三叶木通可溶性蛋白及同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对三叶木通可溶性蛋白及同工酶进行初步研究.结果表明,各样品的蛋白质、同工酶酶谱有共有带,但酶带数量与活性强度有差异;POD同工酶差异明显,可作为品种鉴定的生化指标.     

动物中药可溶性蛋白凝胶电泳图谱的研究

动物胶和蛇类中药属贵重药材 ,经煎煮浓缩而成的胶均为部分水解的胶质蛋白 ,难以用传统的方法加以区分。我们采用凝胶电泳系列技术对下列动物药进行鉴别研究。1　实验材料1乌梢蛇 Zaocys dhumnacles(cantor) ;2蕲蛇Agkistrodoun acutus Guenther为蝰科动物五步蛇 ;3水赤链游蛇 Natrix annulari;4龟胶 ;5鹿角胶 ;6猪皮胶 (自制 ) ;7伪品胶 ;8鲜王浆 A(湖北扬子江蜂业公司 ) ;9鲜王浆 B(湖北崇阳 ,1 999.1 1 ) ;1鲜王浆 C(华中农大永春蜂产品技术部 ,1 999.1 1 .2 3 ) ;1 1金钱白花蛇为眼镜蛇科 Bungarusmulticinctus Blyth的干燥幼蛇 ;1 …     

金钱白花蛇可溶性蛋白凝胶电泳图谱的研究

对金钱白花蛇进行几种凝胶电泳研究,根据聚丙烯酰胺胶电泳（ＰＡＧＥ）谱带的位置和数目进行品种鉴别;用改进的十二烷酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）测定其主要蛋白质成分分子量;用等电聚焦电泳（ＩＦＥ）测定其主要蛋白质成分的等电点（ＰＩ）。清晰的电泳谱带及相应数据为商品蛇真伪鉴别提供了科学依据。     

阴道毛滴虫硫氧还原蛋白过氧化物酶的cDNA克隆及序列分析

目的获取阴道毛滴虫硫氧还原蛋白过氧化物酶的cDNA克隆,研究其还原烷基氢过氧化物和氢过氧化物的抗氧化作用,以及调节由氢过氧化物介导的信号转换. 方法提取阴道毛滴虫的总RNA,用λTripIEx2噬菌体载体构建cDNA表达文库,阳性质粒cDNA克隆进行测序,并用生物软件RPS-Blast,NCBI Blast和ClustalW等对6个读码框架进行序列分析. 结果获得一株开放阅读框为588对碱基的cDNA克隆,推测肽链有196个氨基酸.序列分析表明,该肽链与衣滴虫过氧化物氧化还原酶(Prx1蛋白)及人的自然杀伤增强因子B分别有56%和61%的同源性;除了两个高度保守的半胱氨酸作用基序外,还有蛋白激酶C磷酸化和酪氨酸激酶磷酸化作用基序,N-豆蔻酰化作用位点,脂质运载蛋白信号位点等. 结论该蛋白有＞56%的可能性位于胞浆,和典型2-Cys Prx亚家族有很高(56%～62%)的同源性,很可能是其中的一个新成员.     

原发性肝癌病人血清过氧化物酶同工酶的测定

报告血清过氧化物酶(POD)同工酶的检测方法,并检测了45例正常人及20例原发性肝癌病人的血清POD同工酶.结果正常人血清POD同工酶出现1～3条区带,HCC病人血清POD同工酶出现2～6条区带.提示,HCC病人血清POD同工酶区带比正常人明显增多(P<0.001),活性也明显增高(P<0.01).     

贵州小香猪超氧化物歧化酶和过氧化物酶同工酶的组织分布

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定贵州小香猪心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、卵巢、子宫等９种组织中超氧化物歧化酶和过氧化物酶同工酶。超氧化物歧化酶同工酶在Ｒｆ０．２２和０．２６处分别各有一条共有谱带，而过氧化物酶同工酶在Ｒｒ０．３９处有一条共有谱带。肝、肺、肾中两种酶活力较高，脑中未测得过氧化物酶。     

黑胸大蠊不同发育阶段可溶性蛋白抗原的分析

目的 了解黑胸大蠊的不同发育阶段蛋白质抗原免疫生化特性。方法 采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对黑胸大蠊不同发育阶段可溶性蛋白质组分进行分离鉴定并通过酶联免疫印迹(ELIB)技术分析不同发育阶段抗原的免疫学特性。结果 四种抗原蛋白经SDS-PAGE后银染色，均得到清晰的蛋白显色带。卵抗原、若虫抗原、雄成虫抗原、雌成虫抗原分别可见13、28、26、41条蛋白区带，其中主带分别为2、10、10、13条，分子量大多位于10～97kDa范围。具有免疫原性的蛋白质大多分布在43kDa以上分子量范围，四种抗原组分相互之间有交叉抗原的存在。结论 不同发育阶段黑胸大蠊的蛋白质组分从卵．若虫．成虫出现次第增多现象并趋于复杂化，这对研究黑胸大蠊的发育生物学特征具有一定的潜在意义。     

