鸦胆子治疗宫颈癌及其作用机制的研究进展

近年来的研究表明鸦胆子对人乳头瘤病毒的复制有抑制作用,宫颈癌的发生与这种病毒的感染密切相关,由于鸦胆子在抗人乳头瘤病毒方面的巨大作用使医务工作者们感到其对于治疗宫颈癌的潜在价值,现就应用鸦胆子治疗宫颈癌的临床现状与趋势做一总结。     

鸦胆子素D 对人胰腺癌细胞株 Panc-1体外增殖的抑制作用

目的 探讨鸦胆子素D对人胰腺癌细胞株Panc-1 体外增殖的影响。方法 人胰腺癌细胞株Panc-1经不同浓度 （0、5、10、20、40、60滋mol/L）鸦胆子素D分别作用24、48、72 h 后,应用CCK-8 法检测鸦胆子素D 对Panc-1细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测Panc-1细胞凋亡情况;Western blot 检测Panc-1 细胞经0、5、10、20、30、60滋mol/L 的鸦胆子素D 处理24h 后以及20滋mol/L的鸦胆子素D处理24、48、72 h后,细胞中Bax 及Bcl-2 的表达。结果鸦胆子素D对Panc-1细胞的增殖抑制作用呈明显浓度和时间依赖性,60滋mol/L时对Panc-1作用24、48、72 h后细胞存活率分别为54.44%、33.00%、21.63%,凋亡率分别为47.29%、63.80%、72.16%;0、5、10、20、30、60滋mol/L 的鸦胆子素D 作用于Panc-1 细胞72h 后的细胞存活率是100%、71.60%、60.37%、46.78%、39.98%、21.63%,凋亡率分别为0、26.63%、45.62%、56.18%、62.21%、72.16%;随着鸦胆子素D 作用时间的延长或浓度的增加Bax 蛋白的表达升高,Bcl-2蛋白的表达降低。结论鸦胆子素D 可显著抑制人胰腺癌Panc-1 细胞生长,并促进其凋亡,在一定的浓度和时间范围内,其作用呈明显浓度和时间依赖性,其作用机制可能是通过促进Bax 的表达,降低Bcl-2 的表达 实现的。     

鸦胆子素D对结肠癌HT29细胞株增殖的抑制及诱导其凋亡的机制

目的 探讨鸦胆子素D对结肠癌细胞株HT29增殖的抑制及诱导其凋亡的机制。方法 人结肠癌细胞株HT29经不同浓度鸦胆子素分别作用24、48、72h后,应用CCK-8（Cell Counting Kit-8）法检测鸦胆子素D对HT29细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测鸦胆子素D对HT29凋亡的影响;Western blot法检测HT29细胞株经不同浓度鸦胆子素D处理24h后以及20μmol/L的鸦胆子素D处理24、48、72h后,细胞中JNK、p-JNK的表达。结果 不同浓度鸦胆子素D分别作用结肠癌HT29细胞24、48、72h后,细胞存活率随药物浓度升高,细胞存活率降低,细胞的凋亡率增加。HT29细胞株经不同浓度鸦胆子素D处理24h后以及20μmol/L的鸦胆子素D处理24、48、72h后,JNK蛋白表达随鸦胆子素D作用时间延长而下调,p-JNK则相应上调。结论 不同浓度的鸦胆子素D随着浓度的增加及时间的延长,结肠癌HT29细胞的存活率降低、凋亡率增高,呈明显的作用-时间-药物浓度依赖性。     

HPV16感染与膀胱癌的相关性研究

用分子生物学手段制备地高辛标记HPV16DNA探针，对人乳头瘤病毒（HPV）与膀胱癌的相关性进行探讨。将质粒pHPV16经BamHⅠ酶切，Ⅴ-形槽电洗脱回收HPV16DNA，随机引物法进行标记。用斑点杂交法对探针的质量参数进行评估，并对28例膀胱癌组织和9例正常膀胱组织进行HPV16DNA检测。膀胱癌组和正常对照组的阳性率分别为43％（12／28）和11％（1／9），两者有显著性差异（P＜0．01）。说明HPV16感染与膀胱肿瘤的发生发展密切相关，可能是膀胱肿瘤发生过程中重要的危险因素之一。     

