RASSF1A基因甲基化在乳癌中的研究进展

随着人们对肿瘤的深入研究．发现多数实体肿瘤存在3号染色体短臂（3p）缺失，提示3p区域所含的基因对肿瘤发生发展起着重要作用，可能隐含肿瘤抑制基因。因此，人们从染色体3p上发现了BLU、FUS1、RASSF1A等抑癌基因。现将RASSF1A甲基化在乳癌中的研究进展综述如下。     

甲基化寡核苷酸诱导灭活RASSF1基因在肝癌发病机制中的应用

目的:甲基化寡核苷酸诱导灭活RASSF1基因并探索其启动子甲基化在肝癌发病机制中的应用。方法:将与RASSF1基因启动子互补的甲基化寡核苷酸转染至肝癌SMMC-7721细胞系内,分别采用BSP和RT-PCR检测转染前后RASSF1基因启动子甲基化状态和mRNA表达状况。结果:正常SMMC-7721细胞系RASSF1基因启动子表现无甲基化状态并表达相应mRNA。转染互补甲基化寡核苷酸后,相应CG位点被诱导成完全甲基化状态,mRNA表达明显受到抑制。结论:互补甲基化寡核苷酸可诱导基因启动子甲基化状态,RASSF1基因启动子甲基化在原发性肝细胞癌发病机制中扮演重要角色。     

抑癌基因RASSF1A与RASSF1B基因的关系

目的：研究RASSF1基因2个转录本基因在胃癌组织及相对应的癌旁组织中表达情况以及RASSF1 2个转录本基因与肿瘤发生的相关性。方法：设计特异性的引物,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）的方法检测胃癌及癌旁组织中RASSF1家族中2种不同转录本mRNA的表达情况。结果：40例胃癌组织中RASSF1A基因表达缺失率为60.2%（24/40）,RASSF1B基因表达缺失率为37.5%（15/40）。结论：RASSF1A和RASSF1B2种转录本在胃癌组织中的表达下调,RASSF1A基因在胃癌的发展中起重要的抑制作用,RASSF1B的表达还可能与细胞的分化程度有关。     

应用MSP方法检测非小细胞肺癌RASSFlA基因启动子甲基化

目的探讨应用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测非小细胞肺癌（NSCLC）RASSF1A基因启动子甲基化情况。方法留取58例非小细胞肺癌患者手术标本及正常肺组织，甲基化特异性PCR分析RASSF1A基因启动子甲基化情况。结果58例非小细胞肺癌中RASSF1A基因启动子甲基化阳性率为34．5％，甲基化与各临床参数之间无显著相关性。结论原发性非小细胞肺癌中存在着较高比例的RASSF1A启动子过度甲基化，提示RASSF1A在非小细胞肺癌的发生中起着重要作用。     

肾癌组织中BHD、RASSF1A、SPINT2基因启动子的甲基化研究

目的：检测肾癌组织中伯特-霍格-杜贝（BHD）、Ras相关结构域家族（RASSF）1A、丝氨酸蛋白酶抑制剂（SPINT）2基因启动子的甲基化状态,探讨其在肾癌发病中的可能作用。方法：收集肾肿瘤组织标本24份,其中透明细胞癌19份、错构瘤2份、癌旁组织3份,应用甲基化特异性聚合酶链反应法分别检测其BHD、RASSF1A、SPINT2基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果：19例透明细胞癌同时检出3种抑癌基因甲基化3例,2种抑癌基因甲基化9例,1种抑癌基因甲基化7例。2例错构瘤中检出1种抑癌基因甲基化1例,3例癌旁组织中检出2种抑癌基因甲基化1例。检出BHD基因甲基化9例,均为透明细胞癌。检出RASSF1A基因甲基化8例,其中透明细胞癌7例,癌旁组织1例。检出SPINT2基因甲基化20例,其中透明细胞癌18例,错构瘤1例,癌旁组织1例。结论：肾癌组织中BHD、RASSF1A、SPINT2基因启动子区存在甲基化状态,抑癌基因甲基化可能在肾癌的发病机制中起重要作用。     

