甘草素对非小细胞肺癌细胞放疗敏感性的影响

[目的]探讨甘草素对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞放疗敏感性的作用及机制.[方法]体外培养NSCLC细胞株A549.使用不同浓度甘草素处理,筛选20％抑制浓度(IC20)的甘草素浓度.经甘草素处理后,克隆形成实验观察细胞放疗敏感性,选择半数细胞存活分数(SF)对应的放射线剂量进行后续实验.A549细胞随机分为对照组、甘...     

氨对重组中国仓鼠卵巢细胞生长及人红细胞生成素表达的影响

氨对重组中国仓鼠卵巢（CHO）细胞的生长具有明显的抑制作用，并遵循二级抑制模型，抑制常数Ka为41．5（mmol/L)^2，即当氨浓度为6．45mmol/L时，细胞的比生长速率下降到最大比生长速率的50％，在重组CHO细胞的批培养过程中，细胞密度和红细胞生成素浓度随着起始氨浓度的提高而下降，但存在一最适的氨浓度，在此浓度下，单位重组CHO细胞的EPO比生成速率最大。     

刺五加多糖对人白血病K562细胞作用的研究

目的：研究刺五加多糖对体外培养人白血病K562细胞有无增殖抑制和凋亡诱导作用。方法：取培养至对数生长期的K562细胞（密度为5×10^4／mL和1×10^4／mL）分别接种于96孔培养板（100μL／孔）及50mL培养瓶（1．5mL／瓶）中。加入不同浓度的刺五加多糖作用24h后。用CCK-8法检测刺五加多糖对K562细胞增殖抑制作用；荧光显微镜检测细胞凋亡。结果：不同浓度刺五加多糖（0．405、0．810、1．620、2．430、3．240mg／mL）作用K562细胞24h．抑制率分别为16％、27％、48％、50％、55％；荧光显微镜下观察发现培养K562细胞中出现核固缩、凋亡小体。结论：刺五加多糖对体外培养K562细胞生长有明显的抑制作用．可诱导K562细胞凋亡。     

5-125I-2′-脱氧尿嘧啶核苷杀伤大鼠C6细胞的实验研究

目的 研究在不同放射性浓度下。5-^125I-2′-脱氧尿嘧啶核苷(^125I-UdR)对大鼠C6神经胶质瘤细胞的杀伤效应,并初步探讨其发生机制。方法 在大鼠C6神经胶质瘤细胞的培养液中,加入不同放射性浓度^125I-UdR培养24h后,通过细胞形态学变化、细胞存活实验及流式细胞仪检测细胞凋亡率进行观察。结果 在加入74MBq／L放射性浓度的^125I-UdR培养24h后,细胞形态上表现出皱缩、变圆、脱落现象,贴壁细胞数目减少。不同放射性浓度的细胞存活分数(SF)随着浓度升高明显下降,同一浓度下与对照组相比较,存在统计学意义。同时流式细胞仪(FCM)检测随着^125I-UdR的升高,细胞凋亡率增加,24h细胞凋亡率最高接近20％。结论 ^125I-UdR对大鼠C6神经胶质瘤细胞具有明显的杀伤效应,并随着浓度的提高而增强,其发生机制可能是通过诱导细胞凋亡而产生。     

雄激素受体在大鼠触须毛囊干细胞中的表达研究

目的探讨在毛囊周期的3个不同时期(生长期、退化期和静止期)中大鼠毛囊干细胞中以及体外培养的毛囊干细胞中雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达规律及其意义.方法采用免疫组织化学方法检测AR表达,采用总RNA提取法及RT-PCR检测AR mRNA的表达情况.结果①在体情况下,生长期、退化期和静止期毛囊干细胞中均有AR的表达,AR mRNA在生长期呈强表达,而在退化期和静止期表达微弱;②体外情况下,培养的毛囊干细胞中有AR的表达.结论毛囊干细胞在整个毛囊周期中均有AR的表达,是雄激素作用的靶细胞;AR mRNA在毛囊周期中呈规律性表达,提示雄激素与其受体的相互作用可能对毛囊干细胞的分化具有重要的促进作用.     

