膜联蛋白A7及血管内皮生长因子在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨膜联蛋白A7 (ANXA7)及血管内皮生长因子(VEGF)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学方法分别检测94例乳腺癌及其癌旁组织中ANXA7蛋白及VEGF蛋白表达情况,分析ANXA7、VEGF蛋白表达与患者年龄、肿瘤大小、病理分级、TNM分期、淋巴结转移、人类表皮生长因子受体2(HER-...     

膜联蛋白Ⅱ和钙卫蛋白在胃癌中的表达

目的研究膜联蛋白Ⅱ(annexinⅡ)、钙卫蛋白在胃癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测正常胃组织、胃溃疡组织、胃癌组织中annexinⅡ、钙卫蛋白表达情况,并分析annexinⅡ和钙卫蛋白的表达与性别、年龄、肿瘤浸润深度和淋巴结转移的关系。结果 AnnexinⅡ在胃癌组织的阳性表达明显高于正常胃组织和胃溃疡组织,差异有统计学意义(P<0.01);正常胃组织和胃溃疡组织中Annexin的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。钙卫蛋白在胃溃疡组织和胃癌组织中的阳性表达高于正常胃组织,差异有统计学意义(P<0.01);胃溃疡组织和胃癌组织中钙卫蛋白的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。在胃癌组织中annexinⅡ和钙卫蛋白的表达与患者年龄及性别无关(P>0.05);与浸润深度和淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AnnexinⅡ和钙卫蛋白可能参与了胃癌的形成,并且在胃癌形成后的肿瘤生长、浸润、转移过程中起促进作用。     

ETF在乳腺癌组织中的表达及对乳腺癌细胞增殖的影响

目的:探究ETF在乳腺癌组织中的表达以及对乳腺癌细胞增殖的影响.方法:收集沈阳市积水潭医院普外科2018年1月至2020年12月经病理组织学确诊的76例乳腺癌患者癌组织和癌旁组织,采用免疫组化技术、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、Western blot法检测ETF在乳腺癌及癌旁组织中的表达,同时检测其在人正常乳...     

敲低膜联蛋白A7对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的：：观察靶向敲低人乳腺癌MCF-7细胞膜联蛋白A7(AXNA7)的表达对MCF-7细胞凋亡的影响。方法：实验分为3组,以靶向ANXA7的siRNA转染MCF-7细胞为siRNA干扰组,另设阴性对照组、空白对照组,采用RT-PCR法和Western blot法检测转染后MCF-7细胞ANXA7的表达情况,应用流式细胞术检测ANXA7低表达对MCF-7细胞凋亡的影响。结果：转染后,siRNA干扰组细胞ANXA7的表达明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05);敲低ANXA7后,MCF-7细胞凋亡明显增加(P＜0.05)。结论：ANXA7低表达可促进乳腺癌细胞MCF-7凋亡。     

RNA沉默Pin1表达对乳腺癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的应用RNA干扰技术沉默Pinl表达后,观察其对乳腺癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法采用脂质体介导法将Pinl干扰片段PinlsiRNA和对照片段controlsiRNA转染入乳腺癌细胞系MDA—MB一23l后,利用RT—PCR和Westernblot法检测Pinl基因在mRNA和蛋白水平的表达情况,并应用MTT法、Transwell法和AnnexinV—FITC／PI试剂盒及流式细胞仪技术分析检测Pinl对MDA—MB一23l细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果Pinl在乳腺癌细胞系中高表达。与未处理组及转染对照片段controlsiRNA组相比,沉默Pinl表达后,PinlmRNA（P〈0．05）和蛋白（P〈0．05）表达均明显下降,细胞生长增殖能力[P〉0．05（第1天）,P〈0．01（第2—4天）]减弱,细胞侵袭数目（6．61±0．53,P〈0．05）减少,细胞凋亡率（31．5％±3．06％,P〈0．05）显著增加。结论沉默Pinl表达后可抑制乳腺癌细胞增殖和侵袭,促进乳腺癌细胞凋亡。     