HPV16-E6蛋白在宫颈癌及癌前病变中的

目的 研究人乳头瘤病毒16型E6(human papillomavirus-16 E6 protein,HPV16-E6)蛋白在宫颈病变组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测HPV16-E6蛋白在宫颈正常组织、慢性炎症、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial nioplasia,CIN)、宫颈浸润癌(invasive cervical cancer,ICC)中的阳性表达情况.结果 HPV16-E6在正常宫颈、宫颈炎、CIN、ICC各组中,阳性表达率分别为0.50%、38.35%、46.15%、71.11%,4组比较差异有统计学意义(χ2=27.50,P<0.01).经χ2分割后比较(α'=0.007 143),ICC组、CIN组、宫颈炎组的阳性率显著高于正常宫颈组.ICC组的阳性率显著高于宫颈炎组.HPV16-E6与年龄、病理类型、宫旁或脉管浸润呈显著性相关(P<0.05).结论 HPV16-E6与宫颈癌的启动、发生、发展及侵袭转移均密切相关.     

HPV16相关宫颈癌组织中MUC16和E6表达的关系

目的:探讨人乳头瘤病毒(HPV)16相关宫颈癌组织中粘蛋白抗原16(MUC16)与E6表达的关系。方法:以HPV16 E6阳性和阴性的宫颈癌细胞系和宫颈鳞状细胞癌(简称鳞癌)组织(184例)为研究对象,采用Western blot和免疫组化方法检测HPV16 E6和MUC16的表达。结果:Western blot结果显示:C-33A细胞中HPV16 E6无表达,Ca Ski细胞和Si Ha细胞中可见HPV16 E6表达;C-33A细胞中MUC16的表达低于Ca Ski细胞和Si Ha细胞(P<0.05),Ca Ski细胞和Si Ha细胞中MUC16的表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果显示:HPV16E6阳性的宫颈鳞癌组织中MUC16的表达高于HPV16 E6阴性的宫颈鳞癌组织(χ2=43.670,P<0.001)。结论:宫颈癌细胞系和鳞癌组织中MUC16与E6表达可能有关。     

HPV16基因组甲基化对宫颈病变的影响

人乳头瘤病毒(HPV)导致的生殖道感染是宫颈癌及癌前病变的主要诱因。高致病性HPV16亚型感染可增加宫颈癌的患病风险,但多为自限性感染,仅部分患者发生宫颈癌变,故仍需对HPV携带者的癌变风险进行精确的检测和判断。HPV DNA甲基化与癌症发生发展密切相关,HPV DNA甲基化与病毒载量、复制转录以及病毒致瘤性具有相关性。准确鉴定HPV相关的甲基化模式对宫颈上皮内瘤变具有较好的诊断价值,将有助于改善宫颈癌癌前病变患者的筛查、临床诊断及治疗。     

HPV感染与宫颈癌的关系

目的探讨HPV感染与宫颈癌的关系。方法采用杂交捕获HPV—DNA检测144例宫颈病变患者中HPV感染、年龄分布状况。结果HPV总阳性率为41．7％,在慢性宫颈炎为8．3％,宫颈癌前病变为48．2％,宫颈癌为69．6％。三者中差异有显著性（P〈0．05）,宫颈癌前病变与宫颈癌HPV感染显著高于慢性宫颈炎。HPV感染在青年组与老年组及中年组与老年组比较有统计学差异（P〈0．05）。结论HPV感染是宫颈癌前病变和宫颈癌的主要致病因素,青、中年妇女HPV感染比例较大。     

