神经干细胞接种密度对其增生和分化的影响

为探讨神经干细胞不同接种密度对其增生和分化的影响,取10～12周龄胎儿的大脑皮质用胰酶消化获得单细胞,分别以1×10~2/mL、1×10~4/mL和1×10~6/mL的细胞密度接种,用无血清培养基DMEM/F12、上皮细胞生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和白血病抑制因子(LIF)培养;用MTT法测OD值并观察神经干细胞的存活和增生情况。从培养基中剔除生长因子,继尔以10％胎牛血清诱导分化,用免疫细胞化学(ICC)方法,研究不同细胞密度培养后神经干细胞的分化能力。结果:在1×10~6/mL细胞密度下培养,神经干细胞增生活跃,形成神经球,Nestin表达阳性,10％胎牛血清诱导后神经干细胞可分化为神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞;低细胞密度(低于1×10~4/mL)培养不利于神经干细胞的存活和增生,血清诱导未见分化的细胞。提示:适宜的神经干细胞接种密度有利于其增生和分化。     

不同浓度GDNF诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化研究

目的观察不同浓度胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对神经干细胞(NSCs)向多巴胺(DA)能神经元分化的影响。方法取新生鼠脑组织体外分离培养NSCs,第2代NSCs诱导培养基中分别加入0、5、10、20 ng/mL GDNF进行诱导。用逆转录-聚合酶链反应检测诱导后细胞酪氨酸羟化酶(TH)mRNA的表达,免疫细胞化学染色鉴定NSCs,检测NSCs向DA能神经元分化率。结果各诱导组均表达TH mRNA。神经球具有自我更新和表达巢蛋白的能力,诱导分化后的细胞能表达神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞特异性抗原。与空白对照组比较,GDNF诱导组TH阳性细胞率均明显升高(P<0.05);且10、20ng/mL GDNF诱导组升高幅度明显高于5 ng/mL GDNF诱导组(P<0.05),10、20 ng/mL GDNF诱导组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论从新生鼠脑组织分离出NSCs。不同浓度的GDNF均能促进NSCs向DA能神经元分化,GDNF浓度从10ng/mL提高到20 ng/mL时TH阳性细胞率无明显变化。     

Rho在二氧化硅诱导的人支气管上皮细胞α平滑肌肌动蛋白表达中的作用（英文）

目的：探讨Rho在二氧化硅（SiO2）诱导人支气管上皮细胞（HBECs）α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达中的作用。方法：以SiO2处理的HBE细胞为研究对象,免疫细胞化学及Western印迹检测α-SMA表达;GST pull down分析Rho的活化情况;干预实验中用Rho抑制剂Y27632处理细胞后,West-ern印迹检测SiO2对α-SMA表达的影响。结果：SiO2（0,50,100,200,300μg/mL）分别作用HBECs细胞72h后,α-SMA表达增强,其中以200μg/mL SiO2组α-SMA表达最强,为对照组的（5.09±1.98）倍（P〈0.01）;用200μg/mL SiO2分别作用HBECs细胞1,2,6,12,24h后,Rho明显活化（P〈0.01）;Rho抑制剂Y27632明显抑制了SiO2诱导的α-SMA表达,20和30μmol/L的Y27632抑制率分别为68%和75%（P〈0.01）。结论：Rho参与介导SiO2诱导的HBECs中α-SMA的表达。     

脂肪组织源性干细胞分步诱导分化为神经元样细胞

目的探讨脂肪组织源性干细胞(ADSCs)诱导分化为神经元样细胞的可行性。方法 ADSCs分离自雄性SD大鼠附睾脂肪垫,差速贴壁法纯化ADSCs,传至第3代培养细胞行流式细胞术行表型鉴定(CD106,CD11b,CD45,CD90,CD29,CD49d),并进行成脂诱导。取鉴定后的ADSCs用分步诱导法,即先用含10 ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、20ng/ml表皮生长因子(EGF)、2%B27的DMEM/F12培养基I培养,诱导其向神经干细胞转分化,再用含10 ng/ml胶质细胞源性神经营养因子(GDNF),10 ng/ml脑源性神经营养因子(BDNF),1μmol/L维甲酸(RA)的培养基II诱导分化为神经元样细胞(NLCs),免疫细胞化学法鉴定细胞表面标记物巢蛋白(nestin),神经细胞特异性标志微管相关蛋白(MAP2),神经元核蛋白(NeuN)。结果分离纯化的ADSCs CD90、CD29表达强阳性;成脂诱导分化后细胞油红O染色阳性;ADSCs经培养基I培养7 d后聚集成球样细胞团悬浮于培养液中,表达nestin;继而用培养基II诱导分化4 h后细胞球逐渐贴壁,球周边少数细胞向外发出突起,形似神经元,MAP2、NeuN均呈阳性。结论特定条件下,ADSCs在体外可被逐步诱导分化为NLCs。     

