恶性疟原虫裂殖子表面主要蛋白对裂殖子入侵人红细胞的…

恶性疟原虫裂殖了表面主要蛋白－１（ＭＳＡ１），又称Ｐ１９５，与人红细胞具有结合作用，这种结合是裂殖子主只别红细胞的基础，为了确定Ｐ１９５蛋白与识别的位点，本研究在大肠杆菌中分８段达了ＭＡＤ２０株恶性疟原虫的Ｐ１９５蛋白。各段蛋白用镍亲和层析柱分离，然后复性，在体外培养疟原虫至成熟裂殖体期，将各种段蛋白分别加入到培养基上清中，继续培养２４小时，检查红细胞感染率，通过感染率了解各段蛋白对裂殖入子侵红细     

恶性疟原虫裂殖子表面主要蛋白对裂殖子入侵人红细胞的抑制作用

恶性疟原虫裂殖子表面主要蛋白－１（ＭＳＡ１），又称Ｐ１９５，与人红细胞具有结合作用，这种结合是裂殖子识别红细胞的基础。为了确定Ｐ１９５蛋白与识别有关的位点，本研究在大肠杆菌中分８段表达了ＭＡＤ２０株恶性疟原虫的Ｐ１９５蛋白。各段蛋白用镍亲和层析柱分离，然后复性。在体外培养疟原虫至成熟裂殖体期，将各段蛋白分别加入到培养基上清中，继续培养２４小时，检查红细胞感染率，通过感染率了解各段蛋白对裂殖子入侵红细胞的影响。结果发现Ｐ１９５蛋白中氨基酸序列为３８４－５９５的一段蛋白（Ｍ６），呈剂量依赖性抑制恶性疟原虫裂殖子入侵人红细胞，且Ｍ６对疟原虫生长无细胞毒性作用。这表明Ｍ６可能含红细胞结合位点，该位点与裂殖子竞争性结合红细胞，而使感染率下降     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1羧基端编码基因真核表？…

构建以恶性疟原虫红内期重要的疫苗候选抗原－裂殖子表面蛋白羧基端编码分子量４２０００蛋白的基因片段为外源基因的可用作候选核酸疫苗的真核表达载体。方法目前对疟疾核酸疫苗的研究仅见于鼠疟，将恶性疟原虫ＦＵＰ株裂殖子表面蛋白１羧基端编码４２０００蛋白的基因片段用常规分子克隆方法，分别克隆入非分泌性真核表达载体ＶＲ１０１２和改建后的分泌型载体ＶＲ１０１２／ＴＡ中，通过ＰＣＲ和酶切鉴定出重组克隆。     

我国恶性疟原虫裂殖子表面蛋白MSP-2的抗原表位分析

根据我国恶性疟原虫株MSP-2基因序列,检索我国虫株MSP-2是否具有国外已鉴定的MSP-2抗原表位。结果显示,我国虫株MSP-2具有已鉴定的FC-27等位基因型可变区抗原表位STNS和DTPTATE。同时应用计算机辅助抗原表位分析技术对MSP-2进行抗原表位分析预测,并以合成肽技术鉴定了预测表位的免疫原性。抗原指数分析表明,MSP-2分子亲水性指数和侧链易曲性指数最高的区域分别位于aa153～166和aa65～72,而aa53～60可能是我国虫株特异的抗原表位。用4个合成肽进行免疫学鉴定,证实预测的表位可以诱导抗肽抗体反应,免疫血清可识别重组MSP-2和恶性疟原虫全抗原中MSP-2抗原区带,且合成肽可与我国流行区高度免疫人群免疫血清反应。由于这些表位存在于我国海南、云南、安徽株MSP-2序列中,可以作为研制我国恶性疟重组多价表位疫苗的候选抗原表位。     

在大肠杆菌中表达恶性疟原虫裂殖子表面抗原及一些异常现象的探讨

将我国恶性疟原虫ＦＣＣ－１／ＨＮ株ＭＳＡ１第二区基因（ＭＳＡ１Ｒ２）和ＭＳＡ２全基因克隆入ｐＷＲ４５０－Ｉ表达载体中，在大肠杆菌中表达了ＭＳＡ１Ｒ２和ＭＳＡ２与β－半乳糖苷酶的融合蛋白，分子量分别为７２ｋＤ和９４ｋＤ，约占菌体蛋白总量的２５—３０％和５—８％。用兔抗恶性疟原虫血清进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，诱导的ｐＷＲ－ＭＳＡ１Ｒ２和ｐＷＲ－ＭＳＡ２工程菌分别在７２ｋＤ和９４ｋＤ处出现与抗恶性疟抗体反应的特异染色区带，而未经诱导的工程菌和ｐＷＲ４５０Ｉ转化菌则无反应。对ＭＳＡ２－ｐＷＲ工程菌在诱导后出现的工程菌生长缓慢、表达量低、表达产物分子量偏大等异常现象进行了分析。     

