溶血磷脂酸及其受体在卵巢上皮癌中的表达及其临床意义

目的：探讨溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）及其3种受体亚型（LPA1、LPA2、LPA3）在卵巢上皮癌发生和发展中的作用及可能机制。方法：采用RT—PCR技术检测24例卵巢上皮癌和18例卵巢良性上皮肿瘤组织中LPA1、LPA2、LPA3的表达;用生化测定法检测24例卵巢上皮癌和18例卵巢良性上皮肿瘤患者和10例健康妇女的血浆LPA水平。结果：LPA2与LPA3在卵巢上皮癌组织中的表达水平明显高于卵巢良性上皮肿瘤组织（P值均〈0．001）,而LPA1在这两者间的表达水平无显著差异。卵巢上皮癌患者血浆LPA水平明显高于卵巢良性上皮肿瘤患者及健康妇女（P值均〈0．001）,后两者间血浆LPA水平无显著性差异;Ⅲ-Ⅳ期患者的血浆LPA水平高于Ⅰ-Ⅱ期患者,但无显著性差异。结论：LPA及其受体LPA2、LPA3可能在卵巢上皮癌的发生和发展中起重要作用。     

溶血磷脂酸受体-1在乳腺癌组织中的表达

目的探讨溶血磷脂酸(lysophosphatidicacid,LPA)受体的三种亚型(LPA1、LPA2和LPA3)在乳腺癌组织中的表达水平及与乳腺癌发生发展的关系。方法采用半定量RT-PCR方法检测乳腺癌组织(35例)、癌旁组织(14例)、乳腺纤维瘤组织(15例)和正常乳腺组织(8例)中的LPA受体的三种亚型mRNA的表达水平,并对乳腺癌组织中这些受体的表达水平与病理类型、肿瘤大小和临床分期等的关系进行分析。结果LPA1在乳腺癌组织中的表达水平显著高于乳腺纤维瘤组织(P<0.05)和正常乳腺组织(P<0.05);最大直径≥2cm乳腺癌组显著高于直径<2cm组(P<0.05);浸润性导管癌也显著高于其它浸润性乳腺癌(P<0.05)。LPA2与LPA3在乳腺癌、癌旁、乳腺纤维瘤和正常乳腺四种组织中的表达水平均无统计学差异。结论LPA1在乳腺癌组织中表达增高,可能在乳腺癌发生与发展的过程中有重要的作用。     

溶血磷脂酸对人卵巢癌细胞生长和侵袭转移能力的影响

目的：探讨溶血磷脂酸（1ysophosphatidi cacid，LPA）对卵巢癌细胞系SKOV3、3AO、CAOV3的生长和侵袭转移能力的影响。方法：LPA干预卵巢癌细胞系SKOV3、3AO、CAOV3，并观察其对细胞增殖生长的影响；Boyden小室体外侵袭实验检测细胞侵袭能力；ELISA方法检测LPA剌激卵巢癌细胞系CAOV3后细胞上清液中转移相关因子的表达情况。结果：LPA体外干预卵巢癌细胞系能明显促进细胞增殖生长，且存在剂量依赖性。Boyden小室体外侵袭实验结果显示，实验组3AO和CAOV3细胞的侵袭指数都高于各自的空白对照组，不同浓度组的比较差异有统计学意义，但2组细胞系之间的比较差异无统计学意义。LPA干预CAOV3后细胞上清液中细胞因子的含量随LPA的浓度变化产生相应的变化。结论：LPA体外干预卵巢癌细胞系能明显促进细胞的增殖生长，且侵袭指数和转移相关因子的表达量均会产生相应的变化，说明UH对卵巢癌的侵袭和转移可能具有重要的生物学意义。     