人膜联蛋白在胎儿不同组织中的表达

目的 观察HBV感染相关因子——人膜联蛋白（Human Annexin V,HA—V）在胎儿各组织中的表达。方法 用SP免疫组化法检测HA—V在胎儿肝脏、心脏、肾脏、卵巢、输卵管、脾脏、胸腺中的表达及分布。结果 肝脏、肝内胆管系统、心脏、肾脏、卵巢、脾脏、输卵管、胸腺中均有HA—V表达,HA—V分布于这些组织的实质细胞及问质细胞的胞质;免疫组化图像分析系统显示胎儿肝脏组织中HA．V表达显著多于其他组织（P〈0．05）,其余组织之间无明显差别（P〉0．05）。结论 HA—V是人体组织中的一种固有蛋白,分布于多种组织中,这种分布的广泛性可能与HBV泛嗜性感染相关,而肝脏组织中HA—V表达明显多于其他组织可能是HBV主要侵犯肝组织的重要原因之一。     

肿瘤相关巨噬细胞CD163在乳腺癌组织中的表达及对乳腺癌细胞生物学特性的影响

目的分析CD163巨噬细胞在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法收集2010年1月—2012年12月南京大学医学院附属鼓楼医院普外科收治的160例经病理学证实为乳腺癌患者的组织标本及其癌旁(距癌组织≥5 cm)正常组织标本,比较乳腺癌组织和癌旁正常组织CD163巨噬细胞表达情况,依据染色结果将CD163巨噬细胞分为高、低表达组,分析其与乳腺癌患者临床病理特征的关系,采用小分子干扰技术下调巨噬细胞MH-S中CD163的表达,与乳腺癌细胞MCF-7共培养,平板克隆实验观察细胞增殖能力,Transwell实验观察细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期。结果乳腺癌组织中CD163~+巨噬细胞浸润数量明显高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(t=134.273,P<0.01);CD163~+巨噬细胞在不同年龄及肿瘤直径中的浸润数量差异无统计学意义(P均>0.05),而在不同分化程度、TNM分期及淋巴结转移间差异有统计学意义(χ~2=23.498、13.965、9.753,P<0.01)。正常表达CD163的MH-S共培养MCF-7细胞的增殖能力和侵袭能力均明显高于低表达CD163的MH-S共培养的MCF-7细胞(t=11.960、18.397,P<0.01);与siRNA-NC组相比,siRNA-FAM组的G1期MCF-7细胞所占的比例明显增高,差异具有统计学意义(t=6.398,P<0.01),而G2期细胞所占的比例明显降低,差异亦具有统计学意义(t=9.542,P<0.01)。结论乳腺癌组织中CD163~+巨噬细胞数量明显升高,与临床分期、淋巴结转移、分化程度密切相关,且CD163能够增强乳腺癌细胞增殖、侵袭能力。     

miR⁃588在乳腺癌中的表达及对乳腺癌细胞增殖和侵袭的作用

目的：探讨miR?588在乳腺癌中的表达及对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：用化学合成的miR?588成熟模拟物（miR?588 mimic）过表达miR?588,并验证miR?588过表达率;采用MTT、克隆形成实验检测miR?588对乳腺癌细胞MCF7和MDA?MB?231增殖的影响;采用划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测miR?588对MDA?MB?231细胞迁移和侵袭的影响。结果：miR?588在乳腺癌组织及细胞中的相对表达均低于癌旁正常组织及乳腺正常上皮细胞;过表达miR?588能明显抑制MCF7和MDA?MB?231细胞的增殖;上调miR?588可显著抑制MDA?MB?231细胞的迁移和侵袭能力。结论：miR?588在乳腺癌中低表达,过表达miR?588可抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。     

