竞争抑制法检测抗-HBc总抗体的影响因素及对策

目的研究酶联免疫吸附试验(ELISA)待测血清标本与辣根过氧化物酶(HRP)标记的乙型肝炎病毒(HBV)核心抗体(抗-HBc-HRP)加入间隔时间对抗-HBc总抗体检测结果的影响。方法选择HBV标志物检测结果为阴性的标本分A、B、C 3组:A组,加样后延长室温放置不同时间再加入抗-HBc-HRP;B组,加样同时加入抗-HBc-HRP延长室温放置不同时间;C组,A组方式测定的阴性转阳性标本再用ELISA试剂2和化学发光(CLIA)试剂重复测定,确认阴、阳性结果。结果A组加样方式对抗-HBc总抗体检测结果影响明显,且加样和加入抗-HBc-HRP的间隔时间越长,标本的假阳性越多;B组加样方式对抗-HBc总抗体检测结果基本无影响;C组ELISA试剂1和试剂2有72.8%的检测结果一致;20例ELISA阴性转阳性标本经过CLIA方法验证仍为阴性。结论A组的不公平竞争在不同时间内可出现程度不等的抗-HBc总抗体假阳性;B组加样方式可最大限度地减少抗-HBc总抗体假阳性,保证检验质量。     

竞争抑制法检测HBeAb的影响因素及对策

目的研究酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清标本与辣根过氧化物酶（HRP）标记的乙型肝炎病毒（HBV）e抗体（抗-HBe—HRP）,加入间隔时间对抗-HBe抗体检测结果的影响。方法选择HBV标志物检测结果为阴性的标本分为A、B、C3组。A组加样后延长室温放置不同时间再加入抗HBe-HRP;B组在加样的同时加入了抗-HBe-HRP延长室温放置不同时间;C组为A组方式测定的阴性转阳性标本再用ELISA试剂2和化学发光（CLIA）试剂重复测定,确认阴、阳性结果。结果A组加样方式对抗-HBe抗体检测结果影响明显,且加样和加入抗HBe-HRP的间隔时间越长,标本的假阳性越多;B组加样方式对抗HBe抗体检测结果基本无影响;C组ELISA试剂1和试剂2有73．1％的检测结果一致;25例ELISA阴性转阳性标本经过CLIA方法验证后仍为阴性。结论A组的不公平竞争在不同时间内可出现不同程度的抗-HBe抗体假阳性;B组加样方式可最大限度地减少抗-HBe抗体假阳性,保证了检验质量。     

加样时差对乙型肝炎病毒e抗体测定的影响

目的 研究ELISA法对血清标本与辣根过氧化物酶(HRP)标志的抗-HBe-HRP加入间隔时间对抗-HBe检测结果的影响.方法 选择HBV标志物检测结果为阴性的标本分为A、B、C 3组:A、B两组分别选用两种不同试剂进行加样后,延长室温放置不同时间,再加入抗-HBe-HRP;C组为A、B组阴性转阳性的标本,用化学发光(CLIA)试剂重复测定,确认阴、阳性结果.结果 A组加样时差对抗-HBe测定结果影响明显,且加样时间间隔越长,标本的假阳性越高;B组加样时差对抗-HBe测定结果影响不如A组明显,但随着加样间隔时间越长,标本的假阳性也越高;C组经CLIA重复检测阴性转阳性标本,结果皆为阴性.结论 在竞争抑制法检测抗-HBe中,加样时差造成的不公平竞争可出现程度不等的假阳性,而两种试剂出现的假阳性率也有差异.     

分批加酶试剂法消除操作时差对竞争法检测抗-HBc的假阳性影响

目的 探讨操作时差对竞争法检测抗-HBc的假阳性影响及消除办法,提高检验质量.方法 方法1:在竞争法检测抗-HBc酶标孔中加入血清标本后放置5,10,15,20,30 min再加酶试剂,然后进行下一步操作;方法2:同时加入血清标本及酶试剂后放置5,10,15,20,30 min,然后再进行下一步操作;方法3:同时加入血清标本及酶试剂,立即进行下一步操作(放置0 min,作为标准对照组).用上述三种方法对36例抗-HBc阴性标本及30例抗-HBc阳性标本进行实验,对实验结果进行统计分析,探讨操作时差对竞争法检测抗-HBc假阳性的影响及消除办法.结果 方法1:36例抗-HBc阴性标本5,10,15,20,30 min各组吸光度低于对照组,假阳性率分别为16.7%,27.8%,33.3%,36.1%,38.9%;30例抗-HBc阳性标本5,10,15,20,30 min各组吸光度低于对照组,但未造成结果的假阳性及假阴性.方法 2:36例抗-HBc阴性标本及30例抗-HBc阳性标本5,10,15,20,30 min各时间段组与对照组比较吸光度差异均无统计学显著性意义,无一例出现假阳性或假阴性.结论 同时加入血清标本及酶试剂,放置不同时间,将血清标本与酶试剂的不公平竞争时差转变为公平竞争时差,可消除操作时差对竞争法检测抗-HBc的假阳性影响.工作中可在加完一批样本即加入酶试剂,然后加下批标本及酶试剂,即分批加酶试剂法,可保证检测结果的准确性.     

