咪唑克生对EAE小鼠血脑屏障通透性及对MMP-9/TIMP-1的影响

 目的：观察咪唑克生（idazoxan,IDA）对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）时血脑屏障(BBB)通透性及脊髓内的MMP-9/TIMP-1表达的影响。 方法：选用36只8周左右的C57BL/6小鼠,随机分为空白对照组、EAE组和IDA干预组,每组12只,采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）诱导经典EAE模型,干预组采用IDA 2 mg/kg腹腔注射,每天2次,共15 d。观察每组大鼠发病情况并进行神经功能障碍评分,采用HE染色和LFB髓鞘染色观察病理改变,采用伊文思蓝荧光定量方法检测BBB通透性的变化,并用Western blotting法检测MMP-9和TIMP-1的表达。结果：空白对照组无一发病,与EAE组比较, IDA干预组神经功能障碍评分明显下降,炎性病灶明显减少,BBB通透性明显降低,MMP-9的表达和MMP-9/TIMP-1比值明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：IDA可能通过下调MMP-9,降低MMP-9/TIMP-1比值,减轻血脑屏障的降解破坏,从而稳固BBB,降低BBB通透性,减缓小鼠EAE的发病。     

MMP-9和细胞骨架肌动蛋白参与缺氧缺血诱导的体外血脑屏障模型通透性增加

目的：探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和细胞骨架肌动蛋白（actin）在体外模拟缺氧缺血诱导的血脑屏障（BBB）模型通透性增高中的变化及其机制。 方法: 利用人脐静脉内皮细胞系ECV304与星型胶质细胞（AS）共培养建立体外大鼠BBB模型，模型随机分为正常对照组、缺氧缺血组、BB-1101预处理组。通过γ计数仪检测大分子物质［125I］- 牛血清白蛋白（［125I］- BSA）通透曲线观察BBB通透性的改变，直接免疫荧光和Western 印迹法检测actin表达量及分布的改变，并利用金属蛋白酶抑制剂BB-1101探讨MMP-9是否参与缺氧缺血诱导的BBB通透性增加。 结果: 缺氧缺血刺激后5 h，缺氧缺血组［125I］-BSA的通透量增加、MMP-9表达增加，与对照组比较有显著差异（P<0.01）。直接免疫荧光下观察周边actin丝带模糊，细胞间连接松散，出现裂隙，但表达总量没有变化。BB-1101预处理可以减轻缺氧缺血所致的MMP-9表达增加和对actin连接的破坏，［125I］-BSA通透量低于缺氧缺血组（P<0.01）。结论: 缺氧缺血诱导MMP-9表达增加进而促使actin蛋白重组，是导致BBB通透性增加的机制之一。     

大豆异黄酮对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的影响及其机制

目的 探讨大豆异黄酮(SI)对局灶性脑缺血再灌注大鼠的血脑屏障(BBB)通透性的影响及相关机制。方法 72只健康成年SD大鼠均分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和SI预处理组(SI组),每组各24只。SI组每天按120 mg/kg体质量给予12 mg/mL SI灌胃1次,Sham组和I/R组每天用等体积生理盐水灌胃1次,均连续灌胃21 d。在实验第22天,I/R组和SI组大鼠用线栓阻断右侧大脑中动脉血流制作大脑中动脉缺血再灌注动物模型;Sham组不插入线栓,未阻断血流,其余手术操作与I/R和SI组一致。I/R组和SI组大鼠缺血2 h后,拔出阻塞的线栓恢复血流,再灌注24 h。根据Zea longa评分,选择造模成功的大鼠。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)检测大鼠脑梗死体积,干湿重法检测脑组织含水量,伊文思蓝(EB)示踪法检测BBB通透性,Western blot检测脑组织MMP-9、TIMP-1蛋白表达。比较三组大鼠的测量数据,分析SI预处理对以上观测指标的影响。结果 SI组和I/R组大鼠的神经功能评分、脑梗死体积、脑组织含水量和脑组织内EB含量均高于Sham组,而SI组低于I/R组,分别为(1.50±1.13)、(2.33±0.82)和(0.00±0.00)分,12.5%±2.34%、37.50%±2.28%和0.07%±0.03%,81.75%±0.86%、84.17%±0.54%和78.24%±0.41%,(46.50±1.41)、(55.44±1.37)和(3.83±1.49)μg/g,差异均有统计学意义(P值均＜0.01)。SI组和I/R组MMP-9、TIMP-1表达均明显高于Sham组,分别为0.81±0.23、1.15±0.14、1.15±0.14和2.31±0.20、1.62±0.21、1.62±0.21,差异均有统计学意义(P值均<0.01);与I/R组相比,SI组MMP-9表达减少、TIMP-1表达增加,差异均有统计学意义(P值均＜0.01)。结论 SI可能通过下调缺血再灌注后脑组织MMP-9蛋白表达和上调TIMP-1蛋白表达,降低BBB的通透性,减轻缺血再灌注后脑水肿的程度和脑组织EB的含量。     

