灭活柯萨奇B1病毒在原代培养骨骼肌细胞中促进基因转移 …

研究灭活后的柯萨奇病毒在原代培养骨骼肌细胞中，对报道基因ｐＣＤＮＡ３－ＬａｃＺ转移效率的影响。方法用聚乙二醇沉淀和蔗糖低温超速离心法提纯并用β－丙内酯灭活病毒，将灭活ＣＶＢ１，转铁蛋白聚赖氨和报道基因设计成不同浓度组合，观察肌肉细胞中β－乳糖苷酶染色阳性的细胞数。     

半乳糖配体介导大鼠白介素10基因在大鼠肝脏内的靶向表达

目的 探讨大鼠白介素10(rIL-10)基因是否可通过半乳糖配体介导的脂质体转染法在大鼠肝脏内靶向表达.方法 将已构建好的rIL-10基因真核表达质粒与半乳糖配体转染试剂按jetPEI-Gal/DNA (N/P=10)比例混合,通过尾静脉注射转移至大鼠体内.RT-PCR法和ELISA法检测rIL-10基因转移至体内0 ...     

白介素-1和白介素-2对人甲状腺细胞cAMP生成的调节作用

免疫与内分泌调控的相互关系是医学界近年关注的热点，细胞因子在甲状腺生长、功能和自身免疫性甲状腺疾病(AITD)发病机理中的作用也日益受到人们的重视，但这方面的研究尚处于初级阶段，结论仍有较大分歧。本文在国内率先研究IL-1和IL-2对人甲状腺细胞cAMP生成的影响，旨在探讨细胞因子与甲状腺功能的内在联系，及其在AITD发病中的作用和意义。     

脂质体介导人β防御素2基因转染膀胱上皮的实验研究

目的 探讨脂质体介导人β防御-2( humanβ-defensin 2,hBD2 )基因体内、外转染膀胱上皮细胞的可行性.方法 采用脂质体法体外转染人膀胱上皮细胞株T24及膀胱灌注大鼠体内转染,ELISA检测细胞上清及大鼠尿液中hBD2的表达;RT-PCR及Western印迹检测细胞及大鼠膀胱中hBD2的表达;组织免疫...     

成人骨骼肌细胞原代培养

本研究以获取基因治疗自体移植的载体为目的 ,观察了生长因子对成人骨骼肌卫星细胞增殖的影响。用手术中取得的成人骨骼肌进行体外组织块培养及酶消化培养 ,用成纤维细胞生长因子及表皮生长因子进行处理 ,作动态观察。结果证明 ,消化分离出的肌卫星细胞数量极少 ,培养不能成活 ;组织块培养肌卫星细胞的增殖与生长因子的作用有关 ,成纤维细胞生长因子及表皮生长因子处理组的增殖细胞数显著高于对照组。提示 ,生长因子可促进成年人骨骼肌卫星细胞增殖 ,但与其年龄及部位有一定关系。     

脂质体介导胶质细胞源性神经营养因子基因在体骨骼肌的转移和表达

目的：研究脂质体介导胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因在大鼠骨骼肌内的表达。方法：将鼠 GDNF cDNA 克隆到真核表达载体 pEGFP 中,构建重组载体 pEGFP-GDNF;将脂质体和重组质粒 pEGFP-GD- NF cDNA 混合后直接注入大鼠面神经支配的骨骼肌内。采用免疫组化技术和荧光显微镜检测 GDNF 基因转染后的体内表达。结果：转染2 d 后,转染侧面肌细胞内有散在的绿色荧光,且有部分细胞呈 GDNF 免疫反应阳性,对照侧为阴性。结论：GDNF 基因能通过脂质体介导转入骨骼肌内并表达 GDNF 蛋白,为神经营养因子基因肌内转染治疗周围神经损伤提供了初步的理论和实验依据。     