Ebp1的表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究降低Ebp1的基因表达水平对乳腺癌细胞T47D野生型增殖能力和侵袭能力的影响。方法:转染并筛选Ebp1降表达的单克隆细胞株clone1,clone2,clone3,阴性对照组命名为control。应用小干扰RNA技术降低Ebp1的表达,采用Western blotting技术检测Ebp1蛋白水平的变化,噻唑蓝（MTT）比色法和克隆形成实验观察其对T47D野生型细胞增殖能力和克隆形成能力的影响;采用Matrigel侵袭实验研究其对细胞侵袭能力的影响。结果:Western blotting检测表明siRNA干扰后T47D野生型细胞中Ebp1的蛋白表达水平明显下降,且与亲本和control组细胞比较,Ebp1降表达的细胞克隆的增殖能力和侵袭能力明显增强,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:Ebp1表达下降可以明显促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,提示Ebp1可能是乳腺癌增殖和侵袭的抑制性因子。     

miR-99a对乳腺癌细胞侵袭和迁移的负向调控机制研究

目的探讨miR-99a对乳腺癌细胞侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7中miR-99a的表达。运用脂质体介导的转染方法分别将miR-99a模拟物（miR-99amimics）、miR-99a抑制物（miR-99ainhibitors）以及相应对照miRNA转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,通过Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕实验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-99a的靶基因,并对靶基因进行验证。结果（1）高转移潜能的MDA-MB-231细胞中miR-99a表达明显低于低转移潜能的MCF-7细胞,划痕实验中转染miR-99amimics的与转染controlmimics的MDA-MB-231细胞比较迁移能力显著减弱（P＜0.05）,而MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力明显增强（P＜0.01）。（2）Transwell的侵袭及迁移实验显示,转染miR-99amimics后MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力明显减弱（P＜0.01）;MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力增强（P＜0.01）,而侵袭能力基本不变（P＞0.05）。（3）生物信息学方法预测微管相关蛋白（MTMR3）是miR-99a的靶点,实时定量PCR和3′UTR荧光素酶报告基因实验验证了该靶点。（4）干扰了MTMR3后MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。结论（1）miR-99a对乳腺癌细胞的侵袭及迁移发挥负向调控作用。（2）miR-99a可能通过靶向于MTMR3发挥其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用。     

隐丹参酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移、侵袭的影响及其机制

目的探讨隐丹参酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移、侵袭的影响及其机制。方法用不同浓度的隐丹参酮处理MDA-MB-231细胞24 h。采用MTT、划痕实验和Transwell侵袭实验测定不同浓度隐丹参酮对MDAMB-231细胞活性、迁移和侵袭的影响。采用Western blot检测MDA-MB-231细胞中c-Src、p-c-Src Tyr416、FAK、p-FAK Tyr576/577、MMP2蛋白表达水平。结果与0μmol/L对照组相比,5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L隐丹参酮组对MDA-MB-231细胞存活率显著降低,且呈剂量依赖(P0.05)。与对照组相比,5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L隐丹参酮组对MDA-MB-231细胞迁移、侵袭率均显著降低,且呈剂量依赖(P0.05)。Western blot结果显示,与对照组相比,不同浓度组经隐丹参酮处理的MDA-MB-231细胞,MMP2蛋白水平和c-Src、FAK蛋白的磷酸化水平均显著下调(P0.05)。结论隐丹参酮可抑制三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞活性、迁移和侵袭,其机制可能与其下调c-Src/FAK通路和MMP2表达有关。     

RNA干扰下调midkine基因表达对人乳腺癌细胞粘附和侵袭力的影响

目的探讨中期因子（midkine,MK）基因siRNA对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法培养人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA—MB-231、MDA—MB-435、MDA—MB-468及ZR75—1细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测MK基因mRNA表达;筛选出MK表达最高者。采用MK siRNA转染乳腺癌细胞株,分别以荧光实时定量RT—PCR和免疫荧光方法观察MK基因mRNA和蛋白水平,然后以四唑蓝（MTT）比色法检测细胞粘附性,以Boyden小室方法检测癌细胞侵袭能力。结果7株乳腺癌细胞中,MK均有不同程度的表达,以MCF-7细胞最高;以MKsiRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后,癌细胞MK基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;siRNA转染组细胞粘附数量明显下降,细胞侵袭力明显下降,均呈浓度依赖性（P〈0．01;P〈0．01）。结论MK基因在乳腺癌细胞粘附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染乳腺癌细胞,可抑制乳腺癌细胞粘附和侵袭能力。     

