人参二醇组皂苷对再生障碍性贫血小鼠造血组织MAPK/ERK信号通路的诱导作用

目的:观察人参二醇组皂苷(PDS)对免疫介导型再生障碍性贫血(简称再障)小鼠骨髓细胞MAPK/ERK信号通路蛋白激酶及脾脏调节性T细胞的诱导作用,探讨其治疗再障的作用机制。方法:用[60Co]-γ射线5.0 Gy全身照射BALB/c小鼠,后经尾静脉输入DBA/2小鼠的淋巴细胞悬液,制备免疫介导型再障小鼠模型。60只小鼠随机分为6组,即正常组,模型组,PDS低、中、高剂量组,环孢素组。不同浓度药物灌胃治疗14 d测定各组小鼠外周血象,观察骨髓病理切片,Western blot法及免疫组织化学法测定骨髓细胞MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白水平,流式细胞术检测脾脏调节性T细胞比例。结果:再障小鼠外周血全血细胞减少,骨髓呈抑制状态;PDS治疗能够显著升高再障小鼠外周血象,增加脾脏调节性T细胞比例,呈剂量依赖性(P0.05)。PDS中、高剂量组显著上调骨髓细胞MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白水平(P0.05)。结论:PDS能有效促进造血,上调再障模型小鼠骨髓细胞MAPK/ERK信号通路多种蛋白激酶的表达,可能是PDS促进骨髓造血功能恢复的作用机制之一。另外,PDS对再障模型小鼠的免疫功能有一定的调节作用。     

人参总皂甙诱导L—细胞产生造血调节因子的实验研究

为探讨中药人参的重要有效成分人参总皂甙（TotalSaponinsofPanaxGinseng，TSPG）调节造血的可能机制，在体外祖细胞培养中以TSPG诱导（LCCMTSPG）或未经诱导（LSCM）的L—细胞条件培养液替代祖细胞生长因子，观察集落产率的变化，并与TSPG和LcCM共同作用（LcLM＋TSPG）后的集落产率作比较。结果如下：LcCMTSPG作用后的CFU－GM（位—单系祖细胞）、BFU－E（早期红系祖细胞）、CFU－E（晚期红系祖细胞）的集落产率分别为24．8±9．01、61．73±11．26、145．93±17．22，与LcCM组（51．85±10．08、33．95±825、108．66±13．56）相比分别为下降（P＜0．05）、提高（P＜0．01）、提高（P＜0．01）。提示TSPG可诱导L—细胞产生选择性作用于粒—单系的造血抑制因子和作用于红系的生长因子。LCCM＋TSPG作用后CFU－GM、BFU－E、CFU－E集落产率分别为74．25±10．67、42．5±9．32、98±10．81，与LcCM组相比分别为提高（P＜0．05）、提高（P＜0.05）、无变化，提示TSPG可能与LcCM中促进CFU－E、BFU—E生长的因子协同作用。该研究表明TSPG可经影响基质细胞产生造血调节因子或与造血调节因子共同调节血细胞发生。     

人参总皂苷诱导红系血细胞增殖的信号转导研究

目的研究人参总皂苷(TSPG)刺激红系血细胞增殖有关的细胞内信号转导途径。方法用集落形成实验检测TSPG刺激红系造血祖细胞(BFU-E、CFU-E)增殖的能力;噻唑蓝法(MTT)检测红细胞生成素(Epo)对脐血细胞增殖的影响;Western blotting法检测TSPG刺激脐血细胞24 h后EpoR表达的变化;免疫沉淀法检测TSPG对EpoR介导的蛋白酪氨酸激酶JAK2和信号传导及转录激活因子5(STAT5)的酪氨酸磷酸化的影响。结果1.TSPG10~75 mg/L均能提高脐血细胞形成BFU-E、CFU-E的集落产率,以25 mg/L提高幅度最明显;2.以MTT法测定得出Epo 2×103~5×104IU/L均能促进脐血细胞的增殖,以5×103IU/L促进增殖效果最明显;3.在不同剂量的TSPG刺激下,造血细胞EpoR的表达变化不明显;4.TSPG作用造血细胞24 h后,加入Epo继续刺激0、2、5、30 min,JAK2和STAT5的酪氨酸磷酸化均增强。结论TSPG在促进造血细胞增殖的过程中,对造血细胞EpoR表达的影响不显著,但可能在EpoR介导的信号转导过程中增强JAK2和STAT5的酪氨酸磷酸化发挥重要作用。     

