改良酶法肌酐测定试剂的研制

目的探讨建立一种改良酶法肌酐(Cr)测定试剂,并考察其与进口Cr测定试剂(日本东洋纺公司酶法Cr试剂)对血清测定的可比性及偏倚。方法采用酶法测定Cr反应前后吸光度的变化,探讨试剂各成分和浓度对检测性能的影响,并在同一台全自动生化分析仪上同时测定两种试剂的空白吸光度(A值)、分析灵敏度,对自主研发试剂的精密度、线性范围及方法学指标进行评价。结果自主研发试剂的空白A值为0.009,分析灵敏度的A值变化率为0.13,优于进口试剂。自主研发试剂高、低值血清测定变异系数分别为1.5%和1.1%;线性范围为0~2 850μmol/L;方法学比对回归方程为Y=0.98 X+1.15,r=0.999;估计偏倚低于允许误差。以相对偏差不小于10%作为有明显干扰的评判指标,结果显示35mmol/L肌酸、3.42mmol/L胆红素、0.03g/L维生素C、5g/L血红蛋白、1 450浊度乳糜对高、低值浓度标本检测结果均无干扰。结论自主研发的Cr测定试剂性能良好,与进口试剂之间具有良好的相关性,符合临床应用基本要求。     

酶法尿素检测试剂的改进及性能评价

目的建立一种改良酶法尿素测定试剂,并评估其性能。方法采用酶法测定尿素反应前后吸光度(A)值的变化率并对试剂进行改良,评估其性能。同时与现有酶法试剂及进口和光试剂进行比较。结果现有试剂空白A值为1.8,空白A值变化率为-0.001 8;改良试剂空白A值为1.8,空白A值变化率为-0.001 9;和光试剂空白A值为1.6,空白A值变化率为-0.000 4。现有试剂检测限为0.035 mmol/L、改良试剂为0.014 mmol/L、和光试剂为0.075 mmol/L。分析敏感性现有试剂为-0.04,改良试剂为-0.13,和光试剂为-0.05。改良试剂对高、低值血清的批内精密度分别为0.45%和0.85%,批间精密度分别为0.38%和0.71%,线性浓度范围为0~38 mmol/L;改良试剂与和光试剂方法学比对的回归方程为Y=0.93X+0.41(r=0.999),估计偏倚低于允许误差;342μmol/L结合胆红素、342μmol/L非结合胆红素、0.03 g/L维生素C、5 g/L血红蛋白、1 450 FTU乳糜对改良试剂高、低值样本检测结果均无干扰。结论改良酶法尿素试剂具有更加优越的检测限和分析敏感性,并且自身性能良好,符合相关临床应用要求。     

速率法测定血浆谷氨酸脱氢酶活性的分析性能验证

目的对速率法测定血浆谷氨酸脱氢酶(GLDH)活性进行方法学评价,以确定其分析性能是否符合临床实验室应用的要求。方法由ADVIA 2400全自动化分析仪和武汉生之源生物科技股份有限公司的GLDH检测试剂组成检测系统,参照CLSI提供的临床检验方法学评价方案EP5-A2、EP 6-A、EP7-A2、EP15-A分别对该检测系统的精密度、线性范围、干扰、正确度等性能进行评价。结果该检测系统的高、低2个GLDH水平的批内CV分别为3.09%和4.88%,总精密度CV分别为3.83%和5.74%;浓度在2.9~155.4U/L的范围内样本,测定结果为线性;干扰物血红蛋白(Hb)=2g/L;三酰甘油(TG)=5.6mmol/L;总胆红素(TB)=342μmol/L;维生素C(Vc)=6g/L时,干扰相对偏差从-1.81%到4.82%不等,对检测结果无明显干扰;正确度验证时偏差≤10.59%。开瓶后30d内试剂吸光度值无明显变化,试剂稳定性良好。结论该GLDH试剂盒的精密度、分析范围、分析特异性、正确度、试剂稳定性等重要指标与试剂盒声明性能指标一致,可以满足临床检测需要。     

血清钙偶氮胂测定法的一点改进

在刘倩予等建立的碱性条件下偶氮胂 测定血清钙的方法基础上 ,减低了偶氮胂 浓度 ,使试剂空白吸光度降低 ,更适合分光光度计比色。方法评价试验结果 :线性范围 0～ 5mmol/L,批内 CV1 .66% ,批间 CV2 .0 8% ,回收率范围 96%～ 1 0 4 %。血红蛋白 1 7g/L、胆红素 1 0 3μmol/L对该法测定血清钙无明显干扰。该方法试剂稳定 ,操作简便快速、精密度、准确度好 ,值得推广应用。     

