益母草碱、丁香酰胍醇及丁香酸氨基醇酯类化合物抗血小板聚集活性及其与结构的关系

目的：观察和比较益母草碱、丁香酰胍醇及丁香酸氨基醇酯类化合物抗血小板聚集活性及其与结构的关系。方法：以血小板聚集为指标并计算ＩＣ（５０）以比较各样品的作用强度。结果：益母草碱（Ⅰ），化合物Ⅱ，Ⅲ和Ⅳ１，２均能对抗ＡＤＰ诱导大鼠和兔的血小板聚集作用，其ＩＣ（５０）分别为０．９７，４．４，５．２，０．３６和１．１４ｍｇ／ｍｌ。所有化合物在体外均有抑制ＡＤＰ诱导大鼠和兔的血小板聚集的作用，以Ⅳ１，Ⅴ１和Ⅶ１，２的作用最强，ＩＣ（５０）在０．１５～０．３６ｍｇ／ｍｌ，其次为Ⅳ３，５，７，８和Ⅵ１，２．ＩＣ（５０）在０．４３～０．９４ｍｇ／ｍｌ。化合物Ⅰ，Ⅱ，Ⅳ２，４，６和９虽有抑制作用，但无实际意义。结论：益母草碱具有明显的抗血小板聚集活性，完整的益母草碱分子是维持这种活性的基本结构，改变分子结构碱性胍基为氨基，引入双键或碳链加长以及丁香酸氨基醇酯乙烯化或乙氧羰基化，其活性均比母体化合物强。     

益母草香豆素类化学成分与抗血小板聚集活性

综合运用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、MCI色谱以及反相C18柱色谱等方法分离纯化益母草中的化学成分,运用有机波谱学方法鉴定各化合物的结构,并进一步测试各化合物的体外抗血小板聚集活性。从益母草的乙酸乙酯部位中分离鉴定了10个香豆素类化合物,依次为佛手柑内酯(1)、花椒毒素(2)、异茴芹内酯(3)、异栓翅芹醇(4)、异欧前胡素(5)、橙皮内酯水合物(6)、异橙皮内酯(7)、九里香酮(8)、橙皮油内酯烯(9)、欧芹酚甲醚(10)。除化合物9外,其他化合物均为首次从该属植物中分离得到,活性筛选结果表明化合物4和8对ADP诱导的血小板聚集有明显的抑制作用。     

细叶益母草化学成分及其抗血小板聚集活性的研究

目的对细叶益母草Leonurus sibiricus的化学成分和血小板聚集活性进行研究。方法细叶益母草提取液采用大孔树脂、MCI、反相C18、硅胶、Sephadex LH-20柱色谱及重结晶等方法进行分离纯化,所得化合物的结构通过波谱分析和TLC来鉴定,然后对其进行抗血小板聚集活性筛选。结果从中分离鉴定出9个化合物,分别为益母草碱(1)、丁香脂素(2)、梣皮树脂醇(3)、蒙花苷(4)、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、丁香酸乙酯(6)、对羟基苯甲酸乙酯(7)、对羟基苄乙醚(8)、β-胡萝卜苷(9)。结论化合物2~4、6、8均为首次从该植物中分离得到,其中3和6为首次从益母草属植物中分离得到。而且,化合物1、4和5对ADP诱导的血小板聚集均有明显的抑制作用。     