人参皂甙诱导骨髓巨噬细胞表达造血生长因子的研究

目的 探讨人参皂甙对巨噬细胞表达造血生长因子的影响。方法 采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学与核酸原位杂交等技术，研究人参总皂甙(TSPG)对大鼠骨髓巨噬细胞(rBMMφ)和人单核细胞株(THP-1)表达造血生长因子的影响。结果 经TSPG(10～50mg／L)诱导制备的rBMMφ和THP-1的培养上清液可显著提高大鼠和人的CF/U-Mix、CFU-GM和CFU-E的集落产率；经PSPG诱导后rBMMφ和THP-1表达EPO、GM-CSF、IL-3、IL-6的蛋白水平有不同程度提高；经TSPG诱导后rBMMφ和THP-1表达EPO、GM—CSF和IL-3的mRNA水平和强度显著提高。结论 TSPG可通过直接和／或间接途径刺激造血诱导微环境的巨噬细胞，从蛋白水平和基因转录水平两级层次上促进造血调控因子(如EPO、GM-CSF、IL-3和IL-6等)的合成和分泌，进而促进造血干／祖细胞的增殖分化，这或许足人参调节血细胞生成的可能途径之一。     

人参皂苷降低β淀粉样蛋白诱导THP-1单核细胞ERK的磷酸化和细胞因子含量

目的观察人参皂苷对β-淀粉样蛋白(-βamyloid,Aβ)1-40诱导的THP-1单核细胞系表达细胞因子和磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)的影响。方法用Western blotting方法测定磷酸化ERK的表达,放射免疫法测定细胞培养上清液中的细胞因子IL-1β、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度。结果Aβ刺激组磷酸化ERK和细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α的表达明显高于对照组。人参皂苷(50、100和150 mg/L可减少Aβ诱导THP-1细胞磷酸化ERK和细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α的表达。与模型组比较,人参皂苷治疗组Aβ1-40诱导的THP-1细胞磷酸化ERK和细胞因子(IL-1β、IL-8和TNF-α)的表达明显降低。结论人参皂苷可抑制Aβ诱导的ERK磷酸化,进一步减少细胞因子的产生。     

营养组合物促进再障小鼠造血干细胞增殖与血红蛋白合成

目的评价促进造血干细胞增殖与血红蛋白合成营养组合物对小鼠再生障碍性贫血造血功能的影响。方法BALB/c小鼠100只,适应性喂养1周后,随机分为:正常对照组、再障模型组及不同剂量的营养组合物组。采用乙酰苯肼、X射线、环磷酰胺联合应用的方法建立再生障碍性贫血小鼠模型,以铅砖屏蔽施以假照射及单纯等量生理盐水相应部位注射为正常对照组。试验第7天开始,营养组合物高、中、低剂量组小鼠每天灌胃,分别给予1445.55,963.7,674.59 mg/(kg·d)营养组合物,直至第45天,颈椎脱臼法处死小鼠,观察试验小鼠的血象、骨髓象、造血细胞内的线粒体、造血干细胞集落的形成及肝脏、脾脏的病理变化。结果营养组合物组的外周血象三系细胞、骨髓有核细胞数、造血干细胞集落的形成明显高于再障模型组(*p<0.05,*p<0.01),且呈剂量-效应关系,促红细胞生成素(EPO)因代偿作用含量显著降低(*p<0.01)。骨髓透射电镜显示,不同剂量的营养组合物组与再障模型组比较,同类造血细胞内线粒体数目明显增多(*p<0.01)。造血干细胞集落实验证明,营养组合物组集落形成率明显高于再障组。不同剂量的营养组合物组与再障模型组相比,肝脏组织水肿减轻,小叶结构明显清晰,肝细胞形态正常,脾脏虽仍有部分充血,但脾小体个数较再障模型组明显增多。结论营养组合物促进再障小鼠外周血细胞生成和骨髓造血干细胞的增殖,促进骨髓造血细胞内线粒体的增加,对肝、脾的损伤具有明显恢复作用。     

人参总皂甙对骨髓巨噬细胞的影响及与造血调控的关系

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对骨髓巨噬细胞(BMMφ)生物学活性的影响及其与造血调控关系。方法：采用骨髓造血祖细胞体外培养，造血生长因子生物活性检测，免疫细胞化学，核酸探针原位杂交等技术。结果：经TSPG诱导制备的BMMφ的培养上清可提高髓系造血祖细胞的集落产率；经TSPG诱导后，BMMφ表达EPO，IL-3，IL-6，GM-CSF的蛋白水平有不同程度提高；EPO mRNA，GM-CSF mRNA的表达水平和强度明显提高。结论：TBPG可以刺激造血诱导微环境中的巨噬细胞，从基因水平和蛋白水平2级层次上促进造血调控因子的合成和分泌，进而促进CFU-Mix，CFU-E，CFU-GM的增殖分化。     