p16和p53蛋白在宫颈上皮内瘤变中的表达及与HPV16/18感染的关系

目的 观察p16和p53蛋白在宫颈上皮内瘤变(CIN)中的表达,以及与人乳头瘤病毒(HPV) 16/18感染的关系,探讨其在CIN演变过程中的作用及在CIN分级诊断中的应用价值.方法 应用免疫组化S-P法检测96例CIN中p16和p53蛋白的表达,HPV16/18感染通过基因芯片技术检测.结果 在CIN中p16和p53蛋白均有较高表达,且随CIN级别升高而表达增强,其差异有统计学意义(p16:x2=9.41,P＜0.05;p53:x2=11.13,P＜0.05).p16蛋白表达在HPV16/18阳性组中的阳性率明显高于HPV16/18阴性组,其差异有统计学意义(x2=6.618,P＜0.05),而p53蛋白表达在HPV16/18阳性组与阴性组间比较差异无统计学意义(x2=1.328,P＞ 0.05).结论 在CIN中HPV16/18感染可能引发了p16蛋白的异常表达,进而引起细胞的转化和癌变,而p53蛋白的异常表达可能参与了CIN的发生,但不占主导地位;另外p16和p53蛋白的表达随CIN级别的增加而增加,可作为CIN分级诊断的辅助方法,具有较好的应用价值.     

宫颈癌及其癌前病变组织中HPV16 E6蛋白的表达及意义

目的：探讨宫颈癌及其癌前病变组织中16型人乳头瘤病毒（HPV16）E6蛋白的表达及其意义.方法：用免疫组化SP法对15例正常宫颈组织、14例低级别宫颈上皮内瘤变（LCIN）、11例高级别宫颈上皮内瘤变（HCIN）以及61例浸润性宫颈癌标本进行了HPV16 E6蛋白表达的检测.结果：HPV16 E6蛋白在正常宫颈上皮、CINⅠ～Ⅱ、CINⅢ及浸润性宫颈鳞癌中的阳性表达率分别为0（0/15）、7.14%（1/14）、36.36%（4/11）、59.02%（36/61）.高级别CIN和浸润性宫颈癌中HPV16 E6蛋白阳性率明显高于正常宫颈组织和低级别CIN（P〈0.05）,HPV16 E6蛋白表达与宫颈癌临床分期、组织分化和淋巴结转移无关（P〉0.05）.结论：HPV16 E6蛋白的检测可能可作为宫颈癌前病变转归的指标.     

反义寡核苷酸对HPV16阳性人宫颈癌细胞增殖的影响

目的：探讨反义硫代寡核苷酸对ＨＰＶ１６阳性的人宫颈癌细胞增殖的影响，方法：人工合三段１８－ｍｅｒ的反义硫代寡核苷酸Ｓ－ＯＤＮ１－３，其中Ｓ－ＯＤＮ１（ＡＥ６），Ｓ－ＯＤＮ２（ＡＥ７）分别与ＨＰＶ１６Ｅ６Ｅ７基因的起始码及其下游序列互补Ｓ－ＯＤＮ，为一随机序列，分别用三种反义寡核苷酸处理整合有ＨＰＶ１６基因组的人宫颈癌细胞ＳｉＨａ。通过四唑盐比色法，＾３Ｈ－ＴｄＲ参入试验观察不同浓度反义寡核苷酸对Ｓ     

HPV16 E6基因反义寡核苷酸诱导SiHa细胞凋亡的研究

目的　探讨 HPV16 E6反义寡核苷酸 (AE6 )对宫颈癌细胞 Si Ha细胞凋亡的诱导作用 .方法　应用细胞生长抑制实验 (MTT)、透射电子显微镜 (TEM)、DNA电泳及流式细胞术 (FCM)研究 AE6对 Si Ha细胞生长抑制、超微结构改变、核酸及细胞增殖周期的影响 .结果　 AE6 1～ 40μmol· L- 1对 Si Ha细胞抑制率为 9.9%～ 6 0 .3% ,相互间有显著性差异(P<0 .0 5 ) .AE6 2 0 μmol· L- 1作用 72 h,Si Ha出现凋亡形态学改变 ,DNA电泳呈梯状带型 .AE6 5 ,10 ,2 0和 40μmol· L- 1 作用 72 h后 ,Si Ha细胞凋亡率分别为 1.9% ,7.9% ,8.1%和 19.7% .结论　 HPV16 E6基因与 HPV16阳性宫颈癌细胞的增殖和细胞凋亡密切相关 ,AE6可通过诱导 Si Ha细胞凋亡而抑制其生长 ,它的分子克隆有助于阐明宫颈癌发生的分子机制     

