性激素对裸鼠移植性人前列腺癌（PC—3M）生长和雄激素受体水 …

用已烯雌酚（ＤＥＳ）和不同剂量的丙酸睾丸素（ＴＰ）治疗移植于裸鼠体内的雄激素非依赖性ＰＣ－３ｍ前列腺癌肿瘤模型，并以放射配体结合分析测定肿瘤的雄激素受体（ＡＲ）水平，治疗结束进测量瘤重和瘤体积。ＤＥＳ组的瘤重、瘤体积和ＡＲ水平与与照组的相比，差异不显著，说明ＤＥＳ对肿瘤的生长无明显抑制作用。与对照组的相比，低剂量ＴＰ（５０ｍｇ／ｋｇ）组的瘤重、瘤体积和ＡＲ水平显著增高（Ｐ〈０．０１）；而高剂量ＴＰ     

前列腺癌雄激素受体表达与细胞凋亡的关系

目的：探讨前列腺癌雄激素受体与细胞凋亡的关系及其生物学特性,方法：56例前列腺癌和20例良性前列腺增生症,应用免疫组化方法检测石蜡蜡包埋的组织切片中雄激素受体（AR）表达和应用原位末端标记技术（TUNEL）检测细胞凋亡指数（AI）。结果：AR在良恶性前列腺组织中的表达差异无显著性（P＞0．05）。AR和AI与前列腺癌Gleason分级无关。AI在前列腺癌组织中的表达明显高于良性前列腺增生症（P＜0．05）,AR阳性的前列腺癌AI亦明显高于AR阴性的前列腺癌。结论：前列腺癌组织中AR的表达可诱导其细胞凋亡,并对前列腺癌的功能性分类和内分泌治疗的疗效判断具有实用的临床意义。     

雄激素受体在人类前列腺癌发展中的作用研究

目的:研究雄激素受体在前列腺癌雄激素非依赖性生长中的作用。方法:通过连续传代培养,建立雄激素非依赖性前列腺癌细胞模型。用Western blot方法检测AR和PSA在上述过程中的表达情况。结果:连续传代培养后,LNCaP C-33细胞(传代次数少于33次)生物学行为发生改变。同C-33和C-51(传代次数介于33次和80次之间)细胞相比,C-81细胞(传代次数大于80次)表现出更强生长能力和更低雄激素依赖性。C-81细胞分泌高水平PSA,且DHT对其分泌作用的影响比C-33细胞小。3种LNCaP细胞总AR表达水平相同,但C-81表现为特征性AR-B表达丢失和AR-A表达增加。结论:前列腺癌进展是多因素作用的结果,其中包括AR亚型的差异性表达。     

45例人前列腺癌雄激素受体基因B~H外显子的突变研究

目的和方法：为探讨雄激素受体（ＡＲ）与前列腺癌（ＰＣ）发生发展及内分泌治疗不敏感的关系，我们首先建立了用ＰＣ的穿刺和石蜡切片组织检测ＡＲ基因突变的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（双链构象多态性）－双链ＤＮＡ循环测序法。并用上述方法检测了４５例国人前列腺癌组织ＡＲ基因Ｂ￣Ｈ我显子的突变。结果：在６例２的癌组织中证实有７个ＳＳＣ溘 变位片段（其中一患者有两个外显子异常）。这６例 ４例为低分化腺癌，其中２例已有远处转     

45例人前列腺癌雄激素受体基因B～H外显子的突变研究

目的和方法:为探讨雄激素受体(AR)与前列腺癌(PC)发生发展及内分泌治疗不敏感的关系,我们首先建立了用PC的穿刺和石蜡切片组织检测AR基因突变的PCR-SSCP(双链构象多态性)-双链DNA循环测序法.并用上述方法检测了45例国人前列腺癌组织(6例穿刺组织,39例石蜡切片)AR基因B～H外显子的基因突变.结果:在6例患者的癌组织中证实有7个SSCP泳动变位片段(其中一患者有两个外显子异常),这6例患者中4例为低分化腺癌,其中2例已有远处转移,而序列分析证实这2例转移患者SSCP异常的外显子H片段各存在一错义突变(Glu 872 Gln、Met 886 Ile).这两种AR的基因突变国内外均未见报道,为在PC中新发现的突变.结论:实验发现AR突变均发生在前列腺癌的中晚期,提示AR基因突变可能与PC的进展和转移有关.     