人参总皂甙体外诱导CD34+造血干/祖细胞增殖的作用

目的：探讨人参总皂甙(TSPG)协同造血生长因子体外诱导CD34~ 造血干/祖细胞(HSC/HPC)增殖的作用。方法：收集人脐血细胞,采用Stemsep TM干细胞分选系统分离纯化CD34~ HSC/HPC,经不同剂量TSPG加入不同造血生长因子组合进行培养,检测细胞总数、CD34~ 细胞及集落形成细胞总数(CFCs)的变化。结果：TSPG 10、20、50和70μg/ml均可不同程度地提高细胞总数、CFCs和CD34~ 细胞扩增倍数,TSPG 50μg/ml是最佳刺激浓度,可使细胞总数、CFCs和CD34~ 细胞分别增至(2470．50±79．96)倍、(53．96±4．29)倍和(21．86士3．09)倍。结论：合适剂量的TSPG能够促进CD34~ 造血干/祖细胞体外增殖。     

人参皂甙RB2 抑制NF-κB 的激活对LPS 诱导的新生小鼠急性肺损伤的免疫调节作用

目的:研究人参皂苷RB2对脂多糖(LPS)诱导的新生小鼠急性肺损伤的免疫功能的影响及相关分子机制。方法:将新生小鼠随机分为四组:健康组(Ctrl);人参皂苷单独处理组(GR2):健康小鼠腹腔注射GR2 50 mg/kg BW; LPS诱导组(LPS):腹腔注射0. 6 mg/kg BW的LPS,连续5 d; LPS+GR2组:模型小鼠腹腔注射人参皂苷50 mg/kg BW。HE染色观察肺组织损伤情况; TUNEL染色观察肺组织细胞凋亡; Western blot检测Caspase-3和Caspase-9的表达; ELISA检测炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α和IL-10的含量; Western blot检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和NF-κBp 65的表达水平。结果:LPS组与对照组相比,肺组织出现明显的损伤,肺泡壁明显增厚,出现大量炎性细胞浸润;染色呈阳性的凋亡细胞比率显著提高; Caspase-3和Caspase-9的表达水平显著上调;炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的含量显著上升,IL-10的含量没有明显变化; HMGB1和MIF的表达显著上调;磷酸化的NF-κB p65的表达显著上调。LPS+GR2组与LPS组相比,肺组织损伤明显得到缓解,多数肺泡结构完整,仅有少量炎性细胞浸润;凋亡细胞的比率显著下降; Caspase-3和Caspase-9的表达水平显著下调;炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的含量显著下降,IL-10的含量没有明显的变化; HMGB1和MIF的表达显著下调;磷酸化的NF-κB p65的表达显著下调。结论:人参皂苷RB2抑制NF-κB的激活,进而调节LPS诱导的新生小鼠急性肺损伤的免疫反应。     

人参皂苷Rh1对哮喘模型小鼠炎症因子表达的抑制作用

目的:观察和探讨人参皂苷Rh1对哮喘模型小鼠的血清和支气管肺泡冲洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎症因子的表达和肺组织形态学变化的影响。方法:雄性BALB/c小鼠40只,分为正常对照组、哮喘模型组、人参皂苷Rh1小剂量(40 mg·kg~(-1)·d~(-1))治疗组和人参皂苷Rh1大剂量(80 mg·kg~(-1)·d~(-1))治疗组,并利用卵清蛋白致敏和雾化吸入激发方法制作哮喘模型;人参皂苷Rh1小剂量治疗组和大剂量治疗组分别在每次激发攻击前30 min灌胃,每天一次,共2周。在末次激发24 h后收集BALF,计数嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)数目;利用ELISA测定BALF中白细胞介素(IL)-4、IL-5和干扰素γ(IFN-γ)的水平;收集血液并测定血清中Ig G和Ig E的水平;用Western blot检测肺组织中转化生长因子(TGF)-β1蛋白表达的变化;用HE染色观察肺组织的病理学变化。结果:人参皂苷Rh1可抑制小鼠哮喘模型BLAF中EOS数目(P0.01);降低BLAF中IL-4、IL-5和IFN-γ的表达(P0.01);减少血清中Ig E的含量(P0.01);减少肺组织中TGF-β1蛋白表达(P0.01),并改善哮喘小鼠肺组织病理学变化。结论:人参皂苷Rh1对哮喘小鼠具有抑制炎症因子表达、调节免疫反应和改善肺组织病理变化的作用。     

