基于iTRAQ技术筛选妊娠糖尿病患者血清差异蛋白

目的 应用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）联合液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术筛选和鉴定妊娠糖尿病（GDM）患者血清差异蛋白谱,探讨GDM的发病机制以期寻找潜在生物标志物。方法 收集2020年10月至2021年6月产检的孕晚期孕妇血样保存;追踪其妊娠结局,收集最终确诊为妊娠糖尿病及其正常对照组孕妇血清样本各4例,应用iTRAQ联合LC-MS/MS技术对样本进行鉴定,对差异蛋白进行生物信息学分析并构建蛋白互作（PPI）网络。结果 妊娠糖尿病及其对照组中共鉴定出215种差异表达蛋白,其中47种蛋白表达差异显著,上调31个,下调16个;生物信息学分析显示研究组中存在与脂质代谢、凝血级联激活、补体系统及炎性反应相关的蛋白表达异常;通过构建PPI网络发现差异表达蛋白主要分为：以APOB、APOE及APOM为代表的脂质代谢相关蛋白,且这些蛋白处于蛋白质互作网络的中心位置;以CRP、IL-6及C1R为代表的炎性因子及补体相关蛋白;以SERPING、F7及F9为代表的凝血相关蛋白,其结果与KEGG富集通路分析结果基本一致。结论 iTRAQ联合LC-MS/MS技术能有效地筛选出妊娠糖尿病...     

应用iTRAQ定量蛋白质组学技术对β-地中海贫血患者血浆差异蛋白的定量分析

目的应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)分析β-地中海贫血患者血浆蛋白,筛选出差异蛋白及其功能分析。方法通过强阳离子交换色谱分析法的8种不同同位素标记的i TRAQ和液相色谱法以及串联质谱分析了地贫组和健康照者血浆蛋白。通过Mascot软件分析和GO分析表达差异的蛋白。结果与对照组相比,实验组中共鉴定出有定量信息的蛋白质58个,包括49个上调蛋白和9个下调蛋白。生物信息学分析显示差异表达的蛋白主要参与凝血、凝固止血、伤口愈合、应对受伤、体液调节的水平、急性炎症反应、囊泡、介导转运、血小板激活、血小板脱粒等过程,这些表达差异的蛋白中选择5个显著表达差异作为候选蛋白,分别是CRP、SAA1、HBA、FBLN1、HRG。结论本研究发现这5种蛋白在β-地中海贫血发病过程中发挥重要作用,可能作为该病潜在的临床筛查生物标志物。     

膝骨性关节炎差异表达蛋白血清标记物筛选:iTRAQ技术的重要性

背景:在临床上对于早期膝关节骨性关节炎尚缺乏有效的诊断方式。蛋白质组学是从整体的角度分析细胞的所有蛋白质组成、表达水平及修饰状态的学科,可以了解蛋白与蛋白间的相互作用及联系,从而揭示蛋白功能与细胞生命活动的规律。目的:通过对骨性关节炎K/L分级的各阶段的血清样本进行ITRAQ定量蛋白组学分析检测,以发现骨性关节炎各个时期的的潜在分子标志物。方法:收集膝关节骨性关节炎患者60例,参照Kellgren-Lawrence(K-L)分级标准,分为K-L 0、Ⅱ、Ⅳ级的亚组,每个亚组随机选取10例男性与10例女性。去除血清高丰度蛋白,进行稳定同位素116、117、118的iT RAQ标记、反相色谱柱分离、质谱检测及Swissport数据库检索;再利用生物信息学软件进行分析。结果与结论:通过对不同样品的iT RAQ肽段实验标记、Q-star质谱鉴定和MASCOT搜库,共筛选出有意义差异蛋白169个,K-L 0级与K-LⅣ级差异蛋白153个;K-L 0级与K-LⅡ级差异蛋白153个;K-LⅡ级与K-LⅣ级差异蛋白145个。结果表明应用iT RAQ技术可筛选出与骨性关节炎发生发展的多个差异蛋白,提示iT RAQ技术对于骨性关节炎蛋白质组学血清生物标记物的研究有重要意义。     