紫杉醇诱导人胰腺癌细胞Bxpc-3细胞凋亡的实验研究

目的 观察紫杉醇(PA)对体外培养的Bxpc-3细胞凋亡的影响. 方法 体外培养Bxpc-3人胰腺癌细胞,采用MTT法检测不同浓度PA对Bxpc-3细胞的抑制情况,采用流式细胞术检测Bxpc-3细胞的周期及凋亡率.加入正常的培养液作为对照. 结果 与对照相比,不同浓度PA(100,50,25mg/ml)作用24 h可使Bxpc-3细胞生长明显抑制,抑制率呈浓度依赖关系;Bxpc-3细胞在PA 100,50 mg/ml作用下,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例和增殖指数(PI)下降;PA 100,50 mg/ml作用48 h后凋亡指数(AI)增高,AI/PI比例分别是对照组的6倍和2.5倍. 结论 PA对Bxpc-3细胞生长有抑制作用,可诱导人胰腺癌细胞Bxpc-3细胞凋亡.     

腺病毒免疫体外培养BALB/c小鼠脾细胞的研究

本文报道用两种体外免疫及体外强化的方法,对7型腺病毒(7—AV)诱导BALB/c小鼠B淋巴细胞活化进行了研究。结果表明:活7—AV免疫后使培养的脾细胞存活率下降,适当浓度的灭活7—AV免疫可以使培养细胞增生并能在离体培养条件下存活2周,细胞存活率可达90％以上。巨噬细胞预先处理抗原的体外免疫方法的免疫效果较好,如采用体外强化方法可以诱生较明显的特异性抗体反应。     

人胚胎骨髓基质干细胞的长期培养及体外成骨特性

研究了人胚胎骨髓基质干细胞(hBMSCs)在体外长期培养时的基本特性和向成骨细胞的分化能力。结果表明：前三代hBMSCs多数呈长梭形,生长快速,增殖能力强;而后几代细胞变得比较扁平,生长缓慢,增殖能力下降;至第六代,细胞已失去增殖能力。每一代细胞生长均分为延滞期、对数生长期和稳定期,延滞期一般为6～7d,对数生长期为4～5d,最后是稳定期。前三代细胞对数生长期的群体倍增时间(PD71)基本相同,而第四代细胞的PDT略有上升,第五代细胞的PDT最大。在体外扩增能力方面,前三代细胞均可以扩增18倍左右,而第四、第五代细胞则下降至11倍、5倍。实验结果表明扩增后的细胞经过诱导可以形成钙化小结,与未诱导细胞相比碱性磷酸脂酶(ALP)活性显著提高。     

丁酸钠对重组CHO细胞生长及产物EPO表达的影响

在CHO－S－SFM II无血清培养基中维持培养重组CHO细胞,考查添加丁酸钠对细胞生长,糖代谢及产物EPO表达的影响,丁酸钠浓度达到2mmol/L时完全抑制了细胞的生长,同时,丁酸钠的添加也降低了葡萄糖比消耗速率（30％左右）,在本培养系统中,丁酸钠并不能促进产物的表达,但有助于维持EPO表达的稳定性。     

正常人毛乳头细胞和真皮鞘细胞的生长特性观察

目的 观察毛乳头细胞和真皮鞘细胞在体外培养条件下的生长特性。方法 采用胶原酶消化法培养正常人头皮毛囊的毛乳头细胞和真皮鞘细胞,在体外进行传代培养,测定毛乳头细胞不同时相点的细胞数,并观察表皮细胞生长因子、氢化可的松＋胰岛素、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对毛乳头细胞和真皮鞘细胞增殖的影响。结果 毛乳头细胞、真皮鞘成纤维细胞和真皮成纤维细胞的生长呈现３个时相,即停滞期、指数生长期和缓慢生长期。３种细胞都有４ｄ的停滞期,５～１１ｄ为指数生长期,之后呈现出缓慢生长。ＥＧＦ对３种细胞都有显的促进作用（Ｐ〈０．００１）,尤其是对真皮鞘成纤维细胞的作用更强。氢化可的松和胰岛素、ＧＭ－ＣＳＦ对３种细胞的作用不明显。毛乳头细胞、真皮鞘细胞和成纤维细胞的倍增时间分别为６０、５９．２、７６．８ｈ。结论 ＥＧＦ对毛乳头细胞、真皮鞘细胞和     

