金雀异黄素对猪血小板聚集和胞浆游离钙的影响

AIM: To study the effects of genistein on aggregation and cytosolic free calcium concentration in platelets. METHODS: Using turbidimetry to analyse aggregation and using Fura-2 fluorescence technique to determine Ca2+ level. RESULTS: Genistein strongly inhibited the pig platelet aggregation induced by thrombin (250 U.L-1). When genistein concentrations were 5 and 20 mumol.L-1, the inhibition rates on the aggregation were 52% and 73%, respectively. Genistein inhibited the rise of cytosolic free calcium concentration in platelets stimulated by thrombin (500 U.L-1) in the presence of extracellular Ca2+ 1 mmol.L-1. When genistein concentrations were 10, 20, 40, and 80 mumol.L-1, the inhibition rates were 24%, 40%, 63%, and 65%, respectively, but no effect on thrombin-induced internal Ca2+ release from dense tubular system. CONCLUSION: Genistein is a potential anti-platelet agent, mainly due to an inhibition of Ca2+ influx.     

槲皮素对血小板聚集和胞浆游离钙的影响(英文)

目的:研究槲皮素对凝血酶诱导的血小板聚集和胞浆游离钙浓度的影响及钙对槲皮素的血小板聚集抑制效应的作用。方法:用荧光钙离子指示剂观察槲皮素对血小板胞浆游离钙的影响.结果:槲皮素明显抑制凝血酶诱导的血小板聚集和游离钙的升高.IC_(50)和95％可信区间分别为146.2(92.4～231.3)和78.5(49.5—124.4)μmol·L~(-1).槲皮素对血小板的抑制作用可被钙翻转.槲皮素对凝血酶诱导的钙释放无影响.结论:抑制钙内流是槲皮素抑制血小板聚集和[Ca~(2 )]_i升高的机制.     

大黄素对血小板胞浆内游离钙浓度的影响

负载Ｆｕｒａ－２的血小板细胞在静息状态下胞浆内游离钙离子［（Ｃａ２＋）ｉ］为２１８．４０±５６．３６ｎｍｏｌ（ｎ＝１３）。当依次加入ＣａＣｌ２（ｌｍｍｏｌ／Ｌ）、ＫＣｌ（１２０ｍｍｏｌ／Ｌ）ｔ和凝血酶（０．５ｕ／ｍｌ）后，［Ｃａ２＋］ｉ分别为２９７．２５±７５．０３ｎｍｏｌ（ｎ＝１３）、３１８．００±８６．２５ｎｍｏｌ（ｎ＝１２）和６４０．５９±１６２．４９ｎｍｏｌ（ｎ＝１２）。大黄素与血小板作用２０ｍｉｎ，血小板细胞在静息状态及依次加上述剂量的ＣａＣｌ２，ＫＣｌ和凝血酶后，［Ｃａ２＋］ｉ水平均较对照组升高，说明大黄素对血小板细胞外钙内流和内钙释放均有明显的促进作用。     

异钩藤碱体外对家兔血小板聚集和胞浆游离钙离子浓度的影响

目的研究异钩藤碱对血小板内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,以探讨其抗血小板聚集作用的可能机制。方法比浊法测定家兔血小板聚集功能;双波长Fura-2荧光法测定血小板胞浆[Ca2+]i。结果异钩藤碱0.33~1.30mmol.L-1体外给药对ADP和凝血酶引起的血小板聚集有浓度依赖性的抑制作用。存在细胞外钙时,异钩藤碱对基础状态血小板的[Ca2+]i和ADP及凝血酶诱导的[Ca2+]i水平有浓度依赖性的降低作用,而无细胞外钙存在时,则均无明显影响,表明其可抑制血小板的外钙内流,对内钙释放无明显抑制作用。结论异钩藤碱可抑制血小板聚集,其作用机制可能与其抑制血小板胞浆[Ca2+]升高有关。     

哒嗪类药物Y－909对凝血酶诱导的人血小板聚集和胞浆游离钙水平的影响

哒嗪类药物Ｙ－９０９对凝血酶诱导的人血小板聚集和胞浆游离钙水平的影响汪钟，于润，张宏，白建平（中国医学科学院基础医学研究所，北京１００００５）６－［对－（４－（４－甲氧基苯基）哌嗪基）－乙酰胺基苯基］－５－甲基－４，５－二氢－３（２氢）哒嗪酮｛６－［...     

Quin2法测定人血小板胞浆游离钙浓度

应用荧光钙指示剂Quin2测定胞装游离钙浓度的方法,研究了在不同胞外游离钙浓度[Ca²⁺]₀下人血小板场急状态时及由凝血四激活后的胞装游离钙浓度[Ca²⁺]₁的变化.结果显示:凝血的可使负载Quin2的人血小板[Ca²⁺]₁呈现浓度依赖性的短暂升高,且这种作用对[Ca²⁺]₀有明显的依赖性。该项结果提示凝血酸引起的[Ca²⁺]₁升高主要来源于外钙内流,部分为内钙释放所致.     

Quin2法测定人血小板胞浆游离钙浓度

应用荧光钙指示剂Ｑｕｉｎ２测定胞装游离钙浓度的方法,研究了在不同胞外游离钙浓度［Ｃａ￣（２＋）］＿０下人血小板场急状态时及由凝血四激活后的胞装游离钙浓度［Ｃａ￣（２＋）］＿１的变化．结果显示：凝血的可使负载Ｑｕｉｎ２的人血小板［Ｃａ￣（２＋）］＿１呈现浓度依赖性的短暂升高,且这种作用对［Ｃａ￣（２＋）］＿０有明显的依赖性。该项结果提示凝血酸引起的［Ｃａ￣（２＋）］＿１升高主要来源于外钙内流,部分为内钙释放所致．     

高血压病患者血小板胞浆游离钙与血小板聚集功能的关系

高血压病患者血小板胞浆游离钙与血小板聚集功能的关系山西医科大学第二医院（０３０００１）丁康王凤芝山西省政府卫生所孙艾萍血管平滑肌细胞内胞浆钙离子（Ｃａ２＋）浓度决定血管的紧张程度，且是血管收缩的触动剂，因此，Ｃａ２＋在高血压病的发生和发展中起重要作用...     

