雷帕霉素对肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察不同浓度雷帕霉素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。 方法 使用不同浓度雷帕霉素（1 μg/L、2 μg/L、4 μg/L、8 μg/L、16 μg/L）处理大鼠肾小球系膜细胞,并设正常对照组。MTT法测不同浓度雷帕霉素干预24 h、48 h、72 h后对细胞增殖的影响,并描记生长曲线。干预72 h后,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测各浓度雷帕霉素组细胞周期负调蛋白p27和p53的mRNA和蛋白表达变化;用流式细胞计量术检测各浓度雷帕霉素组细胞周期及凋亡率。 结果 小剂量雷帕霉素（1 μg/L）对系膜细胞增殖即具有明显的抑制作用,停滞于G1期的细胞数明显增加,但对系膜细胞凋亡无明显影响。较大剂量雷帕霉素(8~16 μg/L)能够明显增加肾小球系膜细胞凋亡。雷帕霉素能够增加肾小球系膜细胞p27、p53 mRNA和蛋白表达,且呈剂量依赖性。 结论 雷帕霉素可能通过增加p27、p53表达抑制肾小球系膜细胞增殖和促进系膜细胞凋亡。     

游离脂肪酸对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞周期的影响

目的：探讨游离脂肪酸（FFAs）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖和生长周期的影响。方法：用不同浓度的游离脂肪酸处理大鼠HBZY-1细胞株（即大鼠肾小球系膜细胞）24h～72h。采用噻唑蓝比色（MTT）法检测内皮细胞增殖情况,流式细胞术（FCM）分析法测定细胞周期变化。结果：游离脂肪酸可抑制HBZY-1细胞的生长增殖（与对照组比较,P〈0.01）,且这种抑制作用具有剂量和时间依赖性;游离脂肪酸作用于HBZY-1细胞24h、48h、72h,细胞周期发生明显改变,G1期细胞数增多,S期细胞数减少（与对照组比较,P〈0.01）。结论：游离脂肪酸可通过停滞细胞生长于G1期,抑制大鼠肾小球系膜细胞的生长增殖。     

三七总皂苷对大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：研究三七总皂苷（PNS）对大鼠肾小球系膜细胞（MC）增殖以及细胞周期的影响。方法：用不含或含有高、中、低浓度PNS的RPMI-1640细胞培养液刺激体外培养的正常大鼠MC。于实验终点,运用MTT比色法测定细胞增殖情况以及PNS的细胞毒性作用;运用流式细胞术测定细胞周期。结果：PNS能够显著抑制血清诱导的大鼠MC的增殖;通过减少MC进入S＋G2/M期,从而抑制MC的有丝分裂;且在本实验浓度内（100-400μg/ml）不具有明显的诱导凋亡作用和细胞毒性。结论：PNS能通过抑制MC的有丝分裂而抑制其活化、增殖,在慢性肾脏疾病的治疗中具有一定得应用价值。     

甲状旁腺素对大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的观察甲状旁腺素(PTH)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及凋亡的影响,并探讨其作用的可能机制。方法体外培养的大鼠系膜细胞经不同浓度的PTH作用后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期及凋亡,吖啶橙荧光活体染色观察细胞凋亡形态,免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测c-jun、c-fos表达。结果PTH持续刺激GMC6h、12h时,10-11～10-9mol/L浓度范围内,促进细胞增殖(P<0.05);10-9mol/L在12h达高峰,并可使G0～G1期细胞减少,S G2M期细胞增多,并能明显促进c-jun、c-fos的表达(P<0.01),而10-8mol/L无明显作用;刺激24h时各浓度均无作用;刺激48h各浓度明显抑制大鼠系膜细胞增殖(P<0.01),且使细胞阻滞在G0～G1期,不能进入S期,并能明显抑制c-jun、c-fos的表达(P<0.01)。PTH不诱导GMC凋亡。结论PTH体外刺激GMC增殖与作用时间及剂量相关,低浓度短时间作用刺激GMC增殖,持续作用抑制GMC增殖,其作用与c-jun、c-fos的表达有关,并影响细胞周期。PTH对体外培养的大鼠GMC凋亡无诱导作用。甲状旁腺机能亢进可能参与了慢性肾病残余肾功能进一步恶化的病理过程。     

肾小球系膜细胞凋亡研究进展

细胞凋亡(apoptosis)即程序化细胞死亡(programmed cell death,PCD),是基因控制的细胞主动死亡过程.凋亡与细胞有丝分裂起相反作用,对于维持组织内环境稳定,胚胎发育及机体各种生理功能和病理反应都具有重要意义.     