丙酮酸乙酯对人脐静脉内皮细胞HMGB1表达的影响

目的：本研究意在探讨丙酮酸乙酯（EP）对炎症因子HMGB1表达的影响,从而证实EP在急性脓毒症中的作用及机制。方法：采用原代培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,免疫组化法鉴定其纯度,台盼蓝拒染实验鉴定细胞活力。观察不同计量的EP对人脐静脉内皮细胞分泌HMGB1的作用。细胞分三组：LPS 100 ng/mL＋EP 0μM组、LPS 100 ng/mL＋EP 5μM组、LPS 100 ng/mL＋EP 10μM组。采用Western blot方法检测培养上清液HMGB1的含量。结果：各细胞组于LPS 100 ng/mL刺激16 h后,EP 5μM剂量组对HMGB1分泌具有一定的抑制作用,与EP 0μM组比,HMGB1含量明显降低（t=21.27,P〈0.05）;10μM剂量组与0μM组比,降低HMGB1作用更为明显（t=26.38,P〈0.05）。结论：丙酮酸乙酯可以减少血管内皮细胞释放HMGB1,对急性脓毒症有改善作用。     

丙酮酸乙酯对人胰腺癌细胞的抑制作用

目的观察丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)对人胰腺癌细胞PANC-1和AsPC-1增殖、凋亡及高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)mRNA表达水平的影响。方法采用MTT和FCM法分别检测EP与5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)单独及联合作用(EP组,E组;5-FU组,F组;联合组,EF组)对PANC-1和AsPC-1细胞增殖和凋亡的作用;通过Real Time-PCR(RT-PCR)观察各用药组对PANC-1和AsPC-1细胞HMGB1mRNA表达水平的影响。结果随着药物浓度的增加,各用药组细胞增殖活性及HMGB1mRNA表达水平逐渐降低,凋亡率逐渐增高。E0.5225F10、E1.0450F20、E2.0900F40、E3.1350F80组的胰腺癌细胞抑制率均比相应E组高(P<0.05),EF组的胰腺癌细胞凋亡率均比相应E组高(P<0.05),E3.1350F80、E4.1800F160组均比相应E组的胰腺癌细胞HMGB1mRNA表达水平高(P<0.05)。结论 EP可能通过对HMGB1表达的影响,抑制胰腺癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,从而起到抗胰腺癌作用,但是其具体机制及在体内的作用有待进一步深入研究。     

ETM study of electroporation influence on cell morphology in human malignant melanoma and human primary gingival fibroblast cells

Objective

To estimate electroporation (EP) influence on malignant and normal cells.

Methods

Two cell lines including human malignant melanoma (Me-45) and normal human gingival fibroblast (HGFs) were used. EP parameters were the following: 250, 1 000, 1 750, 2 500 V/cm; 50 µs by 5 impulses for every case. The viability of cells after EP was estimated by MTT assay. The ultrastructural analysis was observed by transmission electron microscope (Zeiss EM 900).

Results

In the current study we observed the intracellular effect following EP on Me-45 and HGF cells. At the conditions applied, we did not observe any significant damage of mitochondrial activity in both cell lines treated by EP. Conversely, we showed that EP in some conditions can stimulate cells to proliferation. Some changes induced by EP were only visible in electron microscopy. In fibroblast cells we observed significant changes in lower parameters of EP (250 and 1 000 V/cm). After applying higher electric field intensities (2 500 V/cm) we detected many vacuoles, myelin-like bodies and swallowed endoplasmic reticulum. In melanoma cells such strong pathological modifications after EP were not observed, in comparison with control cells. The ultrastructure of both treated cell lines was changed according to the applied parameters of EP.

Conclusions

We can claim that EP conditions are cell line dependent. In terms of the intracellular morphology, human fibroblasts are more sensitive to electric field as compared with melanoma cells. Optimal conditions should be determined for each cell line. Summarizing our study, we can conclude that EP is not an invasive method for human normal and malignant cells. This technique can be safely applied in chemotherapy for delivering drugs into tumor cells.     