雄激素对人卵巢癌细胞系雄激素受体的影响

本文以卵巢浆液性囊腺癌细胞系为模型，氚标记的人工合成的雄激素＾３Ｈ－Ｒ１８８１为配体，采用完整细胞受体测定法，证实ＨＯ－８９１０细胞存在＾３Ｈ－Ｒ１８８１特异结合位点，这些位点与＾３Ｈ－Ｒ１８８１特异结合有饱合现象，在Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图上成一直线。     

利用RNA干涉技术研究雄激素受体在人前列腺癌细胞增殖中的作用

目的: 利用RNA干涉技术抑制雄激素受体(AR)的表达,研究AR在激素依赖性和激素非依赖性前列腺癌细胞增殖中的作用。方法: 设计、合成针对AR的4种不同的小干涉RNA(siRNA),连接到带有人H1启动子的腺病毒载体质粒pShuttle-H1-Ri中,构建成能产生AR-siRNA的质粒pShuttle-H1-Ri-AR,与能表达AR的质粒pcDNA-AR共转染HEK293细胞,Western blot 检测不同的siRNA对AR表达的抑制效率,选取抑制效率高的siRNA制备重组腺病毒,感染LNCap、C4-2B和CWR22Rv1 3种对雄激素有不同反应性的人前列腺癌细胞,采用Western blot 检测感染后细胞中AR的表达程度,并用MTT比色法测定细胞的增殖活性。结果: 4种siRNA都能抑制共转染AR的表达,用抑制效率高的siRNA制备重组腺病毒感染3种靶细胞后,均能特异性地抑制3种细胞中AR的表达,细胞的增殖活性也随之明显下降。结论: AR-siRNA通过抑制激素依赖性和激素非依赖性前列腺癌细胞中AR的表达,有效地抑制细胞的增殖,AR对维持激素依赖性和激素非依赖性前列腺癌细胞的增殖活性具有十分重要的作用,是治疗前列腺癌的重要靶分子。     

原发性肝癌及癌周组织雄激素受体与~3H－R1881的特异性结合

本文通过受体的放射配体结合分析，显示人原发性肝癌及癌周组织的细胞胞浆、胞核内存在能与３Ｈ－Ｒ１８８１特异结合的雄激素受体（ＡＲ），其３Ｈ－Ｒ１８８１的饱和浓度分别为３．５０ｎｍｏｌ／Ｌ、４．７５ｎｍｏｌ／Ｌ；癌及癌周组织中胞浆ＡＲ与标记配体结合的亲和力基本相同（Ｐ＞０．０５），而癌组织胞核ＡＲ的亲和力则明显降低；癌组织胞浆、胞核ＡＲ的最大结合容量（Ｂｍａｘ）均分别高于癌周组织（Ｐ＜０．０１）；以双氢睾酮、甲基睾丸素和丙酸睾丸素作竞争抑制剂，其抑制常数Ｋｉ分别为５．９３±０．６０×１０（－７）、１．６７±０．２１×１０（－３）、１．３±０．１０×１０（－２）ｍｏｌ／Ｌ。     

激素受体及CgA表达与去势抵抗性前列腺癌的关系

目的探讨嗜铬粒蛋白A(chromogranin A, CgA)、AR、ER、PR表达与前列腺癌(prostate cancer, PCa)去势抵抗的关系。方法收集行TURP术有临床随访资料的63例PCa标本,采用免疫组化SP法检测CgA、AR、ER、PR在PCa组织中的表达情况,并分析去势抵抗与PCa各临床病理特征、CgA、AR、ER、PR的关系,以及CgA与PCa各临床病理特征、AR、ER、PR的关系。结果去势抵抗性PCa的发生与PCa PSA≥20 ng/mL、Gleason评分8～10、CgA阳性、AR阴性具有相关性,CgA阳性与PCa PSA≥20 ng/mL、Gleason评分8～10、AR阴性具有相关性。ER、PR表达与去势抵抗性PCa的发生及CgA表达无相关性。多因素Logistic回归分析结果显示Gleason评分是进展为去势抵抗性PCa的独立危险因素,AR是CgA的独立危险因素。结论 CgA表达与前列腺的恶性程度呈正相关,AR表达与前列腺的恶性程度呈负相关。Gleason评分、CgA及AR与PCa去势抵抗密切相关,监测CgA与AR的表达情况,结合Gleason评分对PCa的治疗方案选择和预后判断有一定的临床指导意义。     