基于血清蛋白质组学分析桥本甲状腺炎合并肥胖患者血清蛋白质差异表达

目的 探讨体质量对桥本甲状腺炎(HT)患者中肥胖与正常体质量对血清中蛋白质表达差异的影响,探寻存在的差异蛋白质与相关通路。方法 收集桥本甲状腺炎患者中肥胖与正常体质量患者血清各10例,健康对照组血清10人,提取血清中蛋白质,使用胰蛋白酶降解,进行液相色谱-质谱联用分析,与对照组对比分析,鉴定两组差异蛋白质的表达变化,并进行生物信息学分析。结果 检测到正常体质量的桥本甲状腺炎组与对照组的血清差异蛋白质共有180个,差异表达的蛋白质参与的通路有Relaxin信号通路,心肌细胞中肾上腺素能信号通路和心肌收缩等;桥本甲状腺炎合并肥胖组与对照组进行对比,血清中差异蛋白质共有232个,差异蛋白质相关的通路有TRP通道的炎性反应介质调节,C型凝集素受体信号通路,Apelin信号通路;正常体质量的桥本甲状腺炎和桥本甲状腺炎合并肥胖组对比,结果显示血清中差异蛋白质共有212个,差异蛋白质富集的通路是雌激素信号通路。结论 桥本甲状腺炎患者是否合并肥胖对血清中蛋白质表达具有一定的影响,合并肥胖时可能增加向甲状腺癌转化的风险。该结论为桥本甲状腺炎进一步的研究提供理论基础,对临床诊断与治疗具有重要意义。     

食管癌患者血浆外泌体蛋白标志物TMT定量蛋白质组学筛选及分析

目的 探讨食管癌患者血浆外泌体蛋白的表达变化,筛选并分析食管癌诊断的生物标志物.方法 采用定量蛋白质组学串联质量标签(TMT)标记技术对3例食管鳞状细胞癌患者及3例健康体检者的血浆外泌体蛋白进行检测及定量分析,筛选食管癌患者血清外泌体中发生显著性变化的差异蛋白.采用Proteome Discoverer、STRING等...     

基于iTRAQ技术的早发型重度子痫前期患者胎盘组织定量蛋白质组学研究

目的 应用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）联合液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术筛选和鉴定早发型重度子痫前期（EOSP）患者胎盘组织差异蛋白,探讨EOSP的发病机制并寻找早期生物标志物。方法 收集2020年5月至2021年5月于文昌市人民医院产检并分娩的孕妇,收集其孕早期血样保存;追踪其妊娠结局,收集最终诊断为EOSP及其正常对照组孕妇胎盘组织各4例,应用iTRAQ联合LC-MS/MS技术对样本进行鉴定,利用生物信息学分析得到的差异表达蛋白;应用酶联免疫吸附测定（ELISA）对孕早期血样中的关键蛋白进行验证。结果 EOSP及其对照组中共鉴定出278种差异表达蛋白,其中37种蛋白表达差异显著,上调21个,下调16个;生物信息学分析显示EOSP中存在与脂质代谢、凝血级联激活及补体系统相关的蛋白表达异常;利用ELISA法验证两组患者孕早期血清关键蛋白基质金属蛋白酶2(MMP2)水平,数据显示EOSP组中MMP2水平较对照组显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 iTRAQ联合LC-MS/MS技术能有效地筛选出EOSP的胎盘组织差异表达蛋白,MMP2有可能成为早期...     

蛋白质组学技术鉴定吉兰-巴雷综合征患者血清急性期反应蛋白的表达

背景：吉兰-巴雷综合征患者血液中存在与发病有关的抗体、补体和细胞因子,以蛋白质组学技术分离鉴定这些标志蛋白,可为寻找新的药物靶标提供依据。 目的：以蛋白质组技术比较吉兰-巴雷综合征患者与正常对照组血清的差异表达蛋白。 方法：采集确诊的吉兰-巴雷综合征患者和正常者血清各30例,提取血清蛋白质以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳,图象分析软件Imagemaster 2D分析电泳图谱,MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定差异表达蛋白。 结果与结论：在吉兰-巴雷综合征患者与正常者中24种蛋白质的表达量显著不同,其中α-2-巨球蛋白,血浆铜蓝蛋白,血清淀粉样P物质,丛生蛋白,抗糜蛋白酶,触珠蛋白,血红素蛋白,α-1-抗胰蛋白酶,血清转铁蛋白等9种蛋白质被鉴定为急性期反应蛋白。结果说明吉兰-巴雷综合征患者血清中急性期反应蛋白表达量发生了明显变化,加深了对吉兰-巴雷综合征发病分子机制的理解。     

