lncRNA MEG3靶向调节miR-27a-3p抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:探究lncRNA MEG3对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:qRT-PCR检测人正常胃上皮细胞GES-1和GC细胞(BGC823、MGC803、SGC7901、AGS、MKN28、MKN451)中MEG3及miR-27a-3p表达差异;将AGS细胞分为对照组、GV144组、GV144-MEG3组、GV144-MEG3+miR-27a-3p NC组、GV144-MEG3+miR-27a-3p mimics组;比较各组AGS细胞中MEG3及miR-27a-3p表达情况;检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证MEG3与miR-27a-3p的靶向关系。结果:与GES-1细胞相比,GC细胞中MEG3水平降低,miR-27a-3p水平升高(P<0.05);与对照组相比,GV144-MEG3组MEG3水平升高,miR-27a-3p、ki-67、MMP-2、MMP-9水平及增殖、迁移和侵袭能力降低(P<0.05);上调miR-27a-3p表达可减弱MEG3过表达对AGS细胞恶性行为的抑制作用。miR-27a-3p是MEG3的靶基因。结论:过表达MEG3可能通过靶向下调miRNA-27a-3p表达抑制AGS细胞增殖、迁移及侵袭。     

Cyclin G在胃癌组织中对p53-鼠双微基因2的负反馈调节作用

目的 探讨Cyelin G在胃癌组织中对p53-鼠双微基因2（Mdm2）负反馈调节循环中的作用及可能的相互关系。方法 应用免疫组织化学SP法检测48例胃癌及相应癌旁组织Cyclin G、Mdm2和p53的表达情况。结果 Cyclin G高表达于胃癌细胞核。Cyelin G，Mdm2和p53阳性率分别为64．6％、47．9％、29．1％，显著高于相应的癌旁组织（P〈0．05），Cydin G与Mdm2呈高相关性（Kappa=0．506），与p53呈低相关性（Kappa=-0．364），并且和胃癌组织学分类和Borrmann分型无关（P〉0．05）。结论 胃癌组织中Cyclin G、Mdm2和p53的异常表达可能与胃癌的发生与发展有关。Cyclin G通过Mdm2调节p53及其通路，可以作为胃癌基因治疗的靶点。     

核因子白细胞介素3调节因子促进乳腺癌细胞增殖和侵袭能力研究

目的:探讨核因子白细胞介素3调节因子(NFIL3)对人乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:采用慢病毒载体构建过表达及敲减NFIL3乳腺癌细胞系BT549和Hs578T(中国科学院上海细胞库),以荧光定量聚合酶链反应(PCR)及蛋白印迹实验(Western blot)进行验证。通过细胞计数试剂盒(MTT)检测细胞增殖、...     

CircTP53调节miR-873-5p/CCND1轴对甲状腺癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响

目的:探讨环状TP53(CircTP53)调节miR-873-5p/细胞周期蛋白1(CCND1)轴对甲状腺癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响。方法:体外培养人甲状腺癌细胞TPC-1,随机分为对照组、CircTP53siRNA、CircTP53 siRNA阴性对照组、共转染组。检测各组TPC-1细胞CCND1上皮间质转化标志蛋白(Vimentin、E-cadherin)表达。结果:与人甲状腺正常细胞Nthy-ori 3-1相比,人甲状腺癌组织源细胞和人甲状腺癌细胞株TPC-1、C643、SW579中CircTP53、CCND1 mRNA表达升高(P<0.05),miR-873-5p表达降低(P<0.05)。与对照组相比,CircTP53 siRNA且凋亡蛋白Bax/Bcl-2比值、细胞miR-873-5p及E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05)。结论:敲低CircTP53可通过促进miR-873-5p分泌下调CCND1表达,抑制甲状腺癌细胞集落形成,降低细胞活力及迁移侵袭活性,并促细胞凋亡。     

微小RNA-143-3p靶向调控Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因介导丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶信号通路对胃癌细胞增殖侵袭及上皮间质转化的作用机制

目的:探讨miR-143-3p靶向调控Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因(KRAS)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路对胃癌细胞增殖和侵袭的作用机制。方法:双荧光素酶报告基因实验验证miR-143-3p与KRAS基因的靶向关系。将购自上海中国科学院的胃癌细胞株转染分组,将筛选人胃癌细胞...     

