢式RT-PCR方法检测79例结直肠癌组织中GAS的mRNA表达．用TUNEL法检测细胞凋亡情况，结直肠癌组织中GAS、Fas／FasL、caspase-3、caspase-8的蛋白表达采用免疫组织化学SP法。结果结直肠癌组织中GASmRNA与其蛋白表达呈正相关（rGAS=0．99，P〈0．01）．高、中分化结直肠癌组织中GASmRNA及其蛋白的表达明显低于低分化者（χ^2，（高与低）=10．47、10．23，均P〈0．01；χ^2（中与低）=6．68、4．95，均P〈0．05）；GASmRNA及其蛋白在乳头状腺癌、管状腺癌的阳性表达率明显低于黏液印戒细胞癌及未分化癌（χ^2（乳与黏印）=4．80、6．22，χ^2（乳与未）=5．44、8．43，χ^2（管与黏印）=4．40、4．38．χ^2（管与未）=4．92、6．43，均P〈0．05）；DukesA、B期的GASmRNA及其蛋白阳性表达率明显低于C、D期（χ^2=4．84、4．45，均P〈0．05）。GAS高、中表达组的细胞AI明显低于低表达组，差异有统计学意义（q（高与低）=6．71，q（中与低）=4．60，均P〈0．01）；FasL阳性表达率在GAS低、中、高表达3组间相比。差异具统计学意义（χ^2=9．35，P〈0．011，其中FasL在GAS高、中表达组的阳性表达率明显高于低表达组（χ^2（高与低）=6．24．χ^2（中与低）=4．74，均P〈0．05）：结论GAS对结直肠癌细胞凋亡的调控可能与Fas／FasL的表达失衡及其功能和信号系统的紊乱有关。GAS的检测可作为临床结直肠癌生物学行为的评估指标之一．     

血小板衍化内皮细胞生长因子和血管内皮生长因子在肝细胞癌和门静脉癌栓中的表达

目的 探讨肝细胞癌（ＨＣＣ）门静脉癌栓的形成机制。方法 采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析法,对手术切除的２８例ＨＣＣ和１８例门静脉癌栓标本中血小板衍化内皮细胞生长因子（ＰＤ－ＥＣＧＦ）ｍＲＮＡ和血管内皮生长因子ｍＲＮＡ的表达水平进行相对定量研究。结果 ＰＤ－ＥＣＧＦｍＲＮＡ在门静脉癌栓、ＨＣＣ和癌周肝组织中的表达率分别为７７．８％、６７．８％６ ３５．７％,ＶＥＧＦｍＲＮＡ则分别为８８．９％、７５．０     

不同剂量的X射线辐照对胰腺癌细胞Survivin表达的影响

目的 观察不同剂量的X线辐照后胰腺癌细胞Survivin表达的变化.方法 胰腺癌细胞室温下经不同剂量的X线辐照处理.实验分为A组:对照组,无照射;B组:2 Gy照射;C组:半致死量4 Gy照射;D组:致死量10 Gy照射.RT-PCR法检测各组Survivin mRNA表达量;MTT法检测胰腺癌细胞增殖抑制率及流式细胞术检查细胞凋亡率.结果 在X线辐照处理后1～2 d,B组与C组的Survivin表达明显增加,且在4 d达到高峰;D组的Survivin表达显著下降.X线照射后第6天,B组与C组的胰腺癌细胞的增殖未受抑制,而D组的增殖受到明显抑制.B组的凋亡率为3%,C组的凋亡率为5%,D组的凋亡率为53%,与B组、C组相比,差异有统计学意义(P<0.01).结论 放疗后诱导的Survivin表达上调可能是胰腺癌细胞对放疗不敏感的重要原因之一.     

Survivin siRNA纳米载体的制备及其对胰腺癌细胞生物学特性的影响

目的：利用纳米技术和基因干扰技术设计并合成携载survivin siRNA的纳米载体,探讨survivins iRNA纳米微粒对人胰腺癌细胞BXPC-3增殖和凋亡的影响。方法：体外培养人胰腺癌BXPC-3细胞,将BXPC-3细胞随机分为4组：生理盐水组、不含基因的纳米微粒组、survivin siRNA组和s urvivins iRNA纳米微粒组。RT-PCR检测survivin mRNA的表达;Wes tern blot法检测s urvivin蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;MTT法检测细胞增殖情况。结果：细胞培养72 h后,survivin siRNA纳米微粒组细胞的survivin mRNA和蛋白表达均低于其他3组（P〈0.05）。survivin siRNA纳米微粒组细胞增殖明显受抑制,生长缓慢,而细胞凋亡率高于其他3组（P〈0.05）。结论：survivin siRNA纳米微粒能够有效减少胰腺癌BXPC-3细胞survivin mRNA和蛋白的表达,提高肿瘤细胞的凋亡,显著抑制BX-PC-3细胞的增殖。     

IFITM3在原发性肝癌中的表达及其对MMP-9调控效应

目的:探讨干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)在原发性肝癌中的表达及作用。方法:用免疫组化与Western blot检测60例肝癌组织及对应癌旁组织中IFITM3以及基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白的表达;构建IFITM3小干扰RNA片段(psilencer3.1-sh IFITM3)转染肝癌Hep G2细胞,用实时荧光定量PCR及Western blot法、CCK8法、Transwell试验和划痕试验分别检测细胞转染后IFITM3和MMP-9 m RNA及蛋白表达、增殖能力以及侵袭与迁移能力的变化。结果:与癌旁组织比较,肝癌组织中IFITM3与MMP-9的蛋白的阳性表达率与表达量均明显升高(81.67%vs.13.33%;88.33%vs.8.33%,均P0.05);psilencer3.1-sh IFITM3转染后,Hep G2细胞IFITM3和MMP-9的m RNA与蛋白表达水平、细胞增值率均明显降低,穿膜细胞数明显减少,划痕融合速率明显减慢。以上定量指标间的差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:原发性肝癌中IFITM3表达增高,高表达的IFITM3可能通过调控MMP-9的表达而促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。