屋尘螨过敏性哮喘患者白介素-2和白介素-4血清水平及基因多态性

目的:检测分析屋尘螨过敏性哮喘患者白介素-2(IL-2)、IL-4血清水平及基因多态性。方法:首次诊断为屋尘螨过敏性哮喘患者73例(过敏性哮喘组),按其临床表现再分为急性发作期组(n=25)、慢性持续期组(n=23)和临床缓解期组(n=25),另选体检健康人群作为对照组(n=81)。采用ELISA检测各组血清IL-2、IL-4和屋尘螨特异性IgE(SIgE)水平,采用等位基因特异性PCR检测各组IL-2基因rs6534349和IL-4基因rs2227284的单核苷酸多态性(SNP)位点基因多态性。结果:血清IL-2水平在急性发作期组(170.58±29.08pg/ml)及慢性发作期组(179.45±45.34pg/m)均较对照组(227.45±43.34pg/ml)明显降低(P0.01);两组血清IL-4水平分别为98.45±28.85pg/ml和89.34±39.21pg/ml,均较对照组(68.41±30.01pg/ml)明显升高(P0.05);临床缓解期组血清IL-2和IL-4水平与对照组差异无统计学意义(P0.05)。血清SIgE水平在急性发作期组(21.27±2.96pg/ml)、慢性持续期组(19.45±10.38pg/ml)和临床缓解期组(18.34±4.21pg/ml)均明显高于对照组(8.90±4.00pg/ml)(P0.01)。SIgE水平变化与IL-2变化呈负相关(r=-0.421,P0.01),与IL-4变化呈正相关(r=0.522,P0.01)。基因多态性分析显示,过敏性哮喘组患者IL-2rs6534349中GG型明显低于对照组(P0.01),而IL-4rs2227284CC型明显高于对照组(P0.01)。结论:屋尘螨过敏性哮喘与其血清IL-2、IL-4水平及基因多态性具有一定关系。     

成年动物骨骼肌细胞原代培养及转染外源基因的初步研究

目的 观察损伤对成年动物骨骼肌卫星细胞增殖的影响,以获取基因治疗自体移植的载体。方法 以阳离子脂质体介导法将ｐＲＳＶ－ＬａｃＺ或ｐＲｃｈ－ＴＨ质粒转入培养肌细胞。结果 骨骼肌损伤后,分离出的肌卫星细胞及组织块游离成肌细胞数均显著增高;外源基因能在细胞内表达。结论 损伤可诱导成年骨骼的卫星细胞增殖并促进体外增减／肌细胞成活。     

白介素-2,白介素-13与输卵管粘膜上皮炎的相关性研究

目的探讨血清炎症因子白细胞介素-2（IL-2）,白细胞介素-13（IL-13）与输卵管粘膜上皮炎的关系。方法运用免疫组化结合病理图像半定量分析方法,检测30例输卵管粘膜上皮炎壶腹部标本（研究组）,30例正常输卵管壶腹部标本（对照组）的表达情况。结果IL-2在研究组输卵管粘膜中阳性表达与对照组比较,有升高趋势,但两组比较无统计学意义（P〉0.05）;IL-13在研究组输卵管粘膜中阳性表达高于对照组,两组比较有统计学差异（P〈0.05）;研究组输卵管炎患者粘膜上皮局部IL-2/IL-13显著下降（P〈0.05）。结论输卵管慢性炎会引起IL-2,IL-13表达增强,IL-2/IL-13比值下降提示可能出现TH1/TH2细胞的免疫功能失衡。     

逆转录病毒介导人胰岛素基因感染pT67、Phoenix和HepG2细胞的表达

十余年前，第一例腺苷酸脱氨酶缺陷症的基因矫正作用为多种疾病的基因治疗带来了极大希望和鼓舞。基因治疗是解决人类遗传缺陷症极有希望的途径。寻找可靠、高效、安全的载体仍是当前基因治疗的关键任务。本研究的目的在于探讨构建人胰岛素基因逆转录病毒载体并检测逆转录病毒介导人胰岛素基因感染pT67、Phoenix和HepG2细胞后胰岛素蛋白质的表达。     

