BCG PPD对哮喘小鼠的CD4+ CD25+调节性T细胞及肺部病理的影响

目的通过建立小鼠哮喘模型,以卡介苗(BCG)和结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)作干预因素,从而了解哮喘小鼠CD4+ CD25+调节性T细胞和其它T细胞亚群数量的变化,以及肺部的病理改变。方法将36只6～8周龄的BALB/C小鼠随机分成A、B、C、D4组,A组为BCG+BCG干预组,B组为BCG+PPD干预组,C组为哮喘模型组,每组各10只,D组6只为正常对照组。应用流式细胞仪分别检测各组的CD4+ CD25+调节性T细胞和T细胞亚群,同时取各组的肺组织PAS染色鉴定黏液分泌。结果A、B、C三组的CD3+、CD4+、CD8+ T细胞的百分比以及CD4+/CD8+的比值均比D组(正常对照组)低(P<0.05),而A、B两组的CD3+T细胞百分比较C组增高(P<0.05)。CD4+ CD25+ Treg占CD4+T细胞的百分比,其它三组低于D组(P<0.05),A、B两组较C组升高(P<0.05),而A、B两组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。肺组织病理提示D组未见到黏液分泌;C组支气管壁可见杯状细胞增生、变大,并有大量黏液分泌;A、B两组与C组比较,杯状细胞减少,黏液分泌减少。B组气道的炎症反应轻于A组。结论...     

雷帕霉素对哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的作用

目的：建立哮喘小鼠动物模型并给予吸入雷帕霉素治疗,观察雷帕霉素治疗哮喘的效果及其对CD4+CD25+调节性T细胞（regulatory T cells,Treg）比例及扩增能力的影响,探讨雷帕霉素治疗哮喘的相关机制。方法：采用随机数字表法将30只雌性BALB/c 小鼠分成3组,每组10只,分别为：对照组、模型组和雷帕霉素治疗组。采用Underwood方法对小鼠肺组织进行评分;采用流式细胞术观察小鼠外周血和肺组织中CD4+CD25+Treg细胞比例;不同浓度（50、100 nmol/L）雷帕霉素处理小鼠CD4+ T细胞后,采用流式细胞术和RT-PCR方法分别检测CD4+CD25+Treg细胞形成比例和Foxp3 mRNA表达情况,观察雷帕霉素对小鼠的影响。结果：与模型组相比,雷帕霉素治疗能够显著改善小鼠肺组织病理评分情况;雷帕霉素治疗后,与模型组相比,外周血单个核细胞和肺组织中CD4+CD25+Treg均显著升高（P<0.01）;50、100 mol/L雷帕霉素处理小鼠CD4+T细胞后,CD4+CD25+Treg细胞比例分别为（7.47±1.84）%和（10.93±2.74）%,与对照组［（4.84±0.76）%］相比,雷帕霉素处理可显著促进CD4+CD25+Treg细胞增殖（P<0.01）;RT-PCR结果与流式细胞结果一致,雷帕霉素处理可显著促进CD4+T细胞中Foxp3的表达（P<0.01）。结论：雷帕霉素可能通过促进CD4+CD25+Treg细胞增殖,增加哮喘小鼠外周血和肺组织中CD4+CD25+Treg细胞比例,进而对小鼠哮喘发挥治疗作用。     

哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞数量及功能的改变

目的观察哮喘小鼠脾脏CD^4＋CD2^4＋5’调节性T细胞（简称Treg细胞）数量及功能的改变。方法以屋尘螨提取液复制小鼠哮喘模型后，分离小鼠脾脏CIM’T细胞，采用流式细胞仪检测Treg细胞占CD^4＋T细胞的比例；分离Treg细胞，与屋尘螨提取液共同培养后测定上清液中白细胞介素-4（IL-4）及IL-10的含量；将Treg细胞与CD^4＋T细胞共同培养，观察其对CD^4＋T细胞增殖及IL4、IL-5、γ-干扰素（IFN-γ）分泌的影响。结果哮喘小鼠脾脏Treg细胞占CD^4＋T细胞比例明显下降；与正常组相比，哮喘小鼠脾脏Treg细胞IL-4、IL-10的分泌无明显差异；Treg细胞可显著抑制哮喘小鼠CD^4＋T细胞的增殖，并降低其IL-4的分泌，对IFN-γ的合成分泌无明显作用；使用anti—CD25mAb后，哮喘和正常小鼠Treg细胞的作用均被显著抑制。结论哮喘小鼠Treg细胞功能与正常对照组小鼠无明显区别，但数量显著下降。哮喘发病过程中Th2型反应占优势，与Treg细胞数量减少，对Th2型反应的抑制作用降低有一定关系。     