人白细胞髓过氧化物酶的纯化及鉴定

以十六烷基三甲基溴化铵溶液提取正常人白细胞髓过氧化物酶经硫酸铵分级沉淀,过SephadexG-150柱,获得其纯品,RZ值为0.68,酶活性为29.77u/mg,SDS-PAGE谱显示3条区带,分子量分别为59kd、38kd、13.5kd。     

苯中毒小白鼠血液中SOD过氧化物酶GSH过氧化物酶变化的实验研究

本文对苯中毒小白鼠血液中ＳＯＤ、过氧化物酶、ＧＳＨ过氧化物酶的变化进行了实验研究。将小白鼠按不同染毒浓度、不同染毒时间分组、对其进行静式吸入染毒。２０天后，对其外周血ＷＢＣ计数及相关血生化指标进行检测。结果提示：在苯中毒早期ＷＢＣ在正常范围时，ＧＳＨ过氧化酶、ＳＯＤ和过氧化物酶已发生变化，为我们进一步研究苯中毒早期诊断指标提供了重要依据。     

过氧化物酶体特异性绿色荧光蛋白的腺病毒构建

目的设计特异性标记过氧化物酶体的绿色荧光蛋白,构建腺病毒载体,并感染培养的大鼠心肌细胞H9C2,检测该腺病毒载体的表达效率,通过共聚焦显微镜观察细胞过氧化物酶体的分布,同时给予细胞缺氧处理,对比细胞内过氧化物酶体的变化。方法（1）设计带有过氧化物酶体信号肽序列的绿色荧光蛋白序列。（2）PCR扩增该序列片断,并将其克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack中;pAdTrack经限制性内切酶Pme Ⅰ酶切线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183感受态细胞中进行同源重组。重组绿色荧光蛋白质粒经限制性内切酶PacⅠ酶切线性化后,转染293A细胞,进行病毒包装,得到Ad-GFP-Peroxi重组腺病毒颗粒。（3）用Ad-GFP-Peroxi腺病毒和不带有信号肽序列的Ad-GFP腺病毒感染培养的H9C2,24h后共聚焦显微镜下观察。（4）用Ad-GFP-Peroxi腺病毒感染H9C2细胞后,分为正常培养和1%氧浓度培养两组,24h后观察。结果重组Ad-GFP-Peroxi腺病毒载体构建成功;与Ad-GFP腺病毒相比,Ad-GFP-Peroxi腺病毒能够特异性显示大鼠心肌细胞内过氧化物酶体的分布;且缺氧刺激后H9C2细胞内过氧化物酶体分布出现聚集现象。结论利用同源重组的方法成功构建的过氧化物酶体特异性绿色荧光蛋白的过表达腺病毒,对大鼠心肌细胞H9C2有较高的感染效率,共聚焦显微镜下可以明确显示心肌细胞内过氧化物酶体的分布情况,且缺氧刺激导致过氧化物酶体分布聚集。     

高碘对豚鼠甲状腺中蛋白水解酶和过氧化物酶活性的影响

本研究以短毛远交群豚鼠为实验动物,用高碘水饲养180天,成功地复制出高碘甲状腺肿动物模型,并观察了高碘对甲状腺组织蛋白水解酶(TC)和过氧化物酶(TPO)活性的影响。结果发现,高碘组动物甲状腺组织TC和TPO活性均显著低于对照组(适碘组),说明高碘对这两种酶有抑制作用,从而为揭示高碘甲状腺肿的发病机理提供了有价值的根据。     

过氧化物酶催化酚聚合的研究

研究过氧化物酶在非水介质中催化酚类化合物的聚合。探讨了有机溶剂的浓度，溶剂极性，体系ＰＨ值、酶浓度等因素对聚酚分子量的影响；分析了聚酚的链结构。结果表明，酚分子之间通过酚羟基的邻位或对位相互连结。形成了分子链上带有酚羟基的聚酚树脂；通过调节聚合参数，可以改变聚酚的分子量。     

吸烟诱导的慢性支气管炎大鼠模型巨噬细胞炎性蛋白-2及髓过氧化物酶研究

目的制备吸烟诱导的慢性支气管炎大鼠模型,研究大鼠血清髓过氧化物酶(MPO)的变化与巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)之间的关系,探讨慢性支气管炎气道炎症形成的可能机制。方法雄性Wistar大鼠随机分为二组:正常对照组、吸烟模型组。采用单纯吸烟的方法建立慢性支气管炎大鼠模型。光镜下观察支气管肺组织病理形态学改变。分析支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数和分类;用ELISA法测定肺组织匀浆MIP-2质量浓度;用生化比色法测定大鼠血清MPO含量。结果模型组病理形态学改变符合人类慢性支气管炎的特点。与正常组比较,模型组血清MPO及肺组织匀浆MIP-2含量明显升高(P<0.01),模型组血清MPO与BALF中性粒细胞数,肺组织匀浆MIP-2质量浓度成显著正相关(分别为r=0.876及r=0.739;均P<0.01)。结论吸烟诱导的慢性支气管炎大鼠可能通过MIP-2介导中性粒细胞聚集,活化参与气道炎症反应。     

