HSV-1载体对体外培养神经元感染作用的研究

目的利用重组有lacZ基因的HSV-1假型病毒载体感染体外培养的人胚神经元,(以β-gal组织化学染色来检测报告基因lacZ在神经元中的表达),并观察该载体的细胞毒性及病毒的水平传播情况。方法用重组有lacZ基因的HSV-1扩增子质粒pHSVlac包装成复制缺陷的假型病毒载体,并在Vero细胞中传代增殖,产生高滴度的病毒载体,用其感染体外原代培养的神经元,以β-gal染色观察报告基因lacZ在神经元中的表达及该载体的细胞毒性。结果pHSVlac质粒与HSV-1 17 ts K可在Vero细胞中包装成复制缺陷的HSV-1假型病毒载体,经传代其滴度可达1×108PFU/mL。该载体在37℃时能感染体外原代培养的人胚神经元,并在其中表达LacZ基因,未发现细胞毒性改变。结论HSV-1载体能够高效靶向地将外源基因导入非分裂的神经元,HSV-1载体介导的基因转移系统的建立为进一步开展神经机能及神经系统疾病的基因治疗的研究奠定了基础。     

生殖器疱疹患者HSV-2和anti—HSV-2检测的临床意义

目的探讨生殖器疤疹（GH）患者HSV-2PCR及HSV-2抗体（包括IgG、IgM）检测的临床意义，评价其对GH诊断的重要性和实用性。方法对182例生殖器部位有皮损的现症GH患者检测HSV-2PCR及HSV-2抗体（包括IgG、IgM）。结果HSV-2PCR阳性检测率为90．6％（165／182），明显高于HSV-2IgG阳性检测率68．7％（125／182）和HSV-2IgM阳性检测率为14．3％（26／128）；初发患者HSV-2PcR阳性检测率为89．7％（61／68）明显高于HSV-2IgG阳性检测率39．7％（27／68）和HSV-2IgM阳性检测率25％（17／68）；复发患者HSV-2PCR阳性检测率为95．6％（109／114），HSV-2IgG阳性检测率为100％（114／114），两者几无差别，而HSV-2IgM阳性检测率为0；23例皮损不明显患者HSV-2IgG阳性检测率为78．3％（18／23），明显高于HSV-2PCR阳性检测率26％（6／23）和HsV-2IgM阳性检测率13％（3／23）。结论HSV-2PCR检测法对有典型临床症状如水疱和糜烂的GH阳性率高、诊断价值大，对临床症状不典型者阳性率低；HSV-2IgG检测对无皮损和无症状的患者有较大的诊断价值；HSV-2IgM对诊断GH感染的价值不大。     

无环鸟苷对HSV-1角膜炎的治疗和预防复发作用分析

目的：研究分析无环鸟苷治疗HSV-1角膜炎的临床效果以及预防复发的作用。方法：选择2013年1月至2013年7月我院治疗的172例180眼HSV-1角膜炎患者,随机分为两组,对照组84例90眼采用El服法莫替丁治疗,20mg／次,2次,d,治疗6周为1个疗程。观察组88例90眼联用法莫替丁和无环鸟苷治疗,口服法莫替丁,20mg次,2次／d,并用0．1％无环鸟苷眼药水滴眼,5次／d,治疗6周为1个疗程,对比两组疗效并进行2个月的随访。结果：观察组总有效率为96．67％,对照组总有效率为91．11％,两组差异具有统计学意义（P〈0．05）,随访2个月显示,观察组仅有2例2眼（2．22％）复发,对照组有4例5眼（5．56％）复发,两组差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：无环鸟苷能够直接作用于患处,具有疗效显著、预防复发、使用安全、副作用少等优点。     

HSV-1作用于KSHV ORF50启动子区中特异性应答位点序列的初寻

目的:构建卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)ORF50启动子系列截短序列克隆,初步寻找HSV-1作用于KSHV ORF50启动子区中特异性应答位点序列.方法:以KSHV基因组为模板,PCR扩增KSHVORF50启动子系列截短序列,克隆至含有...     

