人类趋化素样因子超家族在非小细胞肺癌中的表达

目的 探讨人类趋化素样因子超家族(CKLFSF)成员CKLF1、CMTM1、CMTM2和CMTM4在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义.方法 应用组织微阵列和免疫组织化学方法 检测50例NSCLC组织和癌旁正常肺组织中CKLF1、CMTM1、CMTM2和CMTM4蛋白的表达及差异.结果 CKLF1、CMTM1、CMTM2和CMTM4蛋白在癌旁正常肺组织中的阳性表达率均为100%,在NSCLC组织中的阳性表达率分别为12%、2%、14%和26%,差异有统计学意义(P＜0.01).性别、病理分化程度、病理分期与CKLF1、CMTM1、CMTM2和CMTM4蛋白在NSCLC组织中的表达程度之间无明显相关(P＞0.05).肺腺癌组织中CMTM1、CMTM4蛋白的表达明显高于其在鳞癌组织中的表达(PcmTm1=0.011,PcmTm4＜0.01).结论 位于人类染色体同一基因簇内的趋化素样因子超家族成员CKLF1、CMTM1、CMTM2和CMTM4可能是潜在的NSCLC抑癌基因.     

趋化素样因子1在大鼠主动脉损伤模型中的表达

目的 探讨趋化素样因子1在动脉内膜增生病变中的作用.方法 雄性SD大鼠85只,随机分组,损伤模型分为8组,每组10只,球囊损伤法建立腹主动脉球囊损伤模型,分别在术后12 h,1、3 d,1、2、4、6、8周取材.对照组5只,接受假手术.测量内膜面积/中膜面积评估术后内膜增生程度;免疫组织化学法检测CKLF1蛋白水平的表达,IPP6.0测定阳性染色平均光密度作为评价指标;RT-PCR检测趋化素样因子1(CKLF1)在mRNA水平的表达,以β-actin表达作为内参,CKLF1/β-actin比值作为CKLF1相对表达量.结果 术后1周可见明显新生内膜形成,至术后4周内膜面积/中膜面积升高最明显,此后呈消退趋势,但仍明显高于术后1周及对照;免疫组化检测显示CKLF1在新生内膜表达强度高于中膜(P=0.016),新生内膜中CKLF1表达在术后1周较高;RT-PCR检测发现CKLF1表达在术后3 d出现高峰,逐渐减退,但仍高于基础水平(P<0.05);内膜增生程度与CKLF1相对表达量呈正相关(R=0.70),但无统计学意义(P=0.188).结论 动脉损伤后趋化素样因子1表达上调,新生内膜中表达强度明显高于中膜组织,推测趋化素样因子1对内膜增生的发展可能起一定作用.     

趋化素样因子超家族成员5对前列腺癌侵袭行为的影响

目的 探讨趋化素样因子超家族成员5(CMTM5)对前列腺癌细胞的作用及机制.方法 利用划痕实验观察CMTM5对前列腺癌、DU145细胞迁移的影响;蛋白质印迹法检测PI3 K-AKT信号通路相关蛋白的表达;建立18只裸鼠皮下前列腺癌移植瘤模型,实验组肿瘤局部注射CMTM5腺病毒,检测CMTM5过表达对裸鼠前列腺肿瘤生长的影响,应用免疫组织化学方法检测裸鼠肿瘤组织中Ki-67的表达. 结果 过表达CMTM5抑制前列腺癌DU145细胞迁移,减少了PI3K-AKT信号通路中的关键分子pAKT 、NF-kB等蛋白的表达.裸鼠体内实验结果显示,CMTM5组肿瘤体积及质量分别为(573.39±175.24)mm3及(0.55±0.11)g,对照组分别为(1482.50±327.86) mm3及(1.31±0.29)g,2组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).CMTM5组肿瘤组织Ki-67表达明显低于对照组. 结论 过表达CMTM5抑制前列腺肿瘤的增殖及迁移能力,其机制与PI3K-AKT信号通路有关.     