A Rare,Human Prostate Oncocyte Cell Originates from the Prostatic Carcinoma (DU145) Cell Line

Abstract

DU145 human prostate carcinoma cells are typically poorly differentiated and contain only scantily distributed organelles. However, among numerous tumor cells randomly examined by electron microscopy out of in vitro cultivation, a peculiar, rare oncocyte-like cell type has been observed whose nucleus appears to be of small dimension and with a cytoplasm almost entirely filled with often distorted mitochondria. A few small, dispersed lysosomal bodies, small cisterns of the endoplasmic reticulum and a few glycogen patches can be found among highly osmiophilic contrasted, cytosolic spaces filled by innumerable ribonucleoproteins. The excessive population of mitochondria may have arisen from a more populated tumor cell type wherein the altered mitochondria are found to appear burgeoning into a spherical-like size progeny crowding the tumor cells. Literature cited between 1950 and the present suggests that this rare, oncocytic, benign prostatic tumor cell type is likely appear epigenetically, stemming from an original secretory cell, which is confirmed by the origin of the cell line originally maintained as cell line out of a brain metastatic, adenocarcinoma niche.     

Graves病患者外周血白细胞雌,雄激素受体变化的初步研究

应用放射配体结合法，测定了３５例ＧＤ病人外周血白细胞雌激素受体（ＥＲ）和雄激素受体（ＡＲ）等指标。结果：病人血清Ｅ２、Ｔ、白细胞ＥＲ明显增高（Ｐ〈０．０５），ＡＲ明显降低。提示：ＧＤ病人性激素异常、外周血白细胞ＥＲ、ＡＲ的异常可能与ＧＤ发病和／或演变有关。     

Epidermal Growth Factor Receptor Mutations and the Clinical Outcome in Male Smokers with Squamous Cell Carcinoma of Lung

Epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations in non-small cell lung cancer (NSCLC) have been reported to be related to certain clinical characteristics (i.e., female, non-smokers with adenocarcinoma) and gefitinib responsiveness. This exploratory analysis was performed to determine the incidence of EGFR mutations in male smokers with squamous cell carcinoma, who were treated with EGFR tyrosine kinase inhibitor, gefitinib. Sixty-nine Korean NSCLC patients were treated with gefitinib in a prospective study. For a subset of 20 male patients with squamous cell carcinoma and a history of smoking, pretreatment tumor tissue samples were obtained and analyzed for EGFR mutations (exons 18 to 21). EGFR mutations were found in 3 (15%) patients, including in-frame deletions within exon 19 (n=2) and L858R missence mutation in exon 21 (n=1). These 3 patients with EGFR mutations responded to gefitinib, whereas only one of remaining 17 patients with wild-type EGFR achieved clinical response. Trend toward longer progression-free (5.8 vs. 2.4 months; P=0.07) was noted in patients with EGFR mutations compared to those with wild-type EGFR. Although male smokers with squamous cell carcinoma have not been considered ideal candidates for gefitinib treatment, significant incidence of EGFR mutations was observed. The molecular markers should be considered to predict clinical benefits from gefitinib.     

