青藏铁路沿线鼠疫菌毒力因子检测

目的 检测青藏铁路沿线鼠疫菌是否具有公认的毒力因子.方法 采用反向间接血凝试验检测Fral;利用假结核菌对PstI敏感可产生抑菌环的复盖种子层法检测PstI;采用乏Ca2+时37℃鼠疫菌不能生长观察Vwa,利用色素培养基观察Pgm.结果 所检测青藏铁路沿线菌株都具有PstI+、Vwa+、FraI+、Pgnn+4种毒力因子.结论 根据其地理位置和宿主判断所检测菌株属于强毒力菌株.     

青藏铁路沿线鼠疫菌对20种抗生素的敏感性研究

目的为了解青藏铁路沿线鼠疫菌对抗生素的敏感性。方法采用纸片法应用20种抗生药物对青藏铁路沿线部分鼠疫菌进行了敏感性试验。结果部分头孢类和喹诺酮类药物对鼠疫菌的敏感性效果较好，19种抗生素均较链霉素为佳。结论本试验结果可为临床治疗鼠疫的新药选择提供科学依据。     

青藏铁路沿线鼠疫菌毒力测定

目的 检测青藏铁路沿线部分鼠疫菌的毒力.方法 用6株鼠疫菌对小白鼠和豚鼠采用常规的动物接种试验,计算各试验菌株的绝对致死量(LD100)和半数致死量(LD50).结果 试验用青藏铁路沿线菌株对小白鼠的LD100在102103个菌,LD50为7.9431.62个菌,对豚鼠的LD100在105107个菌,LD50为68.14685.49个菌.结论 试验用的6株鼠疫菌对小白鼠和豚鼠均有较强的毒力,都是强毒型鼠疫菌.     

青藏铁路沿线鼠疫菌生化性状的研究

目的研究青藏铁路沿线鼠疫菌的生物化学性状。方法利用细菌生长后可使培养基中糖醇酵解，产生酸碱并使培养基中指示剂变色的原理来判断该株菌是否酵解糖醇。结果试验用青藏铁路沿线菌株表现为甘油＋、鼠李糖-、阿胶糖＋、密二糖-、麦芽糖＋、脱氮＋等主要特征。结论试验用青藏铁路沿线菌株属典型的青藏高原型曲株。     

广西鼠疫耶尔森氏菌质粒及Pgm特征的研究

目的掌握广西鼠疫菌的质粒图谱及Pgm特征。方法质粒运用Kado改良法进行提取;Pgm利用刚果红培养基置28℃培养7天观察。结果广西鼠疫菌菌落大多为Pgm+及Pgm-混合型,占85.7%(12/14),Pgm+、Pgm±、Pgm-株分别为42.9%(6/14)、35.7%(5/14)、21.4%(3/14);广西鼠疫菌株共含5种质粒,其分子量分别为4MD、6MD、45MD、65MD、111MD,由质粒构成显示广西鼠疫菌质粒图谱可划分为3型,I型含4MD、6MD、45MD、65MD质粒,Ⅱ型含4MD、6MD、45MD质粒,Ⅲ型则含有4MD、6MD、45MD、111MD质粒。结论Pgm可作分型指标之一;质粒图谱可为分子流行病学提供科学依据。     

一起肺鼠疫暴发流行的病原学研究及流行病学分析

[目的]研究一起人间肺鼠疫暴发流行的鼠疫菌分离株其生物学特性、基因特征等。拟从分子流行病学的角度分析传染源和传播关系。[方法]对8株于鼠疫患者(尸体)分离的鼠疫菌进行糖醇类酵解试验;检测其毒力、毒力因子、质粒、生物型、基因型;运用分子流行病学方法分析本次流行的传染源。[结果]8株鼠疫菌全部为甘油+、阿胶糖+、脱氮+,生物型为古典型。具备强毒鼠疫菌的4个毒力决定因子,为FraI+、VW+、PstI+、Pgm+;对小白鼠的最小致死量介于50～1000个菌,为强毒株;具备我国多数鼠疫菌所携带的6、45和65Mdal质粒;基因组型全部为10型。[结论]根据分子流行病学和现场流行病学调查结果证实,此次肺鼠疫暴发流行来自同一个传染源。     