肝细胞生长因子及其受体c-met在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及意义

目的:研究肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor,HGF)和cmet蛋白在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达以及与临床病理特征的关系。方法:应用免疫组织化学SP法对45例卵巢上皮性恶性肿瘤及10例卵巢上皮性良性肿瘤组织中HGF和cmet蛋白的表达进行定位分析;应用蛋白印迹法检测HGF、cmet蛋白在卵巢上皮性肿瘤中的表达。结果:在卵巢癌组织中,HGF在上皮细胞的表达强于间质细胞,cmet在上皮细胞强表达,间质细胞无表达。HGF和cmet蛋白在卵巢癌组织中阳性率分别为60.0%(27/45)和73.0%(33/45),较良性肿瘤组织的阳性率20.0%(2/10)和50.0%(5/10)显著升高,P值分别为0.000和0.000。手术病理分期Ⅲ～Ⅳ期者HGF和cmet蛋白表达的阳性率为70.4%(19/27)和88.9%(24/27),较Ⅰ～Ⅱ期者的38.9%(7/18)和50.0%(9/18)显著升高,P值分别为0.048和0.000。淋巴结转移者阳性率分别为78.6%(11/14)和92.8%(13/14),较无淋巴结转移者阳性率51.6%(16/31)和64.5%(21/31)升高显著,P值分别为0.025和0.000。HGF和cmet蛋白表达阳性率与年龄和病理分级无关,P值分别为0.436、0.549、0.465和0.124。HGF和cmet蛋白相对表达强度在卵巢癌组织中为1.29±1.25和1.57±1.25,在良性肿瘤组织中为0.17±0.34和0.44±0.46,两组比较差异有统计学意义,P值分别为0.000和0.007。在卵巢癌组织中HGF和cmet蛋白的表达呈正相关性,P=0.009。结论:卵巢上皮性肿瘤组织中存在HGF和cmet蛋白的表达,HGF和cmet与卵巢癌的发生、侵袭和转移密切相关。     

内皮分化基因受体介导溶血磷脂酸：肿瘤靶向治疗的新靶点

溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)是一种对多种细胞具有不同生物学活性的磷脂介质,在组织中广泛存在.从细胞形态学改变到细胞功能的影响,LPA可产生如促进细胞增殖、迁移和耐药等生物学效应.如其他生物递质一样,LPA与细胞表面特定的G蛋白偶合受体(Gprotein-coupled receptor,GPCR)发生交联作用,这些受体主要有Edg-2/LPA1、Edg-4/LPA2和Edg-7/LPA3等,它们被命名为内皮分化基因或溶血磷脂受体亚家族(endothelial differentiation gene or lysophospholipid receptor subfamily,Edg/LPAR subfamily).LPA在体内外参与细胞增殖以及血管生成等病理生理过程,LPA代谢和Edg/LPA受体功能的异常与肿瘤的发生、发展相关,可能是肿瘤临床诊治的潜在靶点.本文阐述了LPA通过Edg/LPA受体介导在肿瘤发生和发展中的作用及其机制,并就其在胰腺癌临床诊治中的意义进行了评价.     

溶血磷脂酸及其受体和IL-6 IL-8在乳腺癌进展中的表达变化与意义

  目的  探讨溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid, LPA)及其受体和IL-6与IL-8在乳腺癌进展中的表达及临床意义。  方法  采用半定量RT-PCR方法检测乳腺肿瘤组织和瘤旁组织中LPA受体的表达水平。采用LPA生化测定法和酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测乳腺肿瘤患者和健康妇女的血浆LPA、IL-6和IL-8水平。  结果  术后复发转移乳腺癌患者血浆LPA、IL-6、IL-8的表达水平均显著高于局限期乳腺癌和良性乳腺肿瘤患者及健康妇女(P均 < 0.05);LPA1在乳腺癌组织中的表达水平显著高于良性乳腺肿瘤组织和正常乳腺组织(P < 0.05);乳腺癌患者血浆LPA水平与IL-6和IL-8水平均呈正相关(P均 < 0.01)。  结论  LPA对乳腺癌患者内源性IL-6和IL-8的表达可能具有上调作用, 检测LPA、IL-6和IL-8的表达水平对乳腺癌的转移可能有一定的预测作用, 尤其是骨转移。      

溶血磷脂酸对卵巢癌细胞CAOV3生长转移的影响

目的:探讨溶血磷脂酸(LPA)对卵巢癌细胞CAOV3生长转移的影响.方法:应用MTT法、transwell迁移侵袭实验以及ELISA方法,观察LPA对卵巢癌细胞的增殖、迁移、侵袭、分泌的影响.结果:在无牛血清条件下,LPA作用于卵巢癌细胞后,细胞增殖、迁移、侵袭以及分泌生长因子的作用明显高于对照组(P＜0.01).结论:LPA具有促进卵巢癌细胞CAOV3增殖和浸润转移的作用.     