99Tcm标记抗PSMA单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内的生物分布

目的研究99Tcm-抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)抗体(J591)对前列腺癌细胞体外结合性能、在荷人前列腺癌裸鼠体内生物分布。方法用改进的Schwarz方法进行99Tcm标记,经Sephadex G-50柱分离纯化;用纸层析法和三氯醋酸法测定标记率与放化纯;用流式细胞术测定抗体与肿瘤细胞在体外的结合性能;PSMA阳性的C4-2前列腺癌裸鼠为实验组,PSMA阴性的PC3前列腺癌裸鼠为对照组,裸鼠静脉注射7.5 MBq(25μg/只)99Tcm-J591,分别于2、6、12及24h测定体内放射性分布,计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)及T/NT比值。结果表明99Tcm–J591标记率为(78.9±6.2)%,放化纯90%。J591与99Tcm–J591在体外能结合PSMA阳性的C4-2细胞,与PSMA阴性的PC3细胞不结合,显示出J591具有良好的特异性。生物分布实验显示:实验组裸鼠肿瘤部位出现99Tcm浓聚,对照组则没有。肿瘤组织百分注射剂量率(%ID/g)在12h达高峰,为(15.91±5.16)%ID/g,与对照组(3.22±1.33)%ID/g相比差异有统计学意义(P0.05),其余组织和器官的百分注射剂量率在两组间差异无统计学意义(P0.05)。结论 J591具有良好的免疫活性和对前列腺癌的靶向定位性能,可望用于前列腺癌的导向诊断及导向治疗。     

DIM增强顺铂抑制PC-3细胞增殖及诱导凋亡的效应

目的：观察顺铂(DDP)和3，3-二吲哚基甲烷(3,3-diindolylmethane ,DIM)联合应用对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测PC-3细胞增殖抑制情况，用流式细胞术及吖啶橙染色法分析细胞凋亡的变化，用RT-PCR检测抑癌基因p21的表达变化。结果:60 μmol.L-1的DIM 与0.4 mg·L^-1的DDP 联合可有效抑制PC-3细胞增殖并诱导其凋亡，其效果与单用4 mg·L-1DDP相同。DIM与DDP联合试验中细胞生长抑制率和凋亡率也明显高于单用DIM处理组（P＜0.05）。RT-PCR结果表明：单用DIM和DIM与DDP联合用药都能明显增强p21基因的表达，但联合用药的效果更明显。结论:DIM能显著增强DDP对PC-3细胞的增殖抑制和诱导凋亡的效应。     

p16和p27表达对前列腺癌细胞系的作用

目的 探讨p16和p27Kip1 基因蛋白对抑制前列腺癌细胞增殖和调控其凋亡的作用.方法 构建携带人P16和p27基因的腺病毒载体,转染体外培养的前列腺癌细胞系PC-3,采用RT-PCR、Western blot检测目的 基因的表达.通过细胞生长试验、流式细胞仪检测PC-3转染前后细胞增殖和凋亡的变化.结果 病毒滴度Ad-p16为115×10^8 pfuPml 、Ad-p27为112×10^9 pfuPml ,RT-PCR 检测可见p16-mRNA（520bp）和p27Kip12mRNA （320bp）表达,Western blot检测有p16 蛋白（65KD）和P27蛋白（27KD） 特异表达,并可明显抑制PC-3细胞的增殖,诱导其凋亡,联合基因治疗组与单基因组相比差异显著（P＜0.01）.结论 p16和p27可明显抑制前列腺癌细胞株PC-3的增殖,增加细胞的凋亡,转染携带p16和p27的重组腺病毒载体有望成为治疗前列腺癌的有效方法.     

PARP-1抑制剂对人肝癌细胞HepG2增殖和迁移的抑制作用

目的 研究证实聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(poly ADP ribose polymerase,PARP-1)抑制剂对肿瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭有影响,但对肝癌细胞生物学特性的影响尚不清楚,此研究的目的是观察3种不同的PARP-1抑制剂对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡及迁移的影响及可能机制.方法 MTT检测体外不同浓度的PARP-1抑制剂AG014699,BSI-201,AZD-2281处理后HepG2细胞的增殖;随后选择抑制效果明显的抑制剂AG014699和BSI-201处理HepG2;Western印迹法检测HepG2细胞Casepase3、Casepase8、Bax、Bcl-2、PTEN、Timp3、MMP3蛋白的表达水平.Transwell实验检测AG014699和BSI-201对HepG2细胞迁移的影响.结果 AG014699,BSI-201,AZD-2281均具有抑制HepG2细胞增殖的作用,具有时间和浓度依赖性,作用HepG2细胞48 h后的Caspase3、Caspase8、Bax、PTEN、Timp3蛋白的表达水平随药物浓度的增加而增高,而Bcl-2和MMP3蛋白水平随药物浓度的增加而降低且与对照组相比有显著性差异(P<0.01).结论 在体外PARP-1抑制剂AG014699、BSI-201、AZD-2281明显抑制HepG2细胞的增殖,但AG014699和BSI-201展示较好的敏感性,同时二者诱导肝癌细胞凋亡和抑制肝癌细胞的迁移,这其中的机制可能与影响凋亡信号的通路以及迁移相关蛋白的表达有关.     