中药菊花过氧化物酶酶学特性及炮制工艺的研究

目的 探讨中药菊花过氧化物酶酶学特性及炮制工艺.方法 以愈创木酚为底物,采用分光光度法测定菊花过氧化物酶的酶学特性,并比较不同加工工艺下菊花过氧化物酶学特性及总黄酮含量.结果 菊花反应时间不宜超过2 min,最适pH 7.0,最适温度36℃,100℃处理30 s后,过氧化物酶活性完全丧失.过氧化物酶催化的酶促褐变反应动力学符合米氏方程,动力学参数Km=1.58×10-2 mol/L,Vmax=14.278 U/min.四种炮制工艺比较过氧化物酶的抑制效果为水蒸汽>微波干燥>80℃热风干燥>自然阴干.分光光度计法测定样品总黄酮含量,蒸制干燥>微波干燥>80℃热风干燥>自然阴干.结论 菊花过氧化物酶适应温度范围广,20~80℃,相对耐热性好.本研究可为中药菊花炮制工艺的改善提供理论参考.     

过氧化物酶1,6和GFAP在人脑星形胶质细胞瘤中的表达及临床意义

目的确定星形胶质细胞瘤中过氧化物酶1(Prx1)、过氧化物酶6(Prx6)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,探讨其表达水平与星形胶质细胞瘤恶性程度的关系。方法采用Western blot、RT-PCR和免疫组化检测52例星形胶质细胞瘤(Ⅱ级23例、Ⅲ级15例、Ⅳ级14例)和12例正常脑组织标本中Prx1、Prx6和GFAP的表达情况。结果 Prx1、Prx6在正常脑组织、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级星形胶质细胞瘤中蛋白和mRNA的表达水平逐渐升高,具有统计学意义(P<0.05);GFAP在Ⅲ、Ⅳ级星形胶质细胞瘤中蛋白和mRNA的表达水平低于Ⅱ级星形胶质细胞瘤和正常脑组织(P<0.05)。结论 Prx1、Prx6和GFAP可能是临床评价星形胶质细胞瘤恶性程度和侵袭性的潜在生物标志物,可作为星形胶质细胞瘤生物治疗的潜在靶分子。     

硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ诱饵质粒的构建和检测

目的 构建硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ(PrxⅡ)诱饵质粒,同时检测其在酵母菌内的表达和对酵母细胞的毒性.方法 提取人前列腺癌细胞系PC-3M-1E8细胞的RNA,利用RT-PCR获得其cDNA, PCR方法扩增PrxⅡ基因片段,纯化后以内切酶双酶切PrxⅡ和酵母表达载体pGBKT7,回收产物并连接,重组质粒命名为pGBKT7-PrxⅡ, 将重组质粒导入酵母菌AH109,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性作用.结果 构建的诱饵载体pGBKT7-PrxⅡ测序结果表明序列完全正确,融合区域的读码框正确.将pGBKT7-PrxⅡ成功转化入酵母感受态AH109,并证明PrxⅡ蛋白对酵母无毒性作用.结论 证实了PrxⅡ蛋白无酵母毒性,诱饵质粒pGBKT7-PrxⅡ可以用于酵母双杂交研究前列腺癌发病机制.     

血清过氧化物酶测定及临床意义

报告一种血清过氧化物酶(POD)的测定方法。用该法测定了71例正常人和184例病人的血清POD活性。结果表明,正常人血清POD活性为15～180U/L,男女之间无显著性差异。原发性肝癌(HCC)病人的血清POD活性较正常人及其他疾病对照组明显升高(P<0.01),而良性肝病病人血清POD无明显升高。血清POD活性测定诊断HCC的敏感性为81.9％。对AFP阴性HCC病人,血清POD的诊断敏感性为62.2％。结果提示,血清POD测定有助于HCC的诊断,特别有助于HCC与其他良性肝脏疾病的鉴别。     

用化学发光法测定辣根过氧化物酶几种体系的研究

作者采用四种体系,确定了用化学发光法测定辣根过氧化物酶(HRP)的最佳测定条件和操作步骤。用鲁米诺-H_2O_2(NaOH)可以方便地测定0.05～4pmol HRP,绝对检测限16fmol。用邻苯二酚-H_2O_2(pH6.5)体系可测定0.1～100pmol HRP,绝对检测限3～17fmol。用鲁米诺-H_2O_2-对碘苯酚(pH8.5)体系,可由1分钟时的光强度测定10～50fmol HRP,绝对检测限10fmol。用对羟基联苯代替对碘苯酚,测1或3分钟时的光强度可测定6～40fmol HRP,绝对检测限6.5或3.3fmol.