干扰HMGA2基因表达抑制HL60细胞的增殖及浸润

目的:探索干扰高迁移率族蛋白A2(high mobility group protein A2,HMGA2)基因的表达对HL-60白血病细胞体外增殖、浸润的影响.方法:实验分为3组,实验组为稳定转染慢病毒干扰HMGA2基因表达载体的HL-60细胞;阴性对照组为稳定转染慢病毒空载体HL-60细胞;空白对照组为未转染的HL60细胞.3组分别接种BALB/c裸鼠建立种植瘤模型,检测接种后各个时间点裸鼠外周血和骨髓中白血病细胞的比例(肿瘤负荷)、生活质量,计算接种40 d后各组小鼠的肝脾指数.结果:RT-PCR及Western印迹证明干扰RNA慢病毒表达载体可明显降低HL-60细胞靶基因的表达.接种后骨髓涂片结果显示裸鼠白血病模型成功建立.接种后21,28,40 d,实验组HL-60细胞在小鼠外周血和骨髓中的比例均明显低于阴性对照组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),其白血病细胞比例随接种时间延长而增加的速度亦明显变缓;且实验组小鼠萎糜少动、腹部膨隆、皮下结节等并发症出现时间明显较空白对照组及阴性对照组延迟;接种40 d后实验组小鼠肝脾指数分别为66.76±5.56和20.57±0.75,均明显低于其余两组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:干扰HMGA2基因表达,可明显抑制HL60白血病细胞在小鼠体内增殖、浸润.     

慢病毒介导的GHSR1a shRNA对结直肠癌细胞生长的影响

目的:构建生长激素促泌素受体1a(growth hormone secretagogue receptor 1a,GHSR1a)基因短发夹干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体,感染人结直肠癌细胞系SW480,观察沉默GHSR1a基因对SW480细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法:构建特异性靶向GHSR1a基因的shRNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体;建立稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞、阴性对照细胞(NC)及空白对照细胞(BC),RTPCR检测GHSR1a的mRNA在细胞中的表达;通过Western blot技术检测细胞中GHSR1a、ghrelin、PTEN、p-AKT及p53蛋白的水平;CCK-8法测定GHSR1a shRNA对SW480细胞活力的影响;建立裸鼠结直肠癌皮下移植瘤模型,实验结束后处死裸鼠并测量各组裸鼠肿瘤重量;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67和PTEN的阳性表达。结果:在体外实验中,GHSR1a在人结直肠癌细胞株Caco-2及SW480中的表达明显高于人正常结肠上皮细胞株NCM460的表达;成功建立了稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞;GHSR1a shRNA能明显抑制SW480细胞GHSR1a mRNA及蛋白的表达;沉默GHSR1a基因后SW480细胞活力明显减弱;与NC组相比较,GHSR1a shRNA组细胞中PTEN mRNA及蛋白水平上调,AKT磷酸化被抑制,p53的表达明显增加;在体内实验中,与NC组相比较,GHSR1a shRNA组裸鼠结直肠癌皮下移植瘤重量明显减轻,同时Ki-67表达下调,PTEN表达上调。结论:慢病毒介导的GHSR1a shRNA对体内、外人结肠癌细胞的生长有明显抑制作用,该作用可能通过上调PTEN及其下游PI3K/AKT通路实现。     