在大肠杆菌中表达恶性疟原虫裂殖子表面抗原及一些异常现 …

将我国恶性疟原虫ＰＣＣ－１／ＨＮ株ＭＳＡ１第二区基因（ＭＳＡ１Ｒ２）和ＭＳＡ２全基因克隆入ｐＷＲ４５０－１表达载体中，在大肠杆菌中表达了ＭＳＡ１Ｒ２和ＭＳＡ２与β－半乳糖苷酶的融合蛋白，分子量分别为７２ｋＤ和９４ｋＤ，约占菌体蛋白总量的２５￣３０％和５￣８％。用兔抗恶性疟原虫血清进行Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析，诱导的ｐＷＲ－ＭＳＡ１Ｒ２和ｐＷＲ－ＭＳＡ２工程菌分别在７２ｋＤ和９４ｋＤ处出现与抗恶     

恶性疟原虫海南株裂殖子表面蛋白1基因第1至第4区的多态性分析

本对5株恶性疟原虫海南株MSP1基因5'端（第1～第4区）进行体外扩增，其中2株的目的基因扩增产物直接用末端标记循环测序法测定其DNA序列，另3株虫株的目的基因片段用pGEM-T载体克隆化后再测序，结果获得了6个MSP1分子第1～第4区的序列片段，与已报告的MSP1分子比较，证明属MAD20等位基因型。同时发现，6个序列片段中，除了HN3和HN5株的序列彼此完全一致，其余株序列的保守区（第1和第3区）也一致外，可变区的第2区和第4区的氨基酸序列存在一定的差异，与MAD20的序列也略有不同，序列分析也证明海南株的MSP1也存在基因内重组现象，此外，3株经克隆化处理的虫株中，发现1株含2种不同的MSP1等位基因，本研究初步提供了我国恶性疟原虫海南株MSP1存在多态性的依据。     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1羧基端编码基因真核表达重组克隆的构建

目的构建以恶性疟原虫红内期重要的疫苗候选抗原——裂殖子表面蛋白１（ＭＳＰ１）羧基端编码分子量４２０００蛋白的基因片段为外源基因的可用作候选核酸疫苗的真核表达载体。方法目前对疟疾核酸疫苗的研究仅见于鼠疟，将恶性疟原虫ＦＵＰ株裂殖子表面蛋白１羧基端编码４２０００蛋白的基因片段用常规分子克隆方法，分别克隆入非分泌性真核表达载体ＶＲ１０１２和改建后的分泌型载体ＶＲ１０１２／ＴＰＡ中，通过ＰＣＲ和酶切鉴定出重组克隆。结果成功地构建了真核表达载体ＶＲ１０１２／ＭＳＰ１－４２和ＶＲ１０１２／ＴＰＡ／ＭＳＰ１－４２。结论目前对疟疾核酸疫苗的研究仅见于鼠疟红外期，该研究对研制有效的恶性疟原虫红内期核酸疫苗是一个有益的尝试。其免疫保护作用待进一步研究。     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1的17区片段基因复合核酸疫苗诱导小鼠抗体免疫性的研究

目的　检测以恶性疟原虫裂殖子表面蛋白 1的 17区片段基因为基础的复合核酸疫苗(分泌性的VR10 12 /TPA/HG MSP1 17和非分泌性的VR10 12 /HG MSP1 17)诱导小鼠的体液免疫反应和免疫血清对疟原虫生长的抑制能力。方法　以 2 0 0 μg/10 0 μl或 10 0 μg/10 0 μl每次每只VR10 12 /HG MSP1 17或VR10 12 /TPA/HG MSP1 17肌注免疫BALB/c或C5 7BL/6小鼠。用ELISA间接法测定小鼠血清的特异性抗体 ,用体外抑制试验检测免疫血清抑制疟原虫生长效果。结果　经 3次 10 0 μg/10 0 μl每次每只VR10 12 /HG MSP1 17免疫后 ,BALB/c小鼠和C5 7BL/6小鼠均产生了明显的HG和YMSP119抗体。但总体抗体水平不高。BALB/c小鼠经 3次 2 0 0 μg/10 0 μl每次每只的VR10 12 /HG MSP1 17免疫后 ,产生了较高的HG抗体 ,但MSP1 17的抗体无明显变化 ,经 3次 2 0 0 μg/10 0 μl每次每只VR10 12 /TPA/HG MSP1 17免疫后 ,仅产生较低的HG抗体 ,无MSP1 17抗体的产生。用 2 0 0 μg/10 0 μlVR10 12 /HG MSP1 17免疫的BALB/c小鼠血清做体外抑制试验 ,结果抑制效果明显。结论　VR10 12 /HG MSP1 17比VR10 12 /TPA/HG MSP 17具有更强的免疫原性 ,其免疫鼠血清能明显地抑制疟原虫生长     

