超高效液相色谱-串联质谱法同时测定抑郁大鼠脑脊液中5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法,同时检测抑郁模型大鼠脑脊液中5-羟色胺及其代谢产物5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）的水平,并观察氟西汀治疗后抑郁模型大鼠脑脊液中5-羟色胺和5-HIAA的含量变化。方法 将24只SD大鼠随机分为对照组、模型组和氟西汀治疗组,每组8只。造模第35天,待行为学测试后取大鼠脑脊液,用蛋白沉淀法进行前处理,然后采用UPLC-MS/MS测定5-羟色胺和5-HIAA的含量。色谱柱为ACE C₁₈-PFP柱（4.6 mm×150 mm,3 μm）,流动相为乙腈-0.2%甲酸水,梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,柱温为25℃,质谱检测采用动态多反应监测（DMRM）模式。结果 大鼠脑脊液中5-羟色胺和5-HIAA分别在0.10~100.00 ng/mL和1.00~1 000.00 ng/mL浓度范围内线性关系良好（r>0.999）,日内和日间精密度均<15.00%,提取回收率为86.86%~98.49%,基质效应为89.80%~95.25%,样品稳定性良好。与对照组比较,模型组大鼠脑脊液中5-羟色胺的含量降低（P<0.01）,5-HIAA含量上升（P<0.01）;与模型组比较,氟西汀组大鼠脑脊液中5-羟色胺含量上升（P<0.01）,5-HIAA含量降低（P<0.01）。结论 本实验所建立的方法操作简便,结果准确,灵敏度高,重现性好,适用于检测抑郁大鼠脑脊液中5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸水平。     

高效液相色谱-荧光检测法测定大鼠血小板内5-羟色胺的含量

目的：建立高效液相色谱-荧光检测测定大鼠血小板内5-羟色胺含量的方法。方法：色谱柱为Nucleosil-C18（4 mm×250 mm,10 μm）,流动相：磷酸二氢钾（10 mmol/L,内含EDTA-Na2 0.3 mmol,pH=3.5）∶甲醇∶乙腈＝85∶10∶5,流速：0.5 ml/min,荧光激发波长：254 nm,发射波长：360 nm,增益：32。血小板沉淀用300 μl纯水悬浮,加入15 μl内标溶液（30 μg/ml,α-甲基-5-HT水溶液）,100 μl蛋白沉淀液,混匀,离心,取上清液20 μl,进样。结果：5-羟色胺在0.25～4.00 μg/ml浓度范围内,线性关系良好。5-羟色胺测定的批内和批间相对标准差（RSD）分别小于4.29％和4.44％,回收率为84.3％～88.7％。正常雄性SD大鼠血小板内5-羟色胺的平均含量分别为（1.65±0.14） μg/109 plts。结论：本法简便、准确、快捷,可用于大鼠血小板内5-羟色胺的测定。     

高效液相色谱荧光法检测血小板中5-羟色胺

目的:建立一种简便、快速、准确的血小板5-羟色胺(5-HT)测定方法。方法: 标本去蛋白后,应用反相离子对高效液相色谱荧光法检测5-HT,N-甲基-5-HT为内标,色谱柱为Nova-pak C18柱(150 mm×4.6 mm,颗粒4 μm)。结果 ：本法批内CV是2.29％,批间CV是3.88％,回收率是97.5％,线形范围20～20 000 nmol/L,检测限是1 nmol/L,5-羟吲哚乙酸、色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸对本法无干扰。结论：高效液相色谱荧光法测定血小板5-HT简便快速、灵敏特异,适宜于临床和科研工作。     

133例神经内分泌疾病的血小板5-羟色胺代谢变化

目的 探讨神经内分泌疾病的血小板5-羟色胺代谢变化。方法 用荧光分光光度法测定了37例急性脑梗塞、10例急性脑出血、48例糖尿病和38例甲状腺功能亢进患者的血小板5-差劲色胺和血浆5-差劲吲哚乙酸含量，并以37例健康成人的测定值作对照，进行对比分析，结果 发现急性脑梗塞血浆5-差劲吲哚乙酸显著降低，糖尿病血小板5-差劲色胺和血浆5-差劲吲哚乙酸降低也很显著，甲亢患者的血浆5-差劲吲哚乙酸也显著降低，它们的P值均小于0.05。结论 这4种疾病可能存在着单胺类神经介质5-差劲色胺代谢的紊乱、血小板活性增高和释放5-差劲色胺的增加。     

