针刺调控PI3K/AKT/mTOR信号通路介导自噬保护佐剂性关节炎大鼠膝关节滑膜组织的研究

目的:基于磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路,观察针刺"阴陵泉""三阴交"对佐剂性关节炎(AA)大鼠膝关节滑膜细胞自噬水平的影响,探讨针刺治疗类风湿关节炎的可能机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组、雷公藤组,每组12只。采用风、寒、湿环境因素+弗氏完全佐剂复合造模方法复制AA大鼠模型。针刺组针刺大鼠"阴陵泉""三阴交"穴,30 min/次,1次/d,连续治疗21 d;雷公藤组予以雷公藤多苷片溶液灌胃给药(8 mg·kg^-1·d^-1),1次/d,连续治疗21 d。分别在致炎后第3天、治疗第21天测量各组大鼠右后足跖容积并计算关节肿胀度(E)、评价关节炎指数(AI);ELISA法检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-17、IL-6的含量;电镜下观察右膝关节滑膜超微结构的变化;Western blot法检测右膝关节滑膜组织中PI3K、AKT、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、mTOR、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、微管相关蛋白1轻链3B ...     

化瘀祛痰方通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬改善动脉粥样硬化家兔肝脏脂质损伤

目的:以PI3K/Akt/mTOR信号通路为切入点探讨化瘀祛痰方调控自噬改善动脉粥样硬化家兔肝脏脂质损伤的分子机制。方法:60只新西兰雄性大耳白家兔随机分为正常组、模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,每组15只。正常组给予普通家兔饲料喂养,其他各组一次性静脉注射牛血清白蛋白(250 mg/kg)后以高脂饲料喂养以建立动脉粥样硬化模型,化瘀祛痰方组给予方药剂量为8 g·kg~(-1)·d~(-1),辛伐他汀组给药量为1.4 mg·kg~(-1)·d~(-1),正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃。4周后,HE染色观察各组家兔肝脏形态变化;全自动生化分析仪检测血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量变化;WB法检测肝脏PI3K、Akt、p-Akt、mTOR蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组家兔肝脏脂肪变性明显,血清TC、TG、LDL-C水平显著升高(P0.01),HDL-C水平显著降低(P0.01),PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平下调(P0.01);与模型组比较,化瘀祛痰方组和辛伐他汀组肝脏脂肪变性呈不同程度恢复,血清中TC、TG、LDL-C水平显著降低(P0.01),HDL-C水平显著升高(P0.01),PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平显著上调(P0.05或P0.01)。结论:化瘀祛痰方可通过PI3K/Akt/mTOR信号通路,调控动脉粥样硬化家兔肝脏自噬稳态,减缓肝脏脂质损伤,进而改善动脉粥样硬化。     

续断总皂苷对膝骨关节炎大鼠软骨组织中PI3K/AKT/mTOR信号通路影响的实验研究

目的观察续断总皂苷对膝骨关节炎大鼠的软骨保护作用。通过检测软骨组织中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR表达水平,探讨续断总皂苷对膝骨关节炎大鼠软骨细胞自噬调控机制。方法 SPF级成年SD大鼠28只,采用随机数字法,将大鼠随机分为4组:假手术组(7只)、模型对照组(7只)、续断总皂苷组(7只)、阳性对照组(7只)。采用前交叉韧带及内侧副韧带离断术,对模型对照组、续断总皂苷组、阳性药物对照组大鼠进行KOA模型复制,模型复制成功后,分别给予相应干预因素进行干预,连续2周。末次给药后,观察各组大鼠一般状态。取术侧膝关节软骨组织,采用HE染色方法观察膝关节软骨病理变化;采用western-blot法检测膝关节软骨组织中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR的表达。结果各组间比较,各组大鼠膝软骨组织中PI3K、AKT、mTOR表达水平均变化不明显,差异无统计学意义(P0.05)。与假手术组比较,模型对照组大鼠一般状态较差,关节软骨病理变化较严重,镜下可见明显的炎性细胞浸润,软骨组织中p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达水平显著升高(P0.01),差异有统计学意义;与模型对照组比较,续断总皂苷组大鼠明显好转,软骨组织病理损伤减轻,仅个别大鼠软骨组织中偶见炎性细胞浸润,软骨组织中p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表达水平显著降低(P0.01)差异有统计学意义。结论续断总皂苷对膝骨关节炎模型大鼠膝软骨保护作用的机制可能是通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的过度活化,进而上调软骨细胞自噬水平而实现的。     