溶血磷脂酸对人卵巢癌细胞基质金属蛋白酶-2、9蛋白表达的影响

目的:探讨溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)对人卵巢癌细胞(3AO)中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达的影响。方法:采用免疫细胞化学法检测常规培养的人卵巢癌细胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表达。加入不同浓度LPA(0、0.2、2、10、20μmol/L)作用不同时间(0、2、4、6、16、24 h)后,MTT法检测LPA对人卵巢癌细胞增殖的影响。应用Western blot检测MMP-2和MMP-9的蛋白表达。结果:溶血磷脂酸能促进MMP-2蛋白表达,并呈剂量、时间依赖效应,浓度在20μmol/L作用16 h后MMP-2表达增强最为显著。LPA对细胞MMP-9的蛋白表达无显著影响。结论:LPA促进人卵巢癌细胞增殖,可能通过上调MMP的表达,促进卵巢癌细胞的转移和扩散。     

Kai1在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其意义

目的 :探讨Kai1(KangAi 1)在卵巢上皮性肿瘤中的表达及临床意义。 方法 :采用免疫组织化学S P法 ,检测 10 8例上皮性卵巢肿瘤和 12例正常卵巢中Kai1的表达情况。结果 :Kai1在卵巢上皮性癌、交界性卵巢肿瘤、良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织中的阳性表达率分别为 2 6 6 %、71 4 %、73 3%和 83 3% ,在恶性肿瘤中的阳性表达较良性肿瘤明显下降 (P <0 0 5 )。卵巢浆液性囊腺癌较粘液性囊腺癌及子宫内膜样癌Kai1阳性表达率显著下降 (P <0 0 5 ) ,在不同细胞分化等级与临床分期间Kai1表达无明显差异 (P >0 0 5 ) ,但在伴有和不伴有淋巴结转移的卵巢上皮性癌中Kai1的阳性表达率有显著差异 (P <0 0 5 )。结论 :Kai1表达下降可能是上皮性卵巢癌发生、发展中的一个早期事件 ,有望成为预测卵巢癌发生转移及判断患者预后的参考指标。     

CD44在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其临床意义

目的研究黏附分子CD44在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其表达与卵巢癌临床特征的关系。方法应用RT-PCR、巢式PCR、光密度扫描和免疫组化等方法,从mRNA和蛋白两个水平检测了卵巢上皮性肿瘤中CD44的表达,并分析了其与临床病理特征的关系。结果CD44标准型(CD44H)在恶性组和良性组中的蛋白表达率分别为61.5%和18.8%,差异有显著性;CD44HmRNA定量分析     

环氧化酶-2在上皮性卵巢癌中的表达及其意义

目的:探讨上皮性卵巢癌组织中环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)基因表达及其临床意义。方法:用逆转录-聚合酶链法(RT-PCR)检测32例上皮性卵巢癌、10例良性卵巢肿瘤和10例正常卵巢组织中COX-2 mRNA的表达,分析其与临床病理参数、化疗耐药之间的关系,同时对预后进行多因素的Cox生存分析。结果:COX-2 mRNA在上皮性卵巢癌中的表达(68.8%)显著高于良性卵巢肿瘤(0%)及正常卵巢组织(0%)(P<0.05),COX-2 mRNA的表达与淋巴结转移、术后残留灶直径有关(P<0.05),与临床分期、组织学分级、有无腹水均无关(P>0.05)。COX-2 mRNA在耐药组和非耐药组中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。多因素生存分析显示淋巴结转移、术后残留灶直径和COX-2表达是影响患者预后的独立危险因素。结论:COX-2基因在上皮性卵巢癌的发生、发展、转移和化疗耐药中发挥重要作用,COX-2的表达是影响患者预后的独立危险因素。     