人参总皂甙对小鼠造血细胞增殖的影响

应用ＭＴＴ比色分析法证实,人参总皂甙在一定浓度内能促进小鼠骨髓造血细胞的增殖。应用流式细胞术的研究提示,人参总皂甙能促进骨髓造血细胞进入细胞增殖周期。造血祖细胞体外培养的研究表明,人参总皂甙能促进小鼠多种造血祖细胞的集落形成。综述上研究结果提示,人参总皂甙可能通过促进髓造血细胞进入细胞增殖周期以及促进造血祖细胞增殖等途径。刺激血细胞的生成,进而发挥其临床“补气生血”作用。     

人参总皂甙对造血生长因子产生的影响

本文应用造血祖细胞体外培养术和白细胞介素（ＩＬ）生物活性检测术，观察经人参总皂甙（ＴＳＰＧ）刺激的小鼠脾细胞、腹腔巨噬细胞和成纤维细胞培养上清液的集落刺激因子（ＣＳＦ）、ＩＬ－２和ＩＬ－６生物活性。结果表明：ＴＳＰＧ刺激组的ＣＳＦ和ＩＬ－６活性均显著高于对照组，ＴＳＰＧ刺激的脾细胞培养上清液的ＩＬ－２活性明显高于对照组，而ＴＳＰＧ刺激的巨噬细胞和成纤维细胞培养上清液的ＩＬ－２活性与对照组无显著性差     

人参总皂甙对人淋巴细胞表达早期造血生长因子的影响

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人淋巴细胞表达早期造血生长因子的影响,探讨人参“补气生血”的现代分子生物学机理。方法：采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物活性检测、免疫细胞化学、核酸分子原位杂交技术,研究TSPG对胎儿胸腺细胞、脾细胞表达早期造血生长因子的影响及其机理。结果：经TSPG诱导制备的胎儿胸腺细胞条件培养液(HTCM)、脾细胞条件培养液(HSCM)对人髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)的增殖分化有明显促进作用;经TSPG诱导后胎儿胸腺细胞、脾细胞内IL-3的蛋白及mRNA表达显著提高。结论：TSPG可能诱导人淋巴细胞表达早期造血生长因子,从而促进人早期血细胞增殖分化。     

Proteoglycan 4, a novel immunomodulatory factor, regulates parathyroid hormone actions on hematopoietic cells

Proteoglycan 4 (PRG4), a critical protective factor in articular joints, is implicated in hematopoietic progenitor cell expansion and megakaryopoiesis. PRG4 loss-of-function mutations result in camptodactyly-arthropathy-coxa vara-pericarditis (CACP) syndrome, which is characterized primarily by precocious joint failure. PRG4 was identified as a novel parathyroid hormone (PTH) responsiveness gene in osteoblastic cells in bone, and was investigated as a potential mediator of PTH actions on hematopoiesis. Sixteen-week-old Prg4(-/-) mutant and Prg4(+/+) wild-type mice were treated daily with intermittent PTH (residues 1-34) or vehicle for 6 weeks. At 22 weeks of age, Prg4 mutant mice had increased peripheral blood neutrophils and decreased marrow B220(+) (B-lymphocytic) cells, which were normalized by PTH. The PTH-induced increase in marrow Lin(-)Sca-1(+)c-Kit(+) (hematopoietic progenitor) cells was blunted in mutant mice. Basal and PTH-stimulated stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) was decreased in mutant mice, suggesting SDF-1 as a candidate regulator of proteoglycan 4 actions on hematopoiesis in vivo. PTH stimulation of IL-6 mRNA was greater in mutant than in wild-type calvaria and bone marrow, suggesting a compensatory mechanism in the PTH-induced increase in marrow hematopoietic progenitor cells. In summary, proteoglycan 4 is a novel PTH-responsive factor regulating immune cells and PTH actions on marrow hematopoietic progenitor cells.     

Th1 cells regulate hematopoietic progenitor cell homeostasis by production of oncostatin M

Regulation of hematopoietic progenitor cell homeostasis is crucial for maintenance of innate immunity and the ability of the body to respond to injury and infection. In this report, we demonstrate that progenitor cell numbers and cycling status in vivo are dramatically increased in mice deficient in Stat6 and decreased in mice deficient in Stat4, targeted mutations which also alter T helper cell polarization. Experiments using mice that have T cell restricted transgenic expression of Stat4 or Stat6 or have been in vivo depleted of T cell subsets demonstrate that CD4(+) T cells regulate progenitor cell activity. Injection of the Th1 cytokine Oncostatin M but not other cytokines into Stat4-deficient mice recovers progenitor cell activity to wild-type levels. Thus, T helper cells actively regulate hematopoietic progenitor cell homeostasis.     