抗纤灵方通过PI3K/AKT/mTOR信号通路干预肾纤维化机制研究

目的:研究抗纤灵方对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响及抗肾纤维化作用机制。方法:将60只C57小鼠,随机分为假手术组10只和手术组50只,手术组行5/6肾切除术。术后2周,手术组随机分为模型组、抗纤灵低、中、高剂量组及雷帕霉素阳性药组,各组10只。假手术组给予0.5 mL生理盐水ig,抗纤灵方低、中、高剂量组分别给予0.5 mL抗纤灵药物ig(0.1,0.2,0.4 mg·kg-1),阳性药组给予0.5 mL雷帕霉素ig(0.016μg·kg-1),ig 12周后处死小鼠,在处死小鼠前1 d收集24 h尿液检测24 h蛋白定量,眼眶采血测血肌酐、尿素氮,取残肾采用HE观察肾脏组织形态改变,PCR法检测肾组织中PI3K/AKT/mTOR mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组24 h尿蛋白定量,血肌酐,尿素氮,PI3K/AKT/mTOR mRNA表达均显著升高(P0.01),肾脏病理形态改变明显;与模型组比较,各治疗组24 h尿蛋白定量,血肌酐,尿素氮,PI3K/AKT/mTOR mRNA表达均下降(P0.05),肾脏组织学形态改善。结论:抗纤灵方能降低小鼠24 h尿蛋白定量,改善肾功能,延缓肾纤维化发生;其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路表达相关。     

半枝莲总黄酮通过PI3K/AKT/mTOR通路诱导肿瘤细胞自噬的体内实验研究

该研究拟从体内角度研究半枝莲总黄酮(TF-SB)的抗肿瘤作用,并探讨TF-SB对肿瘤细胞自噬的影响及其对PI3K/AKT/mTOR通路的调控作用,为TF-SB的抗肿瘤作用提供实验依据。实验以黑色素瘤荷瘤小鼠模型为研究对象,分为空白对照组、雷帕霉素组(Rap,1.5 mg·kg~(-1))、TF-SB高、中、低剂量组(200,100,50 mg·kg~(-1)),每天给药1次,连续用药11 d,通过测量肿瘤的体积及抑瘤率,来观察TF-SB对黑色素瘤生长的抑制效果;通过TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况,来进一步验证TF-SB的抗肿瘤活性;通过Western blot法检测LC3-Ⅰ,LC3-Ⅱ的蛋白表达,计算LC3-Ⅱ对LC3-Ⅰ的相对表达量,探讨TF-SB对肿瘤细胞自噬的诱导作用;通过检测PI3K/AKT/mTOR通路标志蛋白的磷酸化水平,研究TF-SB诱导细胞自噬的分子机制。结果表明,TF-SB可有效抑制荷瘤小鼠体内黑色素瘤的生长,减小肿瘤体积、提高抑瘤率,并且可以显著增加肿瘤细胞凋亡指数,增加LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,抑制p-PI3K,p-AKT及p-mTOR的蛋白表达水平,与对照组比较有显著性差异(P0.05,P0.01或P0.001)。由此可见,半枝莲总黄酮具有抑制体内黑色素瘤生长的作用,其机制可能与通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路,诱导肿瘤细胞自噬及凋亡有关。     

健脾祛痰方影响TGF-β/PI3K/Akt通路减轻高脂血症大鼠内皮损伤

目的 探讨健脾祛痰方基于TGF-β/PI3K/Akt信号通路对高脂血症大鼠的内皮保护作用。方法 使用60只SPF级雄性大鼠随机分为正常组、模型组、西药(阿托伐他汀)组和健脾化痰低、中、高剂量组。正常组给予基础饲料喂养,其余各组给予高脂饲料喂养,并活动受限,建立高脂血症大鼠模型。健脾祛痰各组给予不同剂量中药,西药组给予阿托伐他汀。12周后,苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE染色)观察肝组织病理变化;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测一氧化氮(Nitric oxide, NO)与内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)水平;Western blot检测转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)和单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(phos...     