慢病毒载体介导Nanog小分子干扰核糖核酸抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长

目的构建对Nanog基因有干扰作用的慢病毒载体,探讨其在人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤模型中的表达,检测其对裸鼠移植瘤生长的影响。方法将前期细胞实验验证有效的siRNA序列构建于慢病毒载体中,制备携带shRNA-Nanog的慢病毒,同时构建胃癌裸鼠移植瘤模型。以lentivirus-shRNA-Nanog感染的裸鼠作为实验组(目的组),以无关序列慢病毒感染的裸鼠(空载体组)及未感染的裸鼠(未感染组)作为对照组,测量肿瘤瘤体体积及质量的变化;活体荧光成像观察总荧光强度及转移情况,Western blot法检测移植瘤组织中Nanog蛋白的表达情况;TUNEL法观察其对皮下移植瘤细胞凋亡的影响。结果经基因测序鉴定,Nanog基因shRNA重组慢病毒表达载体构建成功。活体荧光成像显示感染27 d后,目的组小鼠肿瘤总荧光强度明显低于空载体组和未感染组,裸鼠移植瘤瘤体积及瘤质量小于未感染组及空载体组;Western blot法显示目的组Nanog蛋白表达较对照组明显降低;TUNEL结果显示目的组凋亡指数较对照组明显增大,而空载体组与未感染组比较,差异无统计学意义。结论成功构建了Nanog基因shRNA表达载体并包装成慢病毒颗粒,在体内感染能明显抑制肿瘤生长。     

RNA干扰Slug基因对HCT116细胞裸鼠移植瘤生长及转移的影响

目的：探讨通过靶向RNA干扰（RNA interference,RNAi）抑制Slug基因的表达,观测对荷瘤裸鼠结直肠癌生长及转移的影响。方法：利用结肠癌细胞株HCT116对24只5周龄裸鼠皮下种植,建立结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,设立空白对照组、阴性对照组及实验组三组,每组8只。分别注射生理盐水、阴性对照质粒及慢病毒载体,观察肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线,观察各组间肿瘤生长及淋巴结转移的变化,应用免疫组化、qRT-PCR和Western blot检测Slug基因和蛋白表达情况。结果：Slug基因shRNA实验组与空白对照组和阴性对照组相比,瘤体生长减缓,移植瘤质量明显减小（3.08±0.31 vs 7.37±1.18,7.46±1.16,P＜0.01）,Slug蛋白表达明显降低（P＜0.05）;实验组淋巴结阳性率为36.3％（4/11）,与阴性对照组77.8％（14/18）及空白对照组68.4％（13/19）相比较（P＜0.01）。结论：靶向Slug的RNA干扰可以显著抑制结肠癌裸鼠模型的生长、淋巴结转移以及癌组织中Slug基因蛋白的表达,可能成为结肠癌基因治疗的潜在分子靶点。     

RNAi沉默 N-cadherin 表达对 EC9706细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的: 探讨RNAi沉默 N-cadherin 表达对人食管鳞状细胞癌EC9706细胞体内生物学行为的影响。方法: 通过逆转录病毒介导的RNAi技术将 N-cadherin 基因的RNA干扰载体pMSCVneo/N-cadherin质粒及对照质粒pEGFP-MSCVneo质粒分别转染至人食管癌细胞系EC9706,运用G418进行抗性克隆的筛选和扩增,进而得到稳定转染的人食管癌细胞系EC9706(分别命名为干扰载体组和空载体组),将正常对照组、空载体组和干扰载体组EC9706细胞通过皮下注射的方式接种于裸鼠背部肩胛区,比较各组裸鼠成瘤期、成瘤大小、瘤体终重量及终体积等情况。运用免疫组织化学方法和Western blotting方法检测3组裸鼠移植瘤组织中E-cadherin、N-cadherin和MMP-9蛋白的表达情况。TUNEL法检测3组裸鼠移植瘤组织中细胞的凋亡水平。结果: (1)与正常对照组和空载体组相比较,干扰载体组裸鼠移植瘤的生长速率、成瘤大小、瘤体终重量和终体积明显降低(P<0.05)。(2)与正常对照组和空载体组相比,干扰载体组裸鼠移植瘤组织中N-cadherin和MMP-9的蛋白表达均下调(P<0.05),而E-cadherin的蛋白表达则无明显变化(P>0.05)。(3)与正常对照组(51.55±4.68)和空载体组(54.17±5.26)相比,干扰载体组(106.81±6.47)裸鼠移植瘤组织中凋亡的阳性细胞数明显增加(P<0.05)。结论: RNAi沉默 N-cadherin 表达可明显抑制EC9706细胞裸鼠体内移植瘤的生长,其作用机制可能是通过下调MMP-9的表达,降低细胞对细胞外基质的降解能力,进而降低EC9706细胞的体内侵袭力。RNAi沉默 N-cadherin 表达具有体内抑制食管鳞状细胞癌细胞生长的作用。N-cadherin可望成为抗食管鳞状细胞癌治疗的潜在分子靶点。     