血清钙偶氮胂Ⅲ测定法的一点改进

在刘倩予等建立的碱性条件下偶氮胂Ⅲ测定血清钙的方法基础上,减低了偶氮胂Ⅲ浓度,使试剂空白吸光度降低,更适合分光光度计比色。方法评价试验结果线性范围0～5mmol/L,批内CV1.66%,批间CV2.08%,回收率范围96%～104%。血红蛋白17　g/L、胆红素103　μmol/L对该法测定血清钙无明显干扰。该方法试剂稳定,操作简便快速、精密度、准确度好,值得推广应用。     

三元胶束络合分光光度法测定血清钙的实验研究

应用三元胶束络合体系理论,利用溴代十六烷基三甲胺与甲基麝香(?)酚蓝测定血清钙。降低了试剂空白吸光度,空白校正因子由原法的1.37下降到本法的1.13,从而提高了方法的精密度,并且在试剂的稳定性、灵敏度等方面有一定的改善。本法线性可达5.0mmol/L.批内 CV=1.13%,批内 CV=2.74%。     

OLYMPUS全自动生化分析仪性能鉴定

目的探讨全自动生化分析仪的性能鉴定方法和技术要素。方法对OLYMPUS AU2700生化仪进行温度准确度与波动、杂散光、吸光度线性范围、吸光度稳定性、吸光度重复性、吸光度准确度、加样误差、加试剂误差、样品携带污染率、项目准确性、项目的批内精密度和批间精密度等指标进行检查,并与行业标准和厂家说明书标准进行比对。结果孵育温度为(36.84±0.07)℃,波动度0.11℃,5只比色杯杂散光均大于4.10。吸光度线性范围不小于2.5时,各测定值相对偏倚在±5%以内。340、380、480、600 nm 4个波长的吸光度变化均远小于0.01。吸光度重复性CV值为0.450%。2 mL样品分配的精确度整体CV≤1.5%;5 mL样品分配精确度整体CV≤0.8%。内、外圈试剂分配精确度CV分别为0.40%和0.32%。5组测定的平均携带污染率为0.241 1%。ALP、Mg、P、AMY、Ca、AST、TP、ALB 8个项目定值质控的测定结果均在质控靶值±2sd范围之内。批内精密度与批间精密度介于0.953%～4.713%之间。ISE单元电极选择性[Na]=150 mmol/L,[K]=4 mmol/L。结论 OLYMPUSAU2700生化仪的性能符合最新的行业推荐标准,生化仪的性能鉴定应进一步完善与规范。     

一种脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)活性检测方法的性能验证

目的验证一种新的脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)活性测定试剂的方法学性能。方法验证苏州博源公司的Lp-PLA2检测试剂的正确度、精密度、线性范围、功能灵敏度(LOQ)、分析灵敏度(LOD)、携带污染率和参考区间,用上海德赛公司Lp-PLA2试剂作为参比试剂,对临床样品进行评价。结果 Lp-PLA2不同浓度水平血清样品的回收率分别为108.7%、96.1%、98.4%;Lp-PLA2低(394.1 U/L)、中(785.3 U/L)、高(1 048.7 U/L)3个浓度样品的变异系数(CV)分别为0.90%、1.90%、2.30%;线性范围为44.4~1 660 U/L(R2=0.999 7);LOQ为4.22 U/L,LOD为0.89 U/L;携带污染率绝对值3%;参考区间满足厂商声明的参考区间(≤670 U/L)。收集体检者血清样品(n=40),分别用苏州博源公司(实验方法,Y)与上海德赛公司(参比方法,X)的Lp-PLA2试剂检测,Deming回归方程为Y=1.016X+3.90,r=0.987。结论苏州博源公司Lp-PLA2试剂盒性能验证满足要求,样品检测结果与上海德赛公司试剂具有一致性。     

