波形蛋白对前列腺癌细胞侵袭与转移的影响

背景与目的:波形蛋白(vimentin)是一种细胞骨架蛋白,参与调节细胞的运动和增殖。本研究通过检测波形蛋白在前列腺癌细胞系中的表达,探讨其对前列腺癌细胞侵袭与转移的影响。方法:应用二维电泳-质谱分析(two-dimensionalgel electrophoresis matrix-assisted laser desorption/time of flight mass spectrometry,2-DE MALDI TOF-MS)检测波形蛋白在前列腺癌配对细胞系中的差异表达,用基因干预技术结合体外侵袭实验探讨波形蛋白对细胞侵袭能力的影响。结果:波形蛋白在前列腺癌高转移细胞系PC-3M-1E8中的表达高于低转移细胞系PC-3M-2B4中的表达。成功构建波形蛋白反义真核表达载体和正义真核表达载体,分别转染PC-3M-1E8和PC-3M-2B4细胞,转染波形蛋白反义真核表达载体的细胞(PC-3M-1E8/vas)的穿膜细胞数为99.3±4.8,明显低于空质粒对照组细胞[PC-3M-1E8/3.1(-)]的319.4±6.5(P<0.01);转染波形蛋白正义真核表达载体的细胞(PC-3M-2B4/vs)的穿膜细胞数为330.5±5.8,明显高于空质粒对照组细胞[PC-3M-2B4/3.1( )]的98.6±7.5(P<0.01)。结论:波形蛋白高表达可促进前列腺癌细胞的侵袭与转移。     

肿瘤转移抑制基因1抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭能力

目的 研究肿瘤转移抑制基因1(TMSG-1)转染对高转移人前列腺癌细胞体外增殖能力和侵袭能力的影响.方法 将TMSG-1全长真核表达载体稳定转染人前列腺癌细胞高转移亚系PC-3M-1E8,G418筛选,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法选取TMSG-1过表达阳性克隆.通过活细胞计数、二苯基溴化四氮唑蓝(MTF)比色实验、软琼脂集落形成实验检测体外细胞生长能力;Matrigel穿膜实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力.结果 在稳定转染TMSG-1基因的PC-3M-1E8细胞系中,筛选出3株TMSG-1转录活性及蛋白表达水平均明显升高的细胞用于后续生物学行为实验.活细胞计数和MTT比色实验结果显示,从计数第3天起,与空载体对照组和空白对照组相比,3株正义转染组细胞生长速度均明显减慢(P<0.05).软琼脂集落形成实验结果显示,3株正义转染组的细胞软琼脂集落形成数与空载体对照组、空白对照组相比,均明显减少(P<0.05),分别为26.00±3.21、13.33±1.45和32.83±2.18.Matrigel穿膜实验结果显示,正义转染的各组细胞与空载体对照组及空白对照组相比,穿膜细胞数均明显减少(P<0.05),分别为45.33±4.16、54.00±2.83和26.33±3.79.结论 TMSG-1表达上调可使高转移人前列腺癌细胞体外增殖速度、锚着不依赖性生长能力及侵袭能力明显降低,TMSG-1可能通过抑制肿瘤细胞生长和侵袭抑制肿瘤转移潜能.     

二肽基肽酶Ⅳ与卵巢上皮性癌临床病理特征和预后的关系

目的 探讨卵巢上皮性癌组织中二肽基肽酶N(DPPIV)的表达及临床意义.方法 采用免疫组化法榆测378例卵巢上皮性癌组织中DPPIC蛋白的表达,采用原位杂交法检测86例卵巢上皮性癌组织中DPPIV mRNA的表达,42例正常卵巢组织作为对照.结果 DPPIV蛋白在卵巢上皮件癌组织中的总阳性表达率为92.9%(351/378),在正常卵巢组织中的总阳性表达率为59.5%(25/42),差异有统计学意义(P=0.001).DPPIV蛋门的表达与患者的发病年龄、肿瘤分化程度和FIGO分期无关(均P＞0.05),而与肿瘤的组织学类型有关(P=0.005).DPPIC蛋白的表达水平越高,患者的生存期越短(P=0.023).DPPIV mRNA在卵巢上皮性癌组织巾的总阳性表达率为97.7%(84/86),在正常卵巢组织中的总阳件表达率为64.3%(27/42),差异有统计学意义(P＜0.05).卵巢上皮性癌组织中DPPIV蛋白和mRNA的表达与定位一致,且二者旱止相关(P=0.001).结论 DPPIV在卵巢上皮性癌的发生发展中起着一定作用,其表达水平可能成为影响患者预后的因素.     

