结缔组织生长因子在颅内动脉瘤壁上的表达

目的通过研究结缔组织生长因子（CTGF）在颅内动脉瘤壁上的表达来探讨CTGF对颅内动脉瘤形成发展的影响。方法中国医科大学附属第一医院神经外科2007年12月至2011年12月收治动脉瘤中的16例动脉瘤病例,以颞浅动脉作对照组,通过实时逆转录酶一聚合酶链式反应（RT．PCR）检测及免疫组化进行研究,并予统计学分析。结果定量检测RT—PCR表明对照组（STA）比较试验组（IA）CTGF表达明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫组化显示动脉瘤壁中膜和外膜CTGF表达阳性率较内膜高（X2=9．94,P〈0．05）。结论CTGF作为一个特异性的靶位,将会有可能对预防和治疗颅内动脉瘤提供新的思路。     

香烟提取物影响大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子的表达*

背景：血管平滑肌细胞增殖是心血管系统组织变化的基础。 目的：观察不同浓度香烟提取物对大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子表达的影响。 方法：取第3代大鼠主动脉平滑肌细胞,分别用体积分数2.5%,5%,10%,20%的香烟提取物进行干预。 结果与结论：实时定量RT-PCR结果显示,体积分数2.5%,5%,10%,20%的香烟提取物作用12 h均可促进大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA的表达,以体积分数5%香烟提取物的作用最明显,且其刺激大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA的表达在24 h内呈时间依赖性。提示香烟提取物可上调大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA的表达,导致大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖。     

外源性碱性成纤维细胞生长因子对鞘内肌腱愈合和粘连的影响

背景：碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF) 能促进体外腱细胞的增殖及胶原分泌，并促进鞘外肌腱的愈合，但其对鞘内肌腱的作用的资料较少。 目的：探讨外源性bFGF对鞘内肌腱愈合和粘连形成的作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2004-05/2005-02在上海市第六人民医院实验动物中心实验室完成。 材料：成年雄性来亨鸡90只制备鸡右爪第3趾趾深屈肌腱横断模型，随机均分为3组，每组30只。 方法：对照组：肌腱横行切断后原位修复。纤维蛋白封闭剂组：在肌腱断端使用纤维蛋白封闭剂0.6 μL后，原位修复肌腱。bFGF组：在断端使用bFGF和内含bFGF 500 ng的纤维蛋白封闭剂混合物0.6 μL，原位修复肌腱。 主要观察指标：术后1，2，4，8周，每组各取6只鸡进行大体、组织学检测；术后8周每组再取6只鸡进行生物力学测定。 结果：对照组与纤维蛋白封闭剂组间各项观测指标比较均无显著性差别，与对照组和纤维蛋白封闭剂组相比，bFGF组修复部位腱鞘、腱外膜及腱实质的新生血管形成、成纤维细胞增殖较好，胶原的分泌出现早，数量也较多；肌腱滑动距离较短，屈曲功和肌腱最大抗拉力较大。 结论：在肌腱断端使用外源性bFGF能促进鞘内肌腱的愈合，但也加重了肌腱的粘连。     

结缔组织生长因子及其胶原在硬皮病组织中的表达

背景：近年来，大量文献报道结缔组织生长因子作为转化生长因子β的下游效应因子，是最重要的致纤维化生长因子，在多种纤维化疾病中高表达。 目的：观察结缔组织生长因子在硬皮病组织中的表达情况及与其上、下游效应基因表达的关系，探讨结缔组织生长因子在硬皮病组织中的促纤维化机制。 设计、时间及地点：对照观察实验，于2008-05/11在解放军广州军区广州总医院医学实验科完成。 材料：组织标本均来源于解放军广州军区广州总医院整形外科患者，正常皮肤来自整形手术中切除的多余皮肤。 方法：收集硬皮病皮肤组织、增生性瘢痕组织及正常皮肤组织标本，免疫组化检测结缔组织生长因子的表达，反转录-聚合酶链式反应方法检测结缔组织生长因子、转化生长因子β1、Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原mRNA表达，Western blotting检测结缔组织生长因子蛋白的表达。 主要观察指标：①结缔组织生长因子蛋白在硬皮病皮肤组织中的表达和定位情况。②结缔组织生长因子、转化生长因子β1、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA的相对表达量。③比较增生性瘢痕、硬皮病和正常皮肤组织中结缔组织生长因子蛋白表达量的情况。 结果：免疫组织化学染色发现，结缔组织生长因子在基底细胞和角质形成细胞中有强阳性表达，在真皮成纤维细胞中亦有阳性表达。硬皮病皮肤组织及增生性瘢痕组织中结缔组织生长因子、转化生长因子β1、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA过表达，而正常皮肤组织无或仅有极弱表达。Western blotting结果显示硬皮病皮肤组织有明显的结缔组织生长因子蛋白表达带。 结论：在硬皮病纤维化过程中，结缔组织生长因子可能是重要的调控因子之一，结缔组织生长因子可能与转化生长因子β1协同作用促进细胞外基质合成。     

