FQ-PCR检测肠黏膜结核杆菌DNA对肠结核的诊断价值

目的建立一种实时定量检测结核分枝杆菌（MTB）插入序列IS6110 DNA的方法,探讨其在肠结核（ITB）诊断中的价值。方法采用FQ-PCR技术对36例内镜活检ITB标本（30例石蜡、6例新鲜组织）、36例Crohn’s disease标本（16例石蜡手术标本,15例石蜡内镜活检标本,5例新鲜内镜活检组织）及34例阴性对照标本进行IS6110 DNA的实时定量检测,并比较上述标本抗酸染色结果。结果13例ITB抗酸染色阳性,CD无1例阳性,抗酸染色对ITB诊断的敏感性36.11%。MTBIS6110DNA检测结果：23例ITB（63.89%）阳性,6例CD（16.67%）阳性,另有1例阳性为升结肠腺癌癌旁正常组织。MTBIS6110 DNA在ITB与CD中的阳性率差异有统计学意义（P〈0.05）。FQ-PCR对ITB诊断的敏感性为63.89%,特异性83.33%。FQ-PCR敏感性显著高于抗酸染色（P〈0.05）。MTBIS6110 DNA阳性的ITB标本其定量结果范围为2.44×10^-4-2.26×10^1拷贝/细胞。结论FQ-PCR检测MTBIS6110 DNA是一种快速有效的ITB诊断方法,其定量范围广,检测灵敏度高。对活检组织少、病理改变不典型、抗酸染色阴性组织的诊断和鉴别诊断尤有意义。     

荧光定量聚合酶链反应在淋巴结结核鉴别诊断中的应用

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测结核分枝杆菌(MTB)DNA在淋巴结结核鉴别诊断中的作用。方法选取近4年来74例淋巴结结核病例及24例其他对照病例,同时作细针吸取细胞学(FNAC)、抗酸染色、MTBDNA检测,采用χ2检验比较抗酸染色与FQ-PCR检测阳性率的差异。结果 74例标本中,抗酸染色阳性32例(43.2%),MTBDNA阳性52例(70.3%),抗酸染色与FQ-PCR检测MTB的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。结论在干酪型淋巴结结核诊断中PCR阳性率达82.3%,与涂片抗酸染色相比诊断率明显提高,有很大优势和应用价值。     

Xpert MTB/RIF技术在高海拔地区结核病诊断中的应用

目的探讨Xpert MTB/RIF技术在高海拔地区结核病(TB)诊断中的应用价值。方法收集2016年6月—2018年1月西藏自治区人民医院1 759例疑似TB患者各类临床样本,同时进行Xpert MTB/RIF法结核分枝杆菌(MTB)检测和涂片抗酸染色镜检(包括萋尼抗酸染色和金胺O荧光染色),比较2种方法的阳性率。结果 1 759例疑似TB患者中,有100例(5.7%)抗酸染色镜检阳性,254例(14.4%)Xpert MTB/RIF法检测阳性,2种方法阳性率差异有统计学意义(χ2=628.24,P0.05)。有37例(2.1%)样本Xpert MTB/RIF法检出对利福平耐药。100例抗酸染色镜检阳性和1 657例阴性样本中,Xpert MTB/RIF法分别检出100例和154例阳性。18～24岁患者2种方法阳性率均最高,且利福平耐药检出率也均最高;其次是18岁患者。男性和女性之间2种方法阳性率、利福平耐药检出率差异均无统计学意义(χ~2值分别为0.73、0.80、0.06,P0.05)。结论 Xpert MTB/RIF法在样本采集当天即可获得结果,敏感性优于显微镜检查,是高海拔地区TB快速诊断的有效方法,可更好地为临床早期诊断TB和尽早制定用药方案提供实验室依据。     