褪黑激素对新生大鼠神经干细胞向神经元样细胞分化的影响

目的 探索褪黑激素对体外培养新生大鼠神经干细胞分化的影响。方法 从新生SD大鼠室管膜下区分离依赖碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)和表皮细胞生长因子（EGF）生存的神经干细胞进行培养，原代及子代细胞鉴定后用于实验。实验细胞均在无生长因子而含10mL/L胎牛血清条件下培养，经褪黑激素或Luzindole作用1周后做免疫组织化学染色，比较Map2阳性细胞出现率。结果 （1) 依赖bFGF和EGF生长的神经干细胞体外呈集落样生长，表达抗原蛋白巢蛋白（Nestin) ,无生长因子培养基中可分化形成胶质原纤维酸性蛋白（GFAP），S100蛋白，微管相关蛋白（Map2)阳性细胞。（2）褪黑激素能够提高Map2阳性细胞生成率（23．45％，21．82％）（P＜0．01）。（3）褪黑激素膜受体竞争性阻断剂Luzindole可阻断高浓度（100μmol/L）褪黑激素促神经干细胞分化作用，但不能抑制低浓度褪黑激素（10nmol/L )的作用。结论 褪黑激素能促进神经干细胞向神经元样细胞分化，不同浓度褪黑激素可能存在不同的作用机制。     

Rho激酶信号转导通路对醛固酮诱导的人肾小管上皮细胞间质转分化的影响?

目的：探讨Rho激酶对醛固酮( ALD)诱导的人肾小管上皮细胞间质转分化的影响。方法人肾小管上皮细胞( HK-2)培养于含15%FBS的 RPMI-1640培养液中,依普利酮(10μmol/L )和 Rho激酶抑制剂Y27632(1μmol/L)预处理细胞30 min后,100 nmol/L ALD作用HK-2细胞24或48 h, ELISA法测定培养上清液中Rho激酶蛋白的含量,实时定量PCR检测细胞α-SMA、E-cadherin mRNA的表达,Western blot测定细胞α-SMA、E-cadherin蛋白的表达。结果 ALD显著上调HK-2细胞Rho激酶蛋白的表达及α-SMA mRNA和蛋白的表达,减低E-cadherin mRNA和蛋白的表达。 Rho激酶抑制剂Y27632及依普利酮可拮抗上述效应。结论ALD可激活HK-2细胞Rho激酶的活化,并通过Rho激酶诱导HK-2细胞间质转分化而加速肾小管间质纤维化的进展。     

纹状体组织提取液诱导人胚胎神经干细胞向多巴胺能神经元分化的实验研究

目的体外培养人胚胎神经干细胞并诱导其向多巴胺能神经元分化。方法从临床引产的人胚胎（胎龄8～16周）海马组织中分离、培养人胚胎神经干细胞, 对其进行诱导分化。诱导剂采用来源于20周胎龄胚胎的纹状体的组织提取液。实验分为2组：对照组无诱导剂,培养基为撤除生长因子的基础培养基;实验组培养基中加入纹状体组织提取液50μL/mL;于诱导分化的第7天终止诱导分化,采用标记TH的免疫荧光染色方法检测TH阳性细胞量,用RT-PCR方法检测TH-mRNA的表达情况。结果抗TH的免疫荧光染色结果为：对照组与实验组的TH阳性细胞率分别为(0.53±0.17)%和(7.38±0.84)%,两组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。RT-PCR结果显示：对照组TH-mRNA表达不明显,实验组明显表达TH-mRNA,实验组与对照组的TH-mRNA表达差异亦有统计学意义（P＜0.05）。结论纹状体组织提取液具有促进人胚胎神经干细胞向多巴胺能神经元分化的作用。     