丙酮酸乙酯抑制脓毒症时HMGB1释放的分子机制

【目的】 探讨丙酮酸乙酯(EP)抑制脓毒症巨噬细胞表达和释放HMGB1的相关分子机制?【方法】将小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7分为LPS和LPS+ EP组,分别采用100 ng/mL LPS和100 ng/mL LPS+ 5 mmol/L EP刺激,于刺激后不同的时间点,Western blot检测细胞总蛋白内p-p38MAPK?CBP的含量变化以及胞质和胞核内NF-κB的含量;用免疫细胞化学?激光共聚焦显微镜观察培养细胞内p-p38MAPK?NF-κB和CBP的变化;Real-time PCR检测培养细胞HMGB1的mRNA水平,ELISA检测培养上清HMGB1的蛋白含量?【结果】 LPS和LPS+ EP刺激后2~6 h,细胞内p-p38MAPK蛋白含量逐渐增加,但LPS+ EP组p-p38MAPK蛋白含量明显低于LPS组;NF-κB在细胞质内的含量逐渐减少,而在细胞核内的含量逐渐增多,而LPS+ EP组NF-κB从胞质到胞核的移位明显弱于LPS组;细胞内CBP的蛋白含量逐渐增加,但LPS+ EP组明显低于LPS组?随着p-p38MAPK?NF-κB和CBP等蛋白的变化,LPS和LPS+ EP刺激后24?36和48 h,LPS+ EP组细胞内HMGB1 mRNA表达比LPS组明显减少;在LPS和LPS+ EP刺激后18~48h,LPS+ EP组培养上清中HMGB1蛋白含量明显低于LPS组?【结论】 EP通过抑制单核-巨噬细胞内的信号分子p-p38MAPK?NF-κB?和 CBP的表达,从而抑制LPS诱导单核-巨噬细胞表达和释放HMGB1?     

Single-dose methotrexate Combined with Chinese medicinal herbs treated unruptured and ruptured ectopic pregnancy

pregnancy(EP)hasbeenincreasingyearbyyear.Recently,variouskindsofmedicinesusedfortreatmentofEPhavebeenreported.Themethotrexate(MTX)isthecommonestone,whichhasbeenusedindifferentways,suchas.IIntramuscularorintravenousinjection('),oraladministration(2),injectionwithinthegestationalsacunderlaparoscopicandvaginalultrasonographicguidance(').WhenasmalldoseofMTXwasusedrepeatedly,sideeffectratecouldreach20%--30%(4).UPtonow,asfarasweknow,EPistreatedbyMTXdomesticallyorinternationallyonlyforunruptur…     

PGE2对LPS诱导小鼠骨髓源性树突细胞成熟及EP4受体表达影响

目的：观察不同浓度前列腺素E2(PGE2)刺激对脂多糖( LPS)诱导小鼠骨髓源性树突细胞( DCs)成熟及EP4受体表达的影响。方法采用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子( rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4( rmIL-4)刺激小鼠骨髓源细胞,诱导生成DCs;经LPS(100 ng/ml)诱导成熟后,用不同浓度 PGE2(0．625、1．25、2．5、5、10、20 nmol/L)刺激 DCs 24 h,流式细胞术检测 DCs 表型 CD40、CD83、MHC-Ⅱ的表达和抗原摄取功能,荧光间标法检测小鼠骨髓源DCs细胞膜上EP4的表达,以平均荧光强度表示表达的高低;MTT法检测经PGE2及LPS诱导成熟的DCs对T细胞增殖的作用。结果流式细胞术结果显示 PGE2(2．5、5、10 nmol/L)能明显上调 CD40、CD83、MHC-Ⅱ的表达;PGE2(1．25、2．5、5、10、20 nmol/L)能明显抑制DCs的抗原摄取功能;MTT法检测结果显示PGE2(2．5、5、10 nmol/L)刺激DCs能促进T细胞增殖的作用;荧光间标法检测结果显示PGE2(2．5、5、10 nmol/L)明显升高DCs细胞膜上EP4表达。结论 PGE2可以调节DCs功能,该作用可能与其调节EP4受体表达相关。     

超速起搏预适应对缺血再灌注心室肌有效不应期及其离散度的影响

目的　观察超速起搏预适应对缺血再灌注 (I/ R)心室肌有效不应期 (ERP)及不应期离散度的影响。　方法　 4 8只健康家兔分为对照组 (C组 )、缺血再灌注组 (IR组 )、起搏预适应早期保护作用组 (EP组 )和延迟保护作用组 (DP组 )。观察 3个试验组 I/ R心肌超微结构、心室肌 ERP及 ERP离散度变化。　结果　 (1 )电镜下 EP组和 DP组心肌细胞超微结构损伤较 IR组明显减轻。 (2 ) EP及 DP组 ERP缺血早期 (I5min)较缺血前 (I前)延长 ,缺血晚期 (I30 min)和再灌注早期 (R5 min,R1 5 min)较缺血前明显缩短。与 IR组相比 ,EP及 DP组 I5 min和 I1 5 min的心室肌 ERP明显缩短 ,I30 min明显延长 (P<0 .0 5 )。(3)缺血期各时点和 R5min的心室肌 ERP离散度较 IR组明显减少 (P<0 .0 5 )。　结论　超速起搏预适应可明显减轻兔 I/ R时心肌细胞超微结构损伤 ,其抗 I/ R心律失常的重要机制可能是明显减轻缺血期和再灌注早期心室肌 ERP离散度     