电针预处理对MCAO大鼠模型血脑屏障和MMP-9的影响

目的:探讨电针(EA)预处理对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障(BBB)通透性及脑内基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法:96只成年雄性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、单纯电针(EA)组、缺血(MCAO)组及电针预处理(EA+MCAO)组,每组24只。使用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血120 min再灌注48 h后处死取脑。分别采用干湿重法测定各组动物脑水含量,伊文斯蓝(EB)法检测血脑屏障通透性,Western Blot检测紧密连接蛋白(TJP)及MMP-9表达水平,同时明胶酶谱法检测MMP-9活性。结果:与Sham组相比,MCAO组大鼠脑水含量及EB含量增多(P0.05),缺血侧脑组织TJP水平下降(P0.05),MMP-9表达及活性明显升高(P0.05);与MCAO组大鼠比较,EA+MCAO组脑水含量及EB含量减少(P0.05),缺血侧脑组织TJP水平升高(P0.05),同时MMP-9表达及活性显著降低(P0.05)。结论:电针预处理通过抑制缺血后脑内MMP-9的表达及活性,维持BBB完整性,有效改善脑缺血后的脑水肿症状。     

L-硝基-精氨酸甲酯对严重烫伤早期大鼠血脑屏障通透性和基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:观察L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)对严重烫伤早期大鼠血脑屏障(BBB)通透性和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨L-NAME对血脑屏障的保护作用.方法:健康SD大鼠,随机分为正常对照组、假烫伤组、烫伤组、烫伤+L-NAME治疗组.烫伤后又设3、6、12、24、48h等5个时相点,用透射电镜观察BBB超微结构变化;紫外分光光度计检测脑伊文氏蓝(EB)含量;免疫组织化学观察脑MMP-9表达.结果:烫伤后脑EB含量明显增高,MMP-9表达升高,差别具有显著性.电镜显示烫伤后大脑皮质的神经细胞线粒体肿胀或溶解.脑毛细血管周围出现空泡化,内皮肿胀,基底膜厚薄不均.L-NAME始疗后,脑EB含量明显下降,MMP-9表达恢复至正常水平,脑毛细血管、神经细胞、突触及基底膜等超微结构基本恢复正常.结论:烫伤后血脑屏障通透性增高与脑内MMP-9表达升高密切相关,提示MMP-9是严重烫伤后血脑屏障损伤的关键因素.早期应用L-NAME能明显减轻烫伤对BBB的损伤,可能与L-NAME抑制MMP-9表达有关.     

川芎嗪对内毒素脂多糖诱导的体外血脑屏障模型通透性增高的保护作用及其机制

目的:探讨川芎嗪对内毒素脂多糖(LPS)诱导的体外血脑屏障模型通透性增高的保护作用及其调控机制。方法:利用脑微血管内皮细胞与星型胶质细胞共培养建立体外大鼠血脑屏障模型,随机分为正常对照组、川芎嗪对照组、LPS干预组和川芎嗪治疗组。采用γ计数仪检测~(125)I-BSA通透量观察体外血脑屏障模型通透性的改变,Western印迹法检测紧密连接蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)表达量的变化。结果:LPS使体外血脑屏障模型对~(125)I-BSA的通透量明显增加,脑微血管内皮细胞ZO-1蛋白表达下降,川芎嗪治疗组能明显拮抗LPS的上述作用。结论:川芎嗪对LPS诱导的体外血脑屏障通透性增高具有保护作用,其机制与它能影响血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1表达有关。     

丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1和血脑屏障的影响

目的:探讨丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)和血脑屏障的影响.方法:90只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,NBP预处理低剂量组、中剂量组、高剂量组.采用线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2h再灌注24 h后以干湿重法测定脑组织含水量,伊文思蓝(EB)评估血脑屏障的破坏程度,实时PCR检测MMP-9及TIMP-1 mRNA的表达水平.结果:脑缺血再灌注后,脑组织含水量及EB含量明显增加,MMP-9和TIMP-1表达均增强,与假手术组比较差异有统计学意义.丁苯酞预处理各组脑组织含水量及EB含量较模型组明显下降,MMP-9表达显著减少,TIMP-1表达明显增加,丁苯酞预处理中、高剂量组差异无统计学意义.结论:丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠可通过调节MMP-9/TIMP-1的表达,降低血脑屏障通透性,减轻脑水肿,发挥预防性保护作用.     