ZL006衍生物的设计、合成及神经保护活性研究

目的：探究突触后密度蛋白95(PSD95)-神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase,nNOS）解耦联剂ZL006(1)的构效关系,探明其解偶联机制。方法：以前期研究发现的PSD95-nNOS解耦联剂ZL006(1)为先导化合物,通过对其亲脂端、连接臂和水杨酸结构3部分进行修饰,设计合成了4个系列共21个ZL006衍生物,其结构均经1H NMR、13C NMR和ESI-MS确认。采用LDH实验测试目标化合物对谷氨酸诱导损伤的人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）的保护作用,以CCK-8染色法测试了目标化合物的细胞毒性。结果：大部分化合物对细胞具有保护活性,其中化合物5e和27a与阳性对照化合物ZL006的神经保护活性相当（10μmol/L时51.24%、48.42%）,化合物23表现出优于ZL006的细胞保护活性（10μmol/L时54.34%,1μmol/L时29.58%）,并表现出较低的细胞毒性（25μmol/L时2.85%）。结论：研究丰富了PSD95-nNOS解耦联剂的结构类型,并对其应用于神经保护提供了借鉴。     

嗅鞘细胞分泌蛋白IGFBP-2对神经干细胞分化的作用

目的:探讨嗅鞘细胞分泌蛋白IGFBP-2在诱导神经干细胞(NSCs)分化过程中的作用.方法:采用新生1 d昆明小鼠嗅球培养嗅鞘细胞(OECs),并制备无血清上清液.C17.2 NSCs置于含10%FBS的DMEM/F12培养基培养,传至第3代,待细胞生长至80%融合时,分别加入OECs无血清上清液(实验组)、H-DMEM/F12培养基(对照组)培养;实验组和对照组均分别加入终浓度为0 ng/mL、125 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL的IGFBP-2.倒置显微镜下观察诱导后细胞生长情况,于诱导5d后收集各组细胞,行Western blot检测细胞巢蛋白(Nestin)、神经胶质酸性蛋白(GFAP)及 β-微管蛋白Ⅲ(TUJ-1),蛋白激酶1/2(ERK 1/2)表达情况,免疫荧光染色鉴定GFAP,TUJ-1阳性细胞并计数,流式分析GFAP,TUJ-1阳性细胞.结果:Western blot、流式分析示对照组中各浓度组GFAP、TUJ-1表达差异无统计学意义;Western blot示实验组随IGFBP-2浓度升高,GFAP表达增多,TUJ-1表达减少,且加入IGFBP-2后ERK1/2表达迅速增多,免疫荧光鉴定表明,随着IGFBP-2浓度升高,GFAP阳性细胞增多,TUJ-1阳性细胞减少,结果有统计学意义.结论:IGFBP-2可以促进OCM诱导NSCs向星形胶质细胞分化,且与浓度呈正相关,其机制与ERK1/2通路有关.     

ATRA对NB细胞增殖抑制及诱导分化作用的研究

目的；通过对神经母细胞瘤（NB）细胞系SH－SYT6和SMS－KCNR的体外实验，探讨全反式维甲酸（ATRA）对NB细胞增殖抑制的可能分子机制及脑源性神经营养因子（BDNF）－TrkB信号转导途径在NB细胞分化中的作用。方法：通过台盼蓝拒染计数活细胞，用倒置相差显微镜观察加药处理前后细胞形态学变化。结果：5μmol/L ATRA抑制NB细胞系SMS－KCNR和SH－SY5Y细胞增殖，而5nmol/L ATRA无此作用；ATRA可诱导SMS－KCNR细胞分化成熟，对SH－SY5Y细胞诱导分化作用极弱；BDNF可使经ATRA处理的SY5Y细胞发生显著形态学分化。结论：5μmol/L ATRA对人NB细胞系SMS－KCNR和SH－SY5Y细胞的体外增殖有抑制作用；ATRA能诱导人NB细胞系SMS－KCNR细胞分化成熟，ATRA与BDNF共同作用可使1SH－SY5Y发生显著形态学分化；BDNF－TrkB信号转导途径的激活可能是ATRA体外诱导NB细胞分化逆转的分子生物学机制之一。     