重组Der f1变应原诱导小鼠哮喘模型的建立

目的建立重组粉尘螨Ⅰ类变应原（Der f1）诱导BALB/c小鼠哮喘模型。方法 30只BALB/c小鼠随机分成3组：PBS阴性对照组、卵清蛋白（OVA）阳性对照组、重组Der f1模型组。用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中IgG1、IgG2α和IgE含量,ELISA法检测脾细胞培养上清液和支气管肺泡灌洗液（BALF）IL-2、IL-4、IL-5、IL-17和IFN-γ含量,计数BALF中细胞总数,同时切取小鼠未灌洗侧肺组织进行病理学观察。结果 OVA阳性对照组、重组Der f1模型组小鼠血清中IgG1、IgG2a和IgE含量,脾细胞上清液和BALF中IL-2、IL-4、IL-5、IL-17和IFN-γ含量与PBS阴性对照组相比差异均具有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;OVA阳性对照组、重组Der f1模型组小鼠BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞（EOS）计数显著高于PBS组（P〈0.05或P〈0.01）。OVA阳性对照组和重组Der f1模型组小鼠肺部病理改变呈明显的变态反应性炎症。结论用重组Der f1能成功诱导BALB/c小鼠哮喘模型。     

变应原对哮喘患者外周血CD4+T细胞功能的影响

目的 探讨CD4+T细胞增殖以及白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平与过敏性哮喘发病之间的关系.方法 制备粉尘螨抗原作为变应原.以25例哮喘患者和15名健康者为研究对象.采集静脉血样本后分为空白对照组、变应原组和自体对照组.流式细胞术检测各组CD4+细胞增殖及CD4+/IL-10+、CD4+/TGF-β+1、CD4+/IL-10+/TGF-β+1细胞亚群分布情况.结果 哮喘患者和健康者之空白对照组的外周血样本中几乎不能检测到CD4+/IL-10+、CD4+/TGF-β+1 和CD4+/IL-10+/TGF-β+1 细胞.健康者变应原组外周血CD4+T细胞增殖明显,CD4+ 、CD4+/IL-10+ T细胞所占比例均较其自体对照组明显增高,而CD4+/TGF-β+1 和CD4+/IL-10+/TGF-β+1亚群所占比例无显著性增加.哮喘患者变应原组外周血CD4+T细胞及CD4+/IL-10+、CD4+/TGF-β+1 和CD4+/IL-10+/TGF-β+1亚群所占比例与其自体对照组比较均未见明显增加.变应原刺激后,哮喘患者外周血CD4+/IL-10+亚群明显少于健康者(P＜0.05),但两者间CD4+T细胞及CD4+/TGF-β+1、CD4+/IL-10+/TGF-β+1亚群所占比例无显著性差异.结论 哮喘患者受特异性变应原刺激后,CD4+T细胞产生的IL-10水平不能相应提高,可能是导致或加重哮喘发病的原因之一.TGF-β1在支气管哮喘发病中的作用尚不明确,有待进一步研究.     

变应原对哮喘患者外周血CD4+T细胞功能的影响

目的探讨CD4 T细胞增殖以及白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平与过敏性哮喘发病之间的关系。方法制备粉尘螨抗原作为变应原。以25例哮喘患者和15名健康者为研究对象。采集静脉血样本后分为空白对照组、变应原组和自体对照组。流式细胞术检测各组CD4 细胞增殖及CD4 /IL-10 、CD4 /TGF-β1 、CD4 /IL-10 /TGF-β1 细胞亚群分布情况。结果哮喘患者和健康者之空白对照组的外周血样本中几乎不能检测到CD4 /IL-10 、CD4 /TGF-β1 和CD4 /IL-10 /TGF-β1 细胞。健康者变应原组外周血CD4 T细胞增殖明显,CD4 、CD4 /IL-10 T细胞所占比例均较其自体对照组明显增高,而CD4 /TGF-β1 和CD4 /IL-10 /TGF-β1 亚群所占比例无显著性增加。哮喘患者变应原组外周血CD4 T细胞及CD4 /IL-10 、CD4 /TGF-β1 和CD4 /IL-10 /TGF-β1 亚群所占比例与其自体对照组比较均未见明显增加。变应原刺激后,哮喘患者外周血CD4 /IL-10 亚群明显少于健康者(P<0.05),但两者间CD4 T细胞及CD4 /TGF-β1 、CD4 /IL-10 /TGF-β1 亚群所占比例无显著性差异。结论哮喘患者受特异性变应原刺激后,CD4 T细胞产生的IL-10水平不能相应提高,可能是导致或加重哮喘发病的原因之一。TGF-β1在支气管哮喘发病中的作用尚不明确,有待进一步研究。     