电针调控PI3K/AKT/mTOR通路改善血管性痴呆大鼠海马神经元炎性和氧化损伤机制

目的 探讨电针百会、足三里穴调控磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B, AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)通路改善血管性痴呆(vascular dementia, VD)大鼠海马组织神经元炎性和氧化损伤机制。方法 45只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和电针组,每组15只。模型组与电针组大鼠采用双侧颈动脉结扎法(2-VO)制备VD模型,假手术组颈动脉分离不结扎。电针组造模3 d后电针百会、足三里穴,每日1次,连续2周,第7天和第14天间断治疗。Morris水迷宫实验检测各组大鼠空间记忆和学习能力。Nissl染色法观察海马区神经元结构形态;酶联免疫吸附测定法检测血清白介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、IL-6(interleukin 6, IL-6)以及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)含量;生化检测海马组织丙二醛(malonaldehyde...     

苦豆碱通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路调控前列腺癌细胞自噬与凋亡

目的：探讨苦豆碱对前列腺癌PC3、LNCaP细胞的抑制作用及其可能机制。方法：采用不同浓度(0、25、50、100、200、400、800、1 600μmol)苦豆碱处理前列腺癌PC3、LNCaP细胞。CCK-8法及克隆形成实验检测PC3、LNCaP细胞增殖活性;光学显微镜观察细胞形态改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫荧光检测自噬指标LC3Ⅱ表达;Western Blot检测凋亡和自噬相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2、LC3Ⅱ、Beclin 1、P62及PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白表达。结果：CCK-8及克隆形成实验结果提示苦豆碱以浓度依赖性抑制PC3、LNCaP细胞活力,与空白对照组(0.1%DMSO)比较,100、200μmol苦豆碱处理后的PC3、LNCaP细胞形态发生明显变化,流式细胞术结果显示细胞凋亡率升高,免疫荧光染色结果显示PC3和LNCaP细胞胞质LC3Ⅱ绿色荧光点状表达数量增多,自噬加强,Western Blot结果显示凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax表达显著升高,Bcl-2表达显著降低;自噬相关蛋白Beclin 1表达及LC3Ⅱ/LC...     

化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏mTOR介导自噬相关基因的影响

目的:利用PCR array技术探讨化瘀祛痰方药对高脂血症大鼠肝脏mTOR介导自噬相关基因的影响。方法:30只SD大鼠随机分为正常对照组、高脂血症组、化瘀祛痰方组。正常对照组给予普通大鼠饲料喂饲,高脂血症组、化瘀祛痰方组予高脂饲料喂饲,造模60 d后,化瘀祛痰组给予化瘀祛痰方煎剂10 m L/次,1次/d,灌胃30d(该剂量是根据人与大鼠的等效剂量进行换算所得)。全自动生化分析仪检测大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDLC含量,HE及油红O染色观察肝脏形态及肝脏脂质沉积情况,PCR array技术分析化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏mTOR介导自噬相关基因的影响。结果:高脂血症组血脂(TC、LDL-C)含量升高,出现肝脏脂质沉积及脂肪空泡;化瘀祛痰方组血脂(TC、LDL-C)降低,肝脏脂滴减少。PCR array结果发现以mTOR为中心的不同作用途径基因Akt1、Bcl2、lgf1、Mapk14、Mapk8、Mtor、Becn1(brclin1)在3组比较发生差异性改变。结论:化瘀祛痰方可通过调控mTOR介导自噬相关基因使高脂血症大鼠肝脏自噬增强,改善高脂血症大鼠肝脏脂质损伤。     