荧光定量PCR诊断肺结核的临床应用研究——附179例检测分析

目的：探讨荧光定量PCR（fluorescent quantitative PCR,FQ—PCR）诊断肺结核病的临床价值。方法：179例临床确诊的结核病患者（结核病组）和41例非结核呼吸系统疾病患者（对照组）的痰标本,分别应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法和结核杆菌培养法检测。对3种方法的阳性检出率进行统计学比较分析。结果：VQ-PCR法检测结核病组痰标本的阳性检出率为64．3％（115／179）,明显高于痰涂片抗酸染色法的20．7％（37／179）及结核杆菌培养法的41．3％（74／179）。3种方法检测对照组41例的结果均为阴性,特异度为100％（41／41）。结论：FQ-PCR荧光定量法的敏感度和特异度明显高于痰涂片抗酸染色法和结核杆菌培兼法．用干诊断结核痛具有良好的临康应用前景。     

结核性脑膜炎患者中几种病原诊断检测技术的应用

目的探讨不同病原学检测方法在结核性脑膜炎(结脑)临床诊断中的应用。方法对临床诊断为结脑患者60例(结脑组)和非结脑患者70例(非结脑组)的脑脊液标本,同时进行离心涂片抗酸染色、结核菌BACTEC MGIT 960快速培养、实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)、玻片离心改良抗酸染色检测,并对其结果进行比较分析。结果结脑组标本中,涂片抗酸染色、结核菌快速培养、FQ-PCR检测、玻片离心改良抗酸染色法的检出率分别为11.7%(7/60)、6.7%(4/60)、48.3%(29/60)、61.7%(37/60)。非结脑组中2例玻片离心改良抗酸染色阳性。玻片离心改良抗酸染色法检出率高于其他3种检测方法,差异有统计学意义(P0.05),且能发现细胞内抗酸杆菌,应用该种方法检测,4例结核菌培养阳性患者的8份脑脊液标本均为阳性。结论玻片离心改良抗酸染色法操作简便、快速,可明显提高脑脊液中抗酸杆菌的检出率,既能检出细胞外抗酸杆菌,也可检出细胞内抗酸杆菌,此方法可能有助于提高病原检测的阳性率,值得进一步探讨其在结脑早期诊断中的临床意义。     

结核感染T细胞斑点试验与荧光定量PCR在肺外结核诊断中的应用

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)与荧光定量聚合酶链反应(PCR)在肺外结核病诊断中的临床应用价值。方法肺外结核组125例,均进行T-SPOT.TB、TB-PCR和抗酸杆菌涂片检测;对照组非结核疾病患者87例,均进行上述检测。结果 125例肺外结核患者,涂片抗酸杆菌阳性4例,阳性率3.2%;PCR阳性57例,阳性率45.6%;T-SPOT.TB阳性96例,阳性率76.8%。T-SPOT.TB与TB-PCR两种方法共检测阳性患者104例,阳性率83.2%。对照组PCR阳性3例,阳性率3.4%;T-SPOT.TB阳性4例,阳性率4.6%。结论 T-SPOT.TB检测技术敏感性及特异性较高,在肺外结核病的诊断上有重要的实用价值,与PCR联合检测可进一步提高肺外结核的检出率。     

3种方法检测结核分枝杆菌的评价

目的评价荧光定量基因扩增法(FQ-PCR法)、胶体金法、痰涂片萋-纳氏抗酸染色法检测结核分枝杆菌情况,寻求结核分枝杆菌的快速、准确和特异性检测手段。方法选择经临床确诊96例肺结核患者痰液,采用3种方法进行检测。以临床确诊结核组为"真阳性",以对照组为"真阴性",分别计算3种方法的灵敏度、特异度、符合率、正确诊断指数、阴性及阳性预测值。结果 3种方法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为:FQ-PCR法42.7%,胶体金法48.9%,痰涂片萋-纳氏抗酸染色法12.5%,FQ-PCR法联合胶体金法66.7%。经χ2检验,FQ-PCR法、胶体金法对结核分枝杆菌的检出率优于痰涂片萋-纳氏抗酸染色法;FQ-PCR法联合胶体金法对结核分枝杆菌的检出率优于单独采用FQ-PCR法、胶体金法的检出率;FQ-PCR法具有高度灵敏性和特异性,结果的可信度优于其他两种方法,联合胶体金法诊断可在保持高灵敏性、高特异性的同时,进一步提高结核分枝杆菌检出率。结论对早期诊断可获得较好治疗效果的肺结核患者应该选择灵敏度高的诊断方法,FQ-PCR法联合胶体金法检测有一定优势。     