国产浓缩型酶法二氧化碳试剂盒的应用研究

目的 探讨浓缩型酶法二氧化碳(CO2)试剂盒在Roche Modular生化分析仪中的检测性能.方法 根据CLSI系列文件(EP15-A2,EP6-A,EP9-A2,C28-A3)和其他相关文献的实验方案,对迈克浓缩型酶法CO2的精密度、线性范围、参考区间及其与Roche配套试剂进行可比性分析,结果与厂商声明的性能或者公认的质量目标进行比较.同时比较分析迈克与罗氏试剂检测参数,高中低浓度标本结果及其检测点吸光度值变化.结果 精密度性能通过验证；呈一次线性,线性范围为5.8～43.8 mmol/L；与罗氏原装试剂具有较好的可比性,回归方程为Y-0.982 2X+0.020 8,相关系数r=0.9916；参考区间验证结果均在该实验室给出的参考区间内；迈克和罗氏试剂的参数设置略有不同,高中低浓度标本检测点吸光度值差异具有统计学意义(P＜0.05),但检测结果差异无统计学意义(P＞0.05).结论 迈克浓缩型酶法CO2试剂盒在Roche Modular检测中的主要分析性能均符合质量目标要求,满足临床需要.     

精浆果糖速率检测法的初步评价

目的建立精浆果糖速率检测法并进行性能评价。方法利用速率法检测精浆果糖浓度,在全自动生化分析仪上建立检测参数,评估该方法的试剂空白吸光度、准确性、重复性和线性范围,与临床常用的精浆果糖吲哚显色法进行比较。结果试剂空白吸光度平均为0.032,空白吸光度变化率(△A/min)平均为0.000 2。3份高、中、低果糖浓度的精浆样本重复测定10次的变异系数(CV)值分别为1.40%、1.57%和2.79%。回收率范围为95.77%~100.97%。精浆果糖浓度在5~35 mmol/L时,具有良好的线性关系(r2=0.997 8)。以精浆果糖吲哚显色法作为对照试剂,速率法作为实验试剂,两者对115例精浆样本的检测结果差异无统计学意义[(20.92±8.62)mmol/L vs(21.15±8.37)mmol/L,t=-1.157,P=0.250],且呈显著正相关(r2=0.939 5,P0.01)。结论本研究建立的精浆果糖速率检测法有较低的试剂空白,重复性和准确性较好,与目前临床使用的吲哚显色法有很好的一致性。本法操作简单、快速,精浆样本无需稀释,适合临床大批量样本的检测筛查,可节省人力和试剂成本。     

连续监测法测定腺苷脱氨酶

目的 建立连续监测法测定腺苷脱氨酶的方法。方法 用连续监测法对 pH值、腺苷浓度等反应条件进行实验研究，并对所建立的方法进行评价。结果 用双试剂连续监测法；试剂Ⅰ：含α－酮戊二酸6mmol/L,NADH 0.35mmol/L,ADP0.8mmol/L,EDTA-Na2 0.1mmol/L，谷氨酸脱氢酶1000U／L，试剂Ⅱ：腺苷12mmol/L,均用磷酸盐缓冲液（0．1mol/L);pH7.2。线性范围达97U／L，批内CV＝4．90％，批间CV＝6．53％。与波氏显色法有良好的相关性（r=0.9902)。结论 本法操作简便，结果准确，可用于常规分析。     

参照CLSIEP方案评价直接胆红素试剂分析性能

目的通过应用CLSIEP方案分别对国产和进口直接胆红素（DBil）试剂分析性能进行评价,了解国产直接胆红素试剂分析性能能否满足临床需要。方法在同一台全自动生化分析仪上,同时测定试剂准确度、精密度、最低检测限、线性范围、干扰试验、方法比对实验、稳定性观察等7项技术指标。结果两种试剂准确度测定,其相对偏差≤±10％;批间变异系数小于4．0％;国产DBil试剂线性范围0．2—595．0umol／L,进口试剂线性范围-0．4—595．7umol／L;国产DBil试剂的最低检测限为0．4umoL／L,进口试剂的最低检测限为0．9umol／L;方法比对实验结果Y=0．997X＋5．2467,R^2=0．9996（浓度范围0.2—595．0umol／L）;抗干扰能力无明显差异;试剂稳定性相近。结论：国产直接胆红素试剂与进口试剂的分析性能无显著性差异,能满足临床实验室的需要。     