RNAi沉默livin基因对裸鼠移植瘤生长及Ki67蛋白表达的影响

目的利用慢病毒携带的livin基因短发夹RNA(shRNA)干扰裸鼠移植瘤中Livin蛋白表达,探讨其对肺腺癌裸鼠移植瘤生长及Ki67蛋白表达的影响。方法建立肺腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,待移植瘤长至100mm3左右时,以携带livin基因shRNA慢病毒载体注入移植瘤,观察肿瘤生长情况。用免疫组织化学方法检测各组Livin蛋白、Ki67蛋白表达,分析二者相关性。结果 livin基因shRNA干预组与空白对照组和阴性载体对照组相比,瘤体生长减缓,移植瘤质量明显减小(P<0.01),Livin蛋白、Ki67蛋白的表达明显降低(P<0.01,P<0.01),且Livin蛋白与Ki67蛋白的表达呈正相关(r=0.54,P<0.01)。结论利用livin基因shRNA可抑制移植瘤生长,Livin蛋白表达明显降低,Ki67蛋白的表达也降低,两者呈显著正相关。     

过表达配对相关同源框1( PRRX1) 通过调控Wnt / β-catenin 通路抑制肝癌细胞体内致瘤性

目的:研究慢病毒介导的配对相关同源框1(PRRX1)过表达对肝癌细胞体内致瘤性的影响及相关机制。方法:构建PRRX1过表达的慢病毒载体pLV-PRRX1-IRES2-EGFP,转染HEK293T细胞,获得慢病毒颗粒后,感染肝癌细胞株SMMC-7721,采用Western blot检测感染后细胞株中PRRX1蛋白表达。皮下注射SMMC-7721细胞(对照组、空载体组、PRRX1过表达组及PRRX1过表达+Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV939干预组)构建裸鼠肝癌移植瘤模型,其中干预组使用XAV939处理,观察处理后移植瘤体积大小并绘制肿瘤生长曲线;采用HE染色观察各组移植瘤组织病变情况;采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测移植瘤中细胞凋亡情况;采用免疫组化检测移植瘤中细胞增殖相关抗原Ki-67的表达;采用Western blot检测移植瘤中PRRX1以及Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、c-Myc的表达。结果:成功构建PRRX1过表达的慢病毒载体并成功感染肝癌细胞株SMMC-7721,感染后细胞中PRRX1蛋白水平明显升高;与空载体组比较,PRRX1过表达组裸鼠移植瘤生长缓慢,组织坏死加重,细胞凋亡及PRRX1蛋白表达增加,而Ki-67、β-catenin及c-Myc蛋白表达均受到抑制;与PRRX1过表达组比较,XAV939干预进一步促进PRRX1过表达对裸鼠移植瘤的作用效果,但不改变PRRX1的表达。结论:过表达PRRX1能显著降低肝癌细胞体内致瘤能力,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

慢病毒靶向携带survivin-siRNA抗肺腺癌裸鼠体内研究

目的探讨慢病毒载体介导survivin-siRNA对人肺腺癌裸鼠移植瘤的体内抑瘤活性。方法参考siRNA的设计策略,构建表达survivin-siRNA的慢病毒载体;于各BALB/C裸鼠右侧腋窝皮下接种人肺腺癌A549细胞悬液,构建人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,肿瘤组织局部注射survivin-siRNA的慢病毒载体,观察肿瘤的体积及随时间变化的生长曲线;通过碘化丙啶(propidiumiodide,PI)染色检测细胞凋亡情况;流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化。结果慢病毒载体介导survivin-siRNA对裸鼠人肺腺癌A549的抑瘤率为46.07%;经过PI和Annexin-V染色区分凋亡早晚期的细胞为30%~35%,荧光显微镜下观察肿瘤细胞凋亡;G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例则明显减少。结论慢病毒载体介导的siRNA能有效抑制裸鼠移植人肺腺癌A549的survivin基因的表达,有效激发细胞凋亡。     