运用SELDI蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达

目的运用SELDI(Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization)蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达,从而为从蛋白质水平研究HSV-1感染的致病机制奠定基础。方法常规培养Vero细胞,感染HSV-1,孵育12 h、24 h、48 h后用细胞裂解液裂解细胞。裂解上清经蛋白定量后应用IMAC3(固定金属亲和)和WCX2(弱阳离子交换)芯片,SELDI-TOF-MS技术检测细胞感染HSV-1前后蛋白质表达的差异。结果感染24 h细胞出现明显细胞病变效应(CPE),感染12 h质谱分析即可见蛋白的差异表达。共19个蛋白表达水平发生变化,其中IMAC3芯片发现差异峰9个,WCX2芯片发现差异峰10个。结论 SELDI蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达方法简便,敏感性高,从而为从蛋白质水平研究HSV-1感染的致病机制,HSV-1与宿主细胞的相互作用,及抗感染治疗靶位的寻找奠定了一定的基础。     

靶向抗HSV-1的siRNA研究进展

单纯疱疹病毒1型（herpes simplex virus type 1,HSV-1）是一种能够在各类人群中携带和传播并能引起包括口唇疱疹、荚膜炎、角膜炎和病毒性脑炎等疾病的重要病原体。虽然已有多种类型的HSV-1疫苗处于研发的不同阶段,但仍没有商业化的疫苗上市销售。临床上使用的特异性抗HSV-1药物如阿昔洛韦、伐昔洛韦和喷昔洛韦等也面临严重的抗药性威胁,开发新的特异性抗HSV-1药物是当前所面临的主要任务之一。siRNA是一种长度为20～25 核苷酸的双链RNA,通过在转录后水平上沉默基因表达发挥干扰作用。siRNA作为一种新的、有潜力的抗病毒药物备受关注,发展也较为迅速。综述近年来siRNA在抗HSV-1方面的研究进展,包括靶向HSV-1关键基因和HSV-1互作的宿主细胞基因的siRNA设计、递送和靶向策略。     

人参皂苷Rg3体外抗HSV-1活性与免疫调节效应

目的：研究人参皂苷Rg3体外对单纯疱疹病毒1型 (HSV-1)的抑制作用与免疫调节效应。方法：采用结晶紫染色法观察Rg3对HSV-1致细胞病变效应的抑制作用。用MTT比色法检测Rg3对Vero细胞和小鼠脾细胞增殖的影响。以Rg3诱导小鼠脾细胞,用鼠脾T淋巴母细胞增殖分析法测定上清中IL-2活性,细胞病变抑制法测定IFN-γ活性。结果：浓度在1.56～25 m g•L^-1的Rg3对HSV-1致细胞病变效应抑制作用显著高于病毒对照组 (P<0.05);浓度小于25 mg•L^-1的Rg3对传代Vero细胞及小鼠脾细胞的增殖作用与细胞对照组比较差异无显著性 (P>0.05); 3.13~6.25 mg•L^-1的Rg3体外诱生IL-2和IFN-γ分泌水平显著高于对照组( P<0.05)。结论：一定浓度的Rg3具有体外抗HSV-1活性,对传代Vero细胞及小鼠脾细胞无毒性,可显著促进IL-2和IFN-γ分泌,参与免疫调节效应。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型在正常人眼睫状体潜伏的初步研究

目的研究正常人睫状体是否有单纯疱疹病毒Ⅰ型潜伏.方法采用健康志愿者捐献的新鲜眼球15个,1/3眼球组织进行免疫组化染色,排除HSV-1急性感染.取出剩余的睫状体,1/3睫状体组织进行离心,取上清液与Vero细胞共培养,另外2/3睫状体组织提取DNA作PCR和凝胶电泳检测HSV-1的DNA和LAT.结果15个标本免疫组化染色皆阴性,Vero细胞与睫状体组织上清液共培养结果为阴性,未观察到细胞病理学改变,PCR检测的15个标本中4、5、7号标本的HSV-1 DNA阳性,HSV-1 LAT阴性,其他12个标本PCR检测HSV-1 DNA阴性,HSV-1 LAT阴性.结论正常人睫状体存在HSV-1 DNA.     

小鼠脑无症状性单纯疱疹病毒Ⅰ型感染的实验研究

【目的】观察单纯疱疹病毒Ⅰ型（herpes simplex virus—type one,HSV-1）是否可以引起脑组织的无症状性感染,探讨多发性硬化的发病机制。【方法】将Balb／c小鼠分为实验组、对照组和脑炎组,在不同时间点观察小鼠神经病学体征、行为学以及体重变化;用聚合酶链反应法检测三叉神经节病毒DNA片段;免疫荧光法检测脑组织疱疹病毒抗原表达,以判定脑组织病毒增殖性感染的存在。【结果】实验组小鼠各时相点神经病学体征、神经行为学和体重变化与对照组小鼠相比较差异无统计学意义。在病毒接种的各时相点,大部分小鼠三叉神经节检测到了疱疹病毒DNA片段,同时脑的颞叶、顶叶和额叶皮层均发现片状HSV抗原阳性表达神经元,以7d组阳性细胞最多,荧光亮度最强,15d组阳性细胞减少,荧光亮度减弱。【结论】单纯疱疹病毒Ⅰ型能够引发小鼠脑组织的急性、短暂性、无症状性非坏死性感染。     