胃癌组织中细胞周期素G和p53的表达及意义

目的研究胃癌组织中细胞周期素G(cyclin G)和p53基因的表达以及它们与胃癌生物学特性可能存在的相关关系。方法应用免疫组织化学S-P法检测42例胃癌组织的cyclin G和p53蛋白表达情况。结果胃癌组织中的cyclin G和p53的阳性表达率分别为69.0%和28.6%,二者呈低相关性,cyclin G的表达与肿瘤分期、淋巴结转移有关。结论cyclin G和p53可能是胃癌相对独立的始动因素,并互相促进参与胃癌的发生和发展。     

17AAG对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制研究

目的：探讨苯醌类安沙霉素药物17AAG对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其作用机制。方法17AAG作用于胃癌细胞SGC7901后,应用MTT法检测细胞增殖能力的变化;应用流式细胞术检测细胞周期的改变;应用流式细胞术和PI/Annexin Ⅴ双染色法检测细胞凋亡情况;应用Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化;应用Western blot法检测热休克蛋白（HSP90和HSP70）及其客户蛋白（c-met和AKT）表达的改变。结果17AAG作用后,胃癌细胞SGC7901生长明显受抑,且该抑制作用呈剂量和时间依赖性;细胞周期被阻滞于G0/G1期;与空白对照组和DMSO对照组比较,17AAG处理组细胞凋亡率显著升高（P＜0．01）;侵袭能力显著下降（P＜0．01）。17AAG可上调HSP70的表达,下调HSP90客户蛋白c-met和AKT的表达,但HSP90表达无明显变化。结论17AAG对胃癌细胞SGC7901具有抑制增殖、诱导凋亡和降低侵袭能力的作用,该作用并不是通过其靶点HSP90,而是通过下调HSP90客户蛋白的表达而实现的。     

miR-520a-3p对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨miR-520a-3p在肾癌细胞系中的表达水平及其对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.方法 通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测miR-520a-3p在正常肾小管上皮细胞HK2和肾癌细胞系786-O、A498、OS-RC-2及ACHN中的表达水平.选取miR-520a-3p表达水平最低的肾癌细胞系786-O...     

p27和细胞核增殖抗原在胃癌中的免疫组化研究

我们采用免疫组化方法检测 10 0例胃癌中细胞调控因子 p2 7和增殖细胞核抗原 (PCNA) ,探讨p2 7和PCNA在胃癌中表达及与临床病理学特征的关系。收集我院胃肠外科 1999年 9月至 2 0 0 1年 5月胃癌手术病人共 10 0例 ,其中男 58例 ,女 42例。年龄 3 0～ 82岁 ,平均 54.5岁 ,术前未做任何抗肿瘤治疗。术后病理检查组织学类型为管状腺癌 56例 ,黏液腺癌 2 8例 ,乳头状腺癌14例 ,印戒细胞癌 2例。分化程度 :高中分化 52例、低分化 48例 ;Dukes’A、B期 66例 ,C、D期 3 4例。所有标本为手术切除新鲜标本 ,分别在正常组织及肿瘤部位取材后由中…     

长链非编码RNA FOXD3-AS1对乳腺癌细胞增殖和侵袭的调控作用

目的:检测长链非编码RNA FOXD3-AS1(lncRNA FOXD3-AS1)在乳腺癌中的表达并观察lncRNA FOXD3-AS1对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法:利用生物信息学的方法对肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中lncRNA FOXD3-AS1在乳腺癌中的表达量进行分析,应用实时定量反转录聚合酶链反应(...     

环状RNA cRAPGEF5对胃癌细胞增殖、侵袭和转移影响的实验研究

目的:观察环状RNA(circRNA) cRAPGEF5对胃癌细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法:选取新乡医学院第一附属医院2018年1月至2020年1月手术切除的143例胃癌组织和癌旁组织作为研究对象,采用转录组织化学测序和荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分析cRAPGEF5表达水平;根据过表达的circRNA的类...     

右美托咪定对胃腺癌SGC-7901细胞生长和转移的影响

目的观察不同浓度右美托咪定对胃腺癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法人胃腺癌SGC-7901细胞接种于培养板培养24h,随机分为五组:对照组(C组)、右美托咪定312.5μg/ml组(D1组)、右美托咪定625μg/ml组(D2组)、右美托咪定1 250μg/ml组(D3组)和右美托咪定2 500μg/ml组(D4组)。分别用不同浓度右美托咪定处理胃癌SGC-7901细胞48h后,采用CCK-8法、Transwell法检测细胞增殖、侵袭和迁移。结果与C组比较,D1、D2、D3和D4组SGC-7901细胞活力差异无统计学意义。D1、D2、D3和D4组SGC-7901细胞迁移能力明显高于C组(P0.05或P0.01),且呈剂量依赖性;D1、D2、D3和D4组SGC-7901细胞侵袭能力明显高于C组(P0.05或P0.01),且呈剂量依赖性。结论右美托咪定可促进人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移,对其增殖无明显影响。     