EXPERIMENTAL STUDIES ON THE ROLE OF SATELLITE CELLS IN REGENERATION OF RAT SKELETAL MUSCLE FIBERS

The process of degeneration, necrosis and regeneration of skeletal muscle fibers of rats administered dlmethyl-para-phenylenediamine was studied by light and electron microscopy. Electron microscopy revealed satellite cells between the basement membrane and plasma membrane of unaffected as well as affected muscle fibers. The cytoplasm of satellite cells was enlarged or elongated and contained many ribosomes, polysomes, rough-surfaced endoplasmic reticulum and well-developed Golgi apparatus. In some satellite cells myofilaments were formed attached to the ribosomes and polysomes. In the process of muscle regeneration many myogenic cells appeared in the vicinity of unaected muscle fibers. The properties of the cytoplasmic organelles of the myogenic cells resembled those of satellite cells. The difierentiation between satellite cells and myogenic cells could be made only by the presence or absence of preexisting muscle fibers. From these results it is not only suggested that the satellite cells are the precursor of myogenic cells but also the regenerated muscle fibers, at least a part of them, originate from satellite cells.     

同型半胱氨酸对人主动脉平滑肌细胞 HCY-2表达及细胞增殖的影响

目的体外研究同型半胱氨酸（HCY）及叶酸对人主动脉平滑肌细胞（hASMCs）中同型半胱氨酸诱导基因（HCY-2）蛋白表达的影响,以及HCY对hASMCs增殖的影响。方法以免疫组织化学ABC法对体外培养的hASMCs中的HCY-2表达进行形态学观察,并利用图像分析系统对结果进行定量分析;以细胞计数法观察不同浓度HCY对体外培养的hASMCs增殖的影响。结果HCY-2主要表达在hASMCs的胞浆中,其表达强度与培养液中HCY浓度呈正性剂量依赖关系;叶酸促使HCY-2表达增强;不同浓度HCY可影响hASMCs的增殖,细胞增殖数目随HCY浓度增长而增加,当HCY到达1．25mmol／L时,细胞数目达到最大值,随着HCY浓度的继续增加,细胞增殖呈下降趋势。结论HCY促使HCY-2表达增强;并影响hASMCs的增殖。叶酸对HCY有拮抗作用。     

体外培养骨骼肌细胞脑内移植存活的研究

取生后２￣５ｄ的ＳＤ大鼠四有支骨骼肌制备细胞悬液，并以１×１０＾６细胞密度放入３５ｍｍ培养皿中培养５￣７ｄ，使其发育为成肌细胞及肌管细胞。按２：３比例将两种细胞混合，以大约１０＾６细胞数分两点移植到４２只成年大鼠纹状体中。有４例动物移植前用荧光染料ＤｉＩ对肌细胞染色，移植后动物分别存活２周、４周、８周、１６周、６个月和１２个月。根据不同存活期将大鼠分组灌注取脑、冠状切片。切片经横纹肌动蛋白和肌红蛋     

大鼠胸腺内促性腺激素释放激素-mRNA的表达

目的 对大鼠胸腺ＧnＲＨ的存在及胸腺ＧnＲＨ－mＲＮＡ的表达进行研究。方法 采用免 主原位杂交方法。结果 大鼠胸腺内不仅有ＧnＲＨ样物质，而且有ＧnＲＨ－mＲＮＡ的表 达。这种ＧnＲＨ除了表达在胸腺上皮细胞以外，在皮质和髓质的部分淋巴细胞及巨噬细胞也有表达。结论 ＧnＲＨ可能是一种在免疫系统和神经内分泌系统之间起双向直接联系作用的因子。     