蛋白质组学技术在前列腺癌血清标志物筛选中的应用

作为目前广泛应用的前列腺癌血清标志物,前列腺特异抗原（PSA）尚不够理想。与单测血清PSA相比,应用蛋白质组学相关技术的优越之处在于诊断的全面性,多结点联检具有更高的诊断敏感性和特异性。近年来,应用SELD I-TOF-MS等方法已经发现和鉴定了许多候选前列腺癌标志物,本文就蛋白质组学技术在前列腺癌肿瘤标志物筛选方面的研究作一综述。     

肺鳞癌患者和健康人血清的差异蛋白质组学研究

目的：比较肺鳞癌患者和健康人血清蛋白质组的差异,为筛选肺鳞癌血清分子标志物提供依据。方法：以5例健康人和5例I期肺鳞癌患者的血清为样本,采用15%的聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离血清蛋白质,Bandleader凝胶图像分析软件识别两种血清样本差异的蛋白质条带,电喷雾-四极杆-串联质谱（ESI-Q-TOF MS/MS）鉴定差异蛋白质条带中的蛋白质。Western印迹检测差异蛋白质结合珠蛋白-2（haptoglobin-2,HP-2)在肺鳞癌患者和健康人血清中的表达。结果：建立了健康人和肺鳞癌患者血清样品的一维凝胶电泳图谱,图像分析识别了4条差异蛋白质条带,质谱鉴定出29种非冗余的血清蛋白质。Western印迹证实了HP-2在肺鳞癌患者和健康人血清中的差异表达。结论：29种血清差异蛋白质为筛选肺鳞癌的血清分子标志物提供了实验依据。     

应用TMT结合质谱技术筛选高原红细胞增多症患者血浆差异表达蛋白

目的:应用串联质谱标签(TMT)结合质谱技术比较高原红细胞增多症(HAPC)患者和健康对照者血浆中的差异表达蛋白。方法:收集HAPC患者血浆4例,与之相匹配的健康对照组血浆5例,组内等量混合后利用多重免疫亲和层析柱去除14种高丰度蛋白,TMT试剂标记后样本进行液相色谱分离,采用HPLC-MS/MS质谱鉴定及相对定量;获取HAPC患者和健康对照血浆各20例,ELISA方法验证部分筛选的差异蛋白。结果:共鉴定和定量了1 094种蛋白,差异表达的蛋白有249种,其中HAPC组较健康对照组表达量≥1.5倍的上调蛋白质有162种,表达量≤67%的下调蛋白质有87种;C反应蛋白和血清淀粉样蛋白A在HAPC组中较健康对照组表达量均上调(P0.05)。结论:筛选出多种与炎症相关的差异表达蛋白,为深入研究HAPC发生机制奠定了良好基础。     

差异表达蛋白质组学中的常用技术

人类基因组计划基本完成后，人们又开始对生物所有蛋白质性质和功能进行大规模研究，即蛋白质组学。尤其是由于差异表达蛋白质组学在制药和疾病研究中的巨大潜力，更是倍受重视。蛋白质组学的极端复杂性决定了它所应用的技术更加复杂和综合，本文简要介绍了在差异表达蛋白质组学中的常用技术。     

差异表达蛋白质组学中的常用技术

人类基因组计划基本完成后,人们又开始对生物所有蛋白质性质和功能进行大规模研究,即蛋白质组学。尤其是由于差异表达蛋白质组学在制药和疾病研究中的巨大潜力,更是倍受重视。蛋白质组学的极端复杂性决定了它所应用的技术更加复杂和综合,本文简要介绍了在差异表达蛋白质组学中的常用技术。     

转甲状腺素蛋白在结直肠肿瘤患者血清中的差异表达

目的探讨转甲状腺素蛋白(transthyretin,TTR)与结直肠肿瘤恶性度的相关性。方法收集12例正常人,12例结直肠息肉与47例结直肠恶性肿瘤患者血清。所有受试者均按性别、年龄、肿瘤分期进行分组。利用Western-blot的方法检测转甲状腺素蛋白的差异表达。结果在血清中,TTR在结直肠恶性肿瘤中的表达下调。在正常人与结直肠恶性肿瘤,结直肠息肉与结直肠恶性肿瘤患者中,TTR的表达差异具有统计学意义(P<0.001,P<0.001)。TTR在pT1(Ⅰ期)与pT4(Ⅳ期)血清样本中的表达差异具有统计学意义(P=0.004),其他组别之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论TTR表达与结直肠肿瘤恶性度间存在相关性。     