血浆及血小板中5-羟色胺的RP-HPLC-ΜV检测方法学研究

目的建立RP-HPLC-ΜV法测量人血浆及血小板中5-HT的含量及进行方法学验证。色谱条件采用Waters C18反相色谱柱（200mm×4.6mm,5μm）,预柱plμs-C18（12.5mm×4.6mm）,流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾-甲醇（体积比为25：2）溶液,流速为0.8mL/min,紫外检测器,检测波长为275nm。结果 5-羟色胺与内标在11min内完全分离,定量下限为0.025μg.L-1,在0.025μg.mL-1-6.40μg.mL-1时线性关系良好,r=0.9998。经测定血浆中低、中、高浓度下的回收率分别为95.6%,95.7%,101.1%。血小板中回收率为99.1%、103.4%、104.2%。日内精密度高中低RSD=5.1%、3.1%和5.8%,日间为6.4%、7.8%和9.2%,均符合方法学要求。结论该法高效、简便、灵敏、稳定、重现性好,可用于5羟色胺的血药浓度的测定和生物等效性研究。     

高效液相色谱-电化学法测定大鼠不同脑区单胺类神经递质及其代谢产物的方法学研究

目的:建立使用高效液相色谱-电化学法测定大鼠下丘脑、海马、皮质中单胺类神经递质及其代谢产物的方法,所测指标包括去甲肾上腺素(NE)、五羟吲哚乙酸(5-HIAA)、高香草酸(HVA)、多巴胺(DA)、和5-羟色胺(5-HT)。方法:色谱柱采用Waters C18反相色谱柱(3.9mm×150mm,5μm),流动相为水相(每1L中含辛烷磺酸钠2.5g,磷酸二氢钾13.6g,乙二胺四乙酸36mg,pH值3.3):甲醇:乙腈=78:19:3,流速为0.8mL/min,柱温35℃;电化学检测器工作电极为玻璃碳电极,参比电极为银/氯化银(Ag/AgCl)电极,工作电压为0.7V[1]。结果:脑组织中五种神经递质的保留时间分别为:去甲肾上腺素3.4min、五羟吲哚乙酸4.2min,高香草酸4.8min,多巴胺5.8min,5-羟色胺11.4min;最低检测限为4～16ng/mL。线性范围为20～320ng。脑组织样品的相对回收率为87.5%～113.9%,日内、日间精密度RSD小于7%。结论:该方法具有快速、准确、灵敏且样品制备简便等优点,可用于大鼠部分脑区内单胺类神经递质的分离测定。     

卡马西平对癫痫患者脑脊液中5-羟吲哚类物质的影响

目的研究原发性癫痫患者卡马西平治疗前后脑脊液中5-羟色胺(5-HT)和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)含量的变化,以期了解5-HT和5-HIAA与癫痫的关系。方法以80例患者为研究对象,癫痫患者40例,对照组40例。根据是否服用卡马西平,将40例癫痫患者分为治疗组和非治疗组。然后采取脑脊液标本,用高效液相色谱—荧光分析法测定脑脊液及血浆中5-HT和5-HIAA含量。结果治疗组与非治疗组比较,脑脊液中5-HT和5-HIAA含量差别均有统计学意义(P<0.01)。结论卡马西平能提高脑脊液中5-HT和5-HIAA含量。     

高效液相色谱-荧光法测定小鼠脑组织中单胺递质及其相关物质

建立高效液相色谱-荧光分析方法,研究小鼠脑皮层、海马、纹状体、丘脑等不同部位的单胺类神经递质及其相关物质。脑组织样本经高氯酸沉淀蛋白后进行色谱分析,采用Lichrospher C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为pH 3.06缓冲液(含1 mmol/L庚烷磺酸钠;30 mmol/L磷酸二氢钠-磷酸溶液)-甲醇(85∶15);流速：1.0 mL/min;柱温：35 ℃。荧光检测：激发波长为280 nm,发射波长为315 nm。采用建立的方法,鉴别出小鼠脑中存在去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)、酪氨酸、色氨酸、3,4-二羟苯乙酸和5-羟吲哚乙酸等物质;对NE、DA和5-HT进行定量研究,确定它们的线性范围分别为2.4～471.0 ng/mL(r=0.999 6),2.6～519.5 ng/mL(r=0.999 4),2.4～469.3 ng/mL(r=0.999 1),日内、日间RSD均小于9.0%,准确度达到限度要求,提取回收率大于90%。本法专属性好,准确度高,可以反映不同鼠脑区域单胺类神经递质及相关物质含量上的差异。     

HPLC法测定己酮可可碱葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛限量

目的:采用HPLC法测定己酮可可碱葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛限量。方法:ODSC18柱(250×4.6mm,5μm),以甲醇:水:三乙胺(50:50:0.1)为流动相,检测波长为284nm。结果:回归方程A=4100.91+53467.52C(r=0.999,n=5),在浓度1μg/ml～20μg/ml的范围内线性良好,加样回收率为99.89%,RSD=0.19%。结论:本方法准确而灵敏,能有效地控制5-羟甲基糠醛的限量。     