Rho在二氧化硅诱导的人支气管上皮细胞 α平滑肌肌动蛋白表达中的作用

目的：探讨Rho在二氧化硅（SiO2）诱导人支气管上皮细胞（HBECs）α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达中的作用。方法：以SiO2处理的HBE细胞为研究对象,免疫细胞化学及Western印迹检测α－SMA表达;GST pull down分析Rho的活化情况;干预实验中用Rho抑制剂Y27632处理细胞后,Western印迹检测SiO2对α-SMA表达的影响。结果：SiO2 (0,50,100,200,300 μg/mL)分别作用HBECs细胞72 h后,α-SMA表达增强,其中以200 μg/mL SiO2组α-SMA表达最强,为对照组的（5.09±1.98）倍（P＜0.01）;用200 μg/mL SiO2分别作用HBECs细胞1,2,6,12,24 h后,Rho明显活化（P＜0.01）;Rho抑制剂Y27632明显抑制了SiO2诱导的α-SMA表达,20和30 μmol/L的Y27632抑制率分别为68％和75％（P＜0.01）。结论：Rho参与介导SiO2诱导的HBECs中α-SMA的表达。     

叶酸对铝诱导的人神经母细胞瘤细胞活性氧和线粒体膜电位水平的影响

目的 探讨叶酸对铝诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP)水平的影响.方法 叶酸与不同金属共同处理SH-SY5Y细胞24 h,不同浓度Al分别染毒SH-SY5Y细胞6 h,不同浓度叶酸干预Al诱导SH-SY5Y细胞6 h,检测上述各组细胞ROS水平.测定叶酸对Al诱导SH-SY5Y细胞的毒性、MMP水平.结果 与control组比较,300μmol/L Al诱导SH-SY5Y细胞的ROS水平最高(P<0.05).50μmol/L叶酸+300μmol/L Al组细胞DCF相对荧光值、MMP降低的细胞比例、细胞存活率分别为15926±8200、38.04％、82.7％,与300μmol/L Al组20118±12503、45.88％、71.9％比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 叶酸可能通过拮抗铝诱导的SH-SY5Y细胞ROS水平升高来阻止MMP的降低,从而提高铝诱导下SH-SY5Y细胞的存活率.     

血管内皮生长因子对骨髓源间充质干细胞增殖的影响及其信号机制

目的探索血管内皮生长因子(VEGF)对间充质干细胞(MSC)增殖的影响及其信号机制。方法采用经典的全骨髓贴壁法培养MSC,通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞仪分析其表面标记(CD45、CD34、CD90、CD29)等鉴定MSC特征;以P3MSC为实验材料,采用MTT法分析VEGF对MSC增殖的影响。随后以50 nmol/L Wortmannin、50μmol/LPD98059、30μmol/L SB203580、10μmol/L H89、20μmol/L Y27632、1μmol/L Rapamycin、10μmol/L Straurosporine、6nmol/L Gǒ6976、50μmol/L Pseudo Z等分别处理P3MSC,观察VEGF影响MSC增殖的信号机制。结果培养的P3MSC呈现出CD90、CD29强阳性,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;VEGF促进MSC增殖,Y27632、PD98059、SB203580、Gǒ6976、Straurosporine可抑制VEGF促进MSC增殖的效应。结论 VEGF引起的MSC增殖效应与AKT-mTOR-PKC途径密切相关,且PKCα处于中间环节。     