抑制EGF-1受体表达对人鼻咽癌裸鼠移植瘤生物学行为的影响

目的诱导IGF-I受体基因沉默的shRNA真核表达质粒的在体抗瘤效应,探讨RNA干扰IGF-I受体基因对裸鼠人鼻咽癌移植瘤的生物学行为的影响。方法将右侧背部接种人鼻咽癌CNE2细胞后,肿瘤直径达5～7mm的24只裸鼠随机分为3组:A组为IGF-1RmRNA特异性真核表达质粒(pshRNA1)治疗组,瘤体内多点注射pshRNA1;B组为pshRNA2质粒载体对照组,瘤体内多点注射阴性质粒载体pshRNA2(剂量同A组);C组为生理盐水对照组,瘤体内多点注射0.3ml生理盐水。从开始治疗后3周处死裸鼠,分离肿瘤,部分做共聚焦观察质粒转染情况,其余肿瘤组织观察肿瘤组织的病理变化和IGF-I受体蛋白在瘤体内的表达变化。结果所有裸鼠移植瘤接种成功,14d左右肿瘤直径达5～7mm。治疗裸鼠7d后,pshRNA1治疗组抑制率达67.21%,瘤体积明显小于阴性质粒组和生理盐水组(P<0.05),阴性质粒组与对照组无显著差异。pshRNA1治疗组移植瘤可见大片癌组织表达绿色荧光,其中仅少数细胞为IGF-IR阳性细胞。阴性质粒组癌组织也表达绿色荧光,但IGF-IR阳性细胞数明显多于pshRNA1治疗组(p<0.05),而生理盐水组的移植瘤未见绿色荧光。结论shRNA干扰IGF-I受体基因能在体内有效下调IGF-I受体蛋白的表达、抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长。     

RNA干扰下调Stat5对人肝癌裸鼠移植瘤的抑制及诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的 探讨Stat5-shRNA对裸鼠体内人肝癌SMMC7721移植瘤的抑制及其诱导肿瘤细胞凋亡的作用.方法 将SMMC7721细胞悬液接种于裸鼠背部皮下,15d后,待在接种部位出现肿瘤结节、质地较硬等指标认定为成瘤.将15只成瘤裸鼠完全随机分为:空白对照组、HK质粒对照组、Stat5-shRNA组共3组,每组各5只.空白对照组瘤内注射生理盐水,HK质粒对照组瘤内注射Pgenesil1-HK,Stat5-shRNA组瘤内注射Pgenesil-1 -Stat5A1,各组注射剂量及次数均为50μl/只,每2天1次,共10次.第35天,处死各组全部动物,剥瘤称重,计算肿瘤大小及抑瘤率,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡情况.结果 与空白对照组和HK质粒对照组比较,Stat5-shRNA组裸鼠人肝癌移植瘤的生长受到明显抑制,肿瘤细胞凋亡率明显上升[(21.35±3.69)％比(3.56±1.12)％,(3.81±3.05)％,P＜0.05].结论 Stat5-shRNA可有效抑制裸鼠体内人肝癌移植瘤的生长,并能够诱导肿瘤细胞凋亡.Stat5-shRNA在人肝癌的基因治疗中具有潜在的应用价值.     