灵芝对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨灵芝对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖及细胞周期的影响。方法：用不同浓度的灵芝作用于高糖培养的MCs,采用MTT法观察其增殖情况,并通过流式细胞仪检测其细胞周期变化,MODIFIT LT软件分析。结果：（1）高糖组与正常组比较有统计学差异（P〈0.05）;其余各组与正常组比较无统计学差异（P〉0.05）,与高糖组比较有统计学差异（P〈0.05）,48h与24h比较有统计学差异（P〈0.05）,72h与48h、24h比较有统计学差异（P〈0.05）。苯那普利组与灵芝组比较无统计学差异（P〉0.05）。（2）培养48h时,高糖组相对于正常对照组G0-G1期细胞比例降低,S期细胞比例增高,细胞凋亡受到抑制（P〈0.05）;而不同浓度的灵芝、苯那普利均减低了高糖对系膜细胞的这种作用,使G0-G1期细胞比例增高,S期细胞数减少,促进过度增殖的系膜细胞凋亡（P〈0.05）。结论：灵芝通过抑制高糖诱导的MCs增殖并促使其凋亡,发挥对糖尿病肾病的保护作用。     

牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其作用的可能机制。方法 用噻唑蓝MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期及凋亡，吖啶噔活体染色观察细胞凋亡形态，免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测cjn,cfos表达。结果 在5－50mmol/L浓度范围内牛磺酸能剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖，可使G0－G1期细胞增多，S期细胞减少，并能明显抑制c-jun,c-fos的表达（P＜0．01），而牛磺酸并不诱导系膜细胞的凋亡。结论 牛磺酸可显著抑制系膜细胞增殖，使系膜细胞阻滞于G0－G1期；牛磺酸对系膜细胞增殖的抑制作用与其抑制c-jun,c-fos的表达有关。牛磺酸对系膜细胞凋亡无诱导作用。     

TLR4/JNK信号通路对高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖、凋亡及炎症反应的影响

目的:探讨高糖诱导肾小球系膜细胞增殖、凋亡及炎症反应的相关机制,为防治糖尿病肾病(DN)提供一定参考.方法:培养人肾小球系膜HGMC细胞株,分为空白对照组、高糖组(30 mmol/L高糖)、通路抑制剂组(5μmol/L Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242+30 mmol/L高糖).采用MTT法、Annex...     

细胞间粘附分子对肾小球系膜细胞增殖的影响

近年来免疫病理学研究已证实细胞间粘附分子-1(ICAM-1)作为细胞粘附分子中免疫球蛋白超家族成员之一,通过与炎性细胞表面同族型配体之间相互作用形成粘附,在免疫监督、炎症反应和动脉粥样硬化等过程中起着重要的作用。因此,有关ICAM-1与肾小球系膜细胞增殖的相关研究对进一步阐明肾小球炎性疾病的发病机理及治疗的进展具有重大意义。 一、材料与方法 1.按经典方法培养、鉴定C57BL/6小鼠肾小球系膜细胞及巨噬细胞,选取第4～6代细胞用于本实验。 2.取系膜细胞,胰酶消化后,将制成的浓度为1.0×10~4/L细胞悬液加入24孔培养板内,正常对照组和     

重楼含药血清对大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

【摘要】 目的 探讨重楼治疗肾小球疾病的作用机制。 方法 以脂多糖诱导MC增殖。提取大鼠的含药血清作用于体外培养的大鼠系膜细胞(MC)，观察重楼对MC增殖、凋亡的影响。用活细胞计数（CCK-8）法检测细胞增殖。以Hoechst染色及流式细胞仪检测细胞凋亡。用RT-PCR检测bcl-2 mRNA水平。 结果 重楼含药血清可抑制MC异常增殖、诱导MC凋亡，呈剂量依赖性。重楼各剂量组MC凋亡率[低、中、高剂量组分别为（11.72±0.32）％、（19.76±0.35）％、（18.71±0.41）％]较脂多糖组[（4.68±0.25）%]均显著增高(P均< 0.01)，重楼中剂量组与低剂量组间差异有统计学意义(P < 0.01)。重楼各剂量组MC bcl-2 mRNA表达[低、中、高剂量组分别为（51.06±0.77）％、（44.06±0.66）%、（35.68±0.67）％]较脂多糖组[（59.62±1.12）％]显著减少(P < 0.01)。重楼呈剂量依赖性降低MC bcl-2 mRNA表达水平(P < 0.01)。 结论 重楼含药血清可抑制MC增生和诱导MC凋亡，其机制可能与抑制抗凋亡基因bcl-2 mRNA的表达有关。     