灵芝孢子粉对PTZ致痫大鼠神经细胞野生型p53表达的影响

目的观察和探讨灵芝孢子粉对戊四氮(PTZ)致痫大鼠海马野生型p53(wtp53)蛋白表达的影响。方法将60只成年SD大鼠随机分为空白对照组,癫痫模型组,灵芝孢子粉用药高、中、低剂量组共5组。癫痫模型组和灵芝孢子粉用药各组大鼠腹腔注射亚惊厥剂量的PTZ35mg/(kg.d),直至达到点燃标准;用药组以灵芝孢子粉灌胃。采用免疫组织化学法检测大鼠海马CA1区wtp53蛋白的免疫反应性。结果大鼠海马CA1区wtp53蛋白表达模型组明显高于对照组(P<0.01);用药高剂量组wtp53蛋白表达明显低于模型组(P<0.05)。结论灵芝孢子粉能明显抑制wtp53蛋白的表达,可能是其对癫痫所致神经细胞凋亡有明显抑制,从而是对脑组织起保护作用的分子机制之一。     

肝癌细胞前列腺素E2受体表达和分布的研究

目的：基于肝癌细胞（肝细胞癌细胞和胆管上皮癌细胞）对PGE2的不同反应性，研究Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1肝癌细胞株前列腺素E2受体的表达类型和分布定位。方法：体外培养肝细胞癌细胞株（Hep3B，HuH7）和胆管上皮癌细胞株（SG231，HuCCT1）。分别给予不同浓度的外源性PGE2处理，以WST-1细胞增殖实验检测肿瘤细胞增殖率：以RT-PCR实验检测上述细胞4种PGE2受体（EP1、EP2、EP3和EP4）的mRNA表达情况；采用上述肝癌细胞的细胞涂片或细胞爬片进行荧光免疫细胞化学实验．于荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察上述4种EP受体蛋白的表达和定位分布。结果：WST-1细胞增殖实验结果显示PGE1可以促进Hep3B和HuH7细胞的生长，但对胆管上皮癌细胞（SG231、HuCCT1细胞）则表现为生长抑制作用；RT-PCR和荧光免疫细胞化学实验结果表明Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1细胞株均有4种EP受体的表达；激光共聚焦结果显示4种EP受体不仅有胞浆，胞膜定位。而且部分在胞核也有表达。其中EP4受体的表达主要定位于细胞核。结论：Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1，4种肝癌细胞株均可以表达EP1、EP2、EP3和EP4受体。且受体的细胞内定位不同。肝癌细胞对前列腺素E2的反应性可能与EP受体的定位以及不同的细胞内信号转导通路激活有关。     

盐酸纳洛酮对颅脑手术病人血浆和脑脊液β-内啡肽的影响

目的:通过观察在颅脑手术中盐酸纳洛酮对血浆和脑脊液中β-内啡肽(β-EP)的影响,探讨盐酸纳洛酮的脑保护作用.方法:32例择期颅脑手术病人ASAⅠ～Ⅱ级,随机分为纳洛酮组(Ⅰ组)和对照组(Ⅱ组).采用放射免疫分析法检测血浆及脑脊液中β-EP的含量.结果:纳洛酮组在给药后1 h( T2期)、给药后2 h(T3期)和给药后3 h(T4期)血浆β-EP含量分别为(187.76±81.37)、(109.56±45.92)和(69.37±21.66) ng*L-1,脑脊液中含量分别为(2 169.61±416.37)、(1 369.85±433.55)和(987.62±278.19) ng*L-1,均较给药前(T1期)即开始切硬膜时低(P<0.05),纳洛酮组血浆和脑脊液中的β-EP均低于对照组同期值(P<0.05).结论:颅脑手术围术期应用纳洛酮可以使脑脊液和血浆中β-EP含量降低,从而说明应用纳洛酮可以减轻脑水肿和损伤,保护脑细胞.