定量蛋白质组学技术构建系统性红斑狼疮疾病的蛋白质组差异表达图谱

目的: 应用定量蛋白质组学技术对系统性红斑狼疮(SLE)病人外周血单个核细胞中的"全组"蛋白进行鉴定和定量分析,获得SLE的蛋白质组差异表达图谱。方法: 利用基于四重相对和绝对定量的等量异位标签结合多维液相色谱-串联质谱分析SLE稳定期和活动期病人以及类风湿关节炎病人和健康人的外周血单个核细胞总蛋白,用肽质量指纹谱经数据库检索鉴定蛋白质,并比较这些蛋白的表达差异。结果: 共鉴定了400多个蛋白质。其中,与健康对照组相比,SLE稳定组和SLE活动组共发现2倍以上表达差异的蛋白质44个,上调的9个,下调的35个;与类风湿关节炎疾病组相比,SLE稳定组和SLE活动组2倍以上表达差异的蛋白共有52个,上调的19个,下调的33个;SLE活动组与SLE稳定组相比,表达上调和下调的蛋白分别为17个和13个。结论: 定量蛋白质组学技术可有效地用于人外周血单个核细胞蛋白鉴定和相对定量;采用该技术获得了SLE病人外周血单个核细胞的蛋白质组差异表达图谱;深入研究这些蛋白的分子机制将有助于进一步阐明SLE的发病机制,为SLE的诊断和治疗提供新途径。     

应用患者恢复期血清初步筛选猪链球菌体内诱导表达抗原

目的利用患者恢复期血清对中国猪链球菌2型05ZY/H33强毒株体内诱导表达抗原进行初步筛选,并对建立的05ZY/H33菌株基因组表达文库及体内诱导表达抗原筛选平台的可行性进行初步验证。方法提取05ZY/H33菌基因组DNA,由Sau3AⅠ不完全酶切后回收0.5～3kbDNA片段,插入经其同尾酶BamHⅠ酶切及去磷酸化处理的pET-30a/b/c表达载体系统,转化大肠埃希菌BL21(DE3),构建05ZY/H33菌株基因组表达文库。将收集的患者恢复期血清等体积混合,经体外培养的05ZY/H33和BL21(DE3)全细胞及细菌超声裂解物吸附处理后,获得吸收血清。用此血清采用免疫印迹法筛选IPTG诱导的基因组表达文库,寻找05ZY/H33强毒株的体内诱导表达抗原。结果 05ZY/H33强毒株的基因组文库构建共得到3.2×104个重组子,重组阳性率达95%。随机挑选文库中的2000个重组子运用吸附处理后的患者恢复期血清对其进行体内诱导抗原的初步筛选,共筛到5个阳性克隆,经测序鉴定和生物信息学分析显示5个克隆子包含了05ZY/H33基因组的7个开放阅读框(ORF),其编码产物均参与细菌新陈代谢、复制增殖及损伤修复等重要的生命活动,极有可能为05ZY/H33强致病株的体内诱导抗原。结论本实验成功建立了运用中国猪链球菌2型05ZY/H33强毒株患者恢复期血清进行菌株体内诱导表达抗原筛选的技术平台,为05ZY/H33菌株体内诱导抗原的系统筛选奠定了基础。     

乳腺癌患者血清Leptin和VEGF的表达

目的：研究瘦素（Leptin）、血管内皮生长因子（VEGF）在乳腺癌患者血清中的表达，探讨其在乳腺癌诊断中的意义。方法：选择乳腺癌患者36例，乳腺良性增生病变患者31例，另选56例健康女性作为对照。分别用放射免疫分析（RIA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）测定这些患者术前血清Leptin、VEGF。结果：正常对照组与良性病变组、乳腺癌组Leptin存在明显差异，正常对照组与乳腺癌组，良性病变组与乳腺癌组VEGF存在明显差异。乳腺癌患者术前血清Leptin、VEGF含量与有无淋巴结转移具有相关性。结论：乳腺癌患者术前血清Leptin、VEGF可作为鉴别乳腺良恶性肿瘤有无转移的指标。     