参照EP方案在不同检测系统评价尿微量白蛋白试剂的分析性能

目的 通过不同检测系统测定尿微量白蛋白的分析性能评价,以探讨新成生物公司尿微量白蛋白测定试剂盒与英国朗道测定试剂盒在分析性能上的差异.方法 在同一台全自动生化分析仪上,同时对两个检测系统的正确度、精密度、最低检测限、测定范围、方法学比对共五项性能指标进行评价.结果 在正确度实验,新成和朗道试剂的相对偏差分别都小于10%.精密度试验,两种试剂的批内CV分别都小于5%.两种试剂的检测低限分别为：0.87mg/L、0.27mg/L.线性试验结果,新成试剂的回归方程和相关系数分别为：Y＝0.9827X＋0.5455,R2＝0.9987（浓度范围0～400mg/L）,朗道试剂的回归方程和相关系数分别为：Y＝1.0356X-0.9091,R2＝0.9996（浓度范围0.0～202.8mg/L）,新成试剂的测定范围更广.方法 比对试验,试验结果表明两种试剂相关性良好,回归方程和相关系数分别为：Y＝1.2555X-1.6888,R2＝0.9976.结论 两种检测系统对尿微量白蛋白的测定能得到一致的结果,其性能指标均能满足临床使用要求,无明显差异.     

不同肌红蛋白检测系统的性能评估

目的评估四种肌红蛋白（Myoglobin,Mb）检测系统的分析性能。方法评价的性能指标为精密度、线性范围、抗干扰性、相关性及偏倚。结果肌红蛋白浓度在37．3—330．4ng／mL时,各家试剂的总CV均〈6％。各家试剂在各自的线性范围内线性良好,其理论值与实测值存在偏倚小。血红蛋白≤384mg／dl,胆红素≤24．8mg／dl,甘油三酯≤19．2mmol／L时对各厂家试剂检测均无显著性影响（干扰〈10％）。相关性分析结果表明,各系统间相关性良好,但存在一定的偏倚。系统预期偏倚在100—500ng／mL范围内,随肌红蛋白浓度的增高而降低。结论各厂家试剂的精密度、线性范围、抗干扰性符合临床使用要求,但系统间测定结果存在一定偏差。     

斑点免疫金渗滤法定量测定血清淀粉样蛋白A方法的建立及性能评估

目的建立斑点免疫金渗滤法（DIGFA）定量测定血清淀粉样蛋白A（SAA）并评估其分析性能。方法选用2株商品化抗SAA单克隆抗体，分别结合于硝酸纤维素膜和胶体金，制备免疫金渗滤试剂板条（SAA—DOT）以定量检测SAA。按照EP文件，评估SAA—DOT的分析性能（检测限、精密度、准确性、线性范围等）。结果SAA—DOT最低检测限为5mg／L；10和100mg／L的批内变异系数（CV）分别为9．07％和10．21％，天间CV分别为11．33％和11．53％；线性范围为5—230mg／L；SAA—DOT的测定结果与商品化乳胶增强速率散射比浊法（LERN）试剂具有良好的相关性（r=0．995，P〈0．05）。表观健康者血清SAA浓度中位数为5．7mg／L，95％可信区间为0—9．6mg／L。结论基于DIGFA的SAA-DOT简便、快速，能在5min内完成检测，各项分析性能指标达到国家食品药品监督管理局（SFDA）对体外诊断试剂的要求，可用于临床患者血清标本的检测。     

血清AST自主研发生化诊断试剂的临床研究

目的对自主研发的血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)生化诊断试剂进行自身的性能评价,并与进口血清AST生化诊断试剂对血清AST试验检测的可比性及偏倚进行评估。方法自主研发血清AST生化诊断试剂自身性能评价:做空白吸光度、重复性和线性检测。依据美国临床实验室标准化委员会(CLSI)EP9-A文件标准,科学设计试验方案,与进口德国Olympus生化诊断试剂进行比对和偏倚评估研究。结果自主研发AST生化诊断试剂空白吸光度、重复性和线性检测均符合要求,两组试剂对临床标本AST的检测结果系统误差符合国际标准。结论自主研发AST生化诊断试剂与进口生化诊断试剂两者间具有良好的相关性,并且自身性能良好,安全性和有效性符合临床应用要求。     