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1与肿瘤侵袭转移的研究进展

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tlymphoma invasion and metastasis inducing factor 1，Tiam 1)，是Rho样GTPase的GDP分离刺激因子，具有调节细胞骨架结构重组，促进细胞运动的功能。研究表明，Tiam1过表达可以诱导肿瘤细胞侵袭、转移，其分子生物学基础主要基于：Tiam1与肿瘤“细胞骨架-粘附分子-细胞外基质”跨膜系统的相互作用，Tiam1对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响，以及其它肿瘤侵袭转移相关因子对Tiaml活性的调控几方面。同时，现有实验结果提示，Tiam1活性调节的多样性和生物效应的特异性，以及Tiam1与其他肿瘤侵袭转移相关因子间的关系及信号转导机制，尚有待深入研究。     

MACC1基因与肾癌转移的相关性及其对细胞侵袭能力的影响

目的:探讨MACC1基因与肾癌转移的相关性,及其表达降低对肾癌细胞侵袭能力的影响。方法:应用荧光定量PCR检测原发未转移肾癌和原发伴转移肾癌组织中MACC1 mRNA的表达。设计并合成MACC1基因特异性的siRNA,转染肾癌Caki-1细胞,检测转染后MACC1蛋白的表达以及Caki-1细胞的侵袭能力。结果:原发伴转移肾癌组织中的MACC1 mRNA表达较原发未转移肾癌明显增加(P<0.05)。siRNA-MACC1能够明显抑制Caki-1细胞中MACC1蛋白的表达(P<0.05)。MACC1蛋白表达抑制的Caki-1细胞的侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论:MACC1基因与肾癌的转移相关,其表达抑制能够降低Caki-1细胞的侵袭能力。     

波形蛋白促进激素非依赖性前列腺癌细胞侵袭与转移的机制探讨

目的:探讨波形蛋白促进激素非依赖性前列腺癌细胞侵袭与转移的分子机制。方法:应用波形蛋白特异性扩增引物,借助RT-PCR获得波形蛋白正义全长和反义全长cDNA片段,分别插入pcDNA3.1( )和pcDNA3.1(-)表达载体中,并将重组质粒导入激素非依赖性前列腺癌配对细胞系中,G418稳定筛选;应用体外运动和侵袭试验比较细胞侵袭能力的改变;用蛋白免疫印迹法检测相关蛋白的表达。结果:波形蛋白通过C-src激酶调节E-钙黏蛋白(E-cadherin)/β-连环蛋白(β-cate-nin)复合物,促进激素非依赖性前列腺癌细胞侵袭与转移。结论:波形蛋白可以作为判断激素非依赖性前列腺癌细胞侵袭与转移的一个重要指标。     

MACC1基因与肾癌转移的相关性及其对细胞侵袭能力的影响

目的：探讨MACC1基因与肾癌转移的相关性,及其表达降低对肾癌细胞侵袭能力的影响。方法：应用荧光定量PCR检测原发未转移肾癌和原发伴转移肾癌组织中MACC1 mRNA的表达。设计并合成MACC1基因特异性的siRNA,转染肾癌Caki-1细胞,检测转染后MACC1蛋白的表达以及Caki-1细胞的侵袭能力。结果：原发伴转移肾癌组织中的MACC1 mRNA表达较原发未转移肾癌明显增加（P〈0.05）。siRNA-MACC1能够明显抑制Caki-1细胞中MACC1蛋白的表达（P〈0.05）。MACC1蛋白表达抑制的Caki-1细胞的侵袭能力明显降低（P〈0.05）。结论：MACC1基因与肾癌的转移相关,其表达抑制能够降低Caki-1细胞的侵袭能力。     