河北省鼠疫自然疫源地鼠疫菌生物学特征的研究概述

为进一步研究河北省鼠疫疫源地的结构和性质,通过查阅大量资料,对该疫源地分离的鼠疫菌株的生物学特征做了总结,分别从生化特征、营养需求、质粒特征、毒力因子、毒力和毒素几方面进行介绍,发现河北省分离的鼠疫菌属于B群鄂尔多斯高原型,营养需求表现为对甘氨酸的半依赖和对色氨酸的营养依赖,含有4种质粒,其中13×106质粒是内蒙古长爪沙鼠疫源地所特有,有的菌株缺失45×106质粒,全部菌株表现为F1抗原和鼠疫菌素（PstⅠ）阳性,而鼠疫菌色素沉着（Pgm）和VW抗原阳性仅占一定比例,表现为遗传的不稳定性,中等毒力。     

青藏铁路沿线鼠疫菌外膜蛋白种类的研究

目的研究并分析青藏铁路沿线鼠疫菌外膜蛋白种类及相对分子质量。方法鼠疫菌经破碎后采取超高速离心法提取外膜蛋白，利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）系统分离鼠疫菌外膜蛋白。结果在10％的SDS-PAGE上，37℃条件下的培养物可表达26条外膜蛋白带，28℃培养物可表达36条外膜蛋白。结论试验用鼠疫菌株可分泌标准的外膜蛋白，属YOP1型。     

我国鼠疫耶尔森菌Pgm特征的研究

目的　对从我国不同类型疫源地分离的鼠疫菌进行色素沉着因子 (Pgm )表型的分析。方法　用氯化血红素培养基或刚果红培养基培养鼠疫菌 ,对不同颜色的菌落进行计数 ,计算鼠疫菌Pgm的阳性率。 结果　我国 10个疫源地的 16个生态型和新发现的四川青海田鼠型 ,除昆仑山A、B型外 ,其他各型的菌株均含有Pgm+ 菌 ,以青海田鼠型、锡林郭勒高原型、北天山东段型、北天山西段A型、北天山西段B型菌株的Pgm+ 率为高 ,Pgm+ 菌株 >90 %。结论　青海田鼠型、锡林郭勒高原型、北天山东段型、北天山西段A型、北天山西段B型菌株的Pgm+ 表型稳定。     

青海省三江源地区鼠疫病原学分析

目的 研究青海省三江源地区鼠疫菌株生物学特性并确定疫源地空间结构及性质.方法 对1954-2007年青海省三江源地区分离的鼠疫菌株进行生物学表型鉴定及分子生物学研究.结果 411株代表性菌株中,12株脱氮(-)阿胶糖(-)甘油(+)属田鼠型,399株为脱氮(+)阿胶糖(+)甘油(+)属古典型.411株均能产生F1和Pst I;vw+菌株占95.13%(391/411),VW-菌株占4.87%(20/411);Pgm+菌株占80.78%(332/411)、Pgm+菌株占9%(37/411)、Pgm-菌株占10.22%(42/411).220株代表株中96.82%(213/220)的菌株对小白鼠表现为强毒株,3.18%(7,220)为中等毒力,说明绝大多数具高致病性,其毒力很强.90.02%(307/341)菌株携带6×106 45×106 x65×106质粒.80株代表株包括8个基因组型,其中6个基因型与原分型相同,另有2个新的基因组型.结论 三江源地区鼠疫菌株具备青藏高原鼠疫病原体特性,人类一旦感染可导致发病急、病情重、传染性强、病死率高等特点.     

