鲜地龙平喘活性蛋白提取工艺研究

目的:确定鲜地龙平喘活性蛋白的最佳提取工艺条件。方法:以哮喘潜伏期为评价指标,通过平喘活性考察影响蛋白活性的因素;以蛋白得率为指标,通过正交试验法考察影响活性蛋白得率的因素,综合以上两个实验结果确定最佳工艺条件。结果:最佳工艺条件是:鲜地龙加2倍体积pH6.8的磷酸盐缓冲液,在低温(4°C)下匀浆并静置抽提3h,4°C离心取上清液,80硫酸铵固体盐析取沉淀。沉淀用20mmol/L、pH值为6.8的磷酸盐缓冲液悬浮,透析除盐,所得蛋白液4°C离心,上清液冷冻干燥得到地龙平喘活性蛋白(Eisenia foetida protein,EP)。结论:该工艺操作简单,稳定,得到的地龙蛋白能保持原有平喘活性。     

正交设计优选地龙的提取工艺

目的优选地龙的最佳提取工艺。方法通过琼脂纤维蛋白平板法测量溶圈面积,优选出用水匀浆法作为地龙的提取方法;综合考虑得率和溶圈面积这两个指标,采用正交实验对地龙的水匀浆工艺条件进行优化。结果最佳工艺参数为:即加入5倍量水,浸渍2h,以10000r/min转速在40℃下匀浆6h。结论优选出的工艺稳定可行。     

鲜地龙可溶性蛋白不同提取方法的比较

目的比较不同提取方法对鲜地龙可溶性蛋白的影响。方法采用直接浸提、匀浆提取和超声提取3种方法,以鲜地龙为实验材料,采用考马斯亮蓝法通过紫外分光光度计测定地龙蛋白的含有量,采用邻苯三酚自氧化法测定SOD酶活性,确定了地龙蛋白的最适提取方法和条件。结果匀浆提取法提取效率较高,而且简单易行;直接浸提法方便简单,成本低,但蛋白质提取率较低;超声提取法提取效率高,但成本与工艺要求均较高。结论考虑到设备利用率和操作过程,并由3种提取方法的提取效果比较可知,匀浆提取法是最适提取方法,提取条件为提取温度25℃,破碎时间1 min,匀浆时间5 min,浸泡时间4.7 h,料液比为1∶6,离心时间5 min,离心机转速10 000 r/min,提取液中蛋白质含有量为13.25 mg/g,SOD酶活性为106.43 U/m L。     

响应面分析法优化湿法超微粉碎地龙蛋白的提取工艺

目的:优选采用湿法超微粉碎法提取地龙蛋白的工艺.方法:在单因素试验基础上,以浸泡时间、料液比、提取温度、粉碎时间为影响因素,蛋白质得率为响应值,根据中心组合试验设计原理采用四因素三水平的4.7h分析法,对湿法超 微粉碎提取地龙蛋白条件进行优化.结果:湿法超微粉碎提取地龙蛋白的最佳工艺条件为浸泡时间4.7 h,料液比1∶11,提取温度17℃,粉碎时间10 min.在此条件下蛋白质得率3.46％.结论:湿法超微粉碎提取技术适用于地龙蛋白提取.该试验优选提取工艺稳定可行,适于工业化推广.     

全蝎匀浆提取工艺的研究

目的 以全蝎为研究对象,比较水回流法、醇回流法、匀浆法、酶解法4种不同提取方法,优选最佳提取方法的工艺条件.方法 以可溶性蛋白得率及总提取物得率为指标.确定最佳提取方法,并用小鼠抗惊厥药效验证该提取方法的可行性,进而采用正交试验优选出最佳工艺条件.结果 从提取液蛋白得率及总提取物得率分析,匀浆提取明显优于其他3种方法;匀浆提取的最优工艺为加入12倍量的水,高速,匀浆提取2次.结论 经小鼠抗惊厥药效验证,采用匀浆法对全蝎进行提取是可行的;验证试验表明,优选的匀浆提取工艺稳定可行.     