雾化吸入变应原对支气管哮喘外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg的影响

目的探讨CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞在哮喘变应原雾化吸入减敏治疗的作用。方法粉尘螨和屋尘螨点刺阳性的支气管哮喘患者随机分为A组(常规治疗)和B组(变应原吸入减敏),各20例。B组雾化吸入特异性变应原,A组雾化吸入以生理盐水代替,两组给予相同的基础治疗。治疗前、后用流式细胞术(FCM)检测外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例;进行哮喘控制评分和肺功能、气道反应性测定。结果治疗后B组ACT评分高于A组,两组肺功能均有明显增加。B组支气管激发试验转阴率明显高于A组。B组外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞比例较A组明显升高(P<0.05)。结论 CD4+CD25+Foxp3+T细胞在变应原雾化吸入减敏防治支气管哮喘中发挥免疫调节作用。     

哮喘小鼠CD4~ CD25~ 调节性T细胞数量及功能的改变

目的观察哮喘小鼠脾脏CD4 CD25 调节性T细胞(简称Treg细胞)数量及功能的改变。方法以屋尘螨提取液复制小鼠哮喘模型后,分离小鼠脾脏CD4 T细胞,采用流式细胞仪检测Treg细胞占CD4 T细胞的比例;分离Treg细胞,与屋尘螨提取液共同培养后测定上清液中白细胞介素-4(IL-4)及IL-10的含量;将Treg细胞与CD4 T细胞共同培养,观察其对CD4 T细胞增殖及IL-4、IL-5、γ-干扰素(IFN-γ)分泌的影响。结果哮喘小鼠脾脏Treg细胞占CD4 T细胞比例明显下降;与正常组相比,哮喘小鼠脾脏Treg细胞IL-4、IL-10的分泌无明显差异;Treg细胞可显著抑制哮喘小鼠CD4 T细胞的增殖,并降低其IL-4的分泌,对IFN-γ的合成分泌无明显作用;使用anti-CD25 mAb后,哮喘和正常小鼠Treg细胞的作用均被显著抑制。结论哮喘小鼠Treg细胞功能与正常对照组小鼠无明显区别,但数量显著下降。哮喘发病过程中Th2型反应占优势,与Treg细胞数量减少,对Th2型反应的抑制作用降低有一定关系。     

哮喘患儿CD4+CD25+调节性T细胞及FOXP3的表达

目的:研究CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘儿童外周血中的比例改变,并探讨其临床意义.方法:采用细胞内染色的流式细胞术检测急性发作期哮喘患儿外周血CD4+CD25+Treg及其调控基因FOXP3的表达,并与健康对照组进行比较.结果:急性发作期哮喘患儿外周血CD4和CD25双阳性细胞所占比例与健康对照组无明显差异(P>0.05),而CD4+CD25+FOXP3调节性T细胞在外周血中的比例明显低于健康对照组(P<0.01).结论:哮喘患儿外周血CD4+CD25+FOXP3调节性T细胞在外周血中的比例明显减少,可能与哮喘的发病机制有关.     

CD4~+CD25~+调节性T细胞对哮喘大鼠免疫功能影响

目的:观察CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)对CD4+CD25-T细胞增殖和Th1/Th2细胞因子分泌的影响,探讨其在哮喘气道炎症中的作用机制。方法:将哮喘大鼠CD4+CD25-T细胞分别与卵白蛋白(OVA)免疫耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞和哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞联合培养,3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测量细胞增殖情况,ELISA检测细胞IL-4、IL-5和IFN-γ含量。结果:OVA耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞能抑制CD4+CD25-T细胞增殖和Th2细胞因子分泌(P<0.05);哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞可明显抑制IFN-γ的分泌(P<0.05)。结论:OVA免疫耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞可能通过抑制哮喘大鼠CD4+CD25-T细胞增殖和影响Th1/Th2平衡发挥作用,哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞存在功能异常,可能与哮喘的发病有关。     