基质金属蛋白酶-9及其组织抑制物-1在妊娠输卵管黏膜中的表达

目的:检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织抑制物-1(TIMP-1)在输卵管黏膜中的表达,探讨与输卵管妊娠的关系。方法:采用免疫组织化学显色技术和图像半定量分析法,检测MMP-9和TIMP-1在人妊娠输卵管黏膜、人正常输卵管黏膜及正常宫内早孕子宫蜕膜组织中的表达。结果:MMP-9和TIMP-1在正常宫内早孕组中表达最强,在输卵管妊娠组中的表达较强,在正常输卵管组中表达较弱。两两比较差异均有显著性。结论:MMP-9/TIMP-1参与了输卵管妊娠中胚胎着床过程,且与输卵管妊娠缺乏蜕膜化反应有关。     

两次线栓法构建脑缺血耐受模型大鼠血脑屏障通透性改变与基质金属蛋白酶9的表达

背景：诸多研究证实,短暂性脑缺血预处理可诱导脑缺血耐受。然而,脑缺血耐受的内源性保护机制尚未明确。 目的：观察脑缺血预处理诱导脑缺血耐受大鼠再灌注不同时间窗血脑屏障通透性改变及基质金属蛋白酶9表达的变化。 方法：将Wistar大鼠随机分为3组,缺血预处理组采用线栓法阻塞大脑中动脉10 min建立局灶性缺血预处理模型,分别在缺血预处理后1,3,7,14,21 d进行再次缺血2 h;模型组不进行缺血预处理,假手术组不阻塞血管。于再灌注22 h进行神经功能检测,采用TTC染色测定脑梗死体积,通过测定渗出血管外的伊文思蓝含量来评价血脑屏障通透性的变化,免疫组织化学和原位杂交法检测基质金属蛋白酶9蛋白及mRNA的表达。 结果与结论：与模型组比较,缺血预处理组1,3,7 d亚组的神经功能评分、脑梗死体积、血脑屏障通透性、脑含水量以及基质金属蛋白酶9蛋白和mRNA表达均明显减小/降低(P < 0.05或P < 0.01),其中以3 d亚组降低最为明显。提示缺血预处理诱导了脑缺血耐受,预缺血诱导的血脑屏障通透性改变以及基质金属蛋白酶9表达减低在脑缺血耐受中发挥重要作用。     

麻杏石甘汤对哮喘模型小鼠气道重塑及肺组织MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的:观察麻杏石甘汤对哮喘模型小鼠气道重塑及肺组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)表达的影响,探讨其治疗哮喘的可能机制。方法:将72只健康雌性BALB/c小鼠随机分为:空白对照组,模型组,麻杏石甘汤低剂量组、中剂量组和高剂量组,阳性对照组。采用卵清蛋白致敏激发建立小鼠哮喘模型。空白对照组和模型组于激发前30 min以生理盐水灌胃;麻杏石甘汤低剂量组、中剂量组和高剂量组分别于激发前30 min以麻杏石甘汤按5.0 g/kg、10.0 g/kg和20.0 g/kg剂量灌胃;阳性对照组于激发前30 min以地塞米松按0.005 g/kg剂量灌胃。连续给药7 d后,观察气道反应性、支气管肺泡冲洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)计数、杯状细胞百分比和胶原沉积的变化;ELISA法检测MMP-9和TIMP-1水平;Western blot法检测MMP-9和TIMP-1的蛋白表达;RT-qPCR法分析检测MMP-9和TIMP-1的mRNA表达。结果:与空白对照组比较,模型组的气道反应性、杯状细胞百分比、胶原沉积、BALF中EOS计数及肺组织MMP-9和TIMP-1的mRNA和蛋白水平均显著升高(P 0.01);与模型组比较,麻杏石甘汤低剂量组、中剂量组和高剂量组及阳性对照组上述指标则明显降低(P 0.05或P 0.01)。结论:麻杏石甘汤可能通过降低MMP-9和TIMP-1的表达改善哮喘模型小鼠气道重塑状态。     