5-氮杂胞苷对RASSF1去甲基化与胃癌细胞增殖和凋亡的关系

目的：探讨5-氮杂胞苷对RASSF1基因去甲基化与胃癌细胞增殖和凋亡的关系。方法将SGC7901胃癌细胞分为AZA组（5-氮杂胞苷处理）和CON组（未用5-氮杂胞苷处理）,比较两组细胞RASSF1基因启动子甲基化、基因表达、细胞周期和凋亡的差异。结果 CON组SGC7901胃癌细胞RASSF1基因启动子MSP处于甲基化状态,AZA组胃癌细胞未检测到甲基化,AZA组RASSF1基因mRNA和蛋白质表达水平高于CON组细胞。AZA组SGC7901胃癌细胞G0/G1期和凋亡率高于CON组细胞（P〈0.05）,S期、G2/M期和PI低于CON组细胞（P〈0.05）。结论5-氮杂胞苷可逆转胃癌细胞RASSF1基因启动子甲基化状态,使沉默的RASSF1基因重新获得表达而抑制胃癌细胞的增殖并促进其凋亡。     

孕妇血浆中胎源性RASSF1A基因在无损性产前诊断中的应用研究

本研究旨在探讨运用非性别依赖的甲基化表观遗传学标记RASSF1A基因作为孕妇血浆中循环游离胎儿DNA存在的通用性标志的可行性.采用2种方法提取孕妇血浆游离DNA,选用其中效果较好的用磁珠法提取20例标本的游离DNA;采用RT-PCR方法扩增SRY基因以及甲基化酶处理后的RASSF1A基因,且对酶处理后RASSF1A基因的扩增体系进行条件优化.结果表明,在20例标本中11例检测有SRY基因,且与胎儿出生后性别相符;选用优化后的PCR体系扩增甲基化酶处理后的RASSF1A基因,在18例标本中检测有RASSF1A基因,在2例标本中未检测到此基因.结论：甲基化RASSF1A基因与SRY基因相比,不受胎儿性别限制,可作为广泛性胎儿特异性表观遗传学标记物,用于临床无损性产前诊断.     

RASSF1基因与肿瘤的关系

RASSF1基因位于染色体3p21．3，其转录本RASSF1A已被确认为一种候选肿瘤抑制基因，在多种实体肿瘤中表达异常，参与细胞周期和细胞凋亡的调控，并抑制细胞生长，但作用机理尚未阐明。     

RASSF1A基因对膀胱癌细胞凋亡及化疗药物敏感性的影响

目的探讨RASSF1A基因表达对人膀胱癌细胞凋亡及对化疗药物敏感性的影响。方法采用脂质体介导的基因转染法建立野生型和突变型RASSF1A基因的真核表达载体及空载体转染膀胱癌BIU87细胞株,细胞株分为空白对照组(A组)、空载组(B组)、转染突变型RASSF1A组(C组)与转染野生型RASSF1A组(D组),B,C,D组采用化疗药物丝裂霉素作用于细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖程度,原位凋亡细胞检测技术检测膀胱癌BIU87细胞凋亡。Western blot测定Caspase-3蛋白的表达水平。结果成功建立稳定表达野生型和突变型RASSF1A基因的膀胱癌细胞株;加入丝裂霉素前、后D组细胞增殖比、凋亡指数及Caspase-3蛋白表达水平与A,B组比较差异均有统计学意义(P<0.05),C组与A,B组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论野生型RASSF1A的重表达可促进膀胱癌BIU87细胞凋亡,提高膀胱癌细胞对丝裂霉素的敏感性。     

SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测在早期肺癌的诊断研究

目的：探讨SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测在早期肺癌的诊断价值。方法：选择2020年8月-2021年3月期间我院收治肺部小结节患者107例为研究对象,其中经病理活检确认早期肺癌患者72例（肺癌组）,肺部良性病变患者35例（对照组）。采集患者肺泡灌洗液（BALF）样本,进行细胞学检查且荧光PCR法测定样本中SHOX2和RASSF1A基因甲基化阳性率,分析甲基化情况及其病理诊断关系。结果：肺癌组和对照组SHOX2基因甲基化阳性率分别为51.4%和2.9%,RASSF1A基因甲基化阳性率分别为61.1%和5.7%,均差异显著（P<0.05）,且SHOX2和RASSF1A基因甲基化任意阳性率显著高于细胞学检查阳性率（P<0.05）;并联SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测早期肺癌的灵敏度和特异性分别为76.4%(55/72)、91.4%(32/35),且在不同病理分型中存在差异,灵敏度在小细胞癌中最高（95.7%,22/23）,鳞癌次之（76.5%,13/17）,腺癌最低（68.8%,22/32）。结论：SHOX2和RASSF1A基因甲基化任意阳性率在患者BALF中诊断...