u-PAR反义核酸载体对高侵袭人前列腺癌细胞PC-3M亚系侵袭能力的抑制效应

目的：观察u-PAR反义核酸载体对高侵袭为PC－3M亚系侵袭能力的抑制效应。方法：利用单层细胞侵袭和软琼脂克5隆形成实验,对比观察u-PAR反义核酸对高侵袭亚系体外侵袭能力的影响;应用RT－PCR和明前酶谱法,分析u-PAR反义核酸对高侵袭亚系MMP－9活性的影响,并且观察u-PAR反义核酸载体转染前后的细胞亚系在裸鼠体内成瘤率及转移情况。结果：转染u-PAR反义核酸的高侵袭亚系体外侵袭能力和非贴壁依赖性生长能力均明显降低,抑制率分别为79％和60％,u-PAR反义核酸虽不影响高侵袭亚系MMP－9 mRNA的转录,但对MMP－9酶原的激活有抑制作用;且转染u-PAR反义核酸载体亚系的体内成瘤率和移植瘤的生长明显受到抑制,与对照组之间差异具有极显著性（P＜0．01）。结论：u-PAR反义核酸对高侵袭亚系体外侵袭能力有较强抑制作用,并可显著抑制高侵袭亚系的体内生长能力。     

胃癌侵袭和转移相关基因的研究现状

目前胃癌,死亡率仍占恶性肿瘤的首位,为了寻找早期诊断的方法,目前针对胃癌侵袭及转移的机制探讨已进入到分子生物学的水平[1]。现将当前胃癌相关基因的研究综述如下:     

高转移潜能人肝癌细胞特异性结合肽对肝癌侵袭和转移的影响

目的 研究高转移潜能人肝癌细胞特异性结合肽(AWYPLPP肽)对肝癌侵袭和转移的影响.方法 采用Matrigel侵袭实验、迁移实验、二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)实验以及黏附实验,探讨AWYPLPP肽对高转移潜能人肝癌细胞HCCLM3侵袭表型的影响.裸鼠皮下接种HCCLM3细胞,建立肿瘤肺转移模型,观察AWYPLPP肽对HCCLM3肺转移的影响.结果 侵袭实验结果显示,在AWYPLPP肽浓度为0.1～100 μmol/L时,能显著促进HCCLM3细胞的侵袭能力,呈剂量效应关系.迁移实验、MTT实验和黏附实验表明,AWYPLPP肽对HCCLM3细胞的迁移、增殖和黏附能力无影响.HCCLM3细胞皮下接种30 d后处死裸鼠,AWYPLPP肽组出现明显的肺转移,肺转移率为88.9%(8/9),与PBS组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但对皮下肿瘤的生长无明显影响.结论 AWYPLPP肽能促进高转移潜能人肝癌细胞体外侵袭能力以及肿瘤肺转移;进一步寻找肿瘤细胞表面与AWYPLPP肽结合的受体,可能为深入研究肝癌侵袭转移的机制和设计干预治疗的靶点提供新思路.     

SRC激酶抑制剂对前列腺癌细胞侵袭与增殖的影响

目的：以PP2[4-Amino-5-（4-Chloro-Phenyl）-7-（t-Butyl）Pyrazolo（3,4-d）Pyrimidine]药物（src激酶抑制剂）处理前列腺癌细胞,检测src激酶及E-cadherin蛋白表达水平的变化,探讨PP2对前列腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：PP2处理前列腺癌细胞PC-3,Western blot检测src及其相关蛋白的表达;Boyden小室实验检测细胞侵袭能力;MTT检测细胞的增殖能力。结果：PP2处理PC-3细胞后,src表达水平明显降低,E-cadherin表达水平升高;细胞的增殖和侵袭能力均受到明显抑制,剂量越高抑制作用越明显（P〈0.05）。结论：PP2通过提高细胞黏附分子E-cadherin的表达抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖和侵袭能力。     

SRC激酶抑制剂对前列腺癌细胞侵袭与增殖的影响

目的:以PP2[4-Amino-5-(4-Chloro-Phenyl)-7-(t-Butyl)Pyrazolo(3,4-d)Pyrimidine]药物(src激酶抑制剂)处理前列腺癌细胞,检测src激酶及E-cadherin蛋白表达水平的变化,探讨PP2对前列腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:PP2处理前列腺癌细胞PC-3,Western blot检测src及其相关蛋白的表达;Boyden小室实验检测细胞侵袭能力;MTT检测细胞的增殖能力。结果:PP2处理PC-3细胞后,src表达水平明显降低,E-cadherin表达水平升高;细胞的增殖和侵袭能力均受到明显抑制,剂量越高抑制作用越明显(P<0.05)。结论:PP2通过提高细胞黏附分子E-cadherin的表达抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖和侵袭能力。     