MMP-9促进间充质干细胞穿越血脑屏障的作用研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）开放血脑屏障（BBB）,促进大鼠间充质干细胞（rMSCs）穿越BBB的作用.方法 构建体外BBB模型,运用Transwell细胞迁移率实验明确MMP-9对体外BBB模型的穿透效果.体内实验：4周龄SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血性脑损伤（HIBD）组、MMP-9处理组及MMP-9抑制剂（TIMP-1）干预组;HE染色观察各实验组不同时间点（0.5、1、3、7、14d）的大脑皮质病理变化和检测其脑含水量,EB值法检测BBB通透性;同时采用Western Blot测定大鼠皮质中MMP-9蛋白表达和免疫组织化学法测定大脑皮质内5-溴-2-脱氧嘧啶（Brdu）标记rMSCs阳性细胞数量.结果 Transwell细胞迁移率实验显示,缺氧状态下各组穿过小室的rMSCs数量均明显高于常氧,差异有统计学意义（P＜0.01）;MMP-9处理组穿过小室的rMSCs数量明显高于阴性对照组和TIMP-1干预组,差异有统计学意义（P＜0.01）.体内实验结果表明：与HIBD组相比,MMP-9处理组脑含水量、BBB通透性增加程度均有所提高;TIMP-1干预组的相应指标均有所降低.大鼠皮质中MMP-9蛋白表达水平具有时间依赖性,MMP-9处理组1～3 d时含量达到最高,明显高于HIBD组和TIMP-1干预组,差异有统计学意义（P＜0.01,P＜0.05）,之后表达开始回落,但仍有稳定表达.MMP-9处理组穿越BBB的Brdu阳性细胞数比HIBD组多,差异有统计学意义（P＜0.01,P＜0.05）.结论 大鼠缺氧缺血后MMP-9表达升高,可介导开放BBB,促进rMSCs穿越BBB.     

红花多糖对荷瘤小鼠肿瘤组织基质金属蛋白酶-9、组织金属蛋白酶抑制剂-1mRNA表达影响的研究

目的 探讨红花多糖(safflower polysaccharide,SPS)对荷瘤小鼠肿瘤组织中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-9、组织金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitors of metalloproteinase,TIMP-1)mRNA表达的影响.方法 BABL/c小鼠腋下接种S180肉瘤,腹腔注射SPS连续10 d,给药结束24 h后取肿瘤组织Real time-PCR法测MMP-9、TIMP-1 mRNA表达水平.结果 SPS低剂量组、中剂量组和高剂量组肿瘤组织中MMP-9的表达量分别是模型对照组的0.452、0.204、0.026倍,TIMP-1的表达量分别是模型对照组的3.4、5.2、10.0倍.结论 SPS能够抑制肿瘤组织中MMP-9基因的表达,促进TIMP-1基因的表达,具有抑制肿瘤及其转移的作用.     

人血脑屏障体外实验模型的建立及缺氧-复氧对其通透性的影响

目的建立人血脑屏障体外实验模型，并探讨缺氧-复氧对血脑屏障模型通透性的影响。 方法将分离、纯化的人脑微血管内皮细胞（HB-MVEC）在细胞插入器上培养至汇合状态，以液面试漏试验确定血脑屏障模型的形成，并通过形态学检查、跨内皮细胞电阻（TEER）测定和辣根过氧化物酶（HRP）通透率对血脑屏障模型进行鉴定；以未达汇合状态的HB-MVEC及培养至汇合状态的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为对照。观察缺氧-复氧处理（缺氧2h和复氧1、2、4、8、24h）和缺氧-复氧时存在白细胞激活产物（缺氧2h后在有白细胞激活产物存在情况下复氧1h）对血脑屏障模型通透性的影响，以及前列腺素E、α1抗胰蛋白酶和丹参单体764-3对血脑屏障模型的保护作用。各项实验均观察3孔细胞。 结果HB-MVEC在细胞插入器培养至汇合状态后，液面试漏试验呈阳性；扫描电镜观察显示细胞间无间隙，透射电镜检查证实细胞间存在紧密连接。血脑屏障模型、未达汇合状态HB-MVEC和HUVEC的TEER分别为（46.0±1.3）、（30.8±1.4）、（7.5±2.1）Ω/cm^2；向细胞插入器内加入含HRP的培养基培养1h后，HRP通透率分别为0.17%±0.03%、0.26%±0.04%和0.94%±0.07%；缺氧2h和复氧1、2、4、8、24h HRP通透率分别为3.97%±0.94%、6.06%±0.75%、7.17%±0.18%、7.96%±0.47%、8.57%±0.62%、10.37%±0.78%。血脑屏障模型缺氧2h后在有白细胞激活产物的情况下复氧1h，其HRP通透率为8.87%±0.76%，明显高于无白细胞激活产物组（7.20%±0.87%）；而前列腺素E、α1抗胰蛋白酶和丹参单体764-3能够减弱这种情况下的血脑屏障模型通透性增加，3组的HRP通透率分别为7.08%±0.89%，6.01%±0.57%和5.53%±0.62%。 结论应用HB-MVEC可以构建血脑屏障体外模型，缺氧-复氧明显增加血脑屏障模型的通透性，前列腺素E、α1抗胰蛋白酶和丹参单体764-3具有保护血脑屏障     