小鼠肾小管发育过程中纤维粘连蛋白与整合素α5的表达**

背景：纤维粘连蛋白-整合素α5相互作用影响肾小管发育的体内研究较少。 目的：观察小鼠肾小管发育过程中纤维粘连蛋白及其受体整合素α5的表达。 方法：选取胚龄(E)12,14,16,18 d和生后日龄(P)1,3,7,14,21,28,40 d的小鼠。 结果与结论：免疫组织化学染色结果显示纤维粘连蛋白于E12 d时即表达于输尿管芽的基底膜处,随后表达于发育各个时期的肾小管基膜;整合素α5于E12 d时开始表达,表达部位是肾小管的上皮细胞。体视学测量结果显示纤维粘连蛋白表达的面密度值和整合素α5表达的体密度值都随肾脏的发育逐渐增大。Western blot结果显示纤维粘连蛋白和整合素α5蛋白的水平都随肾脏的发育逐渐增加。可见纤维粘连蛋白和整合素α5在小鼠肾小管的发育和成熟过程中的表达具有一定的时空性,对肾小管的发育起一定的作用。     

糖尿病大鼠皮肤伤口愈合过程中结缔组织生长因子的表达*

背景：结缔组织生长因子表达在糖尿病伤口愈合过程中的变化及意义少见报道。目的：观察链脲佐菌素诱导的糖尿病模型大鼠复合创伤修复过程中结缔组织生长因子表达的变化及意义。方法：将Wistar大鼠随机分成正常对照组和模型组,3周后将各组动物复合背部1.3 cm2全厚皮切除形成伤口。结果与结论：链脲佐菌素诱发的糖尿病模型大鼠伤口愈合明显延迟,创伤后第4,8,12 和16天创面愈合率明显低于正常对照组(P < 0.01)。术后第8天,糖尿病组大鼠肉芽组织成熟度和新生血管形成指标得分均低于正常对照组(P < 0.01)。正常对照组的结缔组织生长因子蛋白表达呈时间递增趋势,而糖尿病组的结缔组织生长因子表达在整个创面愈合过程的后期(第12天后)均明显低于正常对照组(P < 0.01)。结果提示,糖尿病大鼠皮肤伤口愈合后期创面组织结缔组织生长因子表达相对正常对照组减少可能是导致创面愈合迟缓的重要原因之一。     

结缔组织生长因子表达水平与垂体腺瘤侵袭性之间关系

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在垂体腺瘤中表达水平与垂体腺瘤侵袭性之间的关系,为侵袭性垂体腺瘤的诊断和生物学治疗提供理论依据。方法采用实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)和蛋白免疫印记杂交(Westernblot)方法检测16例非侵袭垂体腺瘤及52例侵袭性垂体腺瘤组织中CTGF的表达水平。结果 52例侵袭性垂体腺瘤和16例非侵袭性垂体腺瘤均可见CTGF的表达。在mRNA和蛋白水平上,侵袭性垂体腺瘤较非侵袭性垂体腺瘤CTGF表达高,且CTGF的表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CTGF在侵袭性垂体腺瘤中表达明显高于非侵袭性垂体腺瘤,且与肿瘤的大小相关。     