疟原虫子孢子粘附入侵肝细胞的分子基础

粘附分子在疟原虫子孢子(sporozoites)粘附入侵过程中起重要作用。子孢子表面的粘附分子CSP、SSP2/TRAP与肝细胞表面的粘附分子HSPGS能特异结合,结合部位在CSP、SSP2/TRAP的Region Ⅱ-plus区与HSPGS的GAAG区。保持Region Ⅲ-plus与GAG分子结构的完整性是子孢子入侵肝细胞的分子基础。研制阻止子孢子粘附肝细胞的粘附抑制剂,在疟疾预防上具有重要意义。     

恶性疟原虫FCC-1/HN株裂殖子表面抗原2(MSA-2)基因在卡介苗BCG中的表达

目的 :裂殖子表面抗原 2基因 (Merozoitesurfaceantigen 2 ,MSA2 )是恶性疟原虫的一种保护性抗原 ,为研究其重组BCG疫苗的保护作用 ,首先探讨携带有恶性疟原虫FCC 1 HN株MSA2基因的重组分枝杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pBCG MSA2在卡介苗 (BacillusCalmetteGuerin ,BCG)中的表达情况。方法 :采用电穿孔转化法将重组质粒pBCG MSA2导入BCG中 ,通过卡那霉素抗性筛选并经PCR鉴定的重组BCG培养于Middlebrook 7H9Broth (M7H9)培养基 ,并添加 10 %M7H9EnrichmentADC和 0 0 5 %Tween80 ,4周后于 4 5℃进行诱导表达 ,表达产物进行十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (Sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS PAGE)及免疫印迹 (Western blot)分析。结果 :SDS PAGE及Western blot分析结果均显示在约 31kDa的位置上可见明显的蛋白条带 ,并与MSA2基因编码序列推断的分子量相符。结论 :恶性疟原虫裂殖子表面抗原 2可在BCG中表达 ,这些结果将为恶性疟原虫多价BCG疫苗的研制提供科学依据     

恶性疟原虫FCC-1/HN株裂殖子表面抗原2基因在M.smegmatis mc2155中的表达

目的研究裂殖子表面抗原2(merozoitesurfaceantigen2,MSA2)基因重组BCG疫苗的保护作用.方法采用电穿孔转化法将重组质粒pBCG/MSA2导入耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)mc2155中,通过卡那霉素抗性筛选并经PCR鉴定的重组M.smegmatismc2155培养于middlebrook7H9broth(M7H9)培养基,并添加10%M7H9enrichmentADC和0.05%Tween80,48～72?h后于45℃进行30?min的诱导表达,表达产物进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Westernblot分析.结果SDS-PAGE及Westernblot分析结果均显示在相对分子质量(Mr)约31×103的位置上可见明显的蛋白条带,并与MSA2基因编码序列推断的Mr相符.结论恶性疟原虫裂殖子表面抗原2可在M.smegmatis中表达,这些结果将为恶性疟原虫多价BCG疫苗的研制提供有用的资料.     

探究获得高成熟率伯氏疟原虫裂殖体的体外培养条件?

为获得大量有活力的伯氏疟原虫裂殖体,本研究对伯氏疟原虫ANKA虫株的体外培养条件主要从培养基的用量、培养基胎牛血清的含量、培养的细胞浓度、培养时间及培养的气体环境等方面进行了优化。当小鼠体内虫血率达到1％～3％,在红内期疟原虫处于环期或早期滋养体阶段时取血分组培养,观察在不同培养条件下裂殖体的状态并检测其活力。与既往的体外培养方法相比,优化后的培养方法,可将裂殖体的成熟率提高到80％,每个裂殖体含12～16个裂殖子,裂殖体尾静脉注射重新入侵红细胞4 h后的虫血率为1?57％,与对照组相比裂殖体的活力提高3?4倍。优化的方法可以提高裂殖体的得量和活力,为伯氏疟原虫的转染奠定基础。     