小干扰RNA抑制卵巢癌模型裸鼠移植瘤葡萄糖调节蛋白94的表达及意义

背景：一些实验在模型鼠移植瘤中葡萄糖调节蛋白94被敲除后,细胞黏附中断,刺激肝起源细胞增殖,进而促进肝肿瘤的发生,推测葡萄糖调节蛋白94在肝癌中起到保护作用。 目的：应用小干扰RNA技术抑制裸鼠卵巢癌模型皮下移植瘤内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白94的基因表达,探讨移植瘤中葡萄糖调节蛋白94基因及蛋白表达的变化对移植瘤生长的影响。 方法：从GeneBank中选取人类葡萄糖调节蛋白94基因序列,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6 的真核表达载体psiSTRIKETM/葡萄糖调节蛋白94。建立人卵巢癌HO-8910细胞株裸鼠皮下接种模型,并将真核表达载体转染入裸鼠移植瘤体内,观察肿瘤生长情况。卵巢癌裸鼠模型经过不同给药方案干预后分为特异性小干扰RNA组,非特异性小干扰RNA组和生理盐水对照组, RT-PCR和免疫组化SP法检测葡萄糖调节蛋白94 mRNA和蛋白在肿瘤内的表达情况,并观察模型裸鼠的移植瘤生长情况。 结果与结论：成功构建RNA干扰质粒载体,所有裸鼠模型均接种成功,5 d后即可见皮下肿瘤形成,14 d左右肿瘤直径达7-10 mm。转染质粒完毕后抑瘤率为65.1%,与非特异性小干扰RNA组和生理盐水对照组比较,差异有显著性意义(P < 0.01)。psiSTRIKETM/GRP94治疗后瘤体内葡萄糖调节蛋白94 mRNA和蛋白显著下调(P < 0.01)。说明靶向葡萄糖调节蛋白94 mRNA的小干扰RNA可显著抑制人卵巢癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能是诱导葡萄糖调节蛋白94 mRNA和蛋白表达下调所致。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

裸鼠皮下种植性肝癌模型的建立

背景：目前采用Huh7肝癌细胞在BALB/c裸小鼠皮下种植性成瘤的报道较多,但对其成瘤后稳定性的研究较少。 目的：建立稳定的皮下种植性裸鼠肝癌模型。 方法：取1.5×10⁶个对数期细胞Huh7肝癌细胞,种植于裸鼠皮下。成瘤后从体质量、大体形态,肿瘤生长情况,反转录-聚合酶链式反应,苏木精-伊红染色及免疫组织化学多方面进行稳定性及病理学特征鉴定。 结果与结论：肿瘤形成的潜伏期约12 d,肿瘤成功率为92.8%。种植肿瘤组小鼠体质量较正常对照小鼠明显减轻,肿瘤生长迅速,甲胎蛋白基因及蛋白强阳性表达,细胞分裂明显。表明成功建立了稳定的裸鼠皮下种植性肝癌模型。     

RNA干扰缺氧诱导因子2对肾癌786-0细胞的影响

目的：研究RNA干扰缺氧诱导因子2（HIF-2）对肾癌786-0细胞的影响。方法:合成HIF-2 RNAi片段，将RNAi片段定向克隆于RNAi表达载体，测序鉴定；转染人肾癌786-0细胞, RT-PCR、Western 印迹法检测HIF-2 RNAi表达载体对HIF-2基因表达的影响，MTT法检测转染HIF-2 RNAi表达载体对细胞生长作用，裸鼠种植肿瘤观察RNA干扰组对肿瘤生长的影响。结果:RNA干扰组HIF-2mRNA的表达受到抑制，明显低于空载体组和对照组HIF-2mRNA的表达(P<0.01),空载体组HIF-2mRNA的表达没有受到影响；RNA干扰组的HIF-2蛋白表达明显降低，明显低于空载体组和对照组(P<0.01)，空载体组和对照组HIF-2蛋白的表达无显著差异；RNA干扰组细胞生长减慢,RNA干扰组肿瘤体积和瘤重均小于空白组(P<0.01)。结论:RNA干扰HIF-2可以抑制肾癌786-0细胞HIF-2的表达和抑制细胞生长，减慢裸鼠肿瘤的生长；为肾癌的生物治疗提供一定的实验基础。     