程序性死亡受体1及其配体抑制剂治疗骨肉瘤的研究进展

新辅助化疗结合手术治疗使骨肉瘤患者的5年生存率超过50%,但是,合并复发或转移的骨肉瘤患者其预后仍较差。免疫检查点抑制剂是近年肿瘤领域的研究热点,其中针对程序性死亡受体1及其配体(PD-1/PD-L1)的免疫治疗已在多种人类肿瘤治疗中取得较好疗效。随着肿瘤免疫研究的不断深入,包括PD-1/PD-L1抑制剂在内的免疫治疗在骨肉瘤综合治疗中已发挥越来越重要的作用。该文对PD-1/PD-L1抑制剂治疗骨肉瘤的研究现状进行综述,希望为骨肉瘤的免疫治疗研究提供参考。     

趋化素样因子研究进展及其与前列腺癌的关系

趋化素样因子超家族(CKLFSF)是我国学者在国际上首次成功克隆的一种新的细胞因子,其编码产物在免疫、生殖、造血及肿瘤的发生与发展等过程中均发挥重要作用,有望为肿瘤的诊断和治疗提供新的思路和靶标.作者就CKLF的结构和功能及其在前列腺癌方面的研究应用做一综述.     

程序性死亡配体1在肝癌小鼠的表达及鳖甲煎丸的抑制作用

目的:研究程序性死亡配体1(PD-L1)在肝癌小鼠的表达,探讨鳖甲煎丸抑制肝癌发生的作用机制。方法:健康雄性SPF级C57BL/6小鼠24只,随机分为对照组、模型组和鳖甲煎丸组,每组8只。采用高脂高糖饮食联合腹腔注射四氯化碳(CCl4)制备小鼠肝癌模型;自第6周开始,鳖甲煎丸组给予鳖甲煎丸(1.365 g/kg)灌胃,1次/d;至第24周处死小鼠,计算各组小鼠肝脏的相对质量,记录肝脏表面结节数,测定最大结节直径,取肝组织行HE染色,并分别用荧光定量PCR和Western blot检测PD-L1 mRNA和蛋白表达。结果:模型组小鼠肝脏的相对质量、表面结节数量和结节最大直径,较对照组比较均增加(P＜0.05);与模型组比较,鳖甲煎丸组小鼠肝脏的相对质量、表面结节数量和结节最大直径均减少(P＜0.05);模型组小鼠肝组织镜下可见肝小叶结构紊乱,有增生性结节及癌结节,肝细胞脂肪变性明显,可见核深染、核分裂,伴炎症细胞浸润及点、片状坏死灶,鳖甲煎丸组的组织病理学改变,较模型组减轻;模型组小鼠肝组织PD-L1 mRNA和蛋白表达,较对照组升高(P＜0.05),与模型组比较,鳖甲煎丸组PD-L1 mRNA和蛋白表达均降低(P＜0.05)。结论:PD-L1在肝癌小鼠高表达,鳖甲煎丸抑制肝癌发生的作用机制包括抑制PD-L1表达、降低肝癌细胞免疫逃逸,并改善肿瘤免疫微环境。     

趋化素样因子1对血管平滑肌细胞核因子-κB的影响

目的 应用重组腺病毒载体介导的趋化素样因子1(CKLF1)基因转染大鼠血管平滑肌细胞(SMC),观察CKLF1对SMC内核因子(NF)-κB活性的影响.方法 用腺病毒介导的CKLFl以不同时间梯度转染刺激SMC,采用免疫细胞化学、荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot 等方法 分析细胞内CKLF1和NF-κB激活表达.结果　静息状态下SMC中NF-κB有基础表达量,经CKLF1刺激后2～14 d,其活性迅速增加,免疫细胞化学染色细胞质和核呈棕色,CKLF1荧光定量PCR和Western blot结果　分别为1.0500±0.0681、3.3090±0.1523、2.8540±0.1219、1.7050±0.0944、1.4350±0.0858和1.186±0.061、2.264±0.185、2.397±0.149、1.617±0.101、1.381±0.033,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).NF-κB的Western blot结果　为1.184±0.111、2.046±0.221、1.747±0.068、1.498±0.051、1.412±0.087,与对照组比较5～14 d差异有统计学意义(P＜0.05).两组刺激后5～8 d为表达高峰期,且NF-κB活性与CKLF1表达量间明显相关.结论　CKLF1可导致NF-κB表达增加并随刺激时间梯度改变,提示NF-κB信号通路可能参与了CKLF1对SMC的增殖和迁移作用.