常规试剂中加入磷酸吡哆醛(PPA)测定天门冬氨酸氨基转移酶(AST)催化活性浓度的可行性研究

目的探讨在常规试剂中加入PfIA测定AST催化活性浓度的可行性。方法用加与不加PPA两种常规方法分别比较肝脏病人、心脏病人、透析病人及其表观健康人群血清AST活性。同时对两种常规方法在参考范围、线性范围、干扰物、精密度、试剂稳定性方面进行了比较。结果无论加与不加PPA，健康男性组和女性组相比较均有显著差别。加入PPA使健康人AST升高4．0％，与不加PPA相比没有显著差别。加入PPA，急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化和肝癌病人的AST分别升高18．1％、23．2％、18．2％和28．3％，与不加PPA有显著差别。加入PPA，透析后病人AST升高27．6％，与不加PPA相比无显著差异。加入PfIA，心绞痛病人AST升高5．6％，与不加PPA相比没有显著差异；加入PPA，AMI病人AST升高37．2％，与不加PPA相比有显著差异。AST加与不加PPA的常规方法在参考范围、线性范围、干扰物、精密度、试剂稳定性方面无显著差异。结论无论男性还是女性，加入PPA其AST参考范围仍然在40U／L以内，与目前常规方法的参考范围无差别。因此，我们认为可以推广加PPA的常规方法。     

血清总蛋白测定试剂的改良与应用效果评价

目的　探讨能消除脂质与葡聚糖双重干扰的血清总蛋白测定方法。方法　用氢氧化钾代替Doumas法试剂中的氢氧化钠,使脂质的溶解度增大,以消除或减低脂质所致反应液混浊。优选调整酒石酸钾钠的浓度,以消除葡聚糖对测定的干扰。用正交法设计实验,优选氢氧化钾和酒石酸钾钠的最佳浓度。结果　含氢氧化钾 143mmol/L、酒石酸钾钠 56.7mmol/L的改良试剂与含 TG 5.6mmol/L、葡聚糖60g/L的血清反应均不显混浊,可不设标本空白。TG>5.6mmol/L时,反应液混浊程度较Doumas法轻,可用标本空白纠正。对蛋白标准液和新鲜混合血清反应的吸收曲线相同。吸收峰530~560nm,最大峰值546nm,与Doumas法一致。改良试剂和Doumas试剂与蛋白反应的比吸光度分别为0.299 2L·g-1·cm-1和0.303 6L·g-1·cm-1。测定线性范围28~140g/L。回归方程y=0.892 5+0.272 7xL·g-1·cm-1,r=0.999 5。与 Doumas法平行测定外观正常的血清 72 例。配对 t检验,t=0.99,P>0.2。结论　改良试剂性能稳定,成本低廉,既能消除脂质与葡聚糖的双重干扰,又保留了Doumas法的优点。适合手工、半自动和全自动生化分析仪测定血清总蛋白。     

天门冬氨酸氨基转移酶37℃参考方法的建立及其应用研究

目的通过建立37℃天门冬氨酸氨基转移酶（AST）参考方法,对酶校准品定值,探讨血清AST测定结果的准确性与可比性。方法依据国际临床化学与检验医学联合会（IFCC）推荐的参考测量程序建立AST酶催化活性参考方法,并对其精密度、线性范围和干扰因素进行方法学评价,用参考方法测定c．f．a．s多项校准液,并建立本室的参考范围。同时用参考方法对制备的酶校准品进行准确定值,按照NCCLSEP9-A方案比较40份人血清用酶校准品校准的常规方法和参考方法AST结果。结果我室初步建立的37℃ AST参考方法相应方法学参数,如下：总CV0．89％-1．12％、线性范围1．3—300U／L。AST测定结果在48U／L左右偏差超过5％的干扰物浓度分别为游离胆红素256．5μmol／L、结合胆红素205．2μmol／L;AST在165U／L左右测定结果偏差超过5％的干扰物浓度分别为游离胆红素307．8μmol／L、结合胆红素342μmol／L。血红蛋白在1g／L时对两种浓度的AST干扰均大于5％。而甘油三酯在10mmoL／L以下对两种浓度的AST的干扰仍然小于5％。用参考方法测定c．f．a．s多项校准液AST结果128．5U／L,比靶值高0．5U／L。本室参考范围AST：男性10—40U／L;女性7—40U／L。健康男女AST有显著差别（P〈0．05）。用制备的酶校准品校准的常规方法和参考方法进行比较,相关良好（r^w=0．9992）。前者结果与后者相对偏倚在±10％之内。结论我室的参考方法基本建立,采用参考方法为酶校准品定值,可以提高血清AST测定结果的准确性和可比性。