4-苯乙烯磺酸马来酸酐共聚物抑制HSV-2感染研究

目的:探索4-苯乙烯磺酸马来酸酐共聚物(PSM)对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染细胞或小鼠的抑制作用。方法:建立Vero-ICP10细胞系,通过Luciferase检测不同浓度PSM对感染细胞中HSV-2的抑制作用,并通过In cell western技术检测HSV-2 gD蛋白表达,确定不同PSM浓度对HSV-2 gD蛋白表达的抑制作用;建立HSV-2阴道感染小鼠模型,观察PSM对HSV-2经生殖道感染小鼠的抑制作用。结果:Luciferase实验和In cell western实验结果均表明PSM具有抗HSV-2感染细胞的作用;小鼠模型中,5%的PSM能有效防止小鼠感染HSV-2(P<0.001)。结论:PSM在体内和体外模型中均可以抑制HSV-2感染。     

蛋清溶菌酶对人单纯疱疹病毒Ⅰ型抑制作用的实验研究

目的:观察蛋清溶菌酶(HEWL)对人单纯疱疹病毒Ⅰ型(hHSV-1)的抑制作用.方法:以HSV-1的敏感细胞BHK-21为实验细胞模型,以更昔洛韦为阳性对照药,以0.5-烷基磺酸钠(SDS)为阻断剂,采用细胞病变法(CPE)判定溶菌酶对hHSV-1的抑制效果.结果:HEWL对细胞的最大无毒浓度(TC0)和半数中毒浓度(TC50)均>1 000μg·mL-1,HEWL对hHSV-1抑制作用的最小有效浓度(MIC)为104.17 μg·mL-1,半数有效浓度(IC50)为46.88μg·mL-1,治疗指数(TI)为10.67.在平行对照试验中,更昔洛韦对BHK-21细胞的TC0和TC50均>500 μg·mL-1.更昔洛韦对hHSV-1抑制作用的MIC为7.81μg·mL-1,IC50为3.91 μg·mL-1,TI为64.0.5%SDS完全阻断了HEWL的抗病毒能力.结论:蛋清溶菌酶对HSV-1有较明显的抑制作用,作用强度与溶菌酶的浓度相关.     

不同浓度十二烷基磺酸钠对磷酸川芎嗪透皮性质影响

【目的】考察不同浓度表面活性剂十二烷基磺酸钠对磷酸川芎嗪透皮行为的影响。【方法】以离体大鼠皮肤为透过屏障,采用体外Franz扩散池法,绘制渗透曲线,并计算渗透速率,考察不同浓度SDS对LP离体透皮影响。【结果】不同浓度SDS溶液中(0.25%,0.5%,1.0%,2.5%)磷酸川芎嗪的透皮速率分别为19.45,27.87,19.18,16.78μg.cm-2.h-1,迟滞时间为1.32,1.27,2.10,2.69 h。【结论】SDS的浓度与LP透皮速率以及迟滞时间没有剂量相关性,这可能与热力学活性降低及离子对形成有关。     

黄芪水煎液抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的实验研究

目的 研究黄芪抗Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)的作用。方法 在人胚肺二倍体细胞系统中,采用对病毒所致细胞病变的抑制实验,观察黄芪水煎液抗HSV-I的药效。结果 黄芪水煎液的半数抑制浓度为0.98µg/ml,最小有效浓度为1.95µg/ml,治疗指数为128。结论 黄芪有较显著的抗HSV-Ⅰ作用,且对细胞毒性低。     