马钱子碱和马钱子碱氮氧化物抗血小板聚集及抗血栓形成作用的研究

观察了马钱子碱（Ｂ）和马钱子碱氮氧化物（ＢＮＯ）抗血小板聚集和血栓形成的作用，发现了Ｂ和ＢＮＯ都能显著地抑制由ＡＤＰ和胶原诱导的血小板聚集。与阿斯匹林（ＡＳＰ）比较，在同样终浓度下ＢＮＯ对ＡＤＰ诱导的血小板聚集的抑制作用与ＡＳＰ相似，但对胶原诱导的血小板聚集的抑制作用则强于ＡＳＰ。Ｂ对ＡＤＰ或胶原诱导的血小板的抑制作用均强于ＢＮＯ和ＡＳＰ。Ｂ、ＢＮＯ和ＡＳＰ抗ＡＤＰ诱导的血小板聚集的ＩＤ５０依次为０．８７７，２．３１９和２．０１２ｍｍｏｌ·ｍｌ－１；抗胶原诱导的血小板聚集的ＩＤ５０依次为０．７００，３．９５０，４．１８７ｍｍｏｌ·ｍｌ－１。Ｂ、ＢＮＯ都有类似ＡＳＰ的抗血栓形成作用，血栓抑制率分别为Ｂ：４７．５％、ＢＮＯ：５０．６％和ＡＳＰ：４２．１％。虽然Ｂ的剂量是ＢＮＯ和ＡＳＰ的一半，即有与ＢＮＯ和ＡＳＰ相近的血栓抑制率，但已显示明显的积蓄性毒性。     

抗心梗合剂对急性心肌梗塞血清酶、血小板聚集活性及血液流变学影响

抗心梗合剂已经临床应用表明对减少急性心肌梗塞并发症及降低病死率有一定效果。为了解本制剂的可能作用机理,1981～1982年,选择无严重并发症急性心肌梗塞46例(其中半数对照)进行了抗心梗合剂的治疗对照观察,主要观察本剂对血清酶,血小板聚集活性,血牯度及红细胞电泳等项目的影响,初步小结于下。     

川芎药材、饮片及其中成药抗血小板聚集活性的生物检定方法学研究

目的建立以抗血小板聚集活性为指标的生物检定法,评价川芎药材、饮片及含川芎中成药的质量。方法川芎加水回流定量提取,以提取物为供试品体外测定抗血小板聚集活性。家兔心脏取血,制备富血小板血浆(PRP),用腺苷-5′-二磷酸钠盐诱导血小板聚集,以血小板抑制率为抗血小板聚集活性指标,用阿魏酸钠标定川芎提取物的抗血小板聚集活性。根据量反应平行线法(2.2)法计算川芎提取物的抗血小板聚集活性;结合川芎水提物的提取率,计算川芎样品抗血小板聚集活性。并测定了8份川芎药材、饮片及中成药样品的抗血小板聚集活性,验证方法的可行性。结果阿魏酸钠和川芎提取物均具有显著抗血小板聚集活性(P0.01),并且可靠性检验结果成立。阿魏酸钠在给药质量浓度15~60 mg/m L内与其血小板聚集抑制率呈良好的线性关系(r=0.993 4,n=4)。供试品重复测定抗血小板聚集活性的RSD值为3.43%(n=6),可信限率为23.90%(n=6)。不同川芎样品抗血小板聚集活性不同,4份川芎药材抗血小板聚集活性的生物效价分别为3.183、2.068、1.957和1.931 U/g,川芎饮片及川芎酒炙饮片抗血小板聚集活性的生物效价分别为1.304、1.021 U/g,速效救心丸和乐脉颗粒抗血小板聚集活性的生物效价分别为0.506、0.919 U/g。结论建立的方法可准确测定川芎药材、饮片及含川芎中成药的抗血小板聚集活性,可用来评价川芎产品的质量。     

碱提灵芝多糖的分离纯化、结构表征及免疫活性评价

目的从赤芝Ganoderma lucidum中提取、分离和纯化获得碱提多糖组分,在表征其基本理化性质和精细结构的基础上,对其体外免疫调节活性进行研究。方法赤芝子实体干燥粉碎后,利用碱提醇沉法提取粗多糖,经Q-Sepharose Fast Flow离子交换色谱柱纯化得到灵芝多糖组分(LZJ-0.15)。采用PMP柱前衍生-高效液相色谱法(HPLC)及高效凝胶渗透色谱-十八角度激光光散射联用法(HPGPC-MALLS)测定LZJ-0.15的单糖组成及相对分子质量特征,并通过核磁共振氢谱(1H-NMR)、碳谱(13C-NMR)及二维谱(1H-1H COSY和1H-13C HSQC)对LZJ-0.15的精细结构进行表征。采用小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红实验对灵芝多糖LZJ-0.15进行免疫活性评价。结果 LZJ-0.15的相对分子质量、分子半径及Mw/Mn分别为24 700、46.6 nm和1.019,其单糖组成分析显示以葡萄糖为主(92.3%),核磁谱图显示LZJ-0.15为→3)Glc(β1→及→6)Glc(β1→连接为主的葡聚糖。RAW264.7细胞吞噬中性红实验显示LZJ-0.15具有较好的免疫调节活性。结论赤芝碱提灵芝多糖相较于水提多糖组分具有较优的免疫活性,有望开发成重要的免疫调节剂。     