纳秒级陡脉冲电场诱导癌细胞凋亡的实验及作用机理研究

观察纳秒级陡脉冲电场诱导人浆液囊腺性卵巢癌SKOV3癌细胞凋亡效应,及其对细胞内钙离子浓度即[Ca2＋]i的影响并探讨其作用机理。采用场强为10kV/cm、脉宽为100ns、重复频率为1Hz的纳秒级陡脉冲电场作用于SKOV3癌细胞悬液5min。4h后采用Annexin V-FITC/PI双标记并结合流式细胞仪分析SKOV3癌细胞的凋亡率,采用扫描和透射电子显微镜观察癌细胞凋亡的超微结构变化;以Fluo-3/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用激光扫描共聚焦显微镜检测纳秒级陡脉冲电场对SKOV3癌细胞[Ca2＋]i的影响,及[Ca2＋]i变化时的Ca2＋来源。结果显示,流式细胞术检测到癌细胞的早期凋亡率为（22.21&#177;2.71）%,明显高于对照组的（3.04&#177;0.44）%（P〈0.01）,扫描和透射电子显微镜均观察到典型的凋亡细胞形态,证实纳秒级陡脉冲电场能够有效诱导SKOV3癌细胞发生凋亡;同时纳秒级陡脉冲电场可明显升高细胞[Ca2＋]i（P〈0.01）,而与细胞外钙离子浓度无关（P〉0.05）。由于纳秒级陡脉冲电场的等值频率很高,容易穿透细胞膜,其诱导凋亡的机制之一可能是通过激活细胞内钙库（内质网、线粒体）,引起细胞内钙离子升高,从而介导凋亡信号通路。     

腺病毒介导的p27mt基因转移对肝癌细胞生长的影响

目的 :研究突变型p2 7基因 (p2 7mt)对肝癌细胞生长的影响。方法 :采用重组腺病毒载体Ad p2 7mt将p2 7mt全长cDNA转入到肝癌细胞系SMMC 772 1中。3H TdR掺入法及软琼脂集落形成实验检测p2 7mt对肝癌细胞增殖的作用。结果 :转染p2 7mt基因的SMMC 772 1细胞在蛋白质水平有高水平的基因表达。其3H TdR掺入量及集落形成率明显低于对照组 (P <0 .0 5)。结论 :p2 7mt基因能抑制肝癌细胞增殖。p2 7mt可作为目的基因用于基因治疗。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在前列腺癌细胞株PC-3M中对核因子kappa B活化的影响

目的：研究TRAIL诱导激素非依赖前列腺癌细胞株PC-3M过程中核因子kappa B（NF-κB）的活化和失活现象。方法： 当不同浓度的TRAIL和LPS作用于细胞后，我们通过细胞免疫组化染色和凝胶电泳迁移试验（EMSA）来检测NF-κB核转位的情况。并通过RT-PCR的方法粗略评定二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）对抑制蛋白IκB的影响。结果： EMSA和免疫组化分析显示PC-3M细胞中NF-κB的核转位可被TRAIL或LPS明显地激活。以PDTC预处理可以上调抑制蛋白IκB的表达，阻断NF-κB的核转位。结论： TRAIL的作用于激素非依赖前列腺癌细胞时主要的负作用在于其可以显著地刺激NF-κB的活化。另一方面，在PC-3M细胞凋亡过程中NF-κB的核转位可以被PDTC有力地抑制，同时IκB的表达升高和降解减少（PDTC引起的）是抑制NF-κB活化的潜在因素，为我们提出了增强TRAIL疗效的可能性方案。