单纯疱疹病毒1型糖蛋白B基因疫苗的构建

目的：构建用于治疗和预防单纯疱疹病毒性角膜炎的核酸疫苗,探讨单纯疱疹病毒1型糖蛋白B(HSV-1gpB)基因作为基因疫苗的可能性。方法：利用PCR技术从HSV-1 SM44毒株基因组中扩增出编码HSV-1gpB去除N端部分信号肽序列(39 bp)的基因片断（2 673 bp）,定向插入真核表达质粒pcDNA3载体中,构建出重组真核表达质粒pcDNA-gpB,并对其进行酶切分析、PCR鉴定及测序鉴定。 结果：双酶切重组质粒pcDNA-gpB,电泳可见两条带,分别为目的基因（2 700 bp）和线性质粒pcDNA3（5 400 bp）; 以重组质粒pcDNA-gpB为模板进行PCR扩增,在2 700 bp位置扩增出特异的产物;测序结果表明,克隆基因插入方向正确,与GenBank中登录的HSV-1 F株gpB基因序列比较,同源性达99.5%。 结论：利用PCR技术从HSV-1 SM44株基因组中扩增出编码HSV-1gpB去除N端部分信号肽序列（39 bp）的基因片断（2 673 bp）, 成功地构建了HSV-1基因疫苗pcDNA-gpB。     

Detection of herpes simplex virus type 1 in rheumatic valvular tissue

Background Rheumatic heart disease (RHD) is the most important sequela of rheumatic fever (RF):evidence that streptococcal infection is aetiological is prominent, but sometimes contradictory. Acute HSV-1 infection in mouse leads to carditis and valvulitis whereas recurrent infection results in inflammatory granulomatous lesions that resemble Aschoff bodies. Cells containing HSV-1 inclusions or virus infected giant cells appear similar to Anitschkow cells or Asehoff cells respectively. We hypothesized that HSV-1 infection also may be involved in RHD.Methods Formalin-fixed, paraMn-embedded valvular tissue samples from 32 patients with RHD were investigated for evidence of HSV-1 infection. HSV-1 antigen was detected by immunohistoehemistry, using HSV-1-specific monoclonal and polyclonal antibodies. HSV-1 glyeoprotein D gene sequences were amplified by nPCR,using β-globin gene amplification in the same samples as internal control. Valvular tissue from 5 cases of sudden death and 3 cases died of neisseria meningitis without a history of valvular disease was used for comparison. HSV-1-infected lung tissue was used as positive control.Results HSV-I antigens were detected in valvular tissues from 21 of 32 (65.6%) patients. Fifteen of these 21 (46.9% of cases), but no antigen-negative sample, were positive also for HSV DNA. Nueleotide sequence of PCR products was homologous to the targeted region of the HSV-1 glycoprotein D gene. HSV-1 antigen was present also in one case of sudden death but viral DNA was not found in any tissue sample from tile comparison group. Results from reagent and positive controls were as anticipated.Conclusions This is the first study to show the presence of HSV-1 antigen and genomic DNA in valvular tissues from patients with RHD and provides evidence for an association of HSV-1 infection with some cases of rheumatic valvular disease.     

小鼠骨髓中持续携带单纯疱疹病毒I型的初步研究

目的：探讨单纯疱疹病毒I型（HSV-1）感染后在宿主骨髓是否形成潜伏感染。方法：尾静脉注射HSV-1感染小鼠,分别于病毒接种后5、15、30d处死实验组和对照组小鼠,取股骨分离培养原代骨髓间充质干细胞（BMSCs）,并对其进行成骨细胞诱导和树突状细胞诱导的鉴定,PCR法检测骨髓及BMSCs中HSV-1特异条带。结果：BMSCs成骨诱导碱性磷酸酶和钙结节染色均呈阳性,培养出形态典型的树突状细胞。各实验组骨髓及其对应的BMSCs的第1、2代均检测到HSV-1的特异DNA片段。结论：骨髓是HSV一1形成潜伏感染的靶器官之一,且能随细胞增殖而持续携带HSV-1。     

单纯疱疹病毒I型DNA疫苗的构建(英文)

目的　构建表达单纯疱疹病毒 1型糖蛋白D的DNA疫苗。方法　采用聚合酶链式反应 (PCR) ,从HSV 1基因组中扩增出 gD基因 ,插入中间载体pGEM T ,然后克隆入真核表达载体pcDNA3 .1 ,构建重组质粒 pLy D .经部分测序和限制性内切酶分析证实。将pLy D转染Cos 7细胞 ,并肌肉接种ICR小鼠。用免疫组化和ELISA方法分别检测gD蛋白表达及小鼠血清中的特异性抗体。结果　转染的Cos 7细胞中有 gD蛋白的表达 ;经三次肌肉免疫接种的小鼠血清中有特异性HSV 1抗体产生。结论　本研究构建的重组质粒 pLy D能够在哺乳动物细胞中表达目的蛋白 ,免疫接种后可以诱导动物产生免疫反应