御唐丸对糖尿病胰岛素抵抗大鼠肝脏PI3K/AKT信号通路的影响

目的:研究御唐丸对糖尿病大鼠肝脏中PI3K/AKT信号通路的调控作用及机制。方法:采用高脂饲料喂养结合链脲佐菌素(STZ)腹腔注射方法建立大鼠糖尿病模型,灌胃给予不同浓度的御唐丸,连续28 d;测定空腹血糖(FBG)和空腹胰岛素(FINS),并计算各组大鼠胰岛素敏感系数(ISI);免疫组化法检测各组大鼠肝脏组织中AKT2、PI3Kp85蛋白的表达;RT-PCR法检测各组大鼠肝组织中AKT2、PI3Kp85mRNA的表达。结果:御唐丸干预后,大鼠FBG水平明显降低,FINS水平和ISI明显升高,御唐丸能明显上调肝脏组织中AKT2和PI3Kp85蛋白与基因的表达。结论:御唐丸可能通过调控肝脏PI3K/AKT信号通路,纠正糖尿病的糖脂代谢紊乱,从而改善胰岛素抵抗状态。     

补肾活血法调控PI3K/AKT/mTOR通路修复卵巢颗粒细胞自噬损伤机制研究

目的:观察补肾活血法调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)通路对体外培养大鼠卵巢颗粒细胞(OGCs)自噬损伤的影响。方法:将原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞分为六组：空白对照组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、果纳芬组。采用ELISA法检测各组中雌二醇(E₂)、孕酮(P)分泌量;Western blot法和免疫荧光法分别检测各组OGCs中PI3K、AKT、mTOR及自噬关键分子酵母Atg6同系物1(Beclin 1)、微管相关蛋1轻链3(LC3)、自噬受体蛋白p62的蛋白表达。结果:模型组E₂含量显著降低,中药各剂量组E₂含量均上升(均P<0.05),且中药高剂量组与果纳芬组E₂含量相当;各组对P的含量均没有影响(均P>0.05)。中药各剂量组及果纳芬组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR水平和p62的表达上调,Beclin 1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达下调,且中药高剂量组效果优于果纳芬组(均P<0.05)。结论:补肾...     

津力达对胰岛素抵抗大鼠肝脏PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探讨津力达改善大鼠胰岛素敏感性的分子作用机制。方法:48只SD大鼠随机分为正常组和高脂饮食组,分别予以普通饲料及高脂饲料喂养。喂养后6周后行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验,鉴定胰岛素抵抗大鼠造模成功。随后将高脂喂养组分为5组,分别为模型组、津力达低、中、高剂量组(0.75,1.5,3.0 g·kg-1)和二甲双胍组(0.2 g·kg-1)。药物干预8周后行钳夹实验和ip葡萄糖耐量实验,并留取大鼠血清,测定空腹血糖(FBG),空腹胰岛素(FINS),糖化血红蛋白(Hb A1c),葡萄糖输注率(GIR),甘油三酯(TG),总胆固醇(TC),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDLC),极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)水平;并留取大鼠肝脏标本,RT-PCR检测肝脏胰岛素受体(INSR),胰岛素受体底物-1(IRS-1),蛋白激酶B(AKT),磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的mRNA表达水平,Western blot检测IRS-1和AKT的总蛋白及磷酸化蛋白表达水平,并计算p-AKT/AKT和p-IRS-1/IRS-1。结果:与正常组比较,模型组FBG,FINS,Hb A1c,TC及VLDL-C水平明显升高(P0.05),INSR,IRS-1,PI3K,AKT和GLUT2 mRNA表达下降,HDL-C,GIR含量明显降低(P0.05),p-IRS-1/IRS-1明显升高,p-AKT/AKT明显降低(P0.05);与模型组比较,津力达干预后,大鼠葡萄糖输注率明显升高,FBG,FINS,Hb A1c,TG,TC,LDL-C及VLDL-C水平明显降低(P0.05),对HDL-C无明显影响,津力达明显上调肝脏INS,IRS-1,AKT和GLUT2 mRNA表达(P0.05),升高GIR含量,对PI3K无显著影响;津力达干预组p-IRS-1/IRS-1明显降低,p-AKT/AKT明显升高(P0.05)。结论:津力达可改善胰岛素抵抗,纠正糖脂代谢紊乱,可能与上调PI3K/AKT信号通路有关。     