Abstract：

Objective By transfection of adenovirus vector-mediated chemokine-like factor 1 ( CKLF1 ) gene into rat vascular smooth muscle cells ( SMC), to observate the effect of CKLF1 in SMC on nuclear factor-κB (NF-κB) activity. Methods Adenovirus vector-mediated CKLF1 gege was transfected into SMC at different time group. Immunocytochemistry, real-time polymerase chain reaction (PCR) and Western blotting were used to detect the expression of CKLF1 and NF-κB. Results Resting SMC had a low baseline level of NF-κB activity, cells were activated by CKLF1 stimulation from 2 to 14 days, and the activity of NF-κB was rapidly increased. Immunohistochemically, cytoplasma and nucleus were stained as brown. The expression of CKLF1 mRNA and protein was 1. 0500 ± 0. 0681, 3. 3090 ± 0. 1523, 2. 8540 ± 0. 1219, 1. 7050 ±0. 0944, 1. 4350 ±0. 0858 and 1. 186 ±0. 061,2. 264 ±0. 185, 2. 397 ±0. 149, 1. 617±0. 101, 1. 381 ±0. 033 respectively from 2 to 14 days, with the difference being statistically significant (P＜0.05). Western blotting showed that NF-κB activity was 1. 184 ±0. 111, 2.046 ±0.221, 1.747 ±0. 068, 1. 498 ±0. 051, 1. 412 ±0. 087 respectively, with the difference being statistically significant from 5 to 14 days ( P ＜ 0. 05 ). All results suggested that 5 to 8 days after stimulation the expression reached the peak, and the was an obvious correlation between NF-κB activity and CKLF1 expression. Conclusion CKLF1 can enhance the expression of NF-κB in SMC, suggesting that NF-κB signaling pathway might take part in the effect of CKLF1 on SMC proliferation and migration.     

共刺激分子B7-H3和程序性死亡因子配体1在胃肠道恶性肿瘤诊断和预后价值研究

目的:探讨共刺激分子B7-H3和程序性死亡因子配体1(PD-L1)用于胃肠道恶性肿瘤诊断和判断转移的临床价值。方法:选取2016年7月至2017年3月在苏州大学附属第二医院住院并经病理检查确诊为胃肠恶性肿瘤的患者40例(胃癌和肠癌各20例)为研究对象。采集术前和术后血清,同期收取20例健康体检者血清作为对照。采用酶联免...     

趋化素样因子-1致不育小鼠睾丸曲细精管的病理改变

目的　探讨趋化素样因子 1(CKLF 1)致小鼠不育的可能机制。方法　通过以导入CKLFI质粒的不育小鼠为对象 ,观察其睾丸及曲细精管的病理改变 ,探讨小鼠不育的原因。结果导入CKLFI实验鼠不育 ;两组小鼠体重及睾丸重量差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;实验鼠曲精管内各级生精细胞层数少 ,排列紊乱 ,曲细精管壁变薄、皱缩、塌陷 ,细胞排列疏松、脱落。结论　导入CKLFI能使小鼠曲细精管发生病理改变致不育。     

趋化素样因子超家族在小鼠睾丸中的基因发育表达调控和蛋白表达定位

目的研究CKLFSF2小鼠同源序列cklfsf26基因在睾丸组织发育中的表达和定位,为其功能研究做出提示。方法利用RT-PCR方法检测cklfsf26基因在不同周龄小鼠睾丸组织中的表达情况；制备cklfsf2b多克隆抗体,利用免疫组织化学方法,检测cklfsf2b蛋白在小鼠睾丸组织中的表达定位。结果cklfsf2bmRNA在出生后第2周内出现,表达量逐渐增加,在成年前即达高峰并持续表达。cklfsf2b蛋白特异性的表达于睾丸Leydig细胞和Sertoli细胞,阳性信号均位于胞质内。结论cklfsf2b基因存在发育的表达调控,随着睾丸发育的日趋成熟,表达量逐渐增加：在Leydig细胞和Sertoli细胞的特异性表达表明其在睾酮合成和精子发生中均可能发挥作用,但其具体功能还需深入研究。     

Research progress regarding programmed cell death 1/programmed cell death ligand 1 inhibitors combined with targeted therapy for treating hepatocellular carcinoma

In recent years, a number of targeted therapeutic agents have achieved success in phase III trials in patients with advanced hepatocellular carcinoma (HCC), including sorafenib, lenvatinib, and regorafenib. Immunotherapy is considered to be an effective treatment for advanced HCC. Immune checkpoint inhibitors targeting programmed cell death 1 (PD-1)/programmed cell death ligand 1 (PD-L1) are important antitumor immunotherapy agents that represent breakthroughs in the treatment of advanced HCC. However, treating advanced HCC is still a great challenge, and the need for new treatments remains urgent. This review briefly summarizes the research progress in the use of PD-1/PD-L1 inhibitors combined with targeted therapy for treating HCC.     