外源性骨形态发生蛋白7联合血管内皮生长因子诱导大鼠脂肪干细胞向成骨细胞分化的实验研究

 目的探讨脂肪干细胞经低浓度骨形态发生蛋白7（BMP-7）及血管内皮生长因子（VEGF）短期诱导后骨细胞方向的分化情况。方法无菌切取成年Wistar大鼠腹股沟处脂肪,砖型胶原酶消化法体外分离培养脂肪干细胞,分为4 组：各组均加入含10%FBS 的DMEM培养基,0.1 μmol/L地塞米松,50 μmol/L 维生素C,10 mmol/L β-甘油磷酸钠,100 U/mL 青霉素,100 U/mL 链霉素;在此基础上,第1 组加BMP-7 和VEGF（各5 ng/mL）;第2 组加BMP-7（10 ng/mL）;第3 组加VEGF（10 ng/mL）;另设第4组（空白组）,加高糖DMEM。每3 d 更换培养基。至1,5,7,10,14 d 观察细胞生长及转化情况,通过免疫组化、ALP 染色、茜素红钙结节染色及MTT等检测不同组别诱导的成骨细胞。结果细胞计数、MTT、ALP 活性检测及免疫组化灰度值检测证实4 组诱导液诱导脂肪干细胞向成骨细胞分化的能力：BMP-7+VEGF组>BMP-7 组>VEGF组>空白组。结论与单独使用BMP-7、VEGF或基础培养基相比,BMP-7 联合VEGF 有加快脂肪干细胞向成骨细胞分化的能力。     

刺槐素对鞭毛蛋白诱导的小鼠骨髓巨噬细胞NLRC4炎症小体活化的影响

目的：研究刺槐素（Acacetin）对鞭毛蛋白诱导的小鼠骨髓巨噬细胞Nod样受体家族蛋白4(the nod-like receptor family card domaincontaining protein 4,NLRC4)活化的影响。方法：将小鼠骨髓巨噬细胞分为对照组、脂多糖（LPS）组、LPS+鞭毛蛋白组及LPS+Acacetin+鞭毛蛋白组,对照组加入完全培养基,LPS组用LPS(50 ng/mL)预处理3 h,LPS+鞭毛蛋白组用LPS(50 ng/mL)预处理3 h后加入鞭毛蛋白（10μmol/L）刺激0.5 h;LPS+刺槐素+鞭毛蛋白组用LPS(50 ng/mL)预处理3 h后再加入Acacetin(10μmol/L)处理0.5 h,最后加入鞭毛蛋白（10μmol/L）刺激0.5 h;采用WB检测细胞裂解液Pro-caspase-1和Pro-IL-1β的表达,上清液中caspase-1和IL-1β的蛋白表达;ELISA法检测上清液中IL-1β、IL-18和TNF-α的含量,LDH检测试剂盒检测细胞上清液中LDH的活性。结果：与对照组相比,LPS+鞭毛蛋白组细胞上清液中c...     

Ephrin B2基因在维甲酸诱导神经干细胞分化过程中的表达

目的　研究EphrinB2基因在全反式维甲酸诱导人胚胎神经干细胞的分化为神经元过程中的表达及其发挥的作用。方法　用 1μmol/L的维甲酸诱导人胚胎神经干细胞 ,诱导 7d后 ,做NSE免疫荧光染色 ,计数分化为神经元的比例。于ATRA诱导前、诱导 3d和诱导 7d ,提取细胞的总RNA。用半定量RT PCR法检测EphrinB2基因的表达情况。结果　与对照组相比 ,全反式维甲酸能显著提高人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例 (P <0 .0 1)。EphrinB 2基因在维甲酸诱导后明显上调 (P <0 .0 0 1)。结论　EphrinB2基因在全反式维甲酸诱导人胚胎神经干细胞分化为神经元的过程中起正调控作用 ,EphrinB2基因与神经元的分化关系密切。     

老鹳草素对炎性微环境中人牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的 探究老鹳草素(geraniin, GER)对炎性微环境中人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成骨分化及核因子-κB(NF-κB)的影响。方法 将从人牙周膜组织中分离鉴定的hPDLSCs分为对照组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、0.1μmol/L老鹳草素组(0.1GER组)、1μmol/L老鹳草素组(1GER组)、10μmol/L老鹳草素组(10GER组)和100μmol/L老鹳草素组(100GER组)。对照组hPDLSCs用成骨诱导培养液培养,TNF-α组hPDLSCs用含有10 ng/mL TNF-α的成骨诱导培养液培养,0.1GER组、1GER组、10GER组和100GER组hPDLSCs分别用含有10 ng/mL TNF-α以及0.1,1,10,100μmol/L的老鹳草素的成骨诱导培养液培养。培养21 d,采用可见光比色法检测各组细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性。采用茜素红染色观察钙化结节形成。通过qRT-PCR检测Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、osterix(OSX)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)mRNA相对表达量。通过West...     