乌索酸调节PI3K/AKT/mTOR信号通路在结直肠癌中的研究进展

乌索酸（Ursolic acid,UA）是一种广泛存在于植物的草、叶、花和果实中的具有抗氧化,抗菌,抗炎,肝保护,免疫调节,抗肿瘤,化学预防,心脏保护、抗高脂血症和降低血糖等活性的五环三萜类化合物。本文综述了乌索酸结构与抗肿瘤机制、PI3K/AKT/mTOR信号通路参与结直肠癌进程以及乌索酸调节PI3K/AKT信号通路阻碍结直肠癌进展。     

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨中医药通过活性氧介导的内质网应激调控细胞自噬和凋亡抑制结肠癌转移的研究概况

肿瘤的发生发展需要微环境的保护与支持,自噬和细胞凋亡在结肠癌的复发转移中起到关键作用。PI3K/AKT/mTOR信号通路是自噬经典信号通路,过度的自噬能够诱导自噬细胞的凋亡,而ROS通过改变细胞的内部环境在细胞凋亡和自噬中发挥重要作用,并且能够通过产生ER应激影响ER中的蛋白错误折叠信号,从而影响细胞生长和死亡。因此,探究基于PI3K/AKT/mTOR信号通路,中医药是否可以通过ROS介导的ER应激调控自噬和细胞凋亡从而抑制结肠癌的转移,为临床提供治疗思路。     

中医药干预肝纤维化PI3K/AKT信号通路研究进展

调控HCS凋亡是阻止肝纤维化进程的重要方法之一。针对PI3K/AKT通路在肝纤维化形成机制中举足轻重的地位,利用中药中特殊成分,从信号传导通路调控HSC凋亡,从而发挥抗肝纤维化作用。     

基于PI3K/AKT/eNOS信号通路探讨健脾利湿化瘀方抑制前列腺癌血管生成的实验研究

[目的]在健脾利湿化瘀方临床疗效和前期实验的基础上,继续探讨健脾利湿化瘀方及其拆方在抑制人前列腺癌PC-3细胞荷瘤小鼠血管生成方面的作用,及其对PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响.[方法]选取6～8周雄性裸鼠36只建立人前列腺癌荷瘤小鼠模型,随机分为空白对照组、西药组、全方组、君药组、臣药组和佐药组.实验各组干预...     

虎杖苷通过PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导人宫颈癌细胞凋亡的初步研究

通过观察虎杖苷对宫颈癌HeLa细胞体外生长的抑制作用,初步探讨其诱导凋亡的可能机制。不同浓度的虎杖苷(50,100,150μmol·L~(-1))处理HeLa细胞后,采用MTT法检测虎杖苷对HeLa细胞增殖的抑制作用,AO/EB染色法荧光显微镜观察HeLa细胞凋亡的形态学变化;Annexin/PI双标记法检测HeLa细胞凋亡率;流式细胞仪分析HeLa细胞周期分布;RTPCR和Western blot法检测HeLa细胞中PI3K,AKT,mTOR,P70S6K的mRNA和蛋白表达。结果显示,虎杖苷显著抑制HeLa细胞增殖,且具有一定剂量依赖性;虎杖苷能够引起HeLa细胞发生S期阻滞,促进细胞凋亡,显著下调HeLa细胞中PI3K,AKT,mTOR,P70S6K的mRNA和蛋白表达。表明虎杖苷具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路及其下游基因蛋白表达有关。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨银杏叶提取物防治慢性阻塞性肺疾病的机制