肾必宁冲剂加S-9对肾小球系膜细胞凋亡及其相关因素的影响

目的：探讨肾必宁冲剂对肾小球系膜细胞凋亡及凋亡相关基因ICE和BcI-2表达的影响，旨在阐明其治疗系膜增生性肾病有效的作用机制，为临床利用该药治疗以系膜增生为核心病理环节的肾脏疾病提供实验理论依据。方法：采用肾小球系膜细胞培养方法进行体外 研究，有不同剂量与S－9共同孵育的肾必宁冲剂及含肾必宁大鼠血清刺激4－6代系细胞16h,MTT法测定系膜细胞增殖指数；TUNEL法定量观察凋亡细胞；琼脂糖凝胶电泳法观察细胞核小体DNA的断裂现象，逆转录－聚合酶链反应技术（RT－PCR）检测凋亡相关基因ICE和bcI-2的表达变化。结果：加入肾必宁冲剂（S－9）16h后，系膜细胞出现了典型的凋亡征象，诸如细胞内深棕色颗粒形成、核固缩、碎裂和DNA梯形条带等，凋亡率显高于空白对照组（P＜0．01）；同时肾必宁各组ICE表达亦明显高于空白血清对照组，而抑制凋亡的bcI-2基因各组均表达不明显。结论：肾必宁冲剂可诱导系膜细胞凋亡，促进肾小球增殖性病变消散，并可通过调控ICE和bcI-2基因影响凋亡。     

青蒿琥酯对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡及Bcl-2基因表达的影响

目的：观察青蒿琥酯（Art）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cells,GMC）凋亡及Bcl-2基因表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：用不同浓度的青蒿琥酯刺激脂多糖诱导增殖的大鼠肾小球系膜细胞,HE染色观察凋亡细胞形态,DAPI荧光染色观察细胞核凋亡情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫细胞化学结构和计算机图文分析系统检测Bcl-2的表达。结果：青蒿琥酯对系膜细胞凋亡有明显诱导作用,呈一定剂量依赖性;并能明显地抑制脂多糖诱导上调的Bcl-2基因的表达,且高浓度组的抑制作用强于低浓度组。结论：青蒿琥酯能够剂量依赖性的诱导大鼠系膜细胞凋亡,其机制可能与调控Bcl-2的表达有关。     

pRb的磷酸化状态在肾小球系膜细胞增生和凋亡中的作用

目的：探讨视网膜母细胞瘤敏感基因蛋白（Rb蛋白）的磷酸化状态对大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增生和凋亡的影响。方法：将大鼠GMCs分为脂多糖（LPS）组、对照组、维生素（VitE）组、激素组与激素＋VitE组共5组分瓶培养,后3组加LPS诱导。实验末,收集培养细胞,涂片,应用免疫组化法检测GMCs的增生细胞核抗原（PCNA）、去磷酸化Rb蛋白（Rb）、磷酸化Rb蛋白（pRb）阳性表达率,TUNEL法检测GMCs凋亡指数（AI）。结果：VitE组、激素组、VitE＋激素组培养细胞PCNA阳性率均低于LPS组,VitE＋激素组培养细胞PCNA阳性率明显低于激素组。VitE组、激素组、VitE＋激素组培养细胞凋亡指数均高于LPS组,VitE＋激素组培养细胞凋亡指数明显高于激素组。VitE组、激素组、VitE＋激素组培养细胞Rb阳性率均低于LPS组,VitE＋激素组培养细胞Rb阳性率明显低于激素组。VitE组、激素组、VitE＋激素组培养细胞pRb阳性率均低于LPS组,VitE＋激素组培养细胞pRb阳性率均低于激素组。PCNA细胞阳性率与pRb阳性细胞率、Rb阳性细胞率均成正相关;AI与pRb阳性细胞率、Rb阳性细胞率均成负相关。结论：去磷酸化和磷酸化Rb蛋白表达水平增加均促进了肾脏系膜细胞的异常增生,抑制异常增生的系膜细胞凋亡,促进肾脏病的慢性进展。     

肾病Ⅰ号方对大鼠系膜细胞增殖及IL-6和FN表达的影响

目的：观察肾病Ⅰ号方（SBYHF）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）的增殖及表达纤维连接蛋白（FN）及白细胞介素-6（IL-6）的影响,探讨其抗肾纤维化的机制。方法：通过体外培养大鼠肾小球系膜细胞技术及体外药物血清实验方法,采用CCK-8法检测GMC的增殖,ELISA法检测FN的分泌水平,RT-PCR法检测IL-6 mRNA的表达。结果：肾病Ⅰ号方可显著抑制GMC和增殖（P〈0.01）,减少FN的分泌和IL-6 mRNA的表达（P〈0.01）。结论：肾病Ⅰ号方可能通过减少GMC和FN的分泌,下调IL-6 mRNA表达,而抑制大鼠肾小球系膜细胞增殖,从而发挥抗肾脏纤维化的作用。     