荧光定量聚合酶链反应快速检测胸腹水抗酸杆菌的临床应用

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测胸腹水抗酸杆菌的实用价值及其临床应用.方法 比较FQ-PCR法、涂片染色法及罗氏培养法检测80例结核性胸腹水标本的阳性检出率.结果 涂片染色法阳性率为11.25%,FQ-PCR法为45.0%,两者比较差异有统计学意义(χ2=22.539 1,P＜0.05);以罗氏培养法...     

Xpert MTB/RIF在快速诊断肺结核及利福平耐药中的临床应用

目的探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)在肺结核诊断及其耐药性检测中的临床应用价值。方法收集408例结核患者标本,同时采用抗酸染色法、固体培养法及Xpert MTB/RIF检测,并对其结果进行分析比较。结果 408例标本抗酸染色法、固体培养法和Xpert MTB/RIF检测出结核分枝杆菌的阳性率分别为25.00%(102/408)、42.16%(172/408)和58.09%(237/408)。经统计学分析,Xpert MTB/RIF阳性率高于抗酸染色法和固体培养法,差异均有统计学意义(P0.05)。其中,固体培养法和Xpert MTB/RIF检测均为阳性的标本共168例,经比例法药物敏感试验与Xpert MTB/RIF检测利福平耐药率分别为26.19%(44/168)和27.38%(46/168),2种方法耐药率比较,差异无统计学意义(P0.05),以比例法药敏试验作为金标准,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的敏感度为97.73%(43/44),特异性为97.58%(121/124)。结论 Xpert MTB/RIF可快速、准确检测结核分枝杆菌及利福平耐药性,具有重要的临床应用价值。     

刍议活动性肺结核早期检验中半巢式全自动实时荧光定量PCR检测与涂片抗酸染色法的应用研究

目的 评估半巢式全自动实时荧光定量PCR检测与涂片抗酸染色法在活动性肺结核早期检验中的应用效能。方法 选取2022年9月—2023年9月于平邑县结核病防治所就诊的90例疑似肺结核患者为研究对象,采用Xpert MTB/RIF技术、涂片抗酸染色法检验及简单法固体培养法同时检测90例疑似肺结核患者痰标本,对检测结果进行比较。结果 以固体培养结果作为金标准,痰培养阳性率85.56%,阴性率14.44%。Xpert MTB/RIF阳性率84.44%、阴性率15.56%。涂片抗酸染色法检验阳性率48.88%、阴性率51.11%。Xpert MTB/RIF检验的灵敏度97.40%、准确度96.67%、阳性预测值98.68%以及阴性预测值85.71%均高于涂片抗酸染色法检验50.64%、52.22%、88.64%、17.39%,差异有统计学意义(χ²=43.768、46.722、5.922、22.546,P均<0.05)。结论 与涂片抗酸染色法相比,在活动性肺结核早期检验中采用半巢式全自动实时荧光定量PCR检测(Xpert MTB/RIF)的应用效能更高。     

痰液结核杆菌的检查方法结果比较

目的：探讨不同方法结果比较痰液结核杆菌(TB)阳性率。方法：痰直接涂片和浓集涂片找抗酸杆菌；痰培养；实时动态荧光定量PCR(FQ—PCR)检测痰液TB—DNA。结果：浓集法较直接法阳性率有大幅提高，培养法阳性率较低。对50份来自临床诊断肺结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明，FQ—PCR检出28份阳性，直接法检出6份阳性，浓集法检出16份阳性，培养法检出12份阳性，其中1例假阳性，其余证实无结核分枝杆菌的标本，几种方法检查均为阴性。结论：涂片检查结核杆菌应提倡用浓集法，FQ—PCR法检测TB—DNA可列入TB实验诊断常规项目，涂片。培养，及FQ—PCR同时检测可从不同方面满足临床需要。     