上皮性卵巢肿瘤中bcl-2、bcl-xl基因的表达及临床意义

目的：探讨凋亡抑制基因bcl-2、bcl-xl在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其相互关系。方法：应用免疫组织化学S-P方法检测10例正常卵巢、2l例良性上皮性卵巢肿瘤、12例交界性肿瘤、72例恶性肿瘤组织中bcl-2、bcl-xl基因表达情况．并分析其表达与不同临床病理特征之间的关系。结果：bcl-2在正常卵巢、良性上皮性卵巢肿瘤、交界性肿瘤、恶性肿瘤中阳性表达率分别为10％(1／10)、19．1％(4／21)、50％(6／12)、和55．6％(41／72)，bcl-xl在正常卵巢、良性上皮性卵巢肿瘤中均为阴性表达，在交界性肿瘤和恶性肿瘤中阳性表达率分别为16.67％和48．61％。bcl-2与肿瘤的分化程度有关，分化差者bcl-2表达低。bcl-xl与肿瘤的临床分期有关，在Ⅲ、Ⅳ期恶性肿瘤中的阳性率分别为54．05％、71．43％，Ⅰ、Ⅱ期为12．50％、45．00％；两者均与肿瘤的病理学类型无关。未发现两者有相关关系。结论：本实验结果表明bcl-2和bcl-xl基因参与了卵巢肿瘤的发生发展过程，可作为卵巢恶性肿瘤的分子生物学指标之一。     

人卵巢上皮性癌组织中Pim-1与C-myc的表达及其临床意义

目的:探讨人卵巢上皮性癌组织中Pim-1和C-myc的表达及其临床意义。方法:采用RT-PCR半定量方法和免疫组织化学法检测40例卵巢上皮性癌组织、20例卵巢上皮性良性肿瘤组织和10例正常卵巢组织中Pim-1和C-myc mRNA及蛋白的表达情况。结果:卵巢上皮性癌组织中Pim-1和C-myc mRNA与蛋白的表达水平明显高于卵巢上皮性良性肿瘤组织及正常卵巢组织(P<0.05);Pim-1蛋白在卵巢上皮性癌组织中的表达与其组织学类型无关(P>0.05),与国际妇产科联盟(Federation International of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期和淋巴结转移有关(P<0.05);C-myc蛋白在卵巢上皮性癌组织中的表达与其组织学类型、FIGO分期和淋巴结转移均无关(P>0.05)。结论:原癌基因Pim-1和C-myc的mRNA及蛋白在卵巢上皮性癌组织中过度表达,可能与卵巢上皮性癌的发生、发展有关。     

纤粘连蛋白诱导卵巢癌细胞基质金属蛋白酶-2基因表达

目的　研究细胞外基质蛋白对肿瘤细胞基质金属蛋白酶 (MMP)基因表达的影响及机理。方法　以纤粘连蛋白处理SKOV3卵巢癌细胞后 ,用明胶 酶谱法和反转录PCR观察MMP分泌及基因表达。以MMP 2启动子转染细胞 ,通过测定萤火虫酶活性 ,观察纤粘连蛋白对MMP 2启动子活性的影响。细胞p5 3含量采用Westernblot分析。结果　 5 μg/mL纤粘连蛋白刺激MMP 2分泌 ,但不影响MMP 9分泌 ,这一作用随纤粘连蛋白浓度增加而增强。经 10 μg/mL纤粘连蛋白刺激 1h后 ,细胞内MMP 2mRNA量显著增加 ;作用时间延长 ,诱导作用减弱。纤粘连蛋白可诱导转染细胞中萤火虫酶活性增加 ,AP 1功能抑制剂姜黄素 (5 0 μmol/L)不能阻断这一作用。经纤粘连蛋白处理后 ,细胞内p5 3含量明显增加。结论　纤粘连蛋白可刺激卵巢癌细胞中MMP 2分泌 ,诱导MMP 2启动子活性增强及mRNA含量增加 ,这一作用可能与p5 3蛋白转录因子活性有关 ,而与AP 1通路无关。     