HBV X siRNA与5-氮-2'-脱氧胞苷对裸鼠肝癌皮下移植瘤作用的研究

目的 目的 探讨靶向HBV X的siRNA(X-siRNA)和5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-dC)对HBV相关肝细胞癌生长的影响及可能机制.方法 设计合成X-siRNA及对照siRNA,用siRNA处理HepG2/GFP-HBx细胞,RT-PCR法测定处理细胞的HBV X基因表达;将HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx细胞接种于裸鼠皮下建立裸鼠肝癌皮下移植瘤,分别用X-siRNA、5-aza-dC单独或联合处理裸鼠并观察移植瘤生长;甲基化PCR测定移植瘤组织p16基因甲基化.结果 RT-PCR检测示X-siRNA处理的细胞HBV X mRNA水平明显降低;裸鼠体内实验显示HepG2/GFP-HBx组的皮下移植瘤体积明显大于HepG2/GFP组(P＜0.05);X-siRNA与5-aza-dC处理组移植瘤体积明显小于未处理组(P＜0.05);甲基化PCR检测示HepG2/GFP-HBx组移植瘤组织存在p16甲基化而HepG2/GFP组未检出p16甲基化;X-siRNA、5-aza-dC处理的移植瘤组织中p16基因甲基化减低.结论 X-siRNA及甲基化抑制剂可能通过逆转p16甲基化而能有效抑制肝细胞癌生长,具有潜在应用价值.     

琼玉膏抑制肝癌细胞HBxAg表达及对原发性肝癌的防治作用

目的：观察琼玉膏对人肝癌细胞移植裸鼠HBxAg表达的影响,分析其通过影响HBxAg表达防治原发性肝癌的机制。方法：建立人肝癌细胞移植裸鼠模型,观察琼玉膏预防及治疗对小鼠体质量、癌组织质量的影响,同时采用免疫组化法测定癌组织及肝脏中HBxAg的表达。结果：与模型组相比,琼玉膏预防及治疗后,裸鼠的体质量增长迅速,癌组织质量偏低,癌组织及肝脏HBxAg低表达。琼玉膏预防与环磷酰胺治疗的效果相近。结论：琼玉膏能减缓肿瘤的生长,并抑制HBxAg的表达,后者可能是其防治原发性肝癌的主要机制之一。     

BCSG1-siRNA在乳腺癌裸鼠移植瘤的表达

目的 探讨小分子干扰RNA(siRNA)对人乳腺癌移植瘤组织中乳腺癌特异性基因BCSG1表达的抑制作用.方法 根据BCSG1的已知cDNA序列,设计并体外转录合成4条特异性siRNA,分别导入载体质粒中,用脂质体介导分别转染人乳腺癌细胞系MCF7细胞中,以无关序列转染和未转染的MCF7细胞为对照.将用上述4条特异性siRNA和无关序列转染后的细胞连同未转染的MCF7细胞(共6组细胞)注入裸鼠皮下,构建裸鼠乳腺癌移植瘤模型,分析肿瘤生长抑制情况.采用半定量逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学SP法分别检测6组裸鼠移植瘤中BCSG1 mRNA和BCSG1蛋白的表达情况.3组人肿瘤组织(浸润性导管癌、癌旁乳腺导管增生组织和乳腺纤维腺瘤)同时用作对照.结果 BCSG1-siRNA转染的4组的抑瘤率均明显大于无关序列转染组及未转染对照组(P＜0.01);与无关序列转染组及未转染对照组相比,BCSG1-siRNA转染的4组肿瘤组织中BCSG1蛋白的表达明显减弱;未转染细胞对照组和无关序列转染组、人乳腺浸润性导管癌组均有大量BCSG1 mRNA阳性条带,而在BCSG1-siRNA转染的4组中,仅有少量BCSG1较弱的mRNA阳性条带,与未转染细胞对照组和无关序列转染组相比,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 BCSG1-siRNA能有效抑制肿瘤的生长,下调裸鼠乳腺癌组织中BCSG1蛋白及mRNA的表达.     