人乳头瘤病毒16 E6基因沉默对鼻咽癌细胞侵袭转移能力及细胞周期的影响

目的 观察针对人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16 E6基因的RNA干扰(RNA inteffering,RNAi)对人鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)HNE-1细胞侵袭转移能力及细胞周期的影响,探讨HPV16 E6基因作为鼻咽癌基因治疗标靶的可行性.方法 根据基因库上的HPV16 E6 mRNA序列,设计合成针对HPV16 E6的siRNA,转染HNE-1细胞,采用RT-PCR及Western blot分析E6基因的表达,利用侵袭实验检测细胞的侵袭能力,MTT法检测细胞的生长增殖,流式细胞术检测细胞周期.结果 针对HPV16 E6的siRNA下调鼻咽癌HNE-1细胞株E6 mRNA和蛋白表达水平,分别下调66.3%、56.7%(P<0.05);侵袭实验结果 显示,siRNA转染组的穿膜细胞数为(45.3±4.0),显著低于阴性对照组[(147.7±4.7),P<0.05];转染组细胞的增殖受到抑制,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术显示细胞阻滞于G0/G1期.结论 siRNA可以有效干扰鼻咽癌HNE-1细胞内HPV16 E6基因的表达,进而影响HNE-1细胞的侵袭转移能力,并抑制肿瘤细胞的生长增殖,使细胞周期重新分布.     

特异性反义寡核苷酸对含HPV16的SiHa细胞的作用

研究特异性反义寡核甘酸对含ＨＰＶ１６的Ｓｉ－Ｈａ细胞的抑制作用。方法人工合成２条分别与ＨＰＶ１６Ｅ６、Ｅ７基因起始码互补的反义硫代磷酸化核甘酸及１条随机序列，用此３种反义寡核甘酸处理ＳｉＨａ细胞，观察其细胞成活率和细胞蛋白总量的改变。结论此ＡｎｔｉＥ６，ＡｎｔｉＥ７能有效地抑制含ＨＰＶ１６的ＳｉＨａ细胞的生长。     

高危HPV 阴性宫颈癌患者的临床病理特征研究

目的 探究高危人乳头瘤病毒（HPV）阴性宫颈癌（CC）患者的临床病理特征。方法 回顾性分析 2013 年1 月-2017 年1 月湖北省肿瘤医院收治1 123 例宫颈癌患者的临床资料,所有患者均由HPV-DNA 检测 和薄层液基细胞学技术检测为CC,高危HPV 的13 种型别检测为任何一型即可诊断为高危型HPV 阳性,反之 为阴性。分析患者的年龄构成、临床分期及病理类型,比较HPV-DNA 检测和薄层液基细胞学技术检测的筛 查价值。结果 两组高危型HPV 患者的年龄构成比较,差异无统计学意义（P >0.05）;高危型HPV 阴性组腺 癌比例高于高危型HPV 阳性组（P <0.05）,而高危型HPV 阴性组Ⅱ b+ Ⅲ - Ⅳ期比例高于高危型HPV 阳性 组（P <0.05）;HPV-DNA 检测对高危HPV 阴性宫颈癌患者的诊断敏感性和阴性预测值较高。结论 HPVDNA 检测能较好诊断高危型HPV 阴性宫颈癌,患者多发于36 ～ 50 岁,且以腺癌为主。     

人宫颈癌组织中Survivin蛋白及人乳头瘤病毒16、18感染检测

目的:检测人宫颈癌组织中Survivin蛋白及高危人乳头瘤病毒(HPV)16、18感染情况,并探讨其在宫颈癌癌变过程中的作用.方法:选取13例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)及42例宫颈癌(鳞癌36例,腺癌6例;临床分期:Ⅰ、Ⅱ期34例,Ⅲ、Ⅳ期8例;病理分级:Ⅰ、Ⅱ级22例,Ⅲ级20例;有淋巴结转移12例,无淋巴结转移30例)组织,另取8例正常宫颈组织作为对照.分别采用免疫组织化学法检测Survivin蛋白表达情况,原位杂交法检测HPV16、18感染情况.结果:正常宫颈组织中Survivin蛋白的阳性表达率为0,CIN为53.84%,宫颈癌组织中为95.23%,3组间差异有统计学意义(P＜0.05);正常宫颈组织中HPV16、18的感染率为12.50%,与CIN(46.15%)和宫颈癌(85.71%)组织相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).宫颈癌组织中Survivin蛋白表达率与病理分级、临床分期及淋巴结转移有关(P均＜0.05).宫颈癌组织中Survivin蛋白表达率与HPV16、18感染率呈正相关(P＜0.05).结论:在宫颈细胞的恶变和进展过程中,Survivin的表达及HPV16、18感染可能起协同作用.     