甘草次酸C3、C11、C30衍生物的合成及其体外抗肿瘤活性研究

目的对甘草次酸C3、C11、C30进行结构改造及其体外抗肿瘤活性研究。方法甘草次酸经锌汞齐还原为11-脱氧_甘草次酸,然后C。羧基与卤代烃发生酯化反应,C3-羟基与甲基磺酰氯在0℃冰浴条件下发生甲基磺酰化反应,最后在104℃回流条件下与叠氮钠发生消除反应,从而得到目标产物;通过SRB法对上述合成的甘草次酸衍生物进行体外抗肿瘤活性研究。结果设计并合成了7个目标产物5g-5g,利用IR、MS和1H-NMR确证了结构;抗肿瘤活性筛选结果表明5a对MCF-7的抑制率比母体显著提高,5a、5c、5e对A549的抑制率均比母体有所提高。结论结构改造合理,对进一步开展甘草次酸衍生物的结构改造和抗肿瘤活性研究具有一定的参考价值。     

玉足海参多糖对花生四烯酸诱导兔血小板聚集的影响及其与Ca~(2 )、Mg~(2 )的关系

玉足海参多糖能促进花生四烯酸诱导兔血小板聚集作用,体外实验:2.56-320μg/ml时聚集率为116-133％;体内实验:2mg/kg,10-120min的聚集率为125-146％。Ca~(2 ),Mg~(2 )能加强以上作用。     

秦艽的化学成分及抗炎保肝活性研究

目的 研究秦艽Gentiana macrophylla干燥根部的化学成分及抗炎保肝活性。方法 采用多种色谱学方法对秦艽正丁醇和水层萃取物进行系统的分离纯化;采用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的RAW 264.7巨噬细胞中炎症因子白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）的表达为指标,评价各化合物的抗炎活性;采用对乙酰氨基酚（paracetamol,APAP）诱导人肝细胞（LO2）为模型,研究对APAP诱导LO2细胞损伤的抑制作用,以评价各化合物的保肝活性。结果 从秦艽70%乙醇提取物中分离鉴定11个化合物,分别为 (＋)-秦艽酸甲（1a）、(−)-秦艽酸甲（1b）、gentiananoside A（2）、3′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷（3）、chinshanol A（4）、8-羟基-落叶松脂醇-4''-O-β-D-葡萄吡喃糖苷（5）、berchemol（6）、6-去甲氧基茵陈色原酮（7）、1-(β-D-ribofuranosyl)-1H-1,2,4-triazone（8）、尿嘧啶苷（9）、β-D-吡喃葡萄糖基苯甲酸酯（10）和2-苯乙基-β-D-吡喃葡萄糖（11）。活性研究显示,化合物1b对IL-6的分泌抑制效果明显;化合物1、1a、1b、2、8可降低APAP诱导的LO2细胞损伤中的丙氨酸转氨酶（alanine transaminase,ALT）和天冬氨酸转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）水平。结论 化合物1a和1b为1对新的苯并二氢吡喃光学异构体,化合物2～3为环烯醚萜类化合物,化合物4～6为木脂素类化合物,还含有黄酮、苯环衍生物等,化合物4～5、8、10为首次从该属植物中分离得到,化合物9为首次从该植物中分离得到;部分化合物显示出良好的抗炎保肝作用前景。     