NSBP1基因干扰RNA慢病毒载体的构建及效应检测

目的 构建和鉴定NSBP1基因RNA干扰慢病毒表达载体。 方法 针对NSBP1 mRNA设计了3条siRNA,并构建pGCSIL-GFP-NSBP1慢病毒质粒,测序鉴定。用pGCSIL-GFP-NSBP1 、pHelper1.0和 pHelper2.0质粒共转染293T细胞包装产生慢病毒,测定病毒滴度。将慢病毒转染前列腺癌DU145细胞,Western-blot检测NSBP1表达, MTT法检测细胞生长活性,用转染细胞种植裸鼠成瘤,观察抑瘤效果。结果 PCR和测序证实,成功构建LV-shNSBP1的慢病毒载体,病毒滴度达2×108TU/ml。转染细胞中NSBP1蛋白表达显著降低,且MTT检测细胞生长活性明显减慢,转染细胞在裸鼠体内成瘤率没有影响,但对肿瘤的生长有明显抑制作用。结论 人NSBP1基因RNA干扰慢病毒载体的成功构建,且NSBP1对前列腺癌激素非依赖DU145细胞的生长具有重要作用。     

EGFL7基因沉默对裸鼠乳腺癌血管生成的影响

目的探讨类表皮生长因子域7（EGFL7）基因沉默对乳腺癌裸鼠模型瘤内血管生成的影响。方法构建EGFL7短发夹状RNA表达质粒并转染SGC-7901细胞（pshEGFL7组）,以空质粒转染为对照组。观察两组皮下种植瘤生长曲线及体积。免疫组织化学法检测抗-CD34、血管内皮生长因子（VEGF）、血小板反应蛋白（TSP1）表达;RT—PCR检测MMP-2和TIMP2表达。结果pshEGFL7组种植瘤体积为（1．86±0．65）cm^3,微血管密度（MVD）为20．84±6．38,分级为1～2级,对照组体积为（4．86±1．15）cm^3,MVD为39．48±9．01,分级为3～4级,两组种植瘤体积、MVD和分级的差异有统计学意义,P值均〈0．05。EGFL7组TSP1蛋白阳性表达,而VEGF蛋白为弱阳性或阴性表达,MMP-2mRNA表达下调,TIMP2mRNA表达上调,与对照组比较差异有统计学意义,P值均〈0．01。结论EGFL7基因沉默可降低乳腺痛种植瘤血管牛成．与调节MMP-2／TIMP2表汰和影响VEGF/TSP1平衡有关。     

Survivin反义寡核苷酸抑制肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用

目的：研究survivin反义寡核苷酸（ASODN）对人肝癌耐药细胞株移植裸鼠皮下后，移植瘤生长的抑制作用。方法:将人肝癌耐药细胞系SMMC-7721/ADM裸鼠移植瘤模型，随机分为：空白对照组、单纯脂质体转染组、正义链转染组、200 μg/L ASODN组、400 μg/L ASODN组和600 μg/L ASODN组，观察裸鼠移植瘤体积，计算抑瘤率。免疫组化检测Survivin蛋白的表达。结果:A组、B组和C组移植瘤随时间增长而增大，但3组间无显著差异（P>0.05）。D组、E组和F组注射ASODN后，裸小鼠移植瘤的体积随着注射ASODN时间的延长和ASODN浓度的增加，移植瘤生长越来越小，并呈时间-剂量-效应依赖性。实险第20 d D组、E组和F组的肿瘤抑制明显大于A组、B组和C组（P<0.05）。HE染色见对照组移植瘤细胞密集成群，核大深染，而ASODN组见肿瘤细胞少，癌细胞皱缩变圆，胞核固缩深染。免疫组化见对照组肝癌细胞浆Survivin蛋白表达较强，而ASODN组Survivin蛋白表达较弱。结论:Survivin反义寡核苷酸能够抑制裸鼠皮下移植瘤的生长。