左归丸对小鼠CD4+ CD25+调节性T细胞的影响

目的:观察左归丸制剂对小鼠脾细胞中Treg亚群及其相关细胞因子表达的影响。方法:BALB/c小鼠给予不同剂量左归丸处理后,利用流式细胞术检测小鼠脾细胞中Treg亚群(CD4+/CD25+)的变化;采用RT-PCR法检测小鼠脾细胞中IL-10、TGF-β、IFN-γ及Foxp3的表达水平;采用ELISA法检测小鼠外周血中IFN-γ的分泌水平。结果:小剂量左归丸对小鼠脾脏Treg亚群及相关细胞因子的表达没有显著影响;中剂量左归丸可明显上调小鼠脾脏Treg亚群比例(P<0.05),提高Treg特异性胞内信号Foxp3及相关细胞因子IL-10、TGF-β的转录水平,同时抑制IFN-γ的表达;大剂量左归丸可显著降低Treg细胞亚群比例,对Foxp3I、L-10、TGF-β、IFN-γ的表达均有明显的抑制作用(P<0.05)。随着中、大剂量左归丸处理小鼠IFN-γ的转录下调,血清中IFN-γ的水平也明显下降(P<0.05)。结论:左归丸可上调Treg细胞及相关细胞因子的表达水平,抑制IFN-γ的表达,但这种免疫效应有剂量限制性,大剂量应用时显示抑制作用,提示左归丸对Treg亚群有剂量依赖性的双向调节作用。     

氨茶碱、地塞米松对哮喘患者CD4+CD25+T调节细胞抑制功能的影响

目的探讨哮喘患者CD4+ CD25+ T调节细胞的作用是否存在缺陷及药物(地塞米松、小剂量氨茶碱)对其作用的影响,为有效控制哮喘提供依据。方法分离哮喘患者及健康对照者外周血CD4+ CD25+ T调节细胞及CD4+CD25-T淋巴细胞并培养,设CD4+ CD25+ T调节细胞组、CD4+CD25-T淋巴细胞组及CD4+ CD25+ T调节细胞联合CD4+CD25-T淋巴细胞组,第3组又分为氨茶碱干预组、地塞米松干预组及空白对照组,72h后取培养上清液用ELISA法检测IFN-γ、IL-5、IL-13水平。结果健康对照者CD4+ CD25+ T调节细胞可抑制IFN-γ、IL-5及IL-13的生成(P<0.01),哮喘患者仅抑制IFN-γ、IL-5的生成(P<0.01);地塞米松预处理CD4+ CD25+ T调节细胞后,健康对照者CD4+ CD25+ T调节细胞抑制IFN-γ(P<0.05)、IL-5(P<0.01)、IL-13(P<0.01)生成能力增强,哮喘患者抑制IL-5、IL-13生成能力增强(P<0.01);采用氨茶碱预处理后,健康对照者CD4+ CD25+ T调节细胞抑制IL-5(P<0.01)、IL...     

IL-15诱导CD4+CD25- T细胞向CD4+CD25+调节性T细胞转化的机制探讨

目的初步探讨IL-15诱导CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)转化的机制。方法采用免疫磁性细胞分离法分离人外周血中的CD4+CD25-T细胞,依据加入细胞因子不同分为4组:对照组、IL-15组、拮抗1组、拮抗2组,其中后3组均于培养的第1天加入IL-15,而拮抗1组和拮抗2组分别于培养第1、3天加入STAT5a封闭性肽。流式细胞仪检测细胞表型变化,3H-TdR掺入法检测IL-15诱导产生的Tregs抑制CD4+CD25-效应T细胞(Teff)增殖的免疫功能,Western blot法检测细胞内p-STAT5的变化。结果与对照组比较,IL-15能诱导CD4+CD25-T细胞中CD25和Foxp3表达上调,IL-15诱导生成的Tregs具有较天然Tregs稍弱的免疫抑制功能。Western blot检测结果显示,IL-15组p-STAT5表达较对照组明显上调。加入STAT5a封闭性肽后,拮抗1组和拮抗2组中CD4+CD25-T细胞中CD25和Foxp3表达下调,但拮抗2组[细胞表型分别为(47.9±6.0)%、(20.7±3.4)%]改变较拮抗1组[细胞表型分别为(30.7±8....     