二氢青蒿素对胃癌细胞株SGC7901增殖的影响

目的 观察二氢青蒿素(DHA)对胃癌细胞株SGC7901增殖的影响及作用机制.方法 SGC7901细胞分为DHA组和对照组,DHA组分别加入浓度为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 μmol/LDHA的培养基,对照组加入等体积含0.1％ DMSO的培养基.不同浓度DHA处理SGC7901细胞24、48和72 h后,MTT法检测细胞的增殖情况.不同浓度DHA处理SGC7901细胞24h后,流式细胞仪测定细胞周期的分布;100 μmol/L DHA处理细胞24h后,采用Western blot法测定细胞周期蛋白A(Cyclin A)、Cyclin D1、Cyclin E、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和P16蛋白的表达水平;免疫共沉淀检查CDK4与Cyclin D1和P16之间的相互作用.采用单因素方差分析和t检验进行统计学分析.结果 6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 μmol/L DHA分别处理SGC7901细胞24、48和72 h,均明显抑制细胞增殖(F =78.66,235.37,93.75,P＜0.05);与对照组比较,不同浓度DHA组G0/G1期细胞比例均明显上升(F=18.42,P＜0.05);100.00 μmol/L DHA处理细胞24h,Cyclin D1和CDK4蛋白的相对表达量分别为0.17±0.05、0.24±0.06,较对照组的0.67±0.15、0.64 ±0.18明显下降(t=7.746,5.164,P＜0.05);DHA组Cyclin E蛋白的相对表达量为0.35 ±0.06,较对照组的0.42±0.06也有下降,但差异无统计学意义(t=2.021,P＞0.05);DHA组和对照组Cyclin A蛋白的相对表达量分别为0.38 ± 0.08和0.35 ±0.09,两组比较,差异无统计学意义(t=1.266,P＞0.05);与对照组P16蛋白相对表达量(0.29±0.07)比较,DHA组P16蛋白相对表达量(0.54±0.12)显著升高(t=4.408,P＜0.05).免疫共沉淀结果示DHA处理SGC7901细胞后,CDK4与Cyclin D1结合减少,与P16结合增加.结论 DHA将SGC7901细胞周期阻滞于G0/G1期,其主要机制可能与下调Cyclin D1和CDK4表达、上调P16表达,抑制Cyclin D1与CDK4的结合,促进P16与CDK4的结合有关.     

组蛋白去甲基化酶JMJD2D对人胃癌AGS细胞恶性表型的影响

目的:观察组蛋白去甲基化酶JMJD2D在人胃癌细胞系AGS中表达下调后对细胞生物学功能的影响。方法:采用小发夹状RNA(small hairoin RNA,shRNA)技术干扰AGS细胞中JMJD2D表达,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测JMJD2D沉默效果,同时设置对照组;利用细胞计数试剂盒(CCK-8)...     

长基因间非蛋白质编码RNA525在结直肠癌组织的表达及其对结直肠癌细胞增殖、侵袭的影响

目的:观察长基因间非蛋白质编码RNA525(LIN00525)在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞体外增殖、侵袭的影响。方法:收集2018年8月至2018年12月于复旦大学附属肿瘤医院大肠外科诊治患者的50对结肠癌及癌旁组织,通过实时定量聚合酶链式反应(Real time-PCR)检测50对样本中LINC00525的表...     

GPC3基因对肝癌细胞SK-Hep-1体外迁移、侵袭能力的影响

目的 利用构建好的GPC3真核表达载体,观察GPC3基因对SK-Hep-1肝癌细胞增殖、黏附、侵袭能力的影响.方法 将pEGFP-N2-GPC3增强型绿色荧光蛋白表达载体通过脂质体方法 转入SK-Hep-1人肝癌细胞,确定GPC3已经成功转入细胞后,观察肝癌细胞转染前后增殖、黏附、迁移及侵袭能力的改变.结果 GPC3抑制SK-Hep-1的增殖,降低对Matrigel胶的黏附能力,迁移实验中,200倍目镜下实验组细胞的穿膜细胞数为131.70±7.44.空质粒对照组细胞的穿膜细胞数为71.60±4.76.侵袭实验中,200倍目镜下实验组细胞的穿膜细胞数为220.00±12.80.空质粒对照组细胞的穿膜细胞数为138.00±10.50.两组细胞比较,迁移、侵袭能力均显著增强(P＜0.01).结论 GPC3真核表达载体抑制肝癌细胞SK-Hep-1的增殖,降低其对Matrigel胶的黏附能力,增加其迁移及侵袭能力,GPC3可能通过抑制FGF2信号途径抑制肝癌细胞的增殖.     