Xpert MTB/RIF检测技术在肺结核实验室诊断中应用价值探析

目的：探讨结核分枝杆菌及利福平耐药检测(Xpert MTB/RIF)在肺结核实验室诊断中的临床价值。方法：选取2020年1月至2022年1月收治的118例疑似肺结核患者作为研究对象,所有疑似患者均采集痰液标本,开展痰培养、痰涂片抗酸染色、Xpert MTB/RIF检测,并以痰培养为金标准,分析痰涂片抗酸染色法、Xpert MTB/RIF检测诊断肺结核的临床价值;采用kappa检验验证痰涂片抗酸染色法、Xpert MTB/RIF检测诊断肺结核与痰培养的一致性。结果：118例疑似患者痰培养检出92例,其中痰涂片抗酸染色法检出80例,检出率为86.96%(80/92);Xpert MTB/RIF检测检出90例,检出率为97.83%(90/92);Xpert MTB/RIF检测检出率高于痰涂片抗酸染色法,差异有统计学意义(χ²=7.731,P=0.005);Xpert MTB/RIF检测诊断肺结核的灵敏度[96.74%(89/92)]、准确度[96.61%(114/118)]及阴性预测值[89.29%(25/28)]高于痰涂片抗酸染色法[84.78%(78/92)、86....     

结核病分子生物学诊断研究进展

早期、特异的诊断对于结核病(Tuberculosis,TB)患者的及时治疗以及切断TB传播链、保护易感人群等至关重要[1].WHO在全球TB控制规划中指出,TB主要应通过实验室诊断获得确诊.这一文件确立了实验室诊断在TB控制中的重要作用.传统的TB实验室检查主要是涂片抗酸染色检查和结核分枝杆菌(Mvcobacterium tuberculosis,MTB)培养法.抗酸染色检查敏感性差,细菌量至少要大于5&#215;106/L才能检测到阳性结果,而且无法区分MTB和非MTB感染.MTB培养阳性是TB诊断的金标准,但报告周期过长(2～8周),很难满足临床需要[2].因此,临床迫切需要更为快速、特异和敏感的TB的诊断方法.……     

Xpert MTB/RIF与涂片抗酸染色在结核病诊断中的应用价值评估

目的:探讨Xpert MTB/RIF技术与涂片抗酸染色在结核病诊断中的应用价值。方法:选取东莞东华医院2017年6月1日至2018年8月31日疑似患结核病的住院患者病例639份,同时进行了涂片抗酸染色以及Xpert MTB/RIF检测,以出院时的临床诊断为标准,比较Xpert MTB/RIF技术与涂片抗酸染色的阳性率和符合率等,以及比较送检标本的类型情况。结果:在639例病例中,Xpert MTB/RIF阳性率为16.1%(103/639),涂片抗酸染色的阳性率为12.7%(81/639),经卡方检验发现两种检测方法存在统计学差异(P0.05),Xpert MTB/RIF比常规的涂片抗酸染色检测的阳性率高。其中在诊断为结核的190个病例中,Xpert MTB/RIF的阳性符合率为50.0%(95/190),阴性符合率为98.2%(441/449);抗酸涂片的阳性符合率为41.1%(78/190),阴性符合率为99.3(446/449)。送检的标本主要以灌洗液和痰为主,灌洗液和痰的Xpert MTB/RIF阳性率分别为17.1%和19.2%,涂片抗酸染色的阳性率分别为12.4%和23.1%。合格痰与不合格痰的阳性检出率分别为39.6%和15.2%,经卡方检验发现合格与不合格痰标本的抗酸杆菌的阳性检出率存在统计学差异(P0.05)。结论:Xpert MTB/RIF技术在诊断结核病中有显著的优势,有助于临床医生对结核患者进行早期快速的诊断治疗,满足临床需要。     