胃癌细胞功能分化表型与侵袭转移的关系

目的 建立一种胃癌细胞功能分类新方法,探讨胃癌细胞功能分化表型与侵袭转移的关系。方法 按癌细胞功能分化方向和状态,将361例胃癌分为5型。结果（1）吸收功能分化型（AFDT）：82例,占22．7％,13．6％（9／66）男性伴肝脏转移。（2）黏液分泌功能分化型（MSFDT）：54例,占15．0％,有98．1％（53例）病变侵透浆膜。（3）吸收－黏液产生功能双向分化型（AMPFDT）：180例,占49．9％,女性占34．4％,雌激素受体表达率为71．7％,均明显高于其他型;19．4％女婿姓伴卵巢转移。（4）特殊功能分化型（SFDT）：13例,占3．6％,69．2％（9／13）属弥漫性神经内分泌系统来源。（5）无功能分化型（NFDT）：32例,占8．9％,59．4％（19例）伴淋巴结转移。5组术后5年生存率分别为58．5％、28．6％、24．7％、60．0％和28．1％。结论 胃癌细胞功能分类方法可为判断不同类型胃癌的生物学行为及侵袭转移特点提供有益信息,癌细胞功能分化表型与其相应的基因型以及胃癌生物学行为的内在联系有待深入探讨。     

肿瘤转移抑制基因KAI1对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭能力的影响

目的:探讨肿瘤转移抑制基因KAI1基因对子宫内膜癌细胞(AN3CA和HEC-1-B)增殖及侵袭能力的影响。方法:脂质体介导pcDNA3-KAI1质粒转染人子宫内膜癌细胞AN3CA和HEC-1-B,采用免疫印迹法和流式细胞术检测转染前后肿瘤细胞KAI1蛋白的表达,MTT比色法、软琼脂克隆形成实验观察KAI1基因对肿瘤细胞增殖能力的影响,Transwell侵袭实验检测转染前后肿瘤细胞侵袭能力的变化。结果:转染pcDNA3-KAI1质粒后AN3CA和HEC-1-B细胞内和细胞表面均可检测到KAI1蛋白的稳定表达。转染空白质粒组细胞形成克隆数量多体积较大,细胞克隆形成率为(54.2±3.1)%和(52.7±4.3)%,细胞的倍增时间为21.3h和20.1h;基因转染pcDNA3-KAI1质粒组细胞形成克隆数少体积较小,细胞克隆形成率为(37.4±5.1)%和(32.1±3.7)%,细胞的倍增时间为43.7h和45.2h;两组间细胞增殖能力和克隆形成能力比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。基因转染组细胞的穿膜细胞数为(91±10.7)/HT、(68±10.8)/HT,而空质粒转染组细胞的穿膜细胞数为(292±11.5)/HT、(219 12.7)/HT,两组细胞比较,侵袭能力亦显著下降(P<0.05)。结论:外源性肿瘤转移抑制基因KAI1有效转染可使子宫内膜癌细胞增殖、侵袭能力均下降,KAI1可能成为子宫内膜癌转移的新治疗靶点。     

Tiaml基因与肿瘤侵袭转移

肿瘤侵袭诱导基因（Tiaml)能够在多种肿瘤中高表达，而且对于肿瘤细胞的侵袭和转移及细胞的信号传导都有极其重要的作用。     

逆转录病毒介导重组CXCR4对前列腺癌细胞侵袭力的影响

目的:构建CXCR4基因重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-CXCR4,并转染PC-3细胞,探讨趋化因子受体CXCR4对人前列腺癌细胞体外侵袭能力的影响.方法: 分离健康人外周血单个核细胞,提取总RNA,以其为模板, RT-PCR法扩增CXCR4,获取CXCR4基因全长序列,装入带有绿色荧光蛋白(GFP)的逆转录病毒质粒pLEGFP-N1,用脂质体法转染PC-3细胞,采用实时定量PCR和Western blotting观察CXCR4表达情况,并通过体外细胞-基质粘附试验和Transwells小室检测肿瘤细胞体外侵袭能力的变化.结果: 成功构建pLEGFP-CXCR4载体,转染人前列腺癌细胞 72h后,CXCR4 mRNA及蛋白质水平明显上调,细胞的体外侵袭力明显增强,增殖活性增强.结论: CXCR4转染能够明显提高CXCR4基因mRNA及蛋白水平,提高人前列腺癌细胞体外侵袭能力.     