小分子干扰RNA对胃癌MGC803细胞E2F-1表达及其生物学行为的影响

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对胃癌MGC803细胞E2F-1基因表达及其生物学行为的影响.方法 将实验组(E2F-1-siRNA)和阴性对照组(negative control-siRNA)转染进MGC803细胞,48 h后采用实时定量聚合酶链反应(PCR)及Western blot技术分别检测E2F-1 mRNA及蛋白的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测MGC803细胞增殖的变化,流式细胞仪检测MGC803细胞周期变化.结果 E2F-1-siRNA有效抑制胃癌细胞E2F-1 mRNA和蛋白的表达并且影响MGC803细胞的增殖,与阴性对照组及未转染组细胞比较mRNA降低了84.8%和85.3%(F=14.35,P＜0.05),蛋白降低T77.2%和79.6%,MGC803细胞增殖分别抑制了69.0%和81.6%,差异有统计学意义(F=170.18,P＜0.05);同时E2F-1-siRNA促使更多MGC803细胞DNA含量聚集于G2/M期附近,G2/M期DNA含量比例为(54.98±3.46)%,与阴性对照组(44.70±3.82)%和未转染组(31.47±2.12)%比较,差异有统计学意义(F=88.90,P＜0.05).结论 E2F-1-siRNA可以有效抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1 mRNA及蛋白的表达,使G1 期细胞的DNA含量下调,细胞分裂停滞在G2/M期附近,抑制胃癌细胞的增殖.     

短发卡状RNA抑制AKT2对肝癌细胞增殖及侵袭的影响

目的 探讨短发卡状RNA(siRNA)抑制AKT2对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭转移的影响.方法 设计并合成特异性靶向AKT2的siRNA片段并构建SMMC7721AKT2 siRNA表达质粒,将其转染SMMC7721细胞,通过G418筛选出稳定株.MTT法检测肝癌SMMC7721细胞的生存率变化;流式细胞术检测细胞周期;Western- blot检测P27、CyclinD1;Transwell实验和划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变.结果 MTT检测显示AKT2干扰可抑制SMMC7721细胞的生长,与其他组比较差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术显示AKT2干扰组细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降.Western- blot检测显示CyclinD1表达下降,P27的表达上升.Transwell试验和划痕试验显示AKT2干扰组的侵袭和转移能力受到抑制.结论 AKT2基因沉默可明显抑制肝癌SMMC7721细胞的生长并阻滞细胞周期.AKT2基因沉默可抑制肝癌SMMC7721细胞的侵袭和转移能力.     

不同浓度罗哌卡因对乳腺癌MCF-7细胞增殖和细胞周期的作用研究

目的观察不同浓度罗哌卡因对乳腺癌MCF-7细胞增殖和细胞周期的影响并探讨其机制。方法人乳腺癌细胞MCF-7接种于培养板培养24h,随机分为四组:对照组(C组)、罗哌卡因100μg/ml组(R1组)、罗哌卡因200μg/ml组(R2组)和罗哌卡因400μg/ml组(R3组)处理乳腺癌MCF-7细胞48h后,检测其细胞增殖能力(细胞活力)和细胞周期。检测R3组作用于MCF-7细胞48h后TCF-4、beta-catenin的蛋白表达水平。结果 R2、R3组MCF-7细胞活力明显低于C组(P0.05);R1、R2、R3组MCF-7细胞G0/G1期细胞明显少于C组,S期和G2/M期细胞明显多于C组(P0.05);R3组TCF-4和beta-catenin蛋白表达水平明显低于C组(P0.05)。结论罗哌卡因可能通过下调TCF-4和beta-catenin蛋白表达水平抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖。     

P物质对胃癌细胞增殖的作用

目的观察不同浓度P物质对体外培养的胃癌细胞的促增殖作用及其途径。方法人胃癌细胞系MKN45在RPMI1640培养液中培养。采用免疫组织化学染色的方法观察胃癌细胞表达P物质特异性受体NK-1的情况。运用^3H-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入指数作为判断细胞增殖的指标，向胃癌细胞的培养液中加入不同浓度的P物质，并运用SP的受体NK-1的特异性拮抗剂（ASN-1377642）后观察SP对胃癌细胞的增殖情况的改变。结果免疫组织化学染色方法证实，人胃癌细胞系MKN45表达SP的特异性受体NK-1；在一定的浓度范围内SP可促进低分化MKN45的增殖并呈剂量依赖性，受体NK-1的特异性拮抗剂可以抑制SP对胃癌细胞的促增殖作用。结论胃癌细胞表达SP的受体NK-1，SP对胃癌细胞有促增殖作用；其作用的完成是通过与受体NK-1结合有关。