J—894对人体血小板激活时胞浆内游离钙浓度的影响

细胞内游离钙浓度在细胞反应的调节中作为第二信使起很重要的作用。本文实验采用荧光钙指示剂quin-2测定血小板胞浆内游离钙浓度[Ca^2 ]i的变化。结果表明在1mmol/L外钙的存在下，凝血酶（0.3U/ml）使血小板[Ca^2 ]i增高4－5倍。但在外钙缺乏的情况下，凝血酶使血小板[Ca^2 ]i增加较少，似科凝血酶增加[Ca^2 ]i，部分是通过释放内钙，但主要是通过钙内.J-894通过减少钙内流和释放明显抑制凝血酶引起的血小板[Ca^2 ]i的升高，剂量与效应相关。提示J－894可能是一种钙通道阻滞剂。     

抑肽酶基因的克隆和表达

抑肽酶作为天然的非特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂，临床用途广泛。为实现抑肽酶的大量制备，按大肠杆菌惯用密码子用人工方法合成抑肽酶结构基因，克隆于PUC18的EcoRⅠ和PstⅠ位点，转入Top10大肠杆菌（recA)中，经测序证明序列正确，表达体系模拟抑肽酶的体内成熟过程，将其自身的13肽pro序列融合于抑肽酶的N端，并在其间插入胰蛋白酶识别位点，该融合蛋白在使用PET-11C载体表达时，产物以包涵体形式存在于大肠杆菌中，表达量占菌体总蛋白的30%以上，复性实验证明：该肽段不影响抑肽酶的正确折叠，还能帮助抑肽酶包涵体进行体外折叠。提高复性得率，复性后使用胰蛋白酶切割融合蛋白，可得天然构象的活性抑肽酶。     

抑肽酶对血小板聚集功能保护作用的实验研究

在富血小板血浆（PRP）中加入尿激酶（4000IU／ml），ADP（3μmol／L）、胶原（0．02mg／ml）和花生四烯酸（0.325mmol／L）诱导的血小板凝集率明显下降。而在事先经不同浓度抑肽酶孵育的PRP中加入相同浓度的尿激酶，则能对抗尿激酸引起的ADP、胶原和花生四烯酸诱导的血小板聚集抑制作用，且随抑肽酶浓度增加，其对抗作用也增大，量效关系非常明显。提示尿激酶可造成血小板聚集功能的损伤，而抑肽酶对此有明显的保护作用．     

抑肽酶致过敏性休克2例

患者一,男,29岁,因外伤致左膝关节脱位,于2003年4月28日入院.体格检查:体温37.8℃,脉搏80次/min,呼吸20次/min,血压110/70 mmHg,发育正常.     

川芎嗪对猪血小板胞浆游离钙浓度的影响

<正> 前文我们报道了川芎嗪对血小板中肌醇磷脂代谢和蛋白质磷酸化的抑制作用。为了进一步阐明川芎嗪抗血小板作用的机理,我们研究它对猪血小板胞浆游离钙浓度的影响。1 材料与方法川芎嗪(香港中文大学中药研究中心);Fura-2/AM(Dojindo);凝血酶(Sigma)。ACD(柠檬酸71,柠檬酸三钠85,葡萄糖111 mmol·L~(-1))抗凝血于160×g离心15 min,取上清700×g离心10 min,所得血小板悬于含0.3％BSA和0.2mmol·L~(-1)EGTA的Tyrode-hepes缓冲液(NaCl140,KCl3,MgSO_4l,hepes10,葡萄糖10 mmol·L~(-1),pH     

抑肽酶致严重呼吸困难1例

患者男,39岁,因中上腹疼痛40d、加重3d于2003年8月4日人院.患者曾以急性重症胰腺炎在我院治疗.既往有2型糖尿病史和原发性高血压病史.体格检查:体温37.2℃,脉搏86次/min,呼吸20次/min,血压130/100mmHg,左手掌、右膝、双股内侧可见局灶性皮肤发红,脱屑、抓痕,中上腹广泛轻压痛,肌紧张不明显,无反跳痛,压痛以脐上较明显,左季肋区向左腰部可扪及一直径约20 cm质中包块,靠近腹侧扪及边界,余边界不清,无移动性浊音, 肠鸣音3～4次/min,双下肢无水肿.人院诊断:急性胰腺炎、胰腺假性囊肿,2型糖尿病,原发性高血压,体癣.诊疗计划为禁食、抗炎、抑制胰腺外分泌,监测血压、血糖,进一步查淀粉酶,心、肝、肾功能,局部外用抗真菌药.     

抑肽酶在体外对血小板的作用

选择健康献血员取血，观察抑肽酶在体外对血小板功能及花生四烯酸代谢的影响，抑肽酶剂量分为３组：５０ＫＩＵ／ｍｌ、１５０ＫＩＵ／ｍｌ（小剂量组）、３００ＫＩＵ／ｍｌ（大剂量组）。结果表明：（１）小剂量及大剂理抑肽酶对血反功能均具有可复性的抑制作用，且无明显差异，这可能是它在体外循环（ＣＰＢ）中保护血小板功能的重要原因；（２）抑肽酶对二磷酸腺苷（ＡＤＰ）所诱导的血小板膜磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）、环氧化酶（