荧光定量PCR分析法在结核病诊断中的应用

为了探讨荧光定量PCR(FQ PCR)技术检测结核分枝杆菌的临床应用 ,本文采用FQ PCR技术检测 14 5例标本 ,并与培养法、抗酸染色法和PCR 电泳法进行比较。结果 :在 115例来自结核病人的高度怀疑有结核分枝杆菌的标本中 ,FQ PCR法检出阳性为 5 3例 ,其检出率高于PCR 电泳法检出率(4 8/ 115 )、培养法检出率 (4 3/ 115 )和抗酸染色法检出率 (31/115 ) ,30例非结核病的病人标本 ,四种方法均未检出结核分枝杆菌。FQ PCR法的阳性检出最低值为 10 3 拷贝 /ml,PCR 电泳法为 10 4拷贝 /ml。结果表明 ,FQ PCR技术是高度灵敏、高度特异的快…     

LAMP法在临床诊断的肺结核患者BALF标本中的应用评价

目的评价环介导等温扩增法(LAMP)在临床诊断的肺结核与非肺结核两组患者中支气管肺泡灌洗液(BALF)结核分枝杆菌的检测效果。方法收集2017年6月至2018年2月于遵义医学院附属医院住院的患者130例,其中临床诊断肺结核51例,非肺结核79例,分别行支气管肺泡灌洗(BAL)进一步寻找病原体。所有标本均送支气管刷检物行涂片抗酸染色,支气管肺泡灌洗液分别行结核分枝杆菌罗氏培养及LAMP检测,并进行统计学分析。分别计算LAMP法及培养法的阳性率及阳性检出率。结果 51例临床诊断肺结核患者中,抗酸染色阳性3例,阳性率为5.9%(3/51),18例BALF培养阳性,阳性率为35.3%(18/51),28例LAMP阳性,阳性率为54.9%(28/51)。非肺结核组79例标本中,支气管刷检物行涂片抗酸染色及肺泡灌洗液培养均阴性,LAMP法阳性2例(1例临床诊断为肺癌,1例临床诊断为肺炎)。结论在BALF标本中,TBLAMP法具有较高的灵敏度及特异度,对结核分枝杆菌的阳性率及阳性检出率高于罗氏固体培养,并明显高于抗酸染色法,且LAMP法具有快速、简便、准确的特点,可替代抗酸染色法用于临床上早期发现结核病患者。     

免疫磁珠荧光染色法在痰液结核分枝杆菌检测中的应用

目的 建立免疫磁珠 (immunomagnetic beads,IMB)荧光染色法并评估其在临床痰液标本结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）检测的应用价值。方法 利用 IMB富集纯化结核分枝杆菌,利用自动染色机和自动显微镜智能软件扫描系统进行荧光染色及结果分析,建立结核分枝杆菌 IMB荧光染色法。用实验室培养的标准菌株评估该方法的检测灵敏度和特异度。同时选取 2021年 5月～2022年 2月在山东省第二人民医院就诊的 145例疑似肺结核患者作为临床研究对象,取每例患者的痰液标本,选用萋 -尼氏（Ziehl-Neelsen,Z-N）抗酸染色法、 IMB荧光染色法和 BACTEC 960系统培养法检测结核分枝杆菌感染情况,比较三种方法的阳性检出率、灵敏度、特异度和准确率,验证 IMB荧光染色法在诊断结核分枝杆菌感染中的优势和临床应用价值。结果 IMB荧光染色法的最低结核分枝杆菌检测量是 30 CFU/ml,在标本含菌量≥ 30 CFU/ml时,该方法学的敏感度为 100%;而在 10 CFU/ml时则降到 56%,该方法检测的特异度为 100%。在利用临床标本检测中, IMB荧光染色法、 Z-N抗酸染色法和培养法对于结核分枝杆菌的阳性检出率分别为 73.10%,40.69%和 78.62%;IMB荧光染色法的阳性率明显高于传统 Z-N抗酸染色法的阳性率,差异具有统计学意义（χ2=31.059 9,P＜ 0.05）;略低于培养法,差异无统计学意义（χ2=1.205 2,P＞ 0.05）。IMB荧光染色法在临床标本检测中的灵敏度、特异度和准确率分别为 92.98%,100.00%和 94.48%,明显高于 Z-N抗酸染色法的灵敏度、特异度和准确率（47.37%,83.87%和 55.17%）,差异具有统计学意义（χ2=56.664 7,5.438 6,P＜ 0.05;59.479 2,均 P＜ 0.05）。结论 研究建立的 IMB荧光染色法优于目前应用的其他染色法,可为结核病早期诊断提供新方法。     