急性心肌梗塞血小板内外5-羟色胺类物质的变化和5-羟色胺对血小板的致聚作用

本文观察24例急性心肌梗塞(AMI)患者血小板内外5-羟色胺(5-HT)类物质的变化和5-HT对血小板的聚集作用。结果:AMI组、心绞痛组、正常对照组的血小板5-HT(ng/10~9,x±SD)分别为533.88±1.75、496.44±1.49、707.78±1.57,血浆5-羟吲哚类物质(5-Hls)分别为124.67±1.35、98.01±1.26、87.44±1.20(ng/ml),表明AMI血小板5-HT均值降低、血浆5-HIs均值升高,与正     

RABEX-5和RAB5在乳腺癌中的表达及意义

目的 初步探讨RABEX-5和RAB5与乳腺癌的关系.方法 采用免疫组织化学法、RT-PCR和Western blot法检测RABEX-5及RAB5 mRNA和蛋白在60例乳腺癌、15例乳腺纤维腺瘤和15例乳腺正常组织中的表达,并检测相关临床病理指标与RABEX-5及RAB5表达的关系.结果 RABEX-5和RAB5 ...     

5''''-脱氧氟尿苷和5-氟尿嘧啶对6株大肠癌细胞的抑制作用

目的:测定大肠癌细胞的胸苷磷酸化酶(dThdPase)蛋白含量,探讨dThdPase与5’-脱氧氟尿苷(5’-DFUR)、5-氟尿嘧啶(5-FU)对大肠癌细胞的生长抑制作用的相互关系。方法:采用ELISA法对6株大肠癌细胞系LS174T、CloneA、Col0320、CX-1、Lovo和MIP101进行dThdPase蛋白定量分析,然后进行5’-DFUR、5-FU对6株大肠癌细胞的生长抑制实验。把大肠癌细胞分别接种于96孔培养板的每孔中培养24 h,分别加入2倍梯度稀释的5’-DFUR和5-FU.继续培养96 h后应用MTT分析分别测定5’-DFUR和5-FU对6株大肠癌细胞的半数有效剂量(IC50)。结果:除LS174T检出0.5 u/mg、Lovo检出8.9 u/mg的dThdPase蛋白外,其它4株癌细胞未检出。6株大肠癌细胞均对5-FU高度敏感,其半数有效浓度(IC50)分别为1.52～13.68μmol/L,而5’-DFUR对6株大肠癌细胞的IC50则分别为68.71～528.15μmoL/L,是5-FU的15倍-94倍,差异有显著性(P<0.01)。结论:6株大肠癌细胞很少有dThadPase蛋白表达;每一株大肠癌细胞对5’-DFUR的敏感性均明显低于5-FU。     

5-氮胞苷诱导外源表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化的研究

目的 研究在单层培养条件下,5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化的可能性和效率.方法 实验分为实验组和对照组,实验组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,对照组为P19细胞.2组细胞均在单层培养条件下,以5-aga(1 μmol/L)诱导.倒置显微镜观察细胞的生长状态;诱导4、8、12、16 d,Western blot检测α-fiareomeric actin和cTnT的表达;并用免疫荧光双标检测α-sarcomeric actin和cTnT的共表达.结果 实验组和埘照组细胞在5-aza诱导下,生长缓慢,死亡细胞数目增多.随贴壁细胞密度增加,形成类似于聚集体贴壁生长的状态,中心细胞小、密集,周边细胞呈放射状排列,胞体长梭形,伸出突起.实验组诱导8、12、16 d检测到α-sarcomeric actin和cTnT 2种蛋白的表达和共表达,表达量呈增多趋势;诱导12、16 d时α-sarcomeric aetin的表达量与8 d比差异有统计学意义(P<0.01),诱导16 d的表达量与12 d比差异有统计学意义(P<0.01);cTnT在诱导12、16 d的表达量与8 d比差异有统计学意义(P<0.01).对照组没有2种蛋白的表达和共表达.结论 5-aza可诱导单层生长的表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化.     

补体C5a、C5a受体及其拮抗剂的研究进展

C5a是最重要的补体活化产物之一,它与相应的C5a受体结合被激活后,参与了多种疾病的病理过程,如急性肺损伤、脓毒血症、类风湿性关节炎、肾小球肾炎等疾病。如何阻断C5a信号的下传,从而减轻炎症反应一直是免疫学研究的热点问题。目前C5a和C5a受体的拮抗剂主要分为抗C5a抗体、小分子拮抗剂、C5a反义肽、C5a突变体和细菌来源的趋化抑制蛋白等。本文着重介绍C5a和C5a受体的结构与功能,以及相关拮抗剂的研究进展。     