6种不同加样量对酶联免疫吸附测定法检测乙型肝炎病毒核心抗体结果的影响

目的探讨采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）时,不同加样量对检测结果的影响。方法收集乙型肝炎病毒标志物HBcAb阳性标本93例,HBcAb阴性标本93例。共采取6种（A～G）加样方式。加样方式A：按说明书将待测血清作1：30倍稀释;加样方式B～G分别为直接加入血清10、20、30、40、50μL。然后,用ELISA法进行HB-cab的检测。结果93例阳性样本中,各种加样方式检测结果一致,未造成结果的假阴性。93份阴性样本中,加样方式B组与A比较,差异无统计学意义（P〉0．05）,其余4种方式与方式A比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论用ELISA法检测大批号标本的HBcAb时．可肯辖加入10μL血清．以减少加样环节。提高检测质量．     

加样间隔时间对ELISA竞争抑制法检测抗-HBe和抗-HBc结果的影响

目的 研究ELISA竞争抑制法待检标本与辣根过氧物酶(HRP)标记的抗体加入间隔时间对抗-HBe和抗-HBc结果的影响.方法 用ELISA竞争抑制法将120份标本(放射免疫法定量检测乙肝标志物全部阴性)分两组检测抗-HBe和抗-HBc.一组加入标本后于室温放置不同时间再加入酶标抗体;另一组是将标本和酶标抗体同时加入,于室温放置不同时间,其余严格按说明书操作,最后于酶标仪读取抗-HBe、抗-HBc的结果.结果 加入标本后1、2、5、10、20、30分钟时加入酶标抗体其抗-HBe利抗-HBc的结果分别与0分钟的结果比较,在1分钟组结果无差异(P>0.05).2分钟组结果有差异(0.0l0.05).结论 加入标本后酶标抗体加入间隔时间越长,假阳性率越高,为了保证抗-HBe和抗-HBc检测结果的准确性,标本加入后应在一分钟内加入酶标抗体;标本和酶标抗体同时加入室温放置时间的长短对检测结果基本无影响.     

用中和试验评价四种ELISA试剂盒检测抗-HBe结果的准确性

目的用中和试验方法验证酶联免疫吸附试验（ELISA）竞争抑制法和中和竞争法检测血清乙型肝炎e抗体（抗-HBe）的性能。方法竞争抑制法选择A、B试剂,中和竞争法选择C、D试剂检测抗-HBe;4种试剂结果明显差异的标本,用中和试验确认抗-HBe。结果 4种试剂检测随机血清标本455份,其中195份（42.85%）抗-HBe结果有差异。4种试剂检测抗-HBe总阳性数279份（61.32%）,其中均阳性84份（30.11%）。经中和试验确认,A、B、C试剂假阴性率为35.0%～72.5%;假阳性率为31.4%～77.1%。D试剂假阳性率为37.1%,假阴性率为5.0%。结论 ELISA一步法检测抗-HBe,4种试剂均存在一定比例的假阳性或假阴性,D试剂准确性明显优于A、B、C试剂。中和试验对于确认抗-HBe结果的准确性简便而实用。     

酶联免疫吸附试验竞争法检测HBeAg的探讨

目的 研究酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清标本与辣根过氧化物酶(HRP)标记的乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb-HRP),加入间隔时间对HBeAg检测结果的影响.方法 选择乙型肝炎病毒(HBV)标志物检测结果为阴性的标本分为甲、乙两组,甲组:加样后延长室温放置时间再加入HBeAb-HRP;乙组:加样同时加入HBeAb-HRP,延长室温放置时间.结果 甲组加样方式对HBeAg检测结果影响明显,且加样和加入HBeAb-HRP的间隔时间越长,标本的假阳性越多;乙组加样方式对HBeAg检测结果基本无影响.结论 甲组的不公平竞争在不同时间内可出现程度不等的HBeAg假阳性;乙组加样方式可最大限度地减少HBeAg假阳性,以确保检测结果的准确性.     

两种TP抗体检测试剂的质量评价

目的探讨两种梅毒螺旋体（TP）抗体检测试剂的质量评价。方法采用两种TP抗体酶联免疫吸附试验（ELISA）诊断试剂（A、B试剂），以及甲苯胺红试验（TRUST）试剂（C试剂）同时筛查4608份无偿献血者标本，并采用TP明胶凝集试验（TPPA）进行验证。结果各种试剂单独检测假阴性率分析：A试剂假阴性率为20．83％，B试剂假阴性率为27．17％，C试剂假阴性率为70．83％。各种试剂两两联合检测假阴性率分析：A和B试剂联合检测假阴性率为9．09％，A和C试剂联合检测假阴性率为16．67％，B和C试剂联合检测假阴性率为25．00％。由此可推测，选择最佳的检测试剂组合进行无偿献血者抗-TP筛查，可以减少假阴性率，进一步降低输血风险，保证输血安全。结论选择TP检测试剂的最佳组合对降低输血风险意义重大。     

胶体金免疫层析试验检测乙肝两对半时HBsAg假阴性结果的处置

目的胶体金免疫层析试验(GICA)检测乙肝两对半时,对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)结果疑似假阴性的标本分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)和时间分辨荧光分析法(TRFIA)定量试验进行HBsAg检测,并用抗体中和确认试验进行确认,以获得一个处理GICA检测HBsAg产生假阴性结果的可靠方法。方法 2014年1月至2015年2月用GICA检测乙肝两对半的标本3 078例,选取其中结果为单乙型肝炎核心抗体(抗-HBc),或单乙型肝炎e抗体(抗-HBe)为阳性,或抗-HBc和抗-HBe同为阳性,而HBsAg、乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)均为阴性的标本86例,分别用ELISA和TRFIA检测其HBsAg,对检测为阳性的标本进行抗体中和确认试验确认。结果 86例标本经抗体中和确认试验确认阳性的为35例;ELISA检出阳性标本28例,其中2例为假阳性;TRFIA检出阳性标本35例与抗体中和确认试验符合率100%。结论 GICA检测乙肝两对半时,对HBsAg结果疑似假阴性的标本可选用TRFIA进行复查确认。