柴苓小方对大鼠肾小球系膜细胞异常增殖的影响

目的：探讨柴苓小方对大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）异常增殖的影响及相关机制。方法：采用脂多糖刺激系膜细胞异常增殖。MTT法检测柴苓小方对㈣异常增殖的影响；免疫细胞化学方法检测药物作用后增殖细胞核抗原（PCNA）的表达；乳酸脱氢酶释放实验检测柴苓小方的细胞毒作用。采用RT—PCR检测药物作用不同时间点细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21的表达。结果：柴苓小方可以剂量依赖性的抑制系膜细胞异常增殖并显著减少PCNA阳性细胞数而没有明显的细胞毒作用。并且柴苓小方可以显著地上调p21基因的表达（P〈0．05）。结论：柴苓小方可剂量依赖性的抑制GMC8异常增殖．其机制可能与上调p21mRNA表达有关。     

保肾片对人系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 :探讨对慢性肾衰竭治疗有效的中药复方保肾片对人系膜细胞生物学行为的影响。方法 :以健康志愿者服用保肾片 ,取不同浓度含药人血清加入系膜细胞培养体系中。应用MTT法和流式细胞仪检测系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期。结果 :含中药保肾片的血清组 ,与正常人血清对照组相比 ,显著抑制人系膜细胞增殖 (P <0 .0 5 ) ,并且使大量系膜细胞阻滞在G0 /G1期 ,能诱导人系膜细胞发生凋亡。结论 :保肾片延缓慢性肾衰竭进展的作用机理之一是抑制系膜细胞增殖和促其凋亡。     

肾康注射液与苯那普利对肾小球系膜细胞外基质抑制作用的血清学对比研究

目的：探讨肾康注射液与苯那普利对人肾小球系膜细胞外基质（ECM）不同成分的抑制作用强度,方法：采用体外培养的人肾小球系膜细胞（MC）技术和血清药理学方法,观察具有降逆泄浊,益气活血作用的中药肾康注射液及苯那普利对ECM不同成分的影响。结果：肾康注射液与苯那普利对ECM中纤维连接蛋白（FN）,层粘连蛋白（LN）和IV型胶原（CoⅣ）均具有一定抑制作用,但在等效剂量浓度下,肾康注射液对MC的抑制作用估于苯那普利,结论：MC是肾康注射液发挥治疗作用的重要靶细胞之一,抑制ECM聚积可能是该方延缓肾小球硬化的机制之一。     

灯盏花注射液对ET-1诱导的大鼠系膜细胞增殖的影响

目的:探讨灯盏花注射液对内皮素1(ET-1)诱导的大鼠系膜细胞(MC)增殖的影响.方法:在大鼠系膜细胞原代培养成功的基础上,应用MTT法和流式细胞仪观察灯盏花注射液对ET-1诱导的MC增殖和细胞周期的影响.结果:(1)ET-1(10-10～10-6mol/L)能以一定的剂量方式刺激MC的增殖,以10-8mol/L时作用最强;而灯盏花注射液(45、90、180、360mg/L)能以一定的量效关系抑制ET-1诱导的MC增殖.(2)ET-1(10-9～10-7 mol/L),能增加S期细胞百分数,减少G0/G1期细胞百分数;而上述不同浓度的灯盏花注射液则能增加G0/G1期细胞百分数,减少S期细胞百分数,均呈一定的量效关系.结论:灯盏花注射液能抑制ET-1诱导的系膜细胞DNA合成,延迟细胞周期进程,抑制MC增殖,从而减轻或延缓肾小球硬化进程,可能是其防治肾脏疾病的机制之一.     

白细胞介素-13对肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨白细胞介素—13(IL—13)对肾小球系膜细胞(MC)增殖及其细胞周期的影响。方法：用甲基偶氮唑法(MTT)测定MC增殖，流式细胞术分析细胞周期。结果：IL—13在1ng／ml、5ng／ml、10ng／ml、100ng／ml浓度范围呈剂量依赖性抑制5％FCS培养的和脂多糖(LPS)诱导的MC增殖，抑制率分别为19．8％和29．23％、24．35％和37．05％、30．03％和46．6％、46．93％和55．23％。IL—13作用MC48h，使MC较多滞留于G1期，而S期细胞减少。结论：IL—13通过参与细胞周期的调控而抑制MC增殖。