目的 观察银杏叶提取物对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响，探讨其防治COPD的机制。方法 将90只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、银杏叶提取物组、康士得组、雷帕霉素组、Taselisib组，每组15只。除正常组外，其余各组大鼠均采用香烟烟雾熏吸联合气管内注入脂多糖(LPS)的方法构建COPD模型，银杏叶提取物组于实验的第15～28天腹腔注射舒血宁注射液，其余组于实验的第29～42天分别予Akt抑制剂康士得、mTOR抑制剂雷帕霉素、PI3K抑制剂Taselisib干预。实验的第43天处死各组大鼠，HE染色观察肺泡病理改变及气道重塑情况，酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺泡灌洗液与血清中白细胞介素-10(IL-10)和γ-干扰素(IFN-γ)水平，免疫组化法检测肺组织中LC3蛋白表达情况，Western blot法检测肺组织中PI3K p110α、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、LC3Ⅱ蛋白表达情况，实时荧光定量PCR法检测肺组织中PI3K、Akt、mTOR...     

基于PI3K/AKT/mTORC1信号通路探讨三七对阿霉素肾纤维化大鼠自噬水平的影响

目的 基于PI3K/AKT/mTORC1信号通路,通过实验观察三七对阿霉素肾纤维化大鼠自噬水平的影响。方法 选用健康雄性清洁级SD(Sprasue-Dawley)大鼠60只,随机分成正常组、模型组、三七低剂量治疗组、三七中剂量治疗组、三七高剂量治疗组和贝那普利组共6组,每组10只。除正常组大鼠以外,各组大鼠均采用阿霉素诱导建立肾纤维化大鼠模型。造模成功后,对正常组、模型组均予以生理盐水[10mL/(kg·d)]灌胃;三七低、中、高剂量治疗组分别予以三七颗粒0.45g/(kg·d)、0.9g/(kg·d)、1.8g/(kg·d)水溶液灌胃,贝那普利组予以盐酸贝那普利5mg/(kg·d)药液灌胃,每天一次,共干预8周。分别采用HE、Masson染色方法观察肾脏组织病理情况;采用蛋白质免疫印迹(Western Blot, WB)法检测肾组织中PI3K、AKT、mTORC1、P62、Beclin1、LC3的蛋白表达水平。结果 (1)与正常组相比,模型组肾组织可见空泡样、纤维样改变,肾小球萎缩,肾小管囊性扩张,大量炎性细胞的浸润,而三七各个剂量组与贝那普利组肾组织的上述病理改变均有不同程度的改善...     

萜类化合物Telekin通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导HGC-27细胞自噬

目的:研究从天名精中分离得到的萜类化合物Telekin诱导的胃癌细胞HGC-27自噬并探讨其分子作用机制。方法:MTT法研究Telekin对不同肿瘤细胞的细胞毒活性;透射电镜观察Telekin诱导的HGC-27细胞自噬;用mRFP-GFP-LC3点状聚集物的形成,评价HGC-27细胞内自噬流的变化;MTT法研究用不同自噬抑制剂氯喹(CQ)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)和mTOR抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)预处理时,Telekin对HGC-27细胞的细胞毒活性,研究自噬与细胞死亡的关系。Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路关键蛋白PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-ULK1、ULK1、Beclin1、p-Beclin1、p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白的表达。结果:MTT实验结果表明Telekin对胃癌细胞HGC-27具有较好的细胞毒活性和一定的选择性;透射电镜和激光共聚焦显微镜观察到Telekin诱导HGC-27细胞发生了明显的自噬和显著的自噬流变化;用Rapamycin预处理时增强了Telekin的细胞毒性,IC_(50)值由22.78μM降为14.4μM。用3-MA和CQ预处理后降低了Telekin的细胞毒性,IC_(50)值从22.78μM增加为30.06μM和29.46μM,说明自噬促进了细胞死亡;Western blot结果显示Telekin降低了p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p62、LC3Ⅰ的表达,增强了p-ULK1、p-Beclin1、LC3Ⅱ的表达,而对PI3K、Akt、mTOR、ULK1、Beclin1总蛋白没有明显影响。结论:Telekin通过降低p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p62、LC3Ⅰ的表达水平,增强p-ULK1、p-Beclin1、LC3Ⅱ的表达水平,来诱导HGC-27细胞发生自噬,从而促进细胞死亡。