CBX7基因与膀胱癌转移的相关性及其对细胞侵袭能力影响

目的:探讨CBX7基因与膀胱癌转移的相关性及其过表达对膀胱癌细胞侵袭能力的影响。方法:应用荧光定量PCR检测膀胱癌组织中CBX7 mRNA的表达。构建CBX7真核表达载体pc DNA-CBX7,转染膀胱癌T24细胞,检测转染后CBX7蛋白的表达以及T24细胞的侵袭能力。结果:CBX7基因在膀胱癌组织中明显下调,而且侵袭性膀胱癌组织中CBX7的表达显著低于浅表性膀胱癌;pc DNA-CBX7转染后能够显著升高T24细胞CBX7的表达量;CBX7过表达的T24细胞穿透滤膜的数量明显减少。结论:CBX7基因与膀胱癌的转移相关,其过表达能够降低T24细胞的侵袭能力。     

上皮型钙粘蛋白（E—cadherin）在癌侵袭转移中的作用

恶性肿瘤侵袭转移是肿瘤治疗中最大障碍之一，肿瘤侵袭转移是一个十分复杂的生物学现象，包括肿瘤细胞粘附于基质—蛋白水解酶降解基质一肿瘤细胞移行等过程。其中细胞粘附是一个重要环节，细胞表面的粘附分子是粘附功能的执行者。粘附分子是细胞膜上的跨膜糖蛋白，可分为整合蛋白家族、钙粘蛋白家族、免疫球蛋白超家族、选择亲家族等四大类[1]。钙粘蛋白家族中的上皮型钙粘蛋白（E－cadherin）在肿瘤侵袭转移中的作用令人瞩目，本文就其近年来分子生物学方面的最新近展作一综述。1钙粘蛋白的结构和分类钙粘蛋白是一类介导同种细胞互相粘附…     

埃兹蛋白对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移能力影响的初步实验研究

目的探讨人乳腺癌细胞MDA-MB-231中埃兹蛋白(ezrin)稳定下调后,是否通过MMP-9、Src/β-catenin等途径影响细胞的侵袭转移能力。方法慢病毒感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞后,将细胞分为实验组231-sh1,实验组231-sh2和阴性对照组231-NC,采用Western blot和免疫荧光法观察ezrin蛋白的干扰效率,用Transwell法观察ezrin表达下调对细胞侵袭转移能力的影响,用Western blot法观察基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和Src/β-连结蛋白(β-catenin)通路相关蛋白的表达情况。各组间均数比较采用单因素方差分析和Post hoc检验(LSD法)。结果慢病毒感染MDA-MB-231细胞后,Western blot显示,与阴性对照组231-NC(1.0083±0.0629)相比,实验组231-sh1(0.3833±0.0326)和231-sh2(0.3342±0.0306)中ezrin蛋白的表达明显降低(P均<0.050)。免疫荧光实验中获得相同的改变(231-NC:30.103±2.243;231-sh1:17.227±1.801;231-sh2:14.857±0.394;P均<0.050)。迁移实验中,与阴性对照组231-NC(940.67±80.507)相比,实验组231-sh1(459.67±51.549)和231-sh2(402.00±52.460)穿膜细胞数均明显减少(P均<0.050)。侵袭实验中获得类似的改变(231-NC:157.33±9.713;231-sh1:96.00±14.731;231-sh2:73.67±13.503;P均<0.050)。实验组231-sh1和231-sh2分别与阴性对照组231-NC相比,MMP-9、Src、P-Src、β-catenin和P-β-catenin表达明显降低(P均<0.050)。结论ezrin表达下调可以降低MDA-MB-231细胞的侵袭转移能力,其可能通过MMP-9以及Src和β-catenin磷酸化的作用机制来影响乳腺癌的侵袭转移能力。