川明参中蛋白与多糖的同步提取及抗氧化性测定

目的利用响应面分析法优化超声波辅助同步提取川明参渣中蛋白和多糖工艺,并探究其体外抗氧化活性。方法在单因素试验的基础上,采用Box-Benhnken中心组合试验设计对超声辅助提取条件进行优化。考察提取剂p H、超声功率、超声时间、液料比、超声温度对蛋白和多糖得率的影响。然后,采用DPPH法测定蛋白和多糖的抗氧化性。结果川明参蛋白和多糖超声波辅助同步提取的最佳条件为超声功率225 W、超声时间38 min、液料比20∶1、超声温度49℃。在此工艺条件下,川明参蛋白和多糖得率分别为(24.17±0.84)mg/g和(25.92±0.67)%。而且,川明参蛋白和不同类型的川明参多糖均具有较强的抗氧化性能。结论该方法能够较好地预测川明参蛋白的得率,可用于指导生产实践。     

正交试验优选蜘蛛水溶性蛋白的超声提取工艺

目的:研究蜘蛛中蛋白的最佳超声提取工艺条件。方法:以蜘蛛粉为原料,探究超声处理方法提取蜘蛛水溶蛋白的提取条件,以水提液中蛋白的含量为考察指标,分别对超声处理过程中的提取时间、料液比、PH进行单因素实验,并通过正交试验法优化蛋白超声提取工艺。结果:液料比、提取时间、提取液p H均对蜘蛛的蛋白质提取具有极显著的作用。蜘蛛蛋白的最佳超声提取工艺为料液比1:40 (g:ml),提取时间50分钟,提取液p H10,最佳工艺下,蜘蛛水溶性总蛋白提取率11. 02%。结论:超声波提取蜘蛛水溶性总蛋白具有操作方便,经济高效的特点,在中药成分提取具有很好的应用前景。     

铁皮石斛多糖提取工艺及脱蛋白方法研究

目的:考察铁皮石斛多糖最佳提取工艺及脱蛋白方法。方法:采用单因素考察和正交试验研究铁皮石斛多糖的最佳提取工艺,并比较盐酸法和三氯乙酸法脱蛋白工艺。结果:铁皮石斛多糖的最佳提取条件为:温度70℃、料液比1∶40、提取时间4 h、提取次数1次,各因素的影响顺序为:温度>时间>提取次数>料液比,盐酸法在p H=3时蛋白脱除率效果最佳。结论:优化的提取工艺稳定可行,铁皮石斛粗多糖的得率可以达到4.67%,盐酸法p H=3时脱蛋白,多糖含量高,更适合于实际生产。     

纤维素酶辅助提取藕节多糖工艺优化及其动力学、热力学研究

目的优化纤维素酶辅助提取藕节多糖工艺,并研究其动力学、热力学。方法在单因素试验基础上,以加酶量、介质p H、酶解温度、酶解时间为影响因素,多糖得率为评价指标,Box-Behnken响应面法优化提取工艺。对提取期间的动力学、热力学进行分析。结果最佳条件为加酶量0.9%,介质p H 5.0,酶解温度47℃,酶解时间2.5 h,多糖得率为5.86%。加入纤维素酶后,多糖得率、提取速率常数(k)、表面扩散系数(Ds)提高。提取过程符合一级动力学模型,吸热熵增加,放热熵减小,为自发过程。结论该方法稳定可靠,可用于纤维素酶辅助提取藕节多糖。     

两面针的超声-酶法辅助半仿生提取工艺优选

目的:优选两面针的超声-酶法辅助半仿生提取工艺条件。方法:以氯化两面针碱、总生物碱得率和干膏收率为评价指标,通过正交试验考察超声功率、提取时间及溶剂用量对两面针半仿生超声提取工艺的影响,利用动态过程优选提取时间。运用HPLC测定氯化两面针碱含量,流动相乙腈-水-磷酸-三乙胺(30∶70∶0.15∶0.15),检测波长271 nm;采用UV测定总生物碱含量,检测波长328 nm。结果:最佳提取工艺为复合酶预处理后于250 W超声提取,第1次加5倍量pH2.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液提取18 min,第2次加5倍量pH 7.5缓冲液提取15 min,第3次加5倍量pH 8.3缓冲液提取12 min;氯化两面针碱得率0.135%(RSD 1.86%),总生物碱得率1.20%(RSD 1.75%),干膏收率14.65%(RSD1.23%)。结论:本法的氯化两面针碱和总生物碱得率与乙醇回流法接近或稍低,而干膏收率显著提高,可为两面针的大生产提供参考。