趋化素样因子1对大鼠血管平滑肌细胞增殖活性的影响

目的探讨大鼠趋化素样因子（Cklfl）在体外对血管平滑肌细胞增殖活性的影响。方法将pCDB／Cklfl真核表达载体（实验组）和空载体pCDB（对照组）分别转染COS-7细胞，获取上清液，刺激原代培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞，以噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖情况。并比较在光镜和电镜下形态学的改变。结果以10％胎牛血清稀释的实验组上清与对照组相比，MTT法检测的A值在刺激大鼠平滑肌细胞48和72h后差异有统计学意义（P〈0．05和P〈0．01，n=5）。两组细胞光镜下形态学无明显差异，电镜下经Cklfl刺激后的平滑肌细胞亚细胞器及肌丝和致密体增多。结论Cklfl在血管平滑肌的增殖过程中发挥重要作用。     

糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子配体调控炎症反应的机制

目的 探讨库普弗细胞中糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子配体(GITRL)调控炎症反应的机制.方法 分离小鼠库普弗细胞和T细胞,转染库普弗细胞并与T细胞共培养,将共培养细胞分为6组:空白对照组,共培养细胞只加DMEM培养基;大肠埃希杆菌脂多糖(LPS)组,共培养细胞培养基中加入1 mg/L的LPS;沉默组、沉默对照组、质粒转染组、空载体质粒组,各组的库普弗细胞分别转染GITRLsiRNA、control siRNA、pEGFP-N1 GITRL、pEGFP-N1 control后与T细胞共培养后再加入LPS(1 mg/L),置孵箱培养24 h后处理.细胞免疫荧光法和Western blot法分别检测库普弗细胞的GITRL和程序性死亡配体(PDL1)的表达,MTT法和Annexin V/FITC染色流式分析仪分别检测T细胞增殖和凋亡,ELISA法检测上清液TNFα的含量.数据分析采用独立样本t检验和单因素方差分析(N-K检验).结果 转染24 h后荧光显微镜观察转染细胞荧光强度初步判断转染GITRL siRNA和转染pEGFP-N1 GITRL的库普弗细胞转入效率分别为90％和85％.转染GITRL siRNA的库普弗细胞GITRL蛋白表达较正常库普弗细胞显著下降,而转染pEGFP-N1 GITRL的库普弗细胞GITRL蛋白表达较正常库普弗细胞显著升高(=41.72,13.10,P＜0.05);各转染对照库普弗细胞的GITRL蛋白表达与正常库普弗细胞比较,差异无统计学意义(F=2.27,P＞0.05).LPS组GITRL荧光强度明显高于空白对照组(t=49.29,P＜0.05);与LPS组比较,沉默组GITRL的表达明显下降(t =9.84,P＜0.05);质粒转染组中GITRL的表达明显增加(=5.78,P＜0.05);各转染对照组(沉默对照组、空载体质粒组)中GITRL的表达与LPS组比较,差异无统计学意义(F=0.86,P＞0.05).LPS组PDL1蛋白的表达与空白对照组比较明显下降(t=18.83,P＜0.05);与LPS组比较,质粒转染组中PDL1蛋白的表达下降更明显(t=11.79,P＜0.05);沉默组PDL1蛋白的表达则介于LPS组和质粒转染组之间(t=19.08,P＜0.05);各转染对照组(沉默对照组、空载体质粒组)与LPS组比较,差异无统计学意义(F=2.22,P＞0.05).LPS组与空白对照组比较,T细胞增殖明显增加,凋亡显著减少(t=49.43,40.11,P＜0.05);与LPS组比较,质粒转染组T细胞增殖和凋亡表现为更明显的相同趋势(t=5.77,12.64,P＜0.05);而沉默组T细胞的增殖减少而凋亡明显增加(t=17.00,49.90,P＜0.05);各转染对照组(沉默对照组、空载体质粒组)与LPS组比较,差异无统计学意义(F=1.87,1.35,P＞0.05).LPS组与空白对照组比较,TNF-α的表达明显增加(t=125.68,P＜0.05);与LPS组比较,沉默组TNF-α显著下降(t=119.65,P＜0.05);质粒转染组TNF-α则显著增加(t=147.70,P＜0.05);各转染对照组(沉默对照组和空载体质粒组)与LPS组比较,差异无统计学意义(F=0.14,P＞0.05).结论 库普弗细胞通过上调GITRL的表达抑制PDL1,激活T细胞增殖,促进炎症反应;干扰GITRL的表达可恢复免疫平衡,抑制炎症反应.     