接受骨髓单个核细胞移植慢性肾损伤大鼠肾脏转化生长因子β1和结缔组织生长因子的表达

背景：近年来干细胞移植在肾脏病领域取得了一定进展，但多局限于急性肾损伤，涉及慢性肾损伤方面的报道较少，且肾脏保护机制不清楚。 目的：观察同种异体骨髓单个核细胞移植后慢性肾损伤大鼠尿蛋白排泄、肾功能的变化，以及对肾组织转化生长因子β1和结缔组织生长因子表达的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2008-05/10在解放军沈阳军区总医院动物实验中心完成。 材料：健康SPF级雌性SD大鼠30只，随机分为3组：正常对照组、模型组、细胞移植组，10只/组。另取雄性SD大鼠10只用于骨髓单个核细胞的制备。 方法：模型组、细胞移植组大鼠采用改良肾脏5/6切除术建立慢性肾损伤模型，造模成功后10周，细胞移植组大鼠心脏内注射骨髓单个核细胞悬液1.0 mL，细胞数1×108个/只，治疗4周；模型组心脏内注射等量生理盐水。 主要观察指标：24 h尿蛋白定量及肾功能变化，肾组织病理学变化，肾组织转化生长因子β1及结缔组织生长因子蛋白的表达。 结果：①与正常对照组比较，模型组、细胞移植组大鼠尿蛋白排泄量及血清尿素、肌酐浓度均显著升高(P < 0.01)，但细胞移植组升高幅度明显低于模型组(P < 0.01或P < 0.05)。②苏木精-伊红染色及PAS染色后，与模型组比较，细胞移植组肾小球基质相对面积、肾小球硬化指数均明显减小(P < 0.05)。③与正常对照组比较，模型组、细胞移植组转化生长因子β1及结缔组织生长因子的表达均显著增强(P < 0.01)，但细胞移植组增强幅度显著低于模型组(P < 0.01)。 结论：同种异体大鼠骨髓单个核细胞移植可以减少肾大部切除慢性肾损伤大鼠尿蛋白排泄，降低血清肌酐水平，抑制肾组织转化生长因子β1和结缔组织生长因子表达，减轻肾组织病理改变，起到肾脏保护用。     

小鼠结缔组织生长因子基因克隆及其真核表达载体构建

背景：研究证实结缔组织生长因子在动脉粥样硬化血管平滑肌中呈高表达,构建结缔组织生长因子真核表达载体以特异性上调结缔组织生长因子在血管平滑肌内的表达是进一步通过细胞及动物实验研究其作用机制的基础。 目的：克隆小鼠结缔组织生长因子基因、构建其真核表达载体,并在血管平滑肌细胞中瞬时表达。 设计、时间及地点：单一样本观察,实验于2007-09/2008-04在辽宁医学院省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室完成。 材料：1个月龄昆明小鼠10只。真核表达载体pcDNA3.1(+)由辽宁医学院分子生物学实验室保存。 方法：以小鼠肾脏总RNA为模板,通过反转录-聚合酶链反应方法获得结缔组织生长因子(CTGF)目的基因,连接到pMD18-T载体上,酶切鉴定测序,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体。 主要观察指标：酶切测序鉴定重组体pcDNA3.1(+)-CTGF。将pcDNA3.1(+)-CTGF转入血管平滑肌细胞,Western观察结缔组织生长因子蛋白表达。 结果：酶切、测序鉴定证实成功扩增出小鼠结缔组织生长因子目的基因并构建其真核表达载体,Western检测证实,重组体转入血管平滑肌细胞后,细胞内高表达结缔组织生长因子蛋白。 结论：成功克隆小鼠结缔组织生长因子目的基因并构建其真核表达载体,重组体能在血管平滑肌中表达。     

外源性碱性成纤维细胞生长因子对缺血大鼠脑内源性碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的 研究外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)缩小局灶性脑缺血梗死灶的机制。方法 用免疫组化ABC法检测在局灶性脑缺血模型上给予生理盐水或bFGF后早期生长反应蛋白-1(Egr-1)，bFGF，碱性成纤维细胞生长因子受体(bFGFR)的动态表达。结果 给药组在3h～3d各时间段梗死灶均有不同程度的缩小。对照组和给药组Egr-1表达均表现为3～6h的增强过程，但给药组更强于对照组。对照组12h见有bFGF表达增强，而bFGFR表达3h到达高峰，6h起下降，12h时bFGFR的表达已恢复至正常水平(出现了配体和受体表达时相上不匹配)。给药组bFGF表达提前且增强，3h即见有bFGF表达增强，6h时出现第一峰，从而与bFGFR 3～6h的表达增强过程相吻合。结论 外源性bFGF能缩小梗死灶，该神经保护作用是通过Egr-1蛋白高表达使内源性bFGF的表达增高且提前，从而与bFGFR的表达增强过程重叠而实现的。     

Immunohistochemical localization of connective tissue growth factor in the rat central nervous system

Connective tissue growth factor (CTGF) is an immediate early growth-responsive gene but its distribution and significance in the central nervous system (CNS) are unknown. We investigated the distribution of CTGF-like immunoreactivity (CTGF-IR) in the rat CNS using a specific antiserum against CTGF oligopeptide. The majority of CTGF-IR was observed in astrocytes. Ependymal cells lining the wall of the cerebral ventricle and tanycytes lining the central canal of the spinal cord showed the strongest CTGF-IR, while there was a diffuse but weak signal in the gray matter of the spinal cord. CTGF-IR was also detected in the cytoplasm of a subpopulation of pyramidal neurons in the cerebral cortex. Our results showed that CTGF-IR is widely distributed in the CNS at both regional and cellular levels, suggesting a complex functional role in the CNS.     