神经生长因子低亲合力受体在肝纤维化患者和大鼠肝星状细胞的表达

目的探讨神经生长因子低亲合力受体（P75）在肝纤维化患者和大鼠肝星状细胞（HSCs）的分布及作用机制。方法对四氯化碳（CCL）法制备的肝纤维化大鼠肝组织及肝穿刺获取的肝纤维化患者肝组织,常规石蜡包埋;大鼠离体培养的活化HSCs离心涂片,行免疫组织化学染色,确定P75的表达分布。结果P75在大鼠离体培养的活化HSCs膜,免疫组织化学染色呈阳性,在肝纤维化患者HSCs膜和肝细胞膜,免疫组织化学染色呈阳性,在肝纤维化大鼠HSCs膜和肝细胞膜,免疫组织化学染色呈阳性,在健康人和正常对照大鼠HSCs膜,免疫组织化学染色呈阴性,表明人和大鼠活化的HSCs膜表达P75。结论P75为肝纤维化的治疗提供了新的靶点。     

同时显示杂交信号和荧光R带的FISH技术

目的建立直接将ＤＮＡ探针定位于显示Ｒ带染色体上的简便方法。方法正常人外周血淋巴细胞培养６７小时，同时加入Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８和ＢＵｄＲ继续培养５～６小时，常规方法制片。标本浸于２×ＳＳＣ中，在距其１０ｃＭ的２０Ｗ紫外灯下７５℃照射２０分钟。此标本以生物素标记的ｃｏｓｍｉｄ和ＹＡＣ克隆以及ｐＢａｍＸ７进行原位杂交，Ａｖｉｄｉｎ－ＦＩＴＣ和Ａｎｔｉａｖｉｄｉｎ进行信号的检测与放大，ＰＩ复染。于Ｏ１ｙｍｐｕｓＢＸ６０型荧光显微镜下，通过ＷＩＢ滤光镜同时观察显示Ｒ带的染色体和杂交信号。结果在显微镜下，黄绿色杂交信号直接定位于红色并显示Ｒ带的染色体上。结论该方法可用于快速并准确地进行ＤＮＡ片段的染色体定位     

胎鼠、成鼠和人胚的骨骼肌提取液及肌源神经营养因子的高效液相分析

大量的在体和离体实验证明,骨骼肌内存在着促进脊髓神经元存活和再生的物质。本研究采用高效液相分析方法对胎鼠、成鼠和人胚的骨骼肌提取液进行了分析。结果表明,三者在相同条件下尽管出现蛋白峰的数量不同,峰值也有所差异,但在相同的时间点出现两处４ 峰（Ⅰ、Ⅱ１、Ⅱ２、Ⅱ３）的基本波型。峰Ⅱ１ 的分子量为３５０００Ｄ,峰Ⅱ２ 的分子量为２２０００Ｄ,峰Ⅱ３ 的分子量为１８０００Ｄ。胎鼠和人胚的三峰呈中、低、高的形态分布,而成鼠的三峰呈低、中、高的形态分布。肌源神经营养因子（１０～３０ ｋＤ）位于峰Ⅱ。此结果使人们对肌源神经营养因子的存在产生了疑问,肌源神经营养因子究竟是一个新的营养因子（分子量究竟是多少？）,还是已知的神经营养因子（ＣＮＴＦ,ＢＤＮＦ,ＮＴ ３ 等）在骨骼肌组织中的分布？ 对此有必要进行分子生物学的研究来确定。     

8-Br-cAMP对人视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞抑癌基因表达的效应

目的 探讨８－Ｂr－CＡＭＰ对人视网膜母细胞瘤之ＨＸＯ－Ｒb４４细胞抑癌基因表达的 效庆及其对细胞生长的影响。方法 应用原位杂交、ＲＮＡ斑点印迹检测Ｐ１６＾ＩＮＫ４mＲＮＡ、p２１＾ＷＡＦ１mＲＮＡ、wp５３mＲＮＡ、mp５３mＲＮＡ和ＲｂｍＲＮＡ,应用免疫组织和化学和蛋白质斑点印迹技术检测ＰＣＮＡ－ＩＲ、p２１＾ＷＡＦ１－ＩＲ、 ｐ１６－ＩＲ、ｐＲｂ－ＩＲ、ｃｄｋ２、ＩＲ和ｃｄｋ４－ＩＲ。结果 在人ＨＸＯ－Ｒ