Th1/Th2 lymphocyte balance in patients with aplastic anemia

Activated T cell plays an important role in the pathogenesis of aplastic anemia (AA). CD4+ T cells are divided into Th1 cells producing hematopoietic inhibitory cytokines like interferon-gamma and Th2 cells producing interleukin-4. We investigated the Th1/Th2 cell ratio in the peripheral blood of AA patients treated with immunosuppressive therapy (IST). There were 10 patients who responded well to IST (responders) and 3 patients who were refractory to IST (non-responders). Th1 cells were lower in responders than in non-responders (16.2+/-2.4% vs. 28.8+/-5.5%, respectively, p<0.05), whereas Th2 cells did not differ. The Th1/Th2 ratio was also significantly lower in responders than in non-responders, being 13.2+/-1.5 and 40.4+/-5.1 (p<0.001), respectively. In three responders, the Th1/Th2 ratio was declined according to the hematological recovery (from 10.6 to 8.3, 16.3 to 10.9 and 11.8 to 9.5). Our results suggest that Th1 lymphocytes are more predominant in AA, and it may be very useful to monitor the Th1/Th2 ratio during IST.     

间充质干细胞可能通过调控免疫细胞促进再生障碍性贫血小鼠骨髓的造血功能

目的:探讨间充质干细胞(MSCs)影响再生障碍性贫血小鼠造血功能的可能免疫机制。方法:30只小鼠分3组,分别为单纯照射组、再障模型组、MSCs治疗组,建立再生障碍性贫血小鼠模型。单纯照射组仅经5Gy[60Co]γ射线照射,再障模型组经5Gy[60Co]γ射线照射后输注DBA/2小鼠胸腺淋巴结细胞1×106cell/只,MSCs治疗组经5Gy[60Co]γ射线照射后输注DBA/2小鼠胸腺淋巴结细胞1×106cell/只,3d后输注人骨髓MSCs1×106cell/只。观察各组小鼠外周血象、骨髓及外周血CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+、NK细胞变化及与造血的关系。结果:经5Gy[60Co]γ射线照射后,单纯照射组、MSCs治疗组外周血象第7d开始下降,21d血象恢复正常。再障模型组外周血象第7d开始持续性下降,至21d血象仍未恢复。照射后7d,各组小鼠间外周血CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+无明显差异,但MSCs治疗组NK细胞低于单纯照射组和再障模型组(P0.05)。照射后14d3组CD4+细胞比例均明显下降,CD8+细胞则表现不同,再障模型组与MSCs治疗组CD8+细胞比例明显高于单纯照射组,至照射后21d,MSCs治疗组CD8+、NK细胞与单纯照射组相近、而模型组则明显高于单纯照射组和MSCs治疗组;MSCs治疗组小鼠股骨病理切片中脂肪细胞比例明显低于再障模型组,与单纯照射组结果一致。结论:MSCs输注可能通过调控免疫细胞影响再生障碍性贫血小鼠骨髓造血功能。     

Roles of Stat3 and ERK in G-CSF signaling

G-CSF specifically stimulates the proliferation and differentiation of cells that are committed to the neutrophil-granulocyte lineage. Although Stat3 was thought to be essential for the transduction of G-CSF-induced cell proliferation and differentiation signals, mice deficient for Stat3 in hematopoietic cells show neutrocytosis and infiltration of cells into the digestive tract. The number of progenitor cells in the neutrophil lineage is not changed, and G-CSF-induced proliferation of progenitor cells and prolonged neutrophil survival were observed in Stat3-deficient mice. In hematopoietic cells from Stat3-deficient mice, trace levels of SOCS3, a negative regulator of granulopoiesis, were observed, and SOCS3 expression was not induced by G-CSF stimulation. Stat3-null bone marrow cells displayed a significant activation of extra-cellular regulated kinase 1 (ERK1)/ERK2 under basal conditions, and the activation of ERK was enhanced and sustained by G-CSF stimulation. Furthermore, the augmented proliferation of Stat3-deficient bone marrow cells in response to G-CSF was dramatically decreased by addition of a MEK1 inhibitor. These results indicate that Stat3 functions as a negative regulator of G-CSF signaling by inducing SOCS3 expression and that ERK activation is the major factor responsible for inducing the proliferation of hematopoietic cells in response to G-CSF.