原发性上皮性卵巢癌组织中c-erbB2基因扩增及其临床意义

目的检测原发性上皮性卵巢癌组织中ｃｅｒｂＢ２基因扩增,以探讨其在卵巢癌临床诊治中的价值。方法采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹技术,结合特异性ｃｅｒｂＢ２探针,对１０８例原发性上皮性卵巢癌及３４例良性、７例交界性卵巢肿瘤手术切除组织做ＤＮＡ扩增。结果原发性上皮性卵巢癌ｃｅｒｂＢ２基因扩增频率为３２．４％（３５／１０８）,而良性、交界性卵巢肿瘤均未出现扩增（Ｐ＜０．００１）,且ｃｅｒｂＢ２基因的扩增和上皮性卵巢癌的ＦＩＧＯ分期（Ｐ＝０．０２５）、肿瘤细胞分化程度（Ｐ＝０．０１１）及初次手术后残存肿瘤的大小（Ｐ＜０．００１）呈正相关。经对８４例ＩＩ～ＩＶ期原发性上皮性卵巢癌进行预后分析,结果表明,ｃｅｒｂＢ２基因扩增为影响预后的独立因素,ｃｅｒｂＢ２基因扩增阴性者３年生存率为５７．７％,而阳性者为２８．４％,两者差异具有显著性（Ｐ＝０．０１６）。结论ｃｅｒｂＢ２基因扩增可能和原发性上皮性卵巢癌的发生有关,ｃｅｒｂＢ２基因扩增阳性患者恶性程度高,手术成功率低,预后明显差于阴性患者。检测癌组织中ｃｅｒｂＢ２基因的扩增,将有助于对卵巢癌患者的病情监测和预后判断。     

利用Tet—on可诱导系统构建稳定表达PESl的SKOV3细胞株

目的为了进一步研究PES1的生物学功能,采用Tet—on系统构建可诱导稳定表达PES1的卵巢癌细胞株SKOV3。方法采用PCR技术将PES1克隆到pTRE—Tight载体中,并进行表达鉴定。将调控质粒pTet—on转染卵巢癌细胞,经G418筛选后再转染pTRE—Tight—PES1,然后经潮霉素筛选出阳性克隆。用不同浓度的强力霉素（Dox）进行诱导后,Westernblot确定Dox的最佳诱导浓度。结晶紫实验观察Dox诱导的稳定转染pTRE—Tight-PES1的SKOV3细胞生长速度。结果将成功构建的pTRE—Tight—PES1转染SKOV3细胞后,经过筛选获得Dox可诱导表达PES1的SKOV3细胞克隆。浓度低于2mg／L的Dox可以剂量依赖性地诱导PES1表达,2mg／L可以诱导PES1高表达。Dox诱导的转染pTRE—Tight和未转染任何质粒的SKOV3生长速度无明显差异,而转染pTRE—Tight—PES1的SKOV3细胞比转染pTRE-Tight和未转染任何质粒的细胞在第g天时生长速度明显更快（P=0．001）。结论成功建立了可诱导表达PES1的SKOV3细胞,为研究PES1的生物学功能提供了有效的细胞模型。PES1表达可以增强SKOV3细胞的生长。     

黏附诱导卵巢癌细胞基质金属

目的 观察黏附纤黏连蛋白后肿瘤细胞基质金属蛋白酶（MMP）基因的表达,揭示细胞侵袭发生的机理。方法 纤黏连蛋白与A2780人卵巢癌细胞相互作用后,用反转录PCR观察MMP mRNA的表达;从HT1080细胞基因组DNA克隆MMP9启动子区基因,构建MMP－9－gGL2报告基因载体,瞬时转染A2780细胞,通过测定萤火虫酶活性,观察纤黏连蛋白对MMP9启动子活性的影响。结果 A2780细胞不表达MMP基因,,黏附后细胞内MMP－9mRNA含量明显增加,这一作用与黏附时间有关。克隆MMP－9基因启动子并转染细胞,黏附后转染细胞内MMP－9基因启动子活性明显增强。结论 细胞－细胞外基质黏附可刺激MMP基因转录活性,诱导MMP基因表达,进而促进细胞侵袭。