葡萄糖调节蛋白78在乳腺癌细胞侵袭及转移中的作佑

目的探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在乳腺癌细胞(231)侵袭、转移过程所起的作用。方法构建GRP78真核反义表达载体,转染入231细胞,利用PCR和蛋白印迹方法检测转染有反义GRP78的231细胞和MCF-7细胞的GRP78表达情况;并用伤口愈合实验和体外侵袭实验证验转染细胞转移和侵袭的变化。结果转染反义GRP78的231细胞内GRP78RNA和蛋白表达明显低于未转染细胞;反义GRP78基因对乳腺癌细胞231细胞的侵袭和转移有抑制作用。结论GRP78是乳腺癌的一个促癌基因,下调GRP78基因表达能明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移能力。GRP78为乳腺癌基因治疗的一个新靶点。     

结直肠癌组织CypB表达及其对癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的观察伴或不伴淋巴结转移的结直肠癌组织中亲环素B（CypB）的表达变化,研究CypB质粒敲除对结直肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法采用免疫组织化学法检测结直肠癌组织芯片中59例结直肠癌组织CypB表达,其中31例无淋巴结转移,28例伴淋巴结转移。构建CypB的RNA干扰质粒,测序鉴定后转染结直肠癌细胞系SW1116（SW1116-siCypB）,设立阴性对照（SW1116-NC）;Westernblotting分析CypB敲除效果。分别采用划痕实验和细胞侵袭实验评估和检测CypB敲除对SW1116细胞迁移和侵袭能力的影响。结果伴淋巴结转移结直肠癌组织中CypB表达显著高于无淋巴结转移结直肠癌组织（P〈0．01）。与SW1116-NC比较,SW1116-siCypB的CypB表达明显减少,细胞迁移和细胞侵袭能力均显著降低,差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论CypB在结直肠癌淋巴结转移过程中具有重要作用,有望成为防治结直肠癌淋巴结转移的分子靶点。     

乳腺癌中吲哚胺2,3-双加氧酶和调节性T细胞的表达

[目的]通过研究在乳腺癌和引流淋巴结中吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)和调节性T细胞(Treg cells)的表达,探讨两者之间的关系.[方法]采用半定量RT-PCR法和免疫组织化学检测IDO mRNA和蛋白及Foxp3蛋白在乳腺癌、淋巴结和乳腺良性病变中表达情况.[结果]乳腺癌引流淋巴结中IDO的mRNA水平高于乳腺癌组织(P＜0.05),乳腺癌组织中IDO的mRNA水平高于乳腺良性病变组织(P＜0.05).免疫组化结果显示示乳腺癌引流淋巴结内IDO表达水平高于原发癌(P＜0.05),乳腺癌组织中IDO表达水平高于乳腺良性病变组织(P＜0.05).乳腺癌中IDO的表达与病理类型和临床分期相关(P＜0.05).乳腺癌中Treg细胞Foxp3+比例高于乳腺良性病变,乳腺癌引流淋巴结中Treg细胞Foxp3+比例高于乳腺原发癌(P＜0.05).乳腺癌组织中IDO与Treg细胞间呈正性相关(r2=0.409,P＜0.05),与引流淋巴结中Treg细胞正性相关(r2=0.528,P＜ 0.05).[结论]IDO和Treg细胞有可能在乳腺癌免疫逃逸机制中发挥重要作用.     