COX-2选择性抑制剂西乐葆对IL-1β诱导下A549细胞COX-2表达的影响

目的研究西乐葆对A549细胞COX-2表达的影响。方法分别使用5、10和15μmol/mL的西乐葆对IL-1β诱导下A549细胞COX-2的表达进行干预,收集上清-20℃冻存用于检测PGE2,细胞用PBS洗两次提取RNA。不加西乐葆为对照组。实验重复4次。结果5、10和15μmol/mL的西乐葆干预组COX-2OD值/β-actinOD值分别为(1.4362±0.1061),(1.0142±0.079),(0.6896±0.097)与空白组(1.8058±0.132)相比较有明显降低,差异有显著性(P<0.05)。5μmol/mL组分别与10μmol/mL、15μmol/mL组相比,10μmol/mL组与15μmol/mL组相比都有统计学意义(P<0.05);5、10和15μmol/mL的西乐葆干预组PGE2分别为(17.25±0.98)×10-6mg/L,(11.33±1.49)×10-6mg/L和(10.23±2.00)×10-6mg/L较空白对照组(22.36±1.49)×10-6mg/L明显降低,差异有显著性(P<0.05)。5μmol/mL组分别与10μmol/mL、15μmol/mL组相比,10μmol/mL组与15μmol/mL组相比都有统计学意义(P<0.05)。结论西乐葆抑制人肺上皮细胞COX-2表达,其对IL-1β诱导下人肺上皮细胞COX-2mRNA表达和PGE2的分泌的影响是浓度依赖性的     

GM-1对培养的人胚神经干细胞增殖和分化的影响

目的：观察不同剂量神经节苷脂（GM－1）对神经干细胞增殖和分化的影响。方法：从人胚胎脑组织分离出神经干细胞，培养于含bFGF（阳性对照组）和B27（阴性对照组）的DMEM／F12细胞培养液中，实验组培养液中分别加入0．335μg/L，3．35μg/L及33．5μg/L的GM－1，用MTT比色分析法测定细胞增殖能力，用含体积分数3％血清的DMEM／F12培养液诱导细胞分化，每间隔6h于倒置显微镜下观察细胞分化情况，结果：5d,10dMTT比色显示，GM－1（33．5μg/L）组与阳性对照组比较，P均＞0．05，与阴性对照组比较，P均＜0．05，GM－1（0．335μg/L）组，GM－1（3．35μg/L）组与阴性对照组比较，P均＞0．05。分化实验发现，接种6h后，体积分数3％血清＋DMEM／F12组神球周边可见明显的细胞突起，呈放射状向周围伸出，而3个实验组和阴性对照组的细胞突起短且细小，随着培养时间的延长，各组的细胞突起逐渐伸长，3个实验组分化能力低于对照组，与阴性对照组之间无明显差异，结论：GM－1能够维持神经干细胞的原始神经状态，促进神经干细胞的增殖，对神经干细胞无明显的诱导分化作用。     

人胚胎干细胞向下丘脑神经祖细胞的诱导分化受高雄激素影响

目的：研究体外诱导人胚胎干细胞（human embryonic stem cell,hESC）向下丘脑神经祖细胞分化,并以此为细胞模型,观察不同浓度雄激素对下丘脑神经祖细胞分化的影响。方法：鉴定hESC细胞株CCRM22,体外诱导CCRM22向下丘脑神经祖细胞分化,对其进行初步的细胞生物学鉴定;在分化培养基中添加1×10-8mol/L、1×10-7mol/L睾酮（以无水乙醇为助溶剂对照）,收集不同分化时期细胞,比较分化效率;利用RT?qPCR、流式细胞术、免疫荧光检测等方法鉴定分化细胞,并检测生殖功能调控相关基因的表达。结果：CCRM22分化为下丘脑神经祖细胞的效率超过85%,但睾酮处理降低其分化效率;分化细胞表达神经细胞标志物NESTIN以及下丘脑神经祖细胞特异性标志物NKX2.1,同时表达KISS1和雄激素受体（androgen receptor,AR）,且AR的表达水平与睾酮浓度呈正相关。结论：成功诱导hESC分化形成下丘脑神经祖细胞,高浓度睾酮处理抑制hESC向下丘脑神经祖细胞分化,该细胞模型可应用于后续体外研究多囊卵巢综合征女性孕早期高雄激素环境对后代下丘脑神经细胞分化和发育的影响。