冠心病血瘀证的血清差异蛋白质组学研究

目的:通过比较冠心病血瘀证患者与健康人血清蛋白质表达的差异,寻找与冠心病血瘀证发生发展相关的特异蛋白质。方法:采用蛋白质组学双向凝胶电泳联合质谱技术对冠心病血瘀证患者和健康人(各8例)血清进行蛋白质组学的比较研究。结果:通过鉴定得到了6种差异蛋白质:视黄醇结合蛋白4(RBP4)、载脂蛋白E(ApoE)、载脂蛋白A1(ApoA1)、CD5抗原样蛋白(CD5L)、结合珠蛋白(Hp)、血清白蛋白(ALB)。结论:这些差异蛋白质可能与冠心病血瘀证相关。     

基因芯片筛选Bardct-Bicdl综合征患者外周血差异表达基因

目的 采用基因表达谱芯片研究Bardet-Biedl综合征(Bardet-Biedl syndrome,BBS)患者外周血单个核细胞差异基因表达谱.方法 抽取3例BBS先证者及4名年龄、性别匹配的健康对照者静脉血,分离外周血单个核细胞,用Trizol一步法提取总RNA并进行扩增和标记,然后与Affymetrix U133 Plus 2.0芯片进行杂交,扫描芯片并将图像信号转化为数字信号,GCOS1.4软件读取、处理数据.将患者与正常对照基因表达谱进行比较,最后以表达差异≥2倍(P＜0.05)为标准来确定差异表达基因.结果 BBS患者与正常对照相比,有30个基因表达有显著差异,包括15个上调基因及15个下调基因.通过GO分析,有12个基因与信号传导及细胞周期有关.结论 筛选到的差异基因与纤毛的功能或结构相关性及在BBS发生及发展中的作用有待研究.     

系统性红斑狼疮患者血清蛋白质组学研究

目的 运用蛋白质组学的方法,分析正常人及SLE患者血清蛋白质的差异表达,寻找与SLE疾病发病机制相关的蛋白质.方法 分别收集健康人及SLE患者血清各9例,同组血清等量混合,用试剂盒除去血清中的白蛋白和免疫球蛋白,再经除盐浓缩后,将血清样品采用固相pH梯度（IPG）双向凝胶电泳（2-DE）分离正常人及SLE患者血清的总蛋白质.凝胶经考马斯亮蓝染色显色后,利用Analysis2d软件对获得的蛋白图谱进行分析,寻找差异表达的蛋白质,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）进行鉴定,分析差异蛋白点.结果 对照组凝胶共检出蛋白点648个,患者组检出639个.对照组凝胶蛋白点匹配率84.5％,患者组凝胶蛋白点匹配率82.5％.通过比较分析,差异表达蛋白质点数为92个,有52个蛋白点在SLE患者组表达上调,40个表达下调,有14个点的表达水平在组间差异有统计学意义,质谱鉴定共鉴定5个蛋白质.通过文献研究显示,我们鉴定的部分蛋白在SLE的发病机制中起潜在的作用.结论 在SLE患者血清中存在着差异血清蛋白质,这些蛋白质可能是SLE发病的内在因素,并且在SLE的疾病发展过程中发挥重要作用,可能作为新的血清标志物和潜在的自身抗原.     

应用iTRAQ技术对遗传性易栓症患者血清的蛋白组学分析

目的应用同位素标记相对和绝对定量蛋白质组学技iTRAQ数据对获得的蛋白组,采用Uniprot数据库进行基因功能聚类(GO)分析、蛋白分类及路径(Pathway)分析。方法对易栓症患者血清与正常血清标本,进行酶解、标记等步骤处理样本。应用同位素标记相对和绝对蛋白定量法和功能聚类分析法筛查和分析易栓症患者血清和正常血清的差异表达蛋白。结果共有50个差异表达蛋白质被确定,其中包括29个蛋白表达上调和21个蛋白下调。从而总结易栓症危险因素为进一步的研究提供证据。结论 iTRAQ技术和生物信息学方法为筛选出有意义的易栓症标记物提供了可能。