雌二醇促进正常宫颈上皮永生化细胞系End1/E6E7增殖的研究

[目的 ]研究在 17- β -E2 作用下正常宫颈上皮永生化细胞End1/E6E7的生长增殖和HPV16 /E6E7基因、ERβ表达的变化 ,探讨雌激素及HPV与ERβ在宫颈上皮病变发展过程中的作用。[方法 ]选取ERα(- ) /ERβ( )的正常宫颈上皮永生化细胞系End1/E6E7细胞 ,应用MTT比色实验及流式细胞术研究 17- β -E2 对其生长与增殖的调控作用 ;应用RT -PCR方法半定量研究 17- β -E2 对该细胞中HPV16 /E6E7基因及ERβ基因表达的影响。 [结果 ]随 17- β -E2 浓度增加 ,倍增时间缩短 ,MTT吸光度值增高 (P =0 .0 4 5 ) ,细胞周期G0 、G1期比例下降 ,G2 、M及S期比例上升 (P =0 .0 0 2 ) ;HPV16 /E6E7mRNA表达增强 (P =0 .0 19) ;ERβmRNA表达无明显改变 (P =1.0 0 )。 [结论 ]雌激素可能通过ERβ以外的途径促进HPV16 /E6E7基因的表达 ,进而促进永生化宫颈上皮的增殖生长。     

IL-17在高危型HPV阳性宫颈癌中的表达

目的： 通过检测高危型人乳头瘤病毒（HPV）阳性宫颈癌患者体内IL-17的表达水平,探讨IL-17所介导的特异性免疫反应在高危型HPV感染的宫颈癌发生、发展中可能发挥的作用。 方法： 选取高危型HPV阳性的宫颈浸润性鳞癌患者（宫颈癌组）28例、宫颈高危型HPV感染者（HPV感染组）25例以及对照组30例。 采用ELISA法检测各组患者外周血清及宫颈局部组织匀浆上清液中IL-17 的表达水平。 结果： ①宫颈癌组患者外周血清中IL-17水平较对照组明显升高（ P＜0.05）,与HPV感染组比差异无统计学意义（均P＞0.05）,HPV感染组与对照组间差异无统计学意义（ P＞0.05）;②各组宫颈局部组织匀浆上清液中IL-17的表达水平均明显高于外周血清表达水平,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;③宫颈局部组织匀浆上清液中IL-17表达水平各组间的差异均有统计学意义（均P＜0.05）,且宫颈癌组局部组织匀浆上清液中IL-17的表达水平高于HPV感染组,HPV感染组高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。 结论：IL-17所介导的免疫反应可能参与并促进了高危型HPV的持续性感染,与宫颈癌的发生、发展进程相关。     

人乳头状瘤病毒16型DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系的建立(英文)

目的建立人乳头状瘤病毒（HPv）16型DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系，确证HPv与喉癌的发生有无关系。方法采用脂质体介导法，将pSVHPV16DNA导入原代培养的人喉上皮细胞，继续培养、传代，取20代细胞，用PCR检测细胞是否含有病毒的特异片段，用免疫组化染色检测E6、E7蛋白的表达，用倒置显微镜、生长曲线、流式细胞仪、细胞角蛋白免疫组化染色、透射电镜及软琼脂克隆形成试验检测细胞的生物学特性。结果有3株细胞已连续培养传代超过20代，细胞含有HPV16DNA的特异片段并有E6、E7蛋白的表达，细胞呈锚着依赖性、接触抑制性单层平铺生长，生长曲线呈典型的“s”型，细胞增殖指数为48％，所有细胞均表达角蛋白，胞浆含张力原纤维，软琼脂培养克隆形成试验阴性。结论成功建立了HPV16DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系，为喉癌研究提供了新的理想模型，HPV16对人喉上皮有致癌作用，在喉癌组织标本中检测到的HPV16DNA必定在其多步癌变过程中发挥了重要作用。