Increased expression of connective tissue growth factor in amyotrophic lateral sclerosis human spinal cord

Connective tissue growth factor (CTGF) is a secreted protein involved in a variety of cellular events such as survival, proliferation, and extracellular matrix production. Recent studies suggest a role for this protein also in the repair processes of the central nervous system. The distribution and significance of CTGF in human brain is, however, poorly understood, particularly under pathological conditions. In the present study the expression of CTGF protein was investigated in the spinal cord of control and both sporadic and familial amyotrophic lateral sclerosis (sALS and fALS) patients. Western blot analysis showed a consistent increase in CTGF expression in six sALS patients compared with controls. Immunoreactivity signal for CTGF was equally present in blood vessels of control and ALS spinal cord, but was dramatically increased in reactive astrocytes of the ventral horn and white matter in both sALS and fALS. Increased expression was also observed in the cytoplasm of motor neurons of sALS and fALS patients with long duration of the disease. Our data indicate a role for CTGF in the complex reactive process that is associated with the progression of ALS spinal cord damage. The up-regulation in reactive astrocytes supports a role for CTGF in the molecular mechanisms underlying astrogliosis. However, the altered CTGF expression observed in neurons might represent an additional mechanism involved in motor neuron dysfunction and changes in glial-neuronal communication in the course of the neurodegenerative process.The first two authors contributed equally to the present work.     

灯盏花素对腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞转化生长因子β1的影响

背景：从不同层面了解灯盏花素阻止/延缓腹膜功能衰竭的作用及其机制,从而在临床上推广使用灯盏花素来阻止/延缓腹膜功能衰竭从而延长终末期肾脏病患者腹膜透析时间、提高透析质量、减少透析失败率,提高腹膜透析远期疗效具有广泛的应用前景。 目的：观察灯盏花素对腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞转化生长因子β1分泌及其增殖活性的影响。 方法：体外培养人腹膜间皮细胞,分为5组：分别为对照组、腹膜透析液组、灯盏花素终浓度为5,10,20 µmol/L组。检测各组上清液中转化生长因子β1的水平以及间皮细胞的增殖活性。 结果与结论：腹膜间皮细胞在腹膜透析液诱导下,转化生长因子β1分泌显著增加、细胞增殖活性显著降低。灯盏花素5 µmol/L组转化生长因子β1分泌低于腹膜透析液组(P < 0.05),细胞增殖活性高于腹膜透析液组(P < 0.05);灯盏花素10,20 µmol/L组转化生长因子β1分泌显著低于腹膜透析液组(P < 0.01),细胞增殖活性显著高于腹膜透析液组(P < 0.01)。结果显示灯盏花素可以抑制腹膜间皮细胞转化生长因子β1分泌,拮抗腹膜透析液对腹膜间皮细胞增殖活性的抑制作用。     

Distribution of a major connective tissue protein,fibronectin, in normal and neoplastic human nervous tissue

Summary Fibronectin is a cell surface-associated glycoprotein of various adherent cells in culture, and it has been found to be a major component of connective tissue matrix in human tissues. Reports on expression of fibronectin by cultured human astroglial cells prompted us to study its distribution in vivo. In human brain tissue fibronectin was located, as studied by immunofluorescence staining, to capillary vessel walls in a pattern corresponding both to the vessel lumen and the basement membrane of vessel wall. Glial or neuronal cells did not express fibronectin in the adult human brain. In human brain tumors of the glioma group occasional faint intercellular fluorescence was observed, probably due to leakage of fibronectin from the blood stream. A strong staining associated with the endothelial glomerulus-like proliferations was also observed in malignant gliomas. In peripheral nerves fibronectin fluorescence corresponding to the basement membranes of perineurial and Schwann cells was seen. An interesting feature was the intense staining at the nodes of Ranvier. In a well differentiated schwannoma of peripheral nerve an intercellular lamellar staining pattern was observed, corresponding to the basement membranes of the neoplastic cells. These results indicate that in the human nervous tissue fibronectin occurs only at sites of contact between the neuro-ectoderm and mesenchyme.     