Effects of endothelin-1 on blood-brain barrier permeability during focal cerebral ischemia in rats

The purpose of this study was to determine whether the transport of small hydrophilic molecules across the blood-brain barrier (BBB) during focal cerebral ischemia could be altered by a topical application of endothelin-1 (ET-1) in the ischemic cortex (IC). Forty minutes after middle cerebral artery (MCA) occlusion, patches of 10 nM ET-1 (low-endothelin group), 100 nM ET-1 (high-endothelin group), or normal saline (control group) were placed on the IC of rats for a 20-min period. One hour after MCA occlusion, transfer coefficient (Ki) of [14C-alpha-]aminoisobutyric acid (14C-AIB) or regional cerebral blood flow (rCBF) was determined. Vital signs were not significantly different among the experimental groups. In the control group (n=8), the Ki of the IC was significantly higher than that of the contralateral cortex (CC; 11.9+/-5.8 vs 5.0+/-1.9 microl/g per minute). In the low-endothelin group (n=8), the Ki of the IC was still significantly higher than that of the CC (9.4+/-5.2 vs 5.3+/-2.5 microl/g per minute). However, in the High-endothelin group (n=8), the Ki of the IC was not different from that of the CC (6.9+/-2.1 vs 5.6+/-2.3 microl/g per minute) and 42% lower than that of the control group. The rCBF was not affected by 100 nM of ET-1 [control (n=6): IC 53+/-18 ml/100 g per minute, CC 94+/-23 ml/100 g per minute; high-endothelin (n=6): IC 49+/-15 ml/100 g per minute, CC 98+/-24 ml/100 g per minute]. Our data suggest that the application of endothelin-1 in the IC could reduce the transfer coefficient of small hydrophilic molecules across the BBB during focal ischemia.     

Alterations of the blood-brain barrier in cerebral white matter lesions in the ageing brain

White matter lesions (WML) are associated with dementia and are common in brain ageing. In order to determine whether alteration of the blood-brain barrier (BBB) may contribute to the pathogenesis of WML we assessed albumin leakage and expression of the tight junction (TJ) proteins claudin-5 (Cln-5), zona occludin-1 (ZO-1) and occludin in cases derived from the Medical Research Council Cognitive Function and Ageing Study. Albumin extravasation was widespread in the ageing brain and enhanced in WML, suggesting dysfunction of the BBB may contribute to the pathogenesis of WML. This was not accompanied by significant changes in the endothelial expression of TJ proteins. However, ZO-1 and occludin were expressed by glial cells throughout the parenchyma of both control white matter and WML, suggesting these TJ proteins may have other functions in the brain.     

壮通饮对缺氧/复氧诱导的HUVEC/U251细胞屏障损伤的影响

目的:观察壮通饮(ZTY)对缺氧/复氧诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)和人星形细胞瘤U251细胞损伤模型的作用,探讨壮药保护血脑屏障的相关机制.方法:将8只SD大鼠随机分为4组:空白组(蒸馏水)及低、中、高剂量(3.74、7.48和14.96 g/kg)ZTY含药血清组,每天1次,连续7 d灌胃饲养,获取含药血...     

颈淋巴阻滞对大鼠血脑屏障通透性的影响

目的: 探讨大鼠颈淋巴阻滞后血脑屏障(BBB)通透性的变化。方法: 手术组大鼠采用Casley-Smith法阻滞颈淋巴,对照组大鼠不摘除颈淋巴结和不结扎淋巴管,只将它们分离暴露。每组于术后1、3、5、7、14、21 d,通过观察血清中S-100B的浓度、电镜观察镧离子示踪剂和BBB超微结构变化来确定BBB通透性的改变。结果: 各组血清中S100B浓度变化无显著差异,提示BBB没有破坏;电镜观察:对照组与手术组的超微结构变化相同,各组术后各时点血管腔外没有发现镧离子。结论: 颈淋巴阻滞对BBB通透性没有显著影响。