板蓝根中丁香酸的抗内毒素作用

目的 研究从板蓝根中分离出的丁香酸的抗内毒素作用。方法将丁香酸配成1％水溶液，鲎试验法做抗内毒素定量测定；用内毒素致兔发热实验检测丁香酸体内抗内毒素作用；内毒素致小鼠死亡实验测定丁香酸保护作用。结果0.334mg／mL丁香酸可使4EU内毒素降为0．777EU，破坏率为83．16％；1％丁香酸溶液可使内毒素引起的兔热显著降低；使同等剂量脂多糖引起的小鼠死亡率由68％降为20%。结论 丁香酸有抗内毒素作用。     

高效毛细管电泳同时测定板蓝根中水杨酸、丁香酸、苯甲酸和邻氨基苯甲酸

目的:建立同时测定板蓝根药材中水杨酸、丁香酸、苯甲酸和邻氨基苯甲酸含量的高效毛细管电泳方法.方法:采用重力进样,进样高度10 cm,进样时间30 s,正极进样,负极柱上220nm检测.操作电压11.5kV,运行缓冲溶液为乙腈.硼砂(15%乙腈,25 mmol·L~(-1)硼砂,15 mmol·L~(-1)β-CD),pH 9.10.对电压、缓冲液pH、缓冲液浓度、乙腈、β-CD浓度等因素对分离的影响做了系统的研究.水杨酸、丁香酸、苯甲酸和邻氨基苯甲酸分别在3.0～90,4.0-120,2.0～60,5.0～100 mg·L~(-1)线性关系良好(r=0.999 4,0.999 5,0.999 8,0.999 2);回收率分别为95.9%～102.6%,98.6%～103.4%,98.7%～104.1%,96.1%～104.3%,基于3倍信噪比(S/N=3),4种有机酸的检出限分别为0.7,1.1,1.2,1.5 mg·L~(-1).     

Functional and binding studies of gallic acid showing platelet aggregation inhibitory effect as a thrombin inhibitor

Objective: This study was devoted to identifying natural thrombin inhibitors from traditional Chinese medicine (TCM) and evaluating its biological activity in vitro and binding characteristics. Methods: A combination strategy containing molecular docking, thrombin inhibition assay, surface plasmon resonance (SPR) and molecular dynamics simulation were applied to verify the study result. Results: Gallic acid was confirmed as a direct thrombin inhibitor with IC50 of 9.07 μmol/L and showed a significant inhibitory effect on thrombin induced platelet aggregation. SPR-based binding studies demonstrated that gallic acid interacted with thrombin with a KD value of 8.29 μmol/L. Molecular dynamics and binding free energy analysis revealed that thrombin-gallic acid system attained equilibrium rapidly with very low fluctuations, the calculated binding free energies was ?14.61 kcal/mol. Ala230, Glu232, Ser235, Gly258 and Gly260 were the main amino acid residues responsible for thrombin inhibition by gallic acid, providing a mechanistic basis for further optimization. Conclusion: This study proved that gallic acid is a direct thrombin inhibitor with platelet aggregation inhibitory effect, which could provide a basis for the follow-up research and development for novel thrombin inhibitors.     

银杏二萜内酯A,B,K抗血小板聚集作用机制研究

为研究银杏二萜内酯A,B,K(GA,GB,GK)对家兔血小板聚集功能的影响,比较三者作用机制的异同及强弱,该研究采用体外实验法,观察不同剂量GA,GB,GK对血小板活化因子(PAF)诱导家兔血小板聚集作用的影响。研究结果显示,3种银杏二萜内酯均可抑制PAF诱导的体外家兔血小板聚集,其强弱顺序为GKGBGA;三者还能够拮抗[~3H]PAF与PAF受体的特异性结合,拮抗能力同样为GKGBGA。进一步研究三者对于PAF诱导后血小板中胞内[Ca~(2+)]i动员及胞内c AMP水平的变化,发现三者均能够剂量依赖性的抑制胞内[Ca~(2+)]i动员并提高胞内c AMP水平,且它们的作用强弱与拮抗PAF受体能力的强弱一致。表明银杏二萜内酯GK对于PAF受体具有高度的选择性,并能够通过激活c AMP信号通路、抑制胞内[Ca~(2+)]i动员的方式达到抑制血小板聚集的目的,GB、GA对PAF受体也有较强的拮抗作用,但弱于GK。     