The effects of exogenous nerve growth factor on foetal rat adrenal cells in culture

Summary Foetal rat adrenal cells, identified as chromaffin cells, maintained in culture in the presence of exogenous NGF, express a neuronal phenotype. Once this neuronal phenotype has been established bundles of outgrowing neurites commonly form links with adjacent reaggregates, and also develop synaptic contacts with the cell bodies of chromaffin cells in the adjacent reaggregates. Subsequent withdrawal of exogenous NGF from the culture medium did not result in the chromaffin cells losing their neuronal phenotype if this had been established before NGF was withdrawn. Tyrosine hydroxylase immunocytochemistry revealed that all neurites developed in culture were positive for the enzyme including those in cultures only transiently exposed to exogenous NGF. These results suggest that exogenous NGF may be essential only until the chromaffin cells develop neurites which make contact with appropriate target cells and that once these links, however immature, have been established, neurites are retained for many weeks in the absence of exogenous NGF.     

骨髓间充质干细胞与肝细胞生长因子在组织修复中的作用

当组织损伤发生后，骨髓间充质干细胞逆趋化因子浓度梯度迁移至病变处，通过分化为受损细胞、分泌多种细胞因子，如肝细胞生长因子等，及其免疫调节等机制，发挥组织修复作用；肝细胞生长因子是间充质干细胞的重要趋化因子，它可抑制间充质干细胞的增殖、并诱导其向肝细胞及上皮细胞系分化。骨髓间充质干细胞参与受损组织的修复过程是复杂的，其作用机制主要表现在归巢至受损部位，局部微环境下的正确定向分化和抑制宿主的免疫等方面。随着研究的进一步深入，骨髓间充质干细胞参与受损组织修复作用机制将会逐步被明确，移植有治疗效果的行基因修饰的骨髓间充质干细胞，及采取其他可增强细胞移植的治疗效果，增强干细胞的修复作用，有望更好的用于指导临床治疗工作。     

纤维蛋白对大鼠脑血管内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的观察纤维蛋白对大鼠脑血管内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)转录及蛋白水平表达的影响。方法大鼠脑血管内皮细胞分离后培养,加入不同浓度的纤维蛋白,通过Real-time PCR检测VEGF转录水平,应用酶联免疫方法(ELISA)定量检测培养基和细胞裂解液中的VEGF水平。结果纤维蛋白可以特异性诱导大鼠脑血管内皮细胞表达VEGF;加入不同浓度的纤维蛋白(0.03mg/ml、0.1mg/ml、0.3mg/ml和1.0mg/ml),24h后,1.0mg/ml纤维蛋白组的培养基VEGF水平显著增高(P<0.001);1.0mg/ml纤维蛋白与大鼠脑血管内皮细胞分别培养0、2、4、8、24、48h,VEGF浓度在共培养2h已经升高,8h时显著升高,在24h时仍然保持在显著升高表达水平(P<0.005),48h有所下降;Real-time PCR结果提示,大鼠脑血管内皮细胞中VEGF mRNA的上调呈现出剂量和时间依赖性增加。结论纤维蛋白可以上调大鼠血管内皮细胞中的VEGF。     

结缔组织生长因子在脑胶质瘤组织中的表达和肿瘤级别的关系

目的通过检测人脑胶质瘤患者肿瘤组织中结缔组织生长因子的表达水平,探讨其和肿瘤级别的关系及作用机制。方法采用荧光实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测结缔组织生长因子(CTGF)mRNA在47例脑胶质瘤组织和25例正常脑组织中的表达水平,统计分析表达水平和肿瘤级别之间的关系。结果CTGF在胶质瘤Ⅰ-Ⅱ级(高分化组)及胶质瘤Ⅲ~Ⅳ级(低分化组)中的表达均明显高于正常脑组织(P<0.01),而且在Ⅲ~Ⅳ级胶质瘤中的表达量显著高于胶质瘤Ⅰ~Ⅱ级(P<0.01),说明随着肿瘤级别的升高CTGF表达也增强。结论CTGF在胶质瘤组织中高表达,而且表达水平和恶性程度有密切联系。CTGF的检测可作为胶质瘤恶性程度判断的参考,为从基因水平上探讨胶质瘤的生物学行为、预后及治疗提供新的思路。