疟原虫裂殖子识别人红细胞的分子基础

疟疾是严重危害人类健康的疾病之一。由于有效的抗疟药的研制和各种防治措施的实施,其发病率和死亡率已大大降低。然而,还远没有消灭,在许多地区仍十分流行。某些新的抗药性疟原虫株的出现,使药物治疗更为困难。因此,人们开始了许多新的研究,试图找出新的防治办法。对疟原虫裂殖子入侵红细胞的机理研究就是其中的一个方面。在疟原虫的生活史中,疟原虫裂殖子入侵红细胞的机理知道不多。近几年来,由于疟原虫体外培养技术的发展和红细胞膜生化研究的成就,在研究入侵机理方面有所进     

红细胞白介素－8受体研究进展

ＩＬ－８是很强的中性粒细胞调节因子，它具有趋化、激活中性粒细胞等作用，与急、慢性炎症有密切关系。许多细胞经细胞因子（ＩＬ－１的ＴＮＦ）或脂多糖（ＬＰＳ）刺激后释放ＩＬ－８。中性粒细胞、单核细胞上有ＩＬ－８受体已为人所知，近来发现红细胞上也存在大量的ＩＬ－８受体（即Ｄｕｆｆｙ血型抗原），该受体能将全血中的ＩＬ－８等趋化因子迅速地从血浆中清除掉，它在调节炎症过程中以及疟疾发生上都发挥着重要作用。本文概述了红细胞ＩＬ－８受体的基因、分子结构，生物学特性等研究进展。     

约氏疟原虫子孢子入侵wistar大鼠肝内的扫描电镜观察

在约氏疟原虫子孢子接种大鼠１０－３０ｍｉｎ后，通过大鼠的肝脏冷冻断裂，对其断裂面进行扫描电镜观察。结果显示：在接种后１０ｍｉｎ就可见较多子孢子被枯否氏细胞捕获，有些子孢子正侵入肝细胞；子孢子与肝细胞膜接触时，膜内凹，随着侵入继续，内凹加深；部分子孢子似可直接与肝细胞膜接触。     

核受体超家族及其辅调节子的研究进展

核受体(nuc lear receptor,NR)是一类在生物体内广泛分布的,配体依赖的转录因子,其成员众多,构成了一个大家族,可分为三大类:类固醇激素受体、非类固醇激素受体和孤儿核受体。核受体与相应的配体及其辅调节因子相互作用,调控基因的协调表达,从而在机体的生长发育、新陈代谢、细胞分化及体内许多生理过程中发挥重要作用。核受体的功能障碍将导致一系列疾病如癌症、不育、肥胖、糖尿病。核受体能结合经药物设计而被修饰的小分子,从而调控相关疾病如癌、骨质疏松、糖尿病等。它们是有希望的药物设计靶标。因此,寻找孤儿受体的配体和信号通路成…     

主动入侵的疟原虫子孢子通过CSP蛋白诱导DC成熟

目的观察约氏疟原虫子孢子能否诱导DC成熟,并探讨其机制。方法GM-CSF常规诱导小鼠骨髓前体细胞,获得足量的DC,然后,解剖按蚊唾液腺子孢子与DC共培养,分别于2、4和24 h后,荧光显微镜下观察子孢子与DC的相互关系,同时采用流式细胞分析技术检测DC表面的MHC-Ⅱ类分子、CD80和CD86共刺激分子的表达情况,最后转染重组pFLAG-CMV8-CSP质粒后24 h,检测DC表面的共刺激分子的表达情况。结果在共培养后2h,子孢子便逐渐向DC迁移甚至黏附于DC表面;4 h后部分子孢子便进入DC且仍然保持子孢子的弯月形形态;24 h后DC内的部分子孢子逐渐变圆,类似肝期裂殖体的形态。流式检测发现共培养2 h后对DC共刺激分子表达无明显影响,而共培养4 h和24 h后DC共刺激分子的表达均上调。转染pFLAG-CMV8-CSP重组质粒至DC中后同样能诱导DC的共刺激分子的表达上调。结论在体外共培养的情况下,大部分子孢子可以主动侵入DC而少部分可以被DC吞噬,主动入侵DC的子孢子可能是通过其表面的CSP由纳虫空泡进入胞浆内后诱导DC成熟。     

恶性疟原虫红细胞表面膜蛋白1DBLα区不同区段与血型抗原的结合特性分析

根据大肠杆菌密码子组成特点,重新优化并合成FCR3S1.2株恶性疟原虫红细胞表膜蛋白1(PfEMP1)DBLα区基因序列,利用PCR的方法,将优化后的基因序列分为3段.分别将全长基因和3个基因片段在大肠杆菌中表达、纯化.通过重组蛋白与血型抗原的亲和试验,分析功能区与血型抗原是否具有亲和力.结果表明,重组的PfEMP1-...