诺迪康胶囊对大鼠血液流变学及血小板聚集的影响

诺迪康胶囊２ｇ／ｋｇ和１ｇ／ｋｇ可明显降低大鼠全血粘度、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数，还能明显抑制血小板聚集。     

注射用血栓通体外对家兔血小板聚集的影响

目的研究注射用血栓通(冻干,主要成分为三七总皂苷,质量分数为95%)体外对二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸(AA)、血小板活化因子(PAF)诱导家兔血小板聚集的影响。方法采用Born法,检测ADP、AA、PAF诱导的家兔血小板聚集率。结果与对照组比较,注射用血栓通7.2、14.4 mg/mL组能显著抑制ADP、AA、PAF诱导的兔血小板聚集率(P<0.01),注射用血栓通3.6 mg/mL组能显著抑制ADP诱导的兔血小板聚集率(P<0.01)。结论注射用血栓通具有体外抑制家兔血小板聚集的作用。     

川芎嗪对青霉素致痫大鼠血液流变学、血小板聚集率和去甲肾上腺素含量变化的研究

目的观察川芎嗪(TMP)对青霉素致痫大鼠的血液流变学指标、血小板聚集率和去甲肾上腺素含量的变化。方法建立青霉素致痫大鼠模型,采用BL-410生物功能实验系统记录双侧大脑皮质痫样放电,待癫痫样放电稳定后,腹腔注射不同剂量的TMP,待其抑制作用最明显时,采血检测血液流变学指标、血小板聚集率和去甲肾上腺素含量的变化。结果青霉素致痫组的HCT、全血黏度、血浆黏度、纤维蛋白原均高于治疗组(P均<0.01),而脑血流量显著低于治疗组(P<0.01),血小板聚集率和去甲肾上腺素含量比较亦均有显著性差异(P均<0.01)。结论 TMP对青霉素致痫大鼠血小板聚集率和去甲肾上腺素含量有明显的影响,TMP在血液流变性方面对应激损伤有对抗作用。     

Korean red ginseng attenuates hypercholesterolemia-enhanced platelet aggregation through suppression of diacylglycerol liberation in high-cholesterol-diet-fed rabbits

Intake of Korean red ginseng (KRG, ginseng Radix rubra), rich in glycosylated saponins (ginsenosides), has been known to inhibit platelet aggregation in the normocholesterolemic condition. However, it is unclear whether KRG can attenuate hypercholesterolemia-enhanced platelet aggregation. This study examined whether the daily consumption of a KRG-water extract (WE) could prevent the hypercholesterolemia-enhanced platelet aggregation and progression of hypercholesterolemic atherosclerosis. KRG-WE administration (200 mg/kg/day) for 8 weeks potently inhibited the platelet aggregation induced by low doses of agonists (0.5 microg/mL collagen and 0.025 unit/mL thrombin), whereas it weakly reduced the blood-cholesterol levels and formation of atheromatous lesions. In further investigation, KRG-WE significantly suppressed collagen-induced 1,2-diacylglycerol liberation, but had no significant effect on arachidonic acid liberation. Taken together, it can be suggested that the antiplatelet effect of KRG-WE may, at least partly, be due to the inhibition of 1,2-diacylglycerol generation rather than regulation of blood lipid levels. In conclusion, daily consumption of KRG-WE could be a useful alternative measure for the prevention of thrombus and atheroma formation in hypercholesterolemia.     

LC-MS/MS法测定升麻中咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸含量的研究

[目的]建立LC-MS/MS测定升麻药材中3种苯丙酸类成分含量的方法。[方法]采用ACQUITY UPLC誖BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,流速为:0.3 m L/min;质谱检测器:采用ESI电离源,负离子检测,MRM监测模式,对升麻药材中苯丙酸类成分咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸进行含量测定。[结果]咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸的线性范围分别为5~100 ng/m L,10~200 ng/m L,50~1 000 ng/m L,线性关系良好,最低定量限分别为5、10和50 ng/m L,加样回收率97.83%~98.40%。[结论]该方法简便,快速,精密度高,重复性好,可用于同时测定升麻中咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸的含量。