Polo样激酶1、真核翻译起始因子5A2在人脑胶质瘤组织的表达及其临床意义

目的:探讨Polo样激酶1(PLK1)和真核翻译起始因子5A2(EIF5A2)在正常脑组织和胶质瘤组织中的表达,分析两者与胶质瘤临床病理特征的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测2015年3月至2021年8月大庆市人民医院11例正常脑组织和66例胶质瘤组织中PLK1和EIF5A2的表达水平,结合临床资料行 ...     

腺相关病毒介导的PD—L1基因转染对大鼠肝移植术后肝脏的保护作用

目的：探讨腺相关病毒（AAV）介导的PD—L1基因转染对大鼠移植肝的保护作用及其可能机制。方法：96只近交系大鼠随机分为等基因肝移植组（G1）、同种异体肝移植组（G2）、AAV空载体组（G3）和PD—L1转染组（G4）,每组12对。通过大鼠肝移植急性排斥模型,将PD—L1-AAV2-RFP（RFP）经门静脉灌注夹闭法转染供肝,观察移植后大鼠中位生存时间（MST）,全自动生化分析仪测定肝功能,在荧光显微镜、光镜同视野下观察RFP在移植肝的表达和病理变化。采用免疫组织化学染色法评估PD—L1蛋白的表达及炎性细胞浸润情况。结果：G1在观察期内全部存活;G2与G3MST分别为18（17-20）d和18（17-19）d;G4显著延长了移植肝的存活（MST29d,P〈0．05）。术后14dG4的肝功能及病理变化与术后7dG2和G3相似。G3、G4术后7d中观察到明显的红色荧光,随时间逐渐增强。移植肝PD—L1蛋白的变化趋势与RFP的表达相似。G1移植肝T细胞含量极少;术后14dG2、G3移植肝CD4^＋、CD8^＋、CD25^＋不同程度淋巴细胞浸润,G4移植肝T淋巴细胞浸润明显减少,尤以CD8^＋细胞为著,与各组相比差异显著（P〈0．05）。结论：腺相关病毒介导的PD—L1基因转染可延长移植肝的存活,其机制可能是PD—L1基因转染增强了PD—L1／PD-1信号通路,通过抑制移植肝CD4^＋、CD8^＋、CD25^＋T细胞浸润及其功能,从而发挥对移植肝的保护作用。     

纳米刀消融联合程序性死亡蛋白-1/程序性死亡蛋白配体-1治疗胰腺癌及其免疫学机制研究进展

胰腺癌特殊的肿瘤微环境不利于免疫治疗,而纳米刀消融可在一定程度上逆转免疫抑制,使其成为目前唯一适用于胰腺癌的消融治疗方法。动物研究结果证实,纳米刀消融联合程序性死亡蛋白-1（PD-1）/程序性死亡蛋白配体-1（PD-L1）治疗胰腺癌可延长患者生存时间。本文对纳米刀消融联合PD-1/PD-L1治疗胰腺癌及其免疫学机制研究进展进行综述。     

水通道蛋白8在人脑胶质瘤组织的表达及临床意义

目的:探讨水通道蛋白8(AQP8)在人脑胶质瘤中的表达及其与预后的关系。方法:选取河南省人民医院2017年7月至2019年7月35例人脑胶质瘤组织,通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测AQP8的表达,再通过短发卡RNA(shRNA)技术下调AQP8基因,通过细胞增殖测定和Transwell侵袭/转移实验研究其...