小鼠孕早期暴露量子点对妊娠结局和CD4+ CD25+ Treg细胞的影响

目的  探讨小鼠孕早期暴露硫化锌量子点（QDs）对妊娠结局和外周血CD4+ CD25+ Treg细胞的影响。方法  制备成年健康孕鼠并将其随机分为高剂量QDs组、低剂量QDs组和对照组,分别于妊娠第3～5天尾静脉注射0.50和0.05μmol/L QDs,以及生理盐水各100μl,于妊娠第15天观察妊娠结局,并采用流式细胞术分析孕鼠外周血CD4+ CD25+ Treg细胞比例。结果  QDs可引起流产、吸收胎和死胎等不良妊娠结局,高剂量QDs使胚胎平均着床数、胎鼠均重及胎盘均重低于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）;且QDs暴露孕鼠外周血CD4+ CD25+ Treg细胞的比例低于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）。结论  小鼠孕早期暴露QDs具有胚胎毒性,且其毒性机制可能与降低外周血中CD4+ CD25+ Treg细胞比例、扰乱妊娠免疫耐受有关。

     

Influence of Danshen Injection on airway inflammation and CD4^＋CD25^＋ regulatory T cells of asthmatic rats

Objective： To investigate the influence of Danshen Injection on airway inflammation and CD4^＋CD25^＋ regulatory T cells（CD4^＋CD25^＋ Tr） of asthmatic rats, and elucidate the possible mechanism of Danshen Injection in treatment of asthma. Methods： 30 Wister rats were randomly divided into control group, asthma group and Danshen Injection treated group. Bronchoalveolar lavage fluids （BALF） were collected, and cytology studies were conducted. Lung tissues were obtained and pathologic analyses were done with hematoxylin and eosin stain （HE）. Flow cytometry was used to detect the CD4^＋CD25^＋ Tr ratio in peripheral blood mononuclear cells （PBMCs）. Results： Total cell, the percentage of lymphocytes, neutrophils and eosinophils （Eos） in BALF of Danshen Injection-treated group were lower than that in asthma group （P〈0.05, P〈0.01）. Compared with asthma group, less infiltration of inflammatory cells in lung tissues was observed in Danshen Injection-treated group. CD4^＋CD25^＋ Tr of asthma group was lower than that of control and Danshen Injection treated group （P〈0.05）. Conclusion： Danshen Injection can suppress airway inflammation of asthmatic rats, probably by increasing the number of CD4^＋CD25^＋ Tr.     

CD4+CD25+调节性T细胞和感染免疫

免疫抑制是减轻机体免疫损伤的重要机制，近来研究发现，CD4^＋CD25^＋调节性T细胞是免疫抑制系统的关键组分之一。这群细胞具有明显的免疫抑制效能，通过与细胞直接接触发挥作用。本文就CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的生物学特性及其在感染免疫中的作用进行简要综述。     

哮喘患者外周血Rho激酶及CD4+CD25+调节性T细胞测定

目的：比较不同研究对象外周血Rho激酶及CD4+CD25+调节性T细胞的表达规律,探讨Rho激酶和CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘患者中的变化和相关性。方法：选取中、重度哮喘患者16例,健康对照组14例,通过年龄、性别配对,ELISA测定所有研究对象血清Rho激酶水平,流式细胞仪测定CD4+CD25+调节性T细胞水平,所有研究对象经肺功能仪测定肺功能。结果：哮喘组外周血Rho激酶表达水平高于对照组(P<0.05),外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平低于对照组(P<0.05);两组外周血Rho激酶与肺功能第1秒用力呼气容积(forced expiratory volume in one second,FEV1)占预计值百分比(FEV1%)无相关关系(r=-0.491,P>0.05);两组外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平与肺功能FEV1%呈轻度正相关关系(r=0.380,P=0.038);两组外周血Rho激酶与CD4+CD25+调节性T细胞水平无相关关系(r=-0.438,P>0.05)。结论：哮喘患者外周血Rho激酶水平升高,CD4+CD25+调节性T细胞水平降低,可能在哮喘发病过程中起一定的作用。     

CD4+ CD25+调节性T细胞在肺癌中的表达及其临床意义

目的：：探讨CD4+ CD25+调节性T细胞在晚期肺癌中的表达及其临床意义。方法：应用流式细胞术分析42例肺癌患者(肺癌组)外周血CD4+ CD25+调节性T细胞表达水平,与15名健康志愿者作对照。结果：肺癌组患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞数量为(7.17±3.63)%,明显高于对照组的(4.25±2.11)%(P<0.01)。肺癌组患者外周血中调节性T细胞数量在病理类型间差异无统计学意义(P>0.05),晚期肺癌患者外周调节性T细胞数量高于早期患者(P<0.05)。结论：调节性T细胞在肺癌患者中比率明显升高,并与临床进展有关。