实时荧光定量PCR在非典型结核患者纤支液TB-DNA检测中的应用

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在非典型结核患者纤支液结核分支杆菌(TB)-DNA检测中的应用价值。方法收集该院2009年1月至2010年12月期间,526例临床疑似结核或肺部疾病患者纤维支气管镜检查,行支气管肺泡灌洗,取灌洗液进行实时荧光定量PCR法检测TB-DNA,同时采用常规浓集法涂片查找抗酸杆菌,比较两种检测方法在结核病患者标本中的阳性检出率。结果 526例肺泡灌洗液中阳性44例,TB-DNA阳性检出率为8.54%,常规浓集涂片阳性12例,抗酸杆菌阳性检出率2.28%,PCR法检测TB-DNA阳性检出率明显高于常规抗酸涂片法(P<0.05)。结论 TB-DNA定量能显著提高结核杆菌的检出率,优于传统的涂片、培养等方法,可作为结核病病原学诊断的首选项目使用。     

聚合酶链反应检测结核分枝杆菌的临床应用价值

目的探讨用聚合酶链反应(PCR)荧光定量法检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法对189例临床确诊的结核病患者(结核病组)和45例非结核呼吸系统疾病患者(对照组)的痰或支气管灌洗液标本,分别应用PCR实时荧光定量法、涂片抗酸染色法和结核杆菌培养法检测,然后对3种方法的阳性检出率进行统计学分析。结果 PCR法检测结核病组标本的阳性检出率为74.1%(140/189),明显高于涂片抗酸染色法的24.9%(47/189)及结核杆菌培养法的43.9%(83/189)。3种方法检测45例对照组患者的结果均为阴性,特异度为100.0%(45/45)。结论 PCR荧光定量法的敏感度和特异度明显高于涂片抗酸染色法和结核杆菌培养法,用于结核分枝杆菌的鉴定简便、快速、特异,适于在卫生检疫系统和临床实验室应用。对于结核病的及早诊断、预防和疗效监测具有良好的临床应用前景。     

5种结核分枝杆菌检测方法的临床应用价值研究

目的评价5种结核分枝杆菌检测方法对肺结核的辅助诊断价值。方法统计2018年1-10月在广州医科大学附属第一医院住院的患者,分为临床诊断肺结核患者和临床诊断非结核普通住院患者共209例,用结核培养法、PCR-荧光探针法、结核感染T淋巴细胞酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB)法、抗酸染色法、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)法分别进行检测,比较这5种方法在临床诊断中的价值。结果结核培养法、抗酸染色法、PCR-荧光探针法、T-SPOT.TB法、Xpert MTB/RIF法阳性率分别为16.8%、23.4%、39.2%、53.0%、52.2%。结核培养法灵敏度为52.17%,特异度为100.00%;抗酸染色法灵敏度为42.45%,特异度为96.67%;PCR-荧光探针法灵敏度为76.00%,特异度为97.98%;T-SPOT.TB法灵敏度为91.67%,特异度为79.80%;Xpert MTB/RIF法灵敏度为99.09%,特异度为100.00%。结论Xpert MTB/RIF法是最值得推荐的方法,也是唯一可以作为诊断结核感染的分子生物学方法,如果能够联合这几种方法,可以快速、准确地对结核感染进行诊治。