温度对荧光检测5-羟色胺及5-羟吲哚乙酸的影响

荧光分光法检测生物标本内5-羟色胺(5-HT)及5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)具有效率高、灵敏度比较满意的优点。用邻苯二甲醛(OPT)法,检测荧光温度一般采用100℃,亦有采用低于100℃的。经研究,荧光检测5-HT与5-HIAA的灵敏度,在60—80℃为好,尤以80℃为最佳反应温度。在100℃时,5-HIAA的检测灵敏度已下降到0℃水平。实验如下: 各试管按下列各项依次加试液(单位为ml),然后在不同温度下反应。     

血浆内5—羟色胺含量与肺心病的关系

用荧光法测定42例肺心病急性期血浆5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的含量变化,结果显示:5-HT、5-HIAA 值显著高于支气管炎发作期和对照组;肺心病缓解后,5-HT、5-HIAA 值显著下降.肺心病伴呼吸、心脏衰竭及肾功能不全者5-HT 值高于无并发症患者,5-HT 显著升高的肺心病患者预后差     

哮喘小鼠肺组织中水通道蛋白5和黏蛋白5AC的表达变化及其相关性研究

目的探讨支气管哮喘(以下简称哮喘)小鼠肺组织水通道蛋白5(AQP5)和黏蛋白MUC5AC基因和蛋白的表达变化及其两者的相关性。方法制作小鼠哮喘模型,测定支气管肺泡灌洗液细胞分类及肺组织湿干重比值,应用Real-time PCR法测定哮喘组(OVA组)和对照组肺组织中AQP5和MUC5AC mRNA的表达,应用免疫组化法测定AQP5在肺组织中的分布,免疫印记法、ELISA法测定AQP5和MUC5AC蛋白在肺组织中的表达。结果小鼠哮喘组肺组织中AQP5表达较对照组明显减低(P<0.01),而MUC5AC表达显著升高(P<0.01),两者呈负相关(r=0.901,P<0.01)。结论哮喘时肺组织中AQP5表达的减低可能与气道MUC5AC表达的升高有关,从而促进了气道黏液过度分泌。     

氟铁龙与氟脲嘧啶治疗晚期消化道癌的疗效比较

目的比较氟铁龙与氟脲嘧啶对晚期消化道癌的疗效.方法42例晚期消化道癌随机分为治疗组和对照组,治疗组用氟铁龙加丝裂霉素化疗,对照组用氟脲嘧啶加丝裂霉素化疗.2～3周期后评价疗效与毒副反应.结果治疗组有效率为61.9%,对照组为38.1%.两组差异无显著性.两组毒副反应均表现为白细胞下降与恶心、呕吐等,差异无显著性.结论氟铁龙加丝裂霉素联合化疗,对晚期消化道癌是一疗效较高和较安全的方案.     

原核表达载体pKpL5的构建及应用研究

目的构建基因工程生产用高效原核融合表达质粒载体。方法在原核表达质粒pKpL4起始密码下游嵌入人工合成的六聚组氨酸编码区、16s RNA3端互补区、凝血酶识别位点编码区接头,构建成原核表达质粒pKpL5,并将人生存素单体、双体及利什曼原虫LACK抗原基因编码区分别克隆入pQE32、pKpL4和pKpL5进行表达,SDS-PAGE电泳分析各目的蛋白的表达量。结果人生存素单体、双体及利什曼原虫LACK抗原基因读码框在pQE32和pKpL4质粒载体内均不表达,而在pKpL5内,其目的蛋白表达量分别占细菌总蛋白量的5.1%,19%和35%。结论pKpL5可用作通用原核高效表达质粒载体表达各种目的基因。     

蛋白酶体β5亚单位过表达对氧化环境下人晶状体上皮细胞的影响

 【目的】探讨蛋白酶体筇亚单位（PSMB5）基因过表达对氧化条件下晶状体上皮细胞的影响。【方法】构建重组质粒pcDNA3．1-PSMB5并将其转染人人晶状体上皮细胞株SRAO1／04中，形成稳定表达，同时设pcDNA3．1空载体为对照组。RT—PCR法及Western blot法分别检测PSMB5基因及蛋白的表达情况。H2O2分别作用PSMB5转染细胞及空载体转染细胞，MTT法检测细胞增殖能力的变化。【结果】转染后用G418筛选3周后，获得PSMB5转染及空载体转染的G418抗性的细胞克隆。转染PSMB5基因的细胞PSMB5 mRNA表达强度明显增高．而空载体转染细胞与未转染细胞无显著差异：转染PSMB5基因的细胞的PSMB5蛋白表达也显著高于空载体转染细胞。低浓度H2O2作用后，转染PSMB5基因的细胞增殖能力高于空载体转染细胞。【结论】低浓度氧化环境下蛋白酶体历亚单位PSMB5过表达能对人晶状体上皮细胞具有保护作用。