鼠疫耶尔森菌TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测

目的 建立一种快速检测鼠疫耶尔森菌的方法.方法 以编码F1抗原的基因caf1为靶序列,人工合成基因序列,制备重组质粒作为鼠疫耶尔森菌检测的标准样品;用实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)技术,针对pMT1质粒上的caf1基因设计引物和TaqMan荧光探针,进行实时FQ-PCR检验,评价该方法的准确性、敏感性及特异性.建立鼠疫耶尔森菌TaqMan探针实时FQ-PCR检测方法.结果 本研究成功构建了质粒pUC57-caf1,引物、探针特异性良好,标准曲线在5.03×102～5.03×107拷贝数之间,具有较好的线性关系,相关系数1.0.实时FQ-PCR检验最低可检测出5.03×102拷贝数的重组质粒,灵敏度比普通PCR高100倍.特异性检测试验可选择性检测出鼠疫耶尔森菌,与其他细菌无交叉反应,结果与普通PCR一致.对同一浓度的重组质粒进行15个平行样品的重复性试验,Ct值标准差为0.28.结论 建立TaqMan探针实时FQ-PCR检测技术,能够快速、准确、特异的检测鼠疫耶尔森菌,为鼠疫监控、诊断提供技术支持.     

青藏铁路沿线青海段2003—2013年鼠疫流行态势分析

目的了解青藏铁路沿线近10年来鼠疫流行态势,为今后鼠疫防治工作提供科学依据。方法收集2003—2013年青藏铁路沿线鼠疫监测结果和人间鼠疫疫情处置资料,应用描述流行病学方法进行分析。结果2003—2013年青藏铁路青海省境内沿线动物鼠疫主要发生在格尔木市唐古拉山乡、天峻、乌兰等地区,共分离鼠疫菌69株;检出鼠疫F1抗体阳性血清86份。发生人间鼠疫疫情7起,发病7例,死亡3例。结论青藏铁路沿线青海段鼠疫防治总体形势较为严峻。在该沿线重点区域每年动物间鼠疫流行仍持续活跃;人间鼠疫时有发生,主要与非法猎捕旱獭有关。     

鼠疫耶尔森氏菌三色荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种三色荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法根据鼠疫耶尔森氏菌pPCP1质粒上的pla基因、编码F1抗原在pMT1质粒上的ca f1基因以及菌体染色体上的3a基因序列,设计特异性的引物和不同荧光标记的Taqman荧光探针,优化反应体系和扩增条件,考察该方法检测的敏感度、特异性、重复性和稳定性,最终建立三色荧光定量PCR检测方法。结果本研究所建立的方法对鼠疫耶尔森氏菌DNA的扩增效率高,最低检出限为1×102copies/ml,特异性高,重复性的变异系数在合理范围内,稳定性好。结论建立了一种同时检测鼠疫耶尔森氏菌pla、ca f1和3a基因的三色荧光定量PCR方法,该方法敏感度和特异性高,能够实现快速检测的目的。     

复合探针荧光定量PCR法检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究

目的建立用复合探针荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法研究根据鼠疫耶尔森氏菌pla基因的核苷酸序列设计特异引物,通过PCR法的特异性、灵敏度和重复性研究,建立了复合探针荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法,用于鼠疫的筛选和诊断。结果该检测方法的特异性为100%,最低可检出10个拷贝的质粒DNA分子,可对1×101~1×106拷贝范围内的模板进行定量,最低可检测至1×102cfu/ml细菌。该方法的精密度好,阳性质控品和阴性质控品不同时间测定3次及同一时间5次重复实验结果Cv值均<5%。结论本研究建立的复合探针实时荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法,可对鼠疫耶尔森氏菌进行快速检测、准确辨别和早期诊断,对鼠疫的早期快速诊断具有重要意义。     

青藏高原鼠疫耶尔森菌基因型分布

目的研究青藏高原鼠疫耶尔森菌（鼠疫菌）基因组型分布特征.方法对分离到的青藏高原鼠疫菌297株,根据已经证实的22个差异区段设计引物,每株鼠疫菌的每个基因差异区段都采用PCR技术进行验证.结果在喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地中,鼠疫菌基因组型有9种,分别为1、5、6、7、8、10、11、新基因组型和Ype-ancestor型,其中以5、8和10型为主,3种基因组型合计所占比例为80.6%（204/253）,而且不同地区鼠疫菌基因组型的分布也不一致.青藏高原青海田鼠鼠疫疫源地鼠疫菌基因组型全部为14型.结论青藏高原鼠疫菌基因组型分布具有明显的地理特征.根据基因组型的分布状况推测出了鼠疫菌在青藏高原的传播路径.