RhoC蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义

目的探讨乳腺癌组织中RhoC蛋白的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测112例乳腺癌、20例癌旁正常组织、15例正常乳腺组织中RhoC蛋白的表达,并对其与临床病理特征的关系进行分析,同时检测乳腺癌组织中CD34的表达,计算微血管密度（MVD）,并分析其与RhoC蛋白的相关性。结果RhoC蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为40．2％,而在癌旁乳腺组织及正常乳腺组织中不表达,其在乳腺癌组织中的表达与淋巴结转移和病理分期相关（P〈0．05）;乳腺癌组织中RhoC蛋白阳性患者MVD值显著高于阴性者,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论RhoC蛋白表达与乳腺癌的淋巴结转移、病理分期及MVD信相关． 其表达上调可能促进了乳腺癌的侵袭、转移过程。     

COX-2在乳腺癌中的表达及与血管生成的关系

目的:探讨环氧合酶(COX-2)在乳腺癌中的表达及其与血管形成的关系。方法:运用免疫组化S-P法和原位杂交法。用免疫组化S-P法检测60例乳腺癌COX-2表达,采用CD34进行微血管内皮细胞染色,计算微血管密度(MVD),同时应用原位杂交法检测COX-2mRNA的表达,并结合临床和病理资料进行分析。结果:COX-2在乳腺癌组织阳性表达率为63·33%(38/60),COX-2的表达与肿瘤的大小、淋巴结转移有关,(P=0·001,P=0·038)与年龄、ER和PR无关(P>0·05)。COX-2表达阳性组的MVD为(61·08±13·51),明显高于COX-2表达阴性组(43·02±13·87),(P=0·001)。原位杂交:乳腺癌中COX-2mRNA阳性表达率为73·33%与蛋白表达一致率为52·46%。结论:COX-2在人乳腺癌细胞中高表达并与淋巴结转移密切相关;COX-2在乳腺癌新生血管生成中起重要作用。     

Girdin蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨Girdin蛋白在乳腺癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组化Envision二步法检测128例浸润性乳腺癌、38例导管内癌、30例单纯性导管上皮增生及30例正常乳腺组织中Girdin蛋白的表达情况,并分析其临床病理意义。结果 Girdin蛋白在正常乳腺组织、单纯性导管上皮增生、导管内癌及浸润性乳腺癌中的阳性表达率分别为10.0%、23.3%、42.1%、51.6%,呈逐级上升趋势,差异有统计学意义（P＜0.05）。浸润性乳腺癌组织中Girdin蛋白的表达与TNM分期、淋巴结转移及人表皮生长因子受体2（HER-2）表达明显相关,并与患者的生存时间也明显相关（均P＜0.05）。结论 Girdin蛋白在乳腺癌的发生、演变过程中起重要作用。其表达与患者的生存期密切相关,可作为预测乳腺癌预后的参考指标。     

ERK信号通路通过CXCR-4作用于乳腺癌细胞的侵袭转移研究

目的:ERK信号通路与肿瘤的侵袭转移密切相关,本研究拟阻断ERK通路,检测乳腺癌细胞CXCR-4表达变化,分析ERK信号通路对乳腺癌细胞CXCR-4表达的影响,探讨乳腺癌转移的分子机制。方法:以培养的人乳腺癌MDA-MB-435细胞为研究对象,加入ERK特异性阻断剂PD98059为实验组,加入等量生理盐水为对照组,作用于人乳腺癌MDA-MB-435细胞24 h后,采用Western blotting法检测ERK通路重要因子ERK1/2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达;采用流式细胞术检测细胞表面CXCR-4表达;采用Transwell侵袭实验观察空白对照组、CXCR-4配体SDF-1α组、ERK通路阻断组和SDF-1α+ERK阻断组细胞的侵袭转移情况。结果 :ERK通路被有效阻断后,CXCR-4表达量明显下调;在趋化因子受体CXCR-4的配体SDF-1α的作用下,细胞侵袭能力提高,而在ERK通路阻断后,细胞侵袭能力明显降低且SDF-1α不能逆转这种降低效应反而具有协同作用。结论:在人乳腺癌MDA-MB-435细胞中,ERK信号通路可能通过上调